nghiên cứu bào chế nhũ tương tiêm truyền lipid phối hợp với dung dịch tiêm truyền glucose, acid amin và chất điện giải

Ở Việt Nam, việc sử dụng nhũ tương lipid tiêm truyền pha chếphối hợp với dung dịch tiêm truyền glucose, acid amin và các chất điệngiải đã được áp dụng ở Viện Nhi.. Đồng thời chưa cónghiê

Với lòng biết ơn sâu sắc, tôi xin chân thành cảm ơn :

PGS.TS.Phạm Ngọc Bùng, Người Thầy đã tận tình hướng dẫn,

giảng dạy cho tôi những kiến thức quý báu trong suốt thời gian nghiêncứu, thực nghiệm và hoàn thành khóa luận này

Tôi xin chân thành cảm ơn Th.s Vũ Ngọc Uyên, người đã giúp

đỡ và truyền đạt những kinh nghiệm quý báu cho tôi trong suốt quá trìnhthực hiện khóa luận này

Tôi xin chân thành cảm ơn các Thầy Cô, Kỹ thuật viên Bộ mônVật lý – Hóa lý, cùng toàn thể các thầy cô Trường Đại học Dược Hà Nội,

và Khoa Hóa dầu Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội đã tạo điều kiện,giúp đỡ tôi trong suốt thời gian học tập nghiên cứu và hoàn thành khóaluận này

Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban giám hiệu Trường Đại học Dược

Hà Nội, các Bộ môn, Phòng ban trong trường về những giúp đỡ dànhcho tôi

Tôi cũng xin chân thành gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè đãđộng viên và tạo điều kiện cho tôi học tập, nghiên cứu để hoàn thànhkhóa luận này

Tôi xin chân thành cảm ơn!

Hà Nội, ngày 18 tháng 5 năm 2010

Sinh viên

Đỗ Thị Thu Hằng

Ở Việt Nam, việc sử dụng nhũ tương lipid tiêm truyền pha chếphối hợp với dung dịch tiêm truyền glucose, acid amin và các chất điệngiải đã được áp dụng ở Viện Nhi Tuy nhiên trong nước chưa sản xuấtđược nhũ tương tiêm truyền lipid, phải nhập khẩu Đồng thời chưa cónghiên cứu đánh giá ảnh hưởng của việc phối hợp các thành phần đếnkích thước tiểu phân cũng như độ bền trạng thái tập hợp của nhũ tươnglipid trong dịch truyền.

Xuất phát từ thực tế trên, chúng tôi thực hiện đề tài” Nghiên cứu bào chế nhũ tương tiêm truyền lipid phối hợp với dung dịch tiêm truyền glucose, acid amin và chất điện giải ” với các mục tiêu:

1 Xây dựng được quy trình bào chế nhũ tương tiêm truyền lipid đạtmột số chỉ tiêu vật lý – hóa lý

2 Đánh giá được tương tác và độ ổn định trạng thái tập hợp của nhũtương tiêm truyền lipid khi phối hợp với các dung dịch tiêmtruyền glucose, acid amin và chất điện giải

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN

1.1 Đại cương về dịch truyền hỗn hợp nuôi dưỡng toàn phần

Dịch truyền hỗn hợp nuôi dưỡng toàn phần là dịch truyền cungcấp dinh dưỡng cho bệnh nhân cần hỗ trợ dinh dưỡng, nhung việc hỗ trọdinh dưỡng qua đường tiêu hóa không đủ hoặc chống chỉ định Đồngthời, mỗi bệnh nhân có nhu cầu dinh dưỡng khác nhau do đó lượng dịchtruyền nuôi dưỡng toàn phần phải được tính toán riêng cho từng bệnhnhân Do đó cần phải pha chế phối hợp dịch truyền hỗn hợp nuôi dưỡngtoàn phần ngay tại khoa dược bệnh viện Dịch truyền hỗn hợp nuôidưỡng toàn phần pha chế phối hợp từ các dung dịch tiêm truyền:glucose, acid amin, chất điện giải và nhũ tương lipid

1.1.1 Thành phần của dịch truyền hỗn hợp nuôi dưỡng toàn phần 1.1.1.1 Dung dịch tiêm truyền glucose

Thường dùng dạng monohydrat của glucose (dextrose), mỗi gamglucose cung cấp 3.4kcal Trong thực tế, thường dùng dung dịch glucosetiêm truyền có nồng độ lớn hơn 5% phối hợp với nhũ tương lipid đểcung cấp năng lượng cho người bệnh [3]

Khi tiêm truyền glucose cần chú ý nồng độ đường huyết, cân bằngnước và điện giải của bệnh nhân

1.1.1.2 Dung dịch tiêm truyền acid amin

Acid amin là thành phần cơ bản cấu tạo nên peptid và protein của

cơ thể Có 20 loại acid amin chuẩn, mà sự kết hợp của chúng tạo ra cácprotein thiết yếu cho việc cấu thành cơ thể người Trong đó có 8 loạiacid amin thiết yếu (lysin, leucin, isoleucin, methionin,phenylalanin, threonin, tryptophan, valin) đáp ứng nhu cầu sinh lý mà

cơ thể không thể tự tổng hợp được hoặc tổng hợp được với lượng rất

nhỏ Vì vậy, các chế phẩm cung cấp dinh dưỡng phải cung cấp được 8acid amin thiết yếu và 10 acid amin không thiết yếu Tỷ lệ các acid aminthiết yếu so với tổng số các acid amin trong một dung dịch có thể thayđổi từ 0.39-0.66 [5].

1.1.1.3 Dung dịch tiêm truyền các chất điện giải

Các chất điện giải có vai trò quan trọng trong hoạt động sinh lýcủa cơ thể Bất kỳ sự rối loạn điện giải nào cũng gây ra những phản ứngbất lợi cho cơ thể

Thường dùng dung dịch tiêm truyền NaCl 0.9%; CaCl2 10%; KCl10%

1.1.1.4 Nhũ tương tiêm truyền lipid

Nhũ tương tiêm truyền lipid là nhũ tương D/ N, dùng theo đườngtĩnh mạch có kích thước giọt dầu thay đổi từ 200 – 500nm, trong đó cókhông quá 0.4 % tổng số các giọt có kích thước lớn hơn 5 μm [12,29]

Trong thực tế điều trị cung cấp dinh dưỡng cho bệnh nhân cầnthiết hỗ trợ dinh dưỡng ngoài đường tiêu hóa: nếu chỉ truyền glucose vàacid amin sẽ chỉ cung cấp protein mà không cung cấp đủ năng lượng cầnthiết cho bệnh nhân Khả năng cung cấp năng lượng của lipid lớn hơnglucose và acid amin: 1 gam lipid cung cấp 9.3 Kcal; 1 gam glucosecung cấp 3.4 Kcal; 1 gam protein cung cấp 4.1 Kcal [4] Việc sử dụngquá mức glucose gây ra nhiều biến chứng nguy hiểm [3] Do đó cần phải

bổ sung năng lượng bằng lipid Nguồn năng lượng lipid được sử dụng ởđây là nhũ tương tiêm truyền lipid Nhũ tương lipid này không nhữngcung cấp năng lượng cho cơ thể mà còn cung cấp các acid béo thiết yếu

Pha dầu trong nhũ tương lipid:

Pha dầu trong các chế phẩm thương mại thường dùng là các acidbéo chưa bão hòa mạch dài(LCT) : dầu đậu nành tinh chế, dầu safflower,

dầu cá giàu acid ω-3, dầu olive tinh chế… hoặc các acid béo chưa bãohòa đơn mạch trung bình (MCT) Mỗi loại dầu có thành phần acid béothiết yếu khác nhau :

- Dầu đậu nành: acid linoleic 51%; acid oleic 24%; acid linolenic 9%; acid stearic 4% [15]

- Dầu safflower: acid linoleic 77%; acid oleic 13%; acid γ-linolenic 0%; acid stearic 3% [15]

γ MCT được điều chế bằng cách thủy phân dầu dừa, rồi cất phânđoạn lấy các acid béo có 6-12 C Sau đó MCT được ester hóa vớiglycerin MCT chứa khoảng 60% acid caprylic và 40% acid capric [13,19]

Pha dầu có thể là một dầu hoặc hỗn hợp nhiều loại dầu Hỗn hợp dầu

có thể là hỗn hợp vật lý trộn giữa các loại dầu LCT và MCT hoặc hỗn hợphóa học ester hóa các acid béo chưa no mạch dài và mạch trung bình vớiglycerin (ST) Xu hướng hiện nay là phối hợp nhiều loại dầu để cung cấpđầy đủ các loại acid béo đồng thời tận dụng được lợi thế trong quá trìnhchuyển hóa trong cơ thể bệnh nhân [24,29]

Mỗi loại dầu phải đạt các tiêu chuẩn qui định trong mỗi chuyênluận riêng trong dược diển châu Âu Ngoài ra, do tính chất chế phẩm làdịch tiêm truyền nên mỗi loại dầu phải đạt các tiêu chuẩn về nội độc tố

vi khuẩn: không quá 100CFU/g [13]

Pha nước trong nhũ tương lipid:

Do yêu cầu chế phẩm là dịch truyền nên nước cất sử dụng phải đạttiêu chuẩn nước cất pha tiêm

Ngoài ra, còn có các thành phần điều chỉnh pH và áp suất thẩmthấu của nhũ tương:

- Glycerin được sử dụng làm chất đẳng trương trong mọi côngthức nhũ dịch truyền tĩnh mạch [9,20].Glycerin phải đạt tiêu chuẩn quiđịnh trong dược điển châu Âu: kim loại nặng: không quá 5 phần triệu;Clorid không quá 10 phần triệu… [13].

- Điều chỉnh pH bằng NaOH hoặc HCl tùy theo giá trị pH cần đạttới pH của nhũ tương thường từ 7-8, phù hợp với pH sinh lý và duy trìđược độ ổn định vật lý của nhũ tương (bởi ở pH này, sự thủy phân cáceste của MCT- LCT và phospholipid là thấp nhất) [15,18]

Một thành phần khác cũng có vai trò ổn định nhũ tương là acidoleic và muối natri oleat Acid cholic, acid deoxycholic và muối củachúng cũng có tác dụng ổn định nhũ tương [18]

Chất nhũ hóa trong nhũ tương lipid:

Là thành phần không thể thiếu và đóng vai trò quan trọng trong

việc hình thành và ổn định nhũ tương Có 3 loại chất nhũ hóa (CNH):

CNH có nguồn gốc thiên nhiên; CNH có nguồn gốc tổng hợp hoặc bántổng hợp; Các chất rắn ở dạng bột mịn [16,17,24,29]

Mặc dù số lượng CNH rất phong phú, tuy nhiên việc sủ dụngCNH trong chế phẩm tiêm truyền hết sức hạn chế bởi lý do độc tính Hầuhết các chất nhũ hóa tổng hợp đều độc khi sử dụng trong thuốc tiêmtruyền bởi nó có khả năng làm tan huyết do thay đổi tính thấm của thànhmạch và màng tế bào máu Một số CNH như: sorbitan este( Span), estercủa sorbitan và polyethyenglycol (Tween) dùng trong thuốc tiêm thể tíchnhỏ, không dùng trong thuốc tiêm truyền thể tích lớn [18]

Trong thực tế thường sử dụng phospholipid lòng đỏ trứng (egglecithin) [13,17,24,29] Nồng độ lecithin được sử dụng trong nhũ tươnglipid tiêm truyền có xu hướng giảm từ 1.2% xuống còn 0.6% để làmgiảm lượng cholesterol tự do trong máu.Lecithin sử dụng trong bào chế

nhũ tương phải đạt các tiêu chuẩn: chỉ số Iod: 60-73/ 100g; Nội độc tố:không quá 20EU/g; phosphor( % trọng lượng/ trọng lượng): 3.5%-4.1%

….[30]

1.1.1.5 Một số chế phẩm nhũ tương tiêm truyền lipid trên thế giới

và thị trường Việt Nam

Bảng 1.1Một số chế phẩm nhũ tương tiêm truyền lipid trên thế giới và Việt Nam

Liposyn Abbott Dầu đậu nành/

Dầu safflower 1/1 ( 10 và 20 )

Lecithin lòng đỏ trứng( 1.2 )

Intralipid Fresenius Kabi Dầu đậu nành

( 10 và 20 )

Lecithin lòng đỏ trứng ( 1.2 )

Lecithin lòng đỏ trứng ( 0.75 và 1.2 )

Lipovenos

( Việt Nam )

Fresenius Kabi Austria GmbH

Dầu đậu nành ( 10 và 20 )

Lecithin lòng đỏ trứng ( 0.6 và 1.2 )

Nhà sản xuất Fresenius Kabi đưa ra chỉ tiêu về nhũ tương tiêmtruyền lipid SMOFlipid 10% như sau: nhũ tương trắng, đồng nhất, địnhlượng thành phần các acid béo chưa no, glycerin, natri, phosphor, dl-α-tocopherol, pH, giới hạn các acid béo tự do, độ vô khuẩn và nội độc tố…đặc biệt là chỉ tiêu 75% KTTP trung bình dưới 350nm, không có tiểuphân lớn hơn 5μm và không được có hơn 2% lượng tiểu phân có kíchthước từ 1.5μm- 5μm

1.2 Phương pháp bào chế nhũ tương tiêm truyền lipid

1.2.1 Chuẩn bị nguyên liệu và bao bì

Bao bì thủy tinh, nút cao su, nút nhôm: theo quy định của dượcđiển cho thuốc tiêm truyền

Nguyên liệu: dầu thực vật, glycerin, lecithin và nước cất đạt tiêuchuẩn và vô khuẩn

1.2.2 Phương pháp bào chế

Có thể phân loại các phương pháp bào chế nhũ tương nói chung theocách phối hợp 2 pha dầu- nước như sau [27]:

1.2.2.1 Phương pháp phân tán pha nội vào pha ngoại

Nguyên tắc: Giai đoạn đầu tiến hành điều chế nhũ tương đặc, có

độ nhớt cao, tạo điều kiện phát huy lực gây phân tán, các chất tan trongpha nào hòa tan vào pha đó, pha ngoại dùng lượng nhỏ so với lượng cótrong thành phần Dùng lực gây phân tán tới độ phân tán và đồng nhất tối

đa, sau đó mới pha loãng để có nhũ tương theo công thức

- Các chất điện ly gây kết vón tiểu phân, gây tách pha cần phaloãng, phối hợp dần vào nhũ tương

- Các chất dễ bị nhiệt phân hủy, dễ bay hơi cần cho vào sau cùngkhi nhũ tương đã nguội bằng nhiệt độ phòng

1.2.2.2 Phương pháp phân tán pha ngoại vào pha nội

Nguyên tắc: Giai đoạn đầu pha nội chiếm tỉ lệ khối lượng cao Khitiếp tục thêm nhiều pha ngoại có thể dẫn đến sự đảo pha (pha phân tántrở thành môi trường phân tán) Chất nhũ hóa thân pha nào hơn, pha đó

sẽ trở thành pha ngoại

Trong nhiều trường hợp, phương pháp này còn gọi là phươngpháp keo khô vì các chất nhũ hóa sử dụng là các chất keo thân nước,polymer dùng ở trạng thái bột mịn, phân tán nhanh vào pha dầu, sau đóthêm pha nước vừa đủ để hòa tan chất nhũ hóa, dùng lực gây phân tán

tạo nhũ tương đặc Cuối cùng mới pha loãng tạo nhũ tương theo côngthức

1.2.2.3 Phương pháp phân tán 2 pha dầu - nước vào nhau ở nhiệt độ thích hợp

Nguyên tắc tiến hành: Chuẩn bị 2 pha dầu – nước riêng, dượcchất, các chất phụ, chất nhũ hóa…có trong thành phần pha nào thì hòatan vào pha đó Nâng nhiệt độ pha nước và pha dầu ( thường pha nướccần nhiệt độ cao hơn pha dầu 10ºC( ở 70ºC ± 10ºC)) Phối hợp 2 phadùng lực gây phân tán tạo nhũ tương đến khi hệ đồng nhất và kích thướctiểu phân mịn nhỏ, khuấy kĩ đến khi hệ nguội tới nhiệt độ phòng

Phương pháp này thường được áp dụng trong sản xuất công nghiệp

1.2.2.4 Phương pháp thêm cả 2 pha dầu – nước vào chất nhũ hóa

Phương pháp này có ưu điểm trong giai đoạn đầu chất nhũ hóa cónồng độ cao phát huy tối đa tác dụng Về nguyên tắc: các chất còn lại tantrong pha nào thì hòa tan vào pha đó để chuẩn bị từng pha dầu hoặc nước

1.2.2.5 Phương pháp tách pha từ dung môi đồng tan cả 2 pha dầu- nước

Phương pháp này đi từ dung môi alcol thân nước để hòa tan phadầu có sự trợ tan của các chất HĐBM hoặc hỗn hợp dung môi Dungdịch này phối hợp với pha nước Một trong hai pha sẽ tách ra thành cáctiểu phân phân tán tạo thành nhũ tương

1.3 Độ ổn định vật lý-hóa lý và các yếu tố ảnh hưởng đến độ bền trạng thái tập hợp của nhũ tương

1.3.1 Độ ổn định vật lý – hóa lý của nhũ tương

Nhũ tương được đánh giá có độ ổn định vật lý khi các chỉ tiêu chấtlượng của thuốc như độ nhớt, phân bố kích thước tiểu phân , pH… giữđược trong giới hạn tiêu chuẩn đề ra trong thời gian bảo quản

Các chỉ tiêu trên ảnh hưởng đến độ hòa tan, độ hấp thu thuốc, độđồng đều hàm lượng của thuốc, từ đó ảnh hưởng đến hiệu quả điều trịcủa thuốc Đặc biệt với nhũ tương tiêm truyền còn ảnh hưởng đến độ antoàn của thuốc [5,6,23,24].

1.3.1.1 Kích thước tiểu phân trong nhũ tương

Tiểu phân trong nhũ tương thuốc là các giọt dầu trong nước (nhũtương D/N) hoặc các giọt nước trong dầu (nhũ tương N/D) [5,23]

Phân bố kích thước tiểu phân trong nhũ tương là một yếu tố quantrọng quyết định hình thức cảm quan, tốc độ tách lớp… sau thời gian bảoquản Các tiểu phân trong nhũ tương có thể có các kiểu phân bố khácnhau

Kích thước tiểu phân trong nhũ tương thuốc sau thời gian bảo quản cóthể tăng theo chiều hướng tự diễn biến làm giảm diện tích bề mặt tiếp xúctrong hệ làm giảm năng lượng tự do của hệ Khi kích thước hạt càng lớn thìkhả năng kết tụ càng tăng và do đó kích thước tiểu phân càng dễ tăng lên Hệcàng bền nếu kích thước hạt càng nhỏ trong điều kiện sức căng bề mặt phâncách pha đã được giảm nhỏ tối đa [9,26]

1.3.1.2 Tốc độ tách lớp của các tiểu phân trong nhũ tương

Tốc độ tách lớp của các tiểu phân (Vsl) phân tán là yếu tố ảnhhưởng đến độ bền vững của nhũ tương Tốc độ này càng lớn nhũ tươngcàng không bền, dẫn đến bị tách lớp [5]

Theo phương trình Stock: Vsl = 2 ( 1 2)

9

r d² −d g

ηTrong đó : Vsl: vận tốc tách của các tiểu phân pha phân tán khỏi MTPT;

d1, d2 : tỷ trọng của pha phân tán và MTPT; r : bán kính tiểu phân phaphân tán; η : độ nhớt của MTPT; g : gia tốc trọng trường

Biện pháp tăng độ nhớt và làm nhỏ kích thước tiểu phân làm chậmquá trình tách lớp của nhũ tương [23].

1.3.1.3 Điều kiện bền vững trạng thái tập hợp của nhũ tương

Độ ổn định vật lý của nhũ tương, xét về cấu trúc hóa lý của một hệphân tán được gọi là độ bền trạng thái tập hợp, là khả năng hệ giữ đượcphân bố kích thước tiểu phân như trạng thái ban đầu, hạn chế được sựtập hợp của các tiểu phân nhỏ thành các tiểu phân lớn [14,23]

Có thể áp dụng lý thuyết khoa học về hệ phân tán keo để chỉ rađiều kiện bền vững của nhũ tương phụ thuộc vào 5 yếu tố như sau: Lựchút Van der Waals; lực đẩy tĩnh điện, lực solvate hóa, Sự giảm của lớpđiện kép, Cầu nối polymer

Theo thuyết về độ bền của hệ keo của các nhà khoa học Deryagin,Landau, Verway và Ovebeek (thuyết DLVO) thì lực tương tác giữa haitiểu phân ( FT) bằng tổng hợp của lực đẩy (FR) và lực hút (FA):

FT = FR+ FA

Bề mặt tiểu phân trong nhũ tương tích điện tạo ra lớp điện kép trên

bề mặt tiểu phân bao gồm lớp hấp phụ và lớp khuếch tán Khi tiểu phân

di chuyển luôn kéo theo lớp hấp phụ, lớp hấp phụ được di chuyển trượttrên bề mặt phân cách của lớp này với lớp khuếch tán

Điện thế trên bề mặt trượt được gọi là thế điện động Zeta, nóquyết định tốc độ di chuyển của tiểu phân trong điện trường Khi điệnthế Zeta của tiểu phân có giá trị tuyệt đối nhỏ hơn 25mV thường dễ dẫnđến keo tụ Nhưng kích thước các hạt phân tán trong hệ không đều nhaunên sự hấp phụ các ion từ môi trường phân tán lên bề mặt mỗi tiểu phâncũng khác nhau, từ đó điện thế Zeta ở mỗi tiểu phân cũng khác nhau[17,23]

Điện thế Zeta càng lớn lực đẩy tĩnh điện giữa các tiểu phân càngmạnh, không có điều kiện kết dính với nhau gây ra hiện tượng kết tụđông vón, tăng kích thước tiểu phân Nhũ tương tương đối bền vững khigiá trị tuyệt đối của thế Zeta đo được lớn hơn 30mV (điều kiện đủ đểthiết lập “hàng rào năng lượng” ngăn cản các tiểu phân tiến gần nhau gâykết tụ, có hiệu lực giúp hệ phân tán ổn định) [ 8,23,31].

1.3.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến độ bền trạng thái tập hợp của nhũ tương

1.3.2.1 Tá dược ổn định nhũ tương

Các chất diện hoạt sử dụng trong nhũ tương tạo điều kiện giảmnhỏ KTTP và kích thước hạt phân bố trong khoảng hẹp dần Khi hấp phụlên bề mặt tiểu phân chất diện hoạt tạo ra lớp áo bảo vệ Chất diện hoạtion hóa còn có thể làm tích điện làm tăng lực đẩy tĩnh điện (tăng thếZeta), làm tăng độ bền trạng thái tập hợp của nhũ tương Việc sử dụngchất diện hoạt thích hợp cón có tác dụng chống lại sự bám dính của cáctiểu phân vào bề mặt bao bì, một trong những nguyên nhân gây kết vóntrong quá trình bảo quản Tuy nhiên đối với nhũ tương tiêm truyền, dođưa lượng lớn dịch vào cơ thể nên việc sử dụng các chất diện hoạt cầnđược xem xét kỹ lưỡng để đảm bảo yêu cầu điều trị và an toàn [14,23 ]

Các chất điện ly thêm vào nhũ tương có thể làm tăng hay giảm thếđiện động Zeta của tiểu phân trong nhũ tương, từ đó làm tăng hay giảm

độ bền trạng thái tập hợp của hệ

1.3.2.2 Nhiệt độ

Nhiệt độ tăng ảnh hưởng đến sự tích điện bề mặt tiểu phân do tăngquá trình phản hấp phụ các ion tạo điện thế bề mặt, làm giảm độ nhớtmôi trường, dẫn đến giảm độ bền nhũ tương

Nhiệt độ cao khi tiệt khuẩn cũng như trong quá trình bảo quản làmtăng động năng của các tiểu phân dễ gây ra sự tập hợp kết vón các tiểuphân.

1.3.2.3 Độ nhớt của môi trường phân tán

Khi độ nhớt của môi trường phân tán càng cao, sự chuyển độngcủa các tiểu phân càng giảm nên xác suất chúng va chạm, tiếp xúc vớinhau để kết hợp thành hạt lớn dần, rồi tách hẳn thành lớp riêng cũnggiảm đi, độ bền của nhũ tương tăng lên Độ nhớt của nhũ tương luôn lớnhơn môi trường phân tán [8]

Theo Smolukhosly độ nhớt của nhũ tương có tiểu phân mang điệncao hơn độ nhớt của nhũ tương có tiểu phân không mang điện Sự tăng

độ nhớt này là kết quả của sự tồn tại lớp điện kép trên bề mặt đã gây rahiệu ứng điện nhớt [16]

1.3.2.4 pH

Nhũ tương D/N tồn tại bền vững ở một khoảng pH thích hợp Khi

pH thay đổi làm thay đổi tỷ lệ nồng độ các ion trong dung dịch, dẫn đếnảnh hưởng tới điện thế bề mặt, bề dày lớp khuếch tán và thế Zeta Nếuchất kiềm thêm vào hệ, các tiểu phân có khuynh hướng thu được nhiềuđiện tích âm Ngược lại nếu acid được thêm vào hệ, các tiểu phân sẽ thuđược nhiều điện tích dương Do đó cần duy trì pH của nhũ tương ở giátrị xác định nào đó bằng cách dùng hệ đệm thích hợp Ở mỗi mẫu đều cómột điểm mà đường cong thế Zeta đi qua giá trị 0, điểm này được gọi làđiểm đẳng điện, là điểm mà hệ ở trạng thái kém ổn định nhất Với nhũtương tiêm truyền, ngoài vai trò ổn định nhũ tương, cần điều chỉnh pH

về giá trị thích hợp với pH của máu, đảm bảo an toàn khi tiêm truyền[6]

1.4 Một số nghiên cứu về nhũ tương tiêm truyền lipid phối hợp với các dung dịch tiêm truyền: glucose, acid amin và chất điện giải

Năm 2007, Kovácsné Balogh Judit đã nghiên cứu độ ổn định củanhũ tương tiêm truyền phối hợp với các chất cung cấp năng lượng vàchất điện giải, trong đó KTTP và điện thế Zeta là những chỉ tiêu quantrọng hàng đầu để đánh giá độ ổn định vật lý- hóa lý của chế phẩm saukhi phối hợp [18,19]

Năm 2009, Balogh Judit và cộng sụ, trong thí nghiệm nghiên cứu

độ ổn định của nhũ tương tiêm truyền phối hợp các chất cung cấp nănglượng và chất điện giải đã chứng minh được nhũ tương chứa dầu LCT có

độ ổn định kém hơn so với nhũ tương chứa Structolipid mặc dù KTTPban đầu của Intralipid nhỏ hơn ( 200nm ) so với Structolipid ( 350 nm ),nhưng sau thời gian bảo quản, nhũ tương Intralipid có KTTP tăng lên rõrệt ( 4 ngày : 350nm; sau 10 ngày: 500nm ) [19]

Năm 2002, trong nghiên cứu của mình về độ ổn định của nhũtương tiêm truyền phối hợp các chất cung cấp năng lượng với các chấtđiện giải, F Brouillet và cộng sự đã chứng minh được việc giảm KTTP

và phân bố KTTP bằng cách lọc qua màng lọc sứ có kích thước lỗ lọckhác nhau ( 0.8; 1.2; 1.4μm ) [10]

Năm 2002, R H Miiller và cộng sự đã nghiên cứu về độ ổn địnhcủa Lipofundin MCT/ LCT khi phối hợp với các chất điện giải nồng độcao: 66.7 mmol/l ion kim loại hóa trị I; 6.7 mmol/l ion kim loại hóa trịII( 3.4mmol là ion Ca2+ ) Chế phẩm để ổn định trong 7 ngày, trong khi

đó Intralipid ổn định trong không quá 7 ngày [21,22]

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG

PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Nguyên liệu, thiết bị

2.1.1 Nguyên vật liệu

1 Dầu đậu nành Viện công nghệ thực

BP 2005

11 Dung dịch tiêm truyền

Glucose 30%

Việt Nam(B.BRAUN)

BP 2005

12 Dung dịch tiêm KCl 10% Việt Nam BP 2005

13 Dung dịch tiêm truyền

NaCl 0.9%

Việt Nam(B.BRAUN)

2.1.2 Thiết bị

- Máy đo kích thước tiểu phân HORIBA LA-950

- Máy khuấy từ gia nhiệt IKA®RH digital KT/C

- Máy siêu âm Satorius Labsonic®M

- Tủ sấy tĩnh

- Máy HPLC Agilent 1200 VKN/VL/06.19

- Nồi cách thủy, cân kỹ thuật, nhiệt kế và các dụng cụ, thiết bị bào chế,kiểm nghiệm khác

2.2 Nội dung nghiên cứu

2.2.1 Khảo sát sơ bộ lựa chọn nguyên liệu và phương pháp bào chế nhũ tương tiêm truyền lipid

2.2.2 Nghiên cứu lựa chọn pH và phương pháp bào chế nhũ tương tiêm truyền lipid

2.2.3 Xây dựng qui trình bào chế nhũ tương tiêm truyền lipid

- Xây dựng qui trình bào chế nhũ tương tiêm truyền lipid trong qui

mô nhỏ thử nghiệm :50ml và 500ml

2.2.4 Nghiên cứu đánh giá tương tác khi phối hợp nhũ tương tiêm truyền lipid với các dung dịch tiêm truyền: glucose, acid amin và các chất điện giải

- Sơ bộ đánh giá tương tác khi phối hợp nhũ tương lipid với các

dung dịch tiêm truyền: glucose, acid amin và các chất điện giải bằng cảmquan và kính hiển vi

- Nghiên cứu đánh giá độ dẫn điện riêng, kích thước tiểu phân và

pH của các mẫu nhũ tương phối hợp

- Nghiên cứu đánh giá tương tác hóa học trong mẫu nhũ tươngphối hợp

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3.1 Phương pháp xác định sơ bộ kích thước tiểu phân bằng kính hiển vi

Nguyên tắc: Sử dụng kính hiển vi vật kính 100 cùng với trắc vi thị kính Tiến hành : Lấy mỗi mẫu 0.1ml pha loãng trong 20ml nước cất Dùng pipet

Pasteur chấm một giọt nhỏ lên phiến kính Dùng lam kính dàn mỏng lớpmẫu Soi trên kính hiển vi sơ bộ đếm các giọt ở từng vùng kích thước khácnhau Làm như vậy với mỗi mẫu 3 lần, lấy kết quả trung bình [8,31]

2.3.2 Phương pháp xác định kích thước tiểu phân

Tiến hành xác định KTTP trên máy đo KTTP HORIBA LA-950theo nguyên tắc tán xạ laser

Khi chiếu tia laser vào các tiểu phân có kích thước khác nhau sẽ thuđược mức độ tán xạ ánh sáng khác nhau Dựa vào mức độ tán xạ củachùm tia sáng sau khi va đập vào tiểu phân có thể tính được kích thướctiểu phân theo thuyết Mie [11]

Phương pháp tán xạ laser đưa ra kết quả là tỷ lệ phần trăm thể tíchcủa các hạt theo đường kính tiểu phân Khi chiếu tia laser tới tiểu phân,tại rìa tiểu phân xảy ra hiện tượng tán xạ ánh sáng mạnh và trên nền tathu được hình ảnh của tiểu phân ( nhờ Detector nhận biết hình ảnh ).Thông thường để đánh giá một cách chuẩn xác người ta thường dùng

hệ số giao thoa ánh sáng trên một micromet:

SCPM = Csca ( 4π r3/3 )

Hệ số giao thoa tán xạ được tính theo công thức:

S = 0.75 * ( 1 - cos θ ) SCPMTrong đó : cos θ là cosin góc tán xạ trung bình

Từ phân tích mối tương quan giữa kích thước tiểu phân và S ta tínhđược kích thước của tiểu phân

Tiến hành đo

Mẫu cần phân tích được phân tán đều trong nước ( bằng siêu âm )với tỷ lệ nhất định, cho vào buồng đựng mẫu, lựa chọn chỉ số khúc xạtương ứng với mỗi mẫu khác nhau và các chế độ rung, khuấy, tuầnhoàn tối ưu Nguồn tia sáng laser được phát ra, qua hệ thống lọc vàđập vào các tiểu phân Năng lượng của nguồn sáng laser làm tiểuphân nhiễu xạ, từ đó cho ra các thông tin về kích thước tiểu phân nhờmột hệ thống có gắn máy tính sử dụng phần mềm chuyên dụng

Một số mẫu chuẩn đã được nạp sẵn bộ vi xử lý để đối chiếu, sosánh với mẫu đang cần xác định và cho ra thông tin chính xác về mẫutiểu phân cần phân tích Thông tin về kích thước tiểu phân sẽ đượcqua máy thu và hệ thống khuếch đại rồi in ra kết quả

2.2.3 Phương pháp đo độ dẫn điện riêng

Tiến hành đo theo nguyên tắc nêu trong tài liệu [1]

- Sử dụng chất điện ly chuẩn đã biết độ dẫn điện riêng κch hiệuchỉnh máy đo về giá trị chuẩn của chất điện ly

- Rót mẫu cần đo vào cốc đo của máy Tiến hành đo độ dẫn điệncủa mỗi mẫu Tiến hành 3 lần lấy kết quả trung bình

2.3.4 Phương pháp bào chế nhũ tương tiêm truyền lipid

Công thức cho 500ml nhũ tương lipid 10% :

Sơ đồ 2.3 Sơ đồ các giai đoạn bào chế nhũ tương lipid

Pha nước

( 70-80ºC )

Nhũ tương đặc( khuấy từ, 70ºC )

Nước cất+Glycerin

( 100ºC/ 1h )

Lecithin Dầu thực vật( 121ºC/ 15 phút )

Pha dầu( 60-70ºC )

Nhũ tương(siêu âm đồng nhất hóa,

Nguyên tắc bào chế nhũ tương tiêm truyền lipid

- Hấp tiệt trùng dầu ở 121ºC/ 15 phút

- Nước đạt tiêu chuẩn nước cất pha tiêm theo dược điển Các nguyênliệu: glycerin, lecithin, dầu đạt tiêu chuẩn dược điển và vô khuẩn

- Tiến hành pha chế trong điều kiện vô khuẩn

- Tiến hành bào chế theo phương pháp 1.2.2.1; 1.2.2.2; 1.2.2.3 đã trìnhbày ở mục 1.2.2

- Tùy theo từng phương pháp tiến hành phối hợp từ từ pha dầu vào phanước hoặc ngược lại, hoặc phối hợp đồng thời 2 pha không qua giai đoạntạo nhũ tương đặc

- Khi lecithin nằm trong pha dầu, tiến hành tương tự như trên sơ đồ, khi

đó pha dầu gồm: dầu và lecithin; pha nước gồm glycerin và nước cất

2.3.5 Phương pháp bào chế dịch truyền phối hợp nhũ tương lipid với dung dịch tiêm truyền glucose 10%; 30% với dung dịch tiêm truyền acid amin và dung dịch tiêm truyền các chất điện giải

Nguyên tắc pha chế phối hợp các dịch truyền:

- Pha loãng nhũ dịch tiêm truyền 10% bằng glucose 10%, sau đó phaloãng tiếp bằng glucose 30%, khuấy đều cho đồng nhất

- Thêm từ từ dung dịch vaminolact 6.5% vào nhũ tương đã pha loãng ởtrên, đồng nhất hóa bằng máy khuấy từ và máy siêu âm

- Tiếp tục thêm từ từ dung dịch chất điện giải NaCl 0.9%; KCl 10%vàCaCl2 10% vào hỗn hợp trên, vừa thêm vừ khuấy từ và siêu âm

- Đồng nhất hóa hỗn hợp bằng khuấy từ và siêu âm

Các chế phẩm sử dụng đều phải đạt tiêu chuẩn kiểm nghiệm thành phẩm

và các giai đoạn pha chế được thực hiện trong điều kiện vô khuẩn

2.3.6 Phương pháp định lượng acid amin

Định lượng acid amin bằng phương pháp HPLC

Pha mẫu chuẩn: Hút 5 ml mẫu chuẩn pha trong 100ml HCl 0.1N Siêu

âm và lọc, để phản ứng xảy ra Sau đó tiến hành tiêm mẫu

Pha mẫu thử: Hút 5ml mẫu thử pha trong 20ml HCl 0.1N Siêu âm và

lọc, để phản ứng xảy ra Sau đó tiến hành tiêm mẫu

Tiến hành: Hút 4 μl dung dịch thử ( chuẩn ), 4 μl dung dịch thuốc thử

OPA, 4 μl dung dịch thuốc thử FMOC, 12 μl đệm borat pH10.4, lắc đều.Sau 3 phút tiêm vào hệ thống sắc ký

CHƯƠNG 3 THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ

4 Nước cất pha tiêm vừa đủ 50ml

Để lựa chọn được thành phần pha dầu, pha nước và phương phápbào chế nhũ tương lipid, chúng tôi tiến hành khảo sát các mẫu dầu vàphương pháp bào chế nhũ tương

Theo các nghiên cứu của các tài liệu đã nghiên cứu , chúng tôi tiếnhành khảo sát lựa chọn pha dầu của nhũ tương lipid từ 3 mẫu dầu nguyênliệu : Dầu 1: dầu vừng ; Dầu 2 : dầu đậu nành; Dầu 3 : dầu đậu nànhtinh chế

và khảo sát 2 cách phối hợp chất nhũ hóa (Lecithin) vào nhũ tương :

- Cách 1 : phối hợp CNH vào pha nước

- Cách 2 : phối hợp CNH vào pha dầu

với 3 phương pháp bào chế nhũ tương theo trình tự phối hợp hai pha:

Phương pháp a : phân tán pha dầu vào pha nước :

- Chuẩn bị pha nước: cân các thành phần theo lượng ghi trong công thức

+ CNH trong pha nước: phân tán lecithin trong glycerin và nướccất (5ml), khuấy đến đồng nhất thu được pha nước Giữ pha nước ở 70-80ºC