Nghiên cứu bào chế nhũ tương nano nhỏ mắt chứa diclofenac

Bào chế nhũ tương nano bằng phương pháp siêu âm kết hợp đồng nhất hóa phân cắt tốc độ cao .... Bào chế được nhũ tương nano nhỏ mắt diclofenac bằng phương pháp siêu âm, siêu âm kết hợp đồ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

NGUYỄN THỊ THÚY

NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ NHŨ TƯƠNG NANO NHỎ MẮT CHỨA DICLOFENAC

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

HÀ NỘI – 2013

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

NGUYỄN THỊ THÚY

NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ NHŨ TƯƠNG NANO NHỎ MẮT CHỨA DICLOFENAC

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

LỜI CẢM ƠN

Lời đầu tiên, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc tới:

PGS TS Nguyễn Văn Long

TS Nguyễn Trần Linh ThS Nguyễn Văn Lâm

DS Đặng Thị Hiền

là những người thầy đã dìu dắt tôi từ những ngày đầu làm nghiên cứu khoa học và cũng là những người trực tiếp hướng dẫn, tận tình chỉ bảo, giúp đỡ tôi hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này

Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn tới các thầy cô, các anh chị kỹ thuật viên bộ môn Bào chế và bộ môn Công nghiệp Dược đã nhiệt tình giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện khóa luận này

Tôi cũng xin cảm ơn Ban giám hiệu, các phòng ban, các thầy cô giáo và cán

bộ nhân viên trường Đại học Dược Hà Nội – những người đã dạy bảo và giúp đỡ tôi trong suốt 5 năm học tập tại trường

Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè, anh chị em

đã dành cho tôi sự giúp đỡ và động viên quý báu trong suốt thời gian qua

Hà Nội, ngày 21 tháng 5 năm 2013

Sinh viên

Nguyễn Thị Thúy

MỤC LỤC

Danh mục các kí hiệu, các chữ viết tắt

Danh mục các bảng

Danh mục các hình vẽ, đồ thị

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 2

1.1 Thông tin về dược chất acid diclofenac 2

1.1.1 Công thức hóa học 2

1.1.2 Điều chế 2

1.1.3 Đặc tính lý hóa 2

1.2 Thuốc nhỏ mắt 3

1.2.1 Định nghĩa 3

1.2.2 Sinh khả dụng thuốc nhỏ mắt 3

1.2.3 Thuốc nhỏ mắt chứa diclofenac 4

1.3 Nhũ tương nano (Nano-emulsion) 4

1.3.1 Định nghĩa 4

1.3.2 Thành phần 4

1.3.3 Phương pháp bào chế 5

1.3.4 Độ ổn định 7

1.3.5 Một số phương pháp đánh giá hệ nhũ tương nano 7

1.3.6 Ưu điểm chung của nhũ tương nano 10

1.3.7 Ứng dụng 11

1.4 Ưu điểm của nhũ tương nano nhỏ mắt 11

1.5 Một số nghiên cứu về nhũ tương nano dành cho nhãn khoa 12

1.6 Một số chế phẩm nhũ tương nano trên thị trường 14

1.7 Nghiên cứu về nhũ tương nano nhỏ mắt chứa diclofenac 15

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18

2.1 Nguyên liệu, thiết bị 18

2.1.1 Nguyên liệu 18

2.1.2 Thiết bị 18

2.2 Nội dung nghiên cứu 19

2.3 Phương pháp nghiên cứu 19

2.3.1 Phương pháp bào chế nhũ tương nano 19

2.3.2 Phương pháp đánh giá một số đặc tính của hệ 20

2.3.3 Phương pháp định lượng 21

2.3.4 Phương pháp xác định tỷ lệ dược chất được nhũ tương hóa 22

2.3.5 Phương pháp đánh giá giải phóng dược chất in vitro 23

2.4 Phương pháp xử lý số liệu 24

CHƯƠNG 3 THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 25

3.1 Thẩm định phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao để định lượng dược chất diclofenac 25

3.1.1 Tính đặc hiệu của phương pháp 25

3.1.2 Xác định tính tuyến tính 25

3.1.3 Xác định độ đúng 26

3.1.4 Xác định độ chụm 28

3.1.5 Kết luận 28

3.2 Bào chế nhũ tương nano và xác định thời gian đồng nhất hóa thích hợp 29

3.2.1 Bào chế nhũ tương nano bằng phương pháp siêu âm kết hợp đồng nhất hóa ở áp suất cao 29

3.2.2 Bào chế nhũ tương nano bằng phương pháp siêu âm kết hợp đồng nhất hóa phân cắt tốc độ cao 30

3.2.3 Bào chế nhũ tương nano bằng phương pháp siêu âm 32

3.3 Xác định tỷ lệ dược chất được nhũ tương hóa 33

3.4 Đánh giá khả năng giải phóng dược chất in vitro 33

3.5 Bào chế nhũ tương nano ở quy mô 1 lít bằng phương pháp siêu âm 35

3.5.1 Khảo sát sự thay đổi kích thước tiểu phân của nhũ tương nano theo thời gian siêu âm 36

3.5.2 Khảo sát sự thay đổi tỷ lệ dược chất được nhũ tương hóa theo thời gian siêu âm 38 3.5.3 Khảo sát sự thay đổi mức độ giải phóng dược chất in vitro theo thời gian siêu âm 39

3.6 Đánh giá sự thay đổi một số thông số của nhũ tương nano trong điều kiện lão hóa cấp tốc 1 tháng 40

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43

Tài liệu tham khảo

Phụ lục

DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT

(Diện tích dưới đường cong)

HPLC High performace liquid chromatography

(Sắc kí lỏng hiệu năng cao)

KTTP Kích thước tiểu phân

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 1.1: Một số nghiên cứu về nhũ tương nano dành cho nhãn khoa 12

Bảng 1.2: Một số chế phẩm nhũ tương nano trên thị trường 15

Bảng 1.3: Các nghiên cứu về nhũ tương nano nhỏ mắt chứa diclofenac 15

Bảng 1.4: Công thức NTN được lựa chọn để tiến hành các nghiên cứu tiếp theo 17

Bảng 2.1: Nguyên liệu sử dụng trong quá trình thực nghiệm 18

Bảng 3.1: Sự phụ thuộc giữa diện tích pic và nồng độ acid diclofenac 26

Bảng 3.2:Kết quả khảo sát độ đúng của phương pháp HPLC 27

Bảng 3.3: Kết quả khảo sát độ chụm của phương pháp HPLC 28

Bảng 3.4: Kết quả sự thay đổi KTTP theo thời gian ĐNH của các NTN bào chế bằng phương pháp siêu âm kết hợp ĐNH ở áp suất cao 29

Bảng 3.5: Kết quả khảo sát thời gian ĐNH thích hợp và KTTP của các NTN bào chế bằng phương pháp siêu âm, siêu ấm kết hợp ĐNH ở áp suất cao 30

Bảng 3.6: Kết quả khảo sát sự thay đổi KTTP theo thời gian ĐNH của NTN CT 4 bào chế bằng phương pháp ĐNH phân cắt tốc độ cao 31

Bảng 3.7: Kết quả hàm lượng DC trong mẫu NTN bào chế bằng phương pháp siêu âm 32

Bảng 3.8: Kết quả tỷ lệ DC được nhũ tương hóa của các mẫu NTN 33

Bảng 3.9: Kết quả tỷ lệ DC giải phóng từ NTN trong 4 giờ sử dụng màng thẩm tích 12000 Dalton 34

Bảng 3.10: Kết quả sự thay đổi KTTP theo thời gian siêu âm của các mẫu NTN bào chế ở quy mô 1 lít 36

Bảng 3.11: So sánh KTTP của các NTN bào chế bằng phương pháp siêu âm ở quy mô 100 mL và 1 L 38

Bảng 3.12: Kết quả tỷ lệ DC được nhũ tương hóa của các mẫu NTN có thời gian siêu âm khác nhau, bào chế ở quy mô 1 lít 39

Bảng 3.13: Kết quả tỷ lệ DC giải phóng trong 4 giờ qua màng thẩm tích 12000 Dalton của các mẫu NTN bào chế ở quy mô 1 lít có thời gian siêu âm khác nhau 39

Bảng 3.14: Kết quả xác định một số thông số của các NTN sau thời gian bảo quản 1 tháng ở 40±2ºC, độ ẩm 75±5% và so sánh với NTN mới bào chế 41

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

Hình 1.1: Công thức cấu tạo acid diclofenac 2

Hình 1.2: Phương pháp ĐNH ở áp suất cao 6

Hình 1.3: Sơ đồ bình Franz 9

Hình 1.4: Mô hình thử nghiệm kĩ thuật thẩm tách micro 10

Hình 3.1: Đồ thị biểu diễn sự phự thuộc tuyến tính giữa nồng độ acid diclofenac và diện tích pic 26

Hình 3.2: Đồ thị biểu diễn sự thay đổi KTTP theo thời gian ĐNH của các NTN bào chế bằng phương pháp siêu âm kết hợp ĐNH ở áp suất cao 30

Hình 3.3: Đồ thị biểu diễn sự thay đổi KTTP theo thời gian ĐNH sử dụng máy phân cắt tốc độ cao với tốc độ 6000 vòng/phút 31

Hình 3.4: Đồ thị biểu diễn sự thay đổi KTTP theo thời gian ĐNH sử dụng máy phân cắt tốc độ cao với tốc độ 9000 vòng/phút 32

Hình 3.5: Đồ thị so sánh tỷ lệ DC giải phóng từ NTN sử dụng màng thẩm tích 12000 Dalton 35

Hình 3.6: Đồ thị biểu diễn sự thay đổi KTTP theo thời gian siêu âm của mẫu NTN bào chế ở quy mô 1 lít 37

Hình 3.7: Đồ thị thể hiện tỷ lệ DC giải phóng qua màng thẩm tích 12000 Dalton của các mẫu NTN bào chế ở quy mô 1 lít có thời gian siêu âm khác nhau 40

Hình 3.8: Đồ thị so sánh tỷ lệ DC giải phóng in vitro của NTN sau thời gian bảo quản 1 tháng ở 40±2ºC, độ ẩm 75±5% và NTN mới bào chế 42 Hình P1: Kết quả phân bố kích thước tiểu phân mẫu NTN CT 1……… PL1 Hình P2: Kết quả phân bố kích thước tiểu phân mẫu NTN CT 2……… PL1 Hình P3: Kết quả phân bố kích thước tiểu phân mẫu NTN CT 3……… PL1 Hình P4: Kết quả phân bố kích thước tiểu phân mẫu NTN CT 4……… PL1 Hình P5: Kết quả thế zeta mẫu NTN CT 4……….PL2 Hình P6: Sắc đồ của dung dịch acid diclofenac chuẩn……… PL3 Hình P7: Sắc đồ mẫu NTN CT 1………PL3 Hình P8: Sắc đồ mẫu xác định hàm lượng DC được nhũ tương hóa CT 1………PL3

ĐẶT VẤN ĐỀ

Thuốc nhỏ mắt là dạng bào chế chiếm 90% các dạng thuốc điều trị các bệnh

về mắt và được người tiêu dùng chấp nhận vì sự tiện dụng của nó [38] Tuy nhiên, sinh khả dụng của thuốc nhỏ mắt thường rất thấp (chỉ khoảng 1% - 3%) do tác động của cơ chế bảo vệ sinh lý của hệ thống nước mắt và bản chất cấu tạo các lớp mô giác mạc [2] Hơn nữa, sự hấp thu toàn thân của lượng thuốc thoát qua đường mũi –

lệ có thể gây ra một số tác dụng không mong muốn

Diclofenac là dẫn chất của acid phenylacetic, thuộc nhóm thuốc chống viêm không steroid, có tác dụng chống viêm, hạ sốt, giảm đau mạnh Tuy nhiên, trên thị trường diclofenac dùng cho nhãn khoa mới chỉ có dạng dung dịch nhỏ mắt 0,1%, thời gian tác dụng ngắn nên người bệnh phải dùng thuốc ít nhất 3 – 5 lần một ngày Những nghiên cứu gần đây cho thấy thuốc nhỏ mắt nhũ tương nano khắc phục được những nhược điểm nêu trên của thuốc nhỏ mắt dạng dung dịch Trên thị trường thế giới đã có chế phẩm Cationorm® (Novagali Pharma, Pháp) là nhũ tương nano cation không chứa DC, chỉ định cho các trường hợp khô mắt Thị trường Việt Nam chưa có chế phẩm thuốc nhỏ mắt nhũ tương nano nào Vì vậy, bộ môn Bào chế đã tiến hành nghiên cứu bào chế nhũ tương nano nhỏ mắt chứa diclofenac NTN nhỏ mắt chứa diclofenac đã được nghiên cứu bào chế bằng phương pháp siêu âm [5], phương pháp siêu âm kết hợp ĐNH ở áp suất cao [6], phương pháp ĐNH phân cắt tốc độ cao [8] và đánh giá một số đặc tính của NTN [5], [6], [8]

Tiếp theo những nghiên cứu trên, chúng tôi tiến hành đề tài “Nghiên cứu bào

chế nhũ tương nano nhỏ mắt chứa diclofenac” với các mục tiêu sau:

1 Bào chế được nhũ tương nano nhỏ mắt diclofenac bằng phương pháp siêu

âm, siêu âm kết hợp đồng nhất hóa ở áp suất cao hoặc phân cắt tốc độ cao

2 Đánh giá ảnh hưởng của một số thông số kĩ thuật đến đặc tính nhũ tương nano

3 Bào chế nhũ tương nano nhỏ mắt diclofenac bằng phương pháp siêu âm ở quy mô thể tích 1 L và bước đầu đánh giá độ ổn định của nhũ tương nano

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 1.1 Thông tin về dược chất acid diclofenac

1.1.1 Công thức hóa học

1.1.2 Điều chế

Trong tự nhiên, diclofenac tồn tại ở dạng muối Trên thị trường, nguyên liệu diclofenac chủ yếu tồn tại ở dạng muối natri, nên để thu được dạng acid: tiến hành acid hóa dung dịch natri diclofenac bằng dung dịch acid hydrocloric 1 mol/L, điều chỉnh đến pH 2-3 [51] Lọc lấy kết tủa trắng, rửa sạch bằng nước, sau đó chiết bằng cloroform; loại cloroform bằng thiết bị làm bay hơi chân không [26]

- Hệ số phân bố dầu nước (n-octanol/nước): log P = 1,69 [44]

Hình 1.1: Công thức cấu tạo

- Hấp thụ UV: λmax (methanol) 285 nm, λmax (acetonitril) 278 nm [51]

 Tính chất hóa học: diclofenac chứa nhóm amin bậc 2 nên dễ bị oxy hóa [3]

 Định tính [3], [4], [53]:

- Đo phổ hồng ngoại, sắc ký lớp mỏng: so sánh với chất chuẩn

- Chế phẩm/ethanol có phản ứng với dung dịch kali fericyanid, sắt (III) clorid, acid hydrocloric cho màu xanh, có tủa

Thực tế thuốc nhỏ mắt cũng có dạng nhũ tương Ví dụ: chế phẩm RestasisTM(Allergan, Mỹ) là nhũ tương nhỏ mắt chứa cyclosporin A 0,05%; chế phẩm Refresh Dry Eye Therapy® (Allergan, Mỹ) là nhũ tương nhỏ mắt không có DC [19]

1.2.2 Sinh khả dụng thuốc nhỏ mắt

1.2.2.1 Các yếu tố ảnh hưởng đến sinh khả dụng thuốc nhỏ mắt

Sinh khả dụng thuốc nhỏ mắt thường rất thấp Chỉ có khoảng 1% - 3% lượng

DC có trong liều thuốc đã đưa vào mắt là thấm được qua giác mạc và phân bố đến nơi tác dụng tại các khoang ở trong mắt Đó là do tác động của cơ chế bảo vệ sinh

lý của hệ thống nước mắt và bản chất cấu tạo các lớp mô của giác mạc [1], [2], [29]

1.2.2.2 Các biện pháp cải thiện sinh khả dụng thuốc nhỏ mắt

- Tăng thời gian lưu thuốc ở vùng trước giác mạc: chất làm tăng độ nhớt, chất kết dính sinh học, bào chế thuốc nhỏ mắt dạng hỗn dịch, thuốc mỡ tra mắt…[1], [2]

1.2.3 Thuốc nhỏ mắt chứa diclofenac

Hiện nay trên thị trường, thuốc nhỏ mắt chứa diclofenac chỉ có dạng dung dịch natri diclofenac 0,1% Ví dụ: biệt dược Voltaren Ophtha (Novartis – Thụy Sĩ) [9]

1.3 Nhũ tương nano (Nano-emulsion)

1.3.1 Định nghĩa

Nhũ tương nano là một hệ phân tán cơ học vi dị thể, trong suốt, trong mờ hoặc đục như sữa, được hình thành từ hai chất lỏng không đồng tan, trong đó một chất lỏng là pha phân tán (pha nội, pha không liên tục) được phân tán vào chất lỏng thứ hai là môi trường phân tán (pha ngoại, pha liên tục) dưới dạng các tiểu phân có kích thước hầu hết nằm trong khoảng 20 – 200 nm [1], [24], [49], [25]

1.3.2 Thành phần

- Pha nước: nước, các chất tăng độ nhớt (glycerol, PG…), đệm, chất điều chỉnh áp

suất thẩm thấu, chất bảo quản…

- Pha dầu: thường sử dụng các chất lỏng không phân cực (dầu dừa); triglycerid với

các acid béo có 8C - 10C (isopropyl myristat)

- Chất diện hoạt: CDH ion hóa (natri lauryl sulfat), CDH không ion hóa (Tween 80,

Span 80), CDH lưỡng cực (lecithin)

- Chất đồng diện hoạt: có thể là các hợp chất mạch thẳng, ngắn (4C - 6C) gồm amin

(n-butylamin), diethylen glycol alkyl ether (dithylen glycol monobutyl ether), acid alkanoic (acid n-pentanoic) hoặc các alcol (n-hexanol) [10]

1.3.3 Phương pháp bào chế

1.3.3.1 Phương pháp phân tán hay nhũ hóa sử dụng năng lượng cao

 Phương pháp ĐNH phân cắt tốc độ cao:

Thiết bị ĐNH phân cắt tốc độ cao cấu tạo gồm một roto và một stato Roto được thiết kế bao gồm nhiều lưỡi cắt, stato có nhiều khe hở hướng theo chiều dọc hoặc đường chéo xung quanh trục đồng hóa Các lưỡi cắt được đặt đồng tâm và nằm bên trong stato Khi roto quay, chất lỏng được ly tâm buộc phải đi qua các khe hở của stato Một lực hút được tạo ra và làm cho một lượng lớn chất lỏng được rút lên vào khu vực bên trong roto Hai lực tác động chủ yếu làm giảm KTTP: thứ nhất, lực

ly tâm gây va chạm cơ học vào phần stato; thứ hai, lực phân cắt được tạo ra trong vùng hỗn loạn giữa roto và stato Khi tốc độ ĐNH tăng, các lực phân cắt cũng tăng lên, làm giảm hơn nữa KTTP [7]

 Phương pháp ĐNH ở áp suất cao:

Đây là phương pháp được áp dụng rộng rãi nhất để bào chế NTN do thời gian bào chế mẫu nhanh, KTTP nhỏ và khoảng phân bố KTTP hẹp [56] Tuy nhiên, phương pháp này khá tốn kém, khó vệ sinh thiết bị [30]

- Kĩ thuật Microfluidizer: dựa trên nguyên tắc tia ngược dòng (jet stream) Nhũ

tương được đẩy qua một bơm áp suất cao, được chia làm hai dòng chất lỏng ở đầu vào buồng tương tác, hai dòng chất lỏng được tăng tốc do sự giảm đột ngột của đường kính ống dẫn Sau đó, hai dòng chất lỏng va chạm từ hai hướng ngược nhau dẫn đến sự phá vỡ các giọt ban đầu thành các giọt nhỏ hơn [18], [56], [36]

- Kĩ thuật Dissocubes: dựa trên nguyên tắc ĐNH piston khe hẹp (piston-gap) Ở các

thiết bị này, nhũ tương được đẩy bởi piston dưới áp lực lớn (1500 – 2000 bar) qua một khe hẹp kích thước vài µm Áp suất động của dòng chất lỏng tăng, áp suất tĩnh giảm xuống dưới áp suất hơi của nước ở nhiệt độ phòng Kết quả, nước bắt đầu sôi

tại nhiệt độ phòng, hình thành các bong bóng khí, chúng bị nổ tung khi nhũ tương đi

qua khe đồng nhất và trở lại áp suất không khí bình thường Lực nổ của bong bóng khí đủ để phá vỡ các giọt nhũ tương thành các tiểu phân nano [47]

(a) (b)

Hình 1.2: Phương pháp ĐNH ở áp suất cao [36]

(a)- Kĩ thuật tia ngược dòng (b)- Kĩ thuật piston khe hẹp

 Phương pháp siêu âm:

- Sự nhũ hóa bằng phương pháp siêu âm xảy ra qua 2 cơ chế Thứ nhất, sóng âm tạo

ra dao động bề mặt phân cách pha, dẫn đến sự phân tán pha dầu vào trong pha nước tạo thành các giọt nhũ tương [27] Thứ hai, lực cơ học chủ yếu được tạo ra bởi quá trình hình thành và phá vỡ các bong bóng khí (cavitation bubbles) Các bong bóng khí được hình thành và kích thước lớn dần do sự khuếch tán các phân tử hơi nhỏ hoặc khí từ môi trường vào trong bong bóng khí; đến một lúc nào đó, các bong bóng khí bị phá vỡ, sinh ra năng lượng cơ học, chia nhỏ giọt nhũ tương [30]

- Ưu điểm: ít tốn kém, thiết bị dễ sử dụng

- Nhược điểm: toàn bộ mẫu có thể nóng quá mức, có thể nhiễm titan từ đầu dò siêu

âm, phân bố KTTP rộng [56]

1.3.3.2 Phương pháp tự nhũ hóa hay nhũ hóa sử dụng năng lượng thấp

 Phương pháp điểm đảo pha: ở nhiệt độ hằng định, thay đổi tỷ lệ dầu – nước

Khi tăng tỷ lệ khối lượng nước dẫn đến sự hình thành cấu trúc phân lớp hay liên tục, đến điểm đảo pha xảy ra sự biến đổi độ cong của lớp CDH sẽ làm nhũ tương chuyển từ loại N/D sang D/N [41], [50]

 Phương pháp nhiệt độ đảo pha: giữ nguyên các thành phần, thay đổi nhiệt độ

Phương pháp này dựa trên sự thay đổi độ tan của CDH không ion hóa loại

polyoxyethylen theo nhiệt độ, CDH loại này trở nên thân dầu khi nhiệt độ tăng do

sự loại nước của chuỗi polyoxyethylen [41], [50]

1.3.4 Độ ổn định

Các quá trình kết váng, sa lắng, kết bông, kết tụ thường ít xảy ra do KTTP nhỏ nên chuyển động Brown mạnh làm tốc độ khuếch tán cao hơn tốc độ sa lắng gây ra bởi lực hấp dẫn [52], [49], [24] Thêm vào đó, lớp CDH tương đối dày làm cho màng phim chất lỏng giữa các tiểu phân không bị phá vỡ [52]

Tuy nhiên, quá trình kết tụ Ostwald (Ostwald ripening) được coi là cơ chế chính gây nên sự mất ổn định của NTN [49], [57], [17], [24]

- Kết tụ Ostwald hay sự khuếch tán phân tử là quá trình di chuyển của các phân tử

dầu từ tiểu phân nhỏ qua môi trường phân tán sang tiểu phân lớn, làm tăng KTTP của hệ NTN và có thể dẫn đến tách pha

- Một số phương pháp làm giảm kết tụ Ostwald:

 Thêm vào hệ pha phân tán thứ hai không hòa tan trong môi trường phân tán (ví dụ: squalen, hexadecan)[52], [24], [49]

 Thay đổi màng phim ở bề mặt phân cách D/N: sử dụng CDH hấp thụ mạnh ở

bề mặt phân cách D/N (CDH polymer) [52]; sử dụng chất đồng diện hoạt (alcol mạch dài) [17]; kết hợp nhiều CDH [49]

1.3.5 Một số phương pháp đánh giá hệ nhũ tương nano

1.3.5.1 Đặc tính lý hóa

- KTTP trung bình và phân bố KTTP: phương pháp tán xạ ánh sáng (DLS –

dynamic light scattering) hay phổ tương quan photon (PCS – photon correlation spectroscopy)

- Hình thái và cấu trúc tiểu phân: kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM –

transmission electron microscopy)

- Điện tích bề mặt (thế zeta): dựa vào sự điện di của NTN trong điện trường

- Khả năng thấm ướt (sức căng bề mặt)

- Ngoài ra, đối với NTN nhỏ mắt thì độ nhớt, chỉ số khúc xạ, pH, áp suất thẩm thấu

cũng là các đặc tính cần phải được đánh giá

1.3.5.2 Độ ổn định vật lý

 Đánh giá độ ổn định nhiệt động học [13], [23], [45]:

- Chu kỳ nóng – lạnh: thực hiện sáu chu kỳ giữa 4°C và 45°C, thời gian bảo quản ở

mỗi nhiệt độ không ít hơn 48 giờ Các mẫu ổn định ở nhiệt độ này sẽ tiếp tục được

ly tâm

- Ly tâm ở 3500 vòng/phút trong 30 phút và quan sát bằng mắt thường sự tách pha

Các mẫu không quan sát thấy sự tách pha được kiểm tra tiếp bằng chu kỳ băng - tan

- Chu kỳ băng - tan: thực hiện ba chu kỳ giữa -21°C và 25°C, thời gian bảo quản ở

mỗi nhiệt độ không ít hơn 48 giờ

Mẫu NTN ổn định sau ba quá trình kiểm tra trên được coi là ổn định nhiệt động học và được lựa chọn để nghiên cứu thêm

 Đánh giá độ ổn định cấp tốc: bảo quản NTN ở 40±2ºC, độ ẩm 60±10% trong

một khoảng thời gian nhất định, lấy mẫu đánh giá tại các thời điểm khác nhau tùy nghiên cứu [59] Sau đó, quan sát sự tách pha, kết tụ, sa lắng,…, xác định thay đổi

về phân bố KTTP, thế zeta, độ nhớt,… để xác định độ bền của NTN

1.3.5.3 Định lượng dược chất trong mỗi pha

- Phương pháp siêu lọc: Sử dụng ống có gắn màng lọc với giới hạn KLPT nhỏ

(thường 10 – 12 kDa tùy vào KTTP), ví dụ ống Vivaspin – Sartorius (Đức) Mẫu NTN đựng ở phía trên màng lọc, ly tâm với tốc độ và thời gian thích hợp (4000 vòng/phút trong 30 phút hoặc 3000 vòng/phút trong 1 giờ) Sau đó, lấy phần dịch lọc ở phía dưới màng lọc đi định lượng DC trong pha nước [32], [58], [31]

- Phương pháp siêu ly tâm: NTN được siêu ly tâm ở tốc độ lớn (50000

vòng/phút), với nhiệt độ và khoảng thời gian nhất định tùy thuộc vào độ bền của NTN NTN tách thành hai pha riêng biệt, pha nước sẽ được thu hồi để định lượng

DC [31], [32]

1.3.5.4 Khả năng giải phóng dược chất in vitro

- Màng giải phóng: thường sử dụng màng thẩm tích hoặc túi thẩm tích có giới hạn

KLPT 12 – 14 kDa [28]; đôi khi sử dụng màng lọc cellulose acetat 0,2 µm Các màng này được xử lý bằng môi trường khuếch tán trước khi tiến hành thí nghiệm

- Môi trường khuếch tán: thường là đệm phosphat pH 7,4 [12] hoặc dung dịch nước

mắt nhân tạo [22], được điều nhiệt để duy trì nhiệt độ thích hợp và khuấy trộn với tốc độ nhất định

- Nhiệt độ: 34±0,5oC (nhiệt độ bề mặt nhãn cầu) [22], [12] hoặc 37±0,5ºC [16]

- Thiết bị đánh giá giải phóng thuốc:

 Bình Franz (hình 1.3): mẫu NTN được chứa ở ngăn cho phía trên (donor),

môi trường khuếch tán ở ngăn nhận phía dưới (receptor), màng thử giải phóng được đặt giữa hai phần Sau thời gian nhất định, lấy mẫu từ môi trường khuếch tán để định lượng, và bổ sung lại thể tích môi trường khuếch tán mới tương ứng [20],[28]

 Thiết bị thẩm tách micro (hình 1.4): kim thăm dò được cắm vào lọ thủy tinh

chứa NTN ở nhiệt độ nhất định, môi trường khuếch tán được truyền qua kim thăm

dò với tốc độ thích hợp, mẫu thẩm tách micro được lấy tại các thời điểm và đem phân tích HPLC

Hình 1.3: Sơ đồ bình Franz [35]

 Thiết bị thử hòa tan: NTN được chứa trong túi thẩm tích với 2 đầu được kẹp

chặt [12], [55] hoặc trong một ống thủy tinh hình trụ đường kính 2,5 cm, chiều dài

10 cm, một đầu được bao bởi màng thẩm tích, một đầu nối với thiết bị quay[14] Tại những thời điểm nhất định, lấy mẫu từ môi trường khuếch tán (bổ sung thể tích môi trường mới tương ứng) và định lượng DC bằng phương pháp thích hợp

Hoặc sử dụng kỹ thuật cân bằng ngược túi thẩm tích: NTN được đưa trực tiếp vào môi trường khuếch tán đã đặt các túi thẩm tích kín (trong túi có sẵn môi trường khuếch tán) Sau những khoảng thời gian nhất định, lấy một túi thẩm tích ra để định lượng DC [16], [43]

Hình 1.4: Mô hình thử nghiệm kĩ thuật thẩm tách micro [39]

1.3.6 Ưu điểm chung của nhũ tương nano

- Độ bền động học cao do KTTP rất nhỏ nên hầu như không có hiện tượng kết

tụ, sa lắng, kết bông, nổi váng [24]

- Là dạng bào chế phù hợp với các DC ít tan trong nước, do nhũ tương nano

làm tăng độ tan và tăng khả năng thấm của DC

- Thời gian tác dụng kéo dài do DC nằm trong pha nội

- Thích hợp cho việc phân bố hiệu quả các thành phần hoạt chất qua da, màng

sinh học do diện tích bề mặt tiếp xúc lớn của các tiểu phân nano [52]

- Tính chất trong suốt của hệ, độ loãng (với nồng độ dầu hợp lý) làm cho NTN

có tính thẩm mỹ cao [52]

- NTN sử dụng nồng độ CDH hợp lý (với NTN 20% D/N, nồng độ CDH sử

dụng 5 - 10% là đủ) nên sẽ giảm được tính kích ứng của CDH [52], [24]

- Cải thiện sự hấp thu của các chất bổ sung thân dầu trong công nghệ nuôi cấy

tế bào và cho phép nghiên cứu độc tính của các thuốc tan trong dầu [15]

1.3.7 Ứng dụng

 Trong mỹ phẩm: trong những năm gần đây, NTN được ứng dụng nhiều trong

mỹ phẩm, do tăng hiệu quả thấm qua da của các thành phần có tác dụng, giảm sự mất nước của da, tăng cường khả năng bảo vệ của da, độ ổn định cao hơn nhũ tương thô TRI-K đã cho ra đời sản phẩm Kemira NanoGel làm tăng tính hiệu lực của rất nhiều sản phẩm chăm sóc da [46] Dầu gội dạng NTN cation cải thiện tình trạng khô của tóc, giúp tóc bóng, ít giòn và mềm mượt hơn [37]

 Trong thực phẩm: thực phẩm có thành phần NTN sẽ tạo cảm giác mịn trong

miệng, bền vững hơn nhũ tương thô Hơn nữa, khi kích thước hạt nhỏ hơn 100 nm thì NTN đó có thể tích hợp dễ dàng vào đồ uống và thực phẩm dạng gel mà không làm mất sự trong suốt của đồ uống hay thực phẩm đó [27]

 Trong lĩnh vực Dược: NTN có những đóng góp đáng kể trong điều trị và chẩn

đoán bệnh NTN được ứng dụng trong các thuốc đường uống, thuốc điều trị các bệnh mũi, mắt, các thuốc điều trị tại chỗ, các thuốc kháng vi sinh vật, vaccin [40]

Nó còn được ứng dụng trong điều trị ung thư và phân phối thuốc tới đích

Flurbiprofen là DC ít tan trong nước và thường được bào chế dưới dạng viên nén, do đó mục đích xây dựng công thức là làm sao để hòa tan được DC và làm cho

nó thâm nhập vào khoang trước của mắt Bằng sáng chế số 5171566 của Mỹ mô tả NTN loại D/N của flurbiprofen bao gồm dầu đậu nành và lecithin đậu nành có vai trò là chất nhũ hóa, các chất ổn định là cholesterol và acid phosphatidic NTN được đông khô hoặc giữ ở 4ºC Đó là một chế phẩm thuốc mắt NTN chứa flurbiprofen có thể thâm nhập vào khoang trước của mắt, độ ổn định cao và không kích ứng mắt Sinh khả dụng của dạng thuốc mắt này được tăng lên 4 lần [40]

1.4 Ưu điểm của nhũ tương nano nhỏ mắt

- Sử dụng đơn giản và tiện lợi như dung dịch nhỏ mắt, tránh cảm giác cộm mắt

khi sử dụng hệ tiểu phân rắn, hệ cài đặt, tránh mờ mắt khi dùng dạng thuốc mỡ

- So với dung dịch thuốc nhỏ mắt, NTN nhỏ mắt có thời gian tác dụng lâu hơn

do DC được nhũ tương hóa trong các giọt dầu nên giải phóng thuốc từ từ [48], [32]

vì vậy có thể giảm số lần sử dụng thuốc trong ngày cho bệnh nhân

- Do DC được hòa tan trong pha nội, hạn chế kích ứng mắt đối với DC gây

kích ứng mắt khi tồn tại dưới dạng dung dịch [48]

- KTTP nhỏ nên cho phép chúng bám đều trên các bề mặt giác mạc, lan tỏa và

sự thâm nhập hoạt chất cũng được tăng lên do sức căng bề mặt nhỏ của cả hệ và sức căng mặt phân cách thấp của giọt D/N [52]

- NTN cation có các giọt dầu tích điện dương, tương tác tĩnh điện với các

mucin tích điện âm của giác mạc làm kéo dài thời gian lưu của thuốc trên giác mạc, tăng cường hấp thu DC qua giác mạc, tăng sinh khả dụng của thuốc [29]

1.5 Một số nghiên cứu về nhũ tương nano dành cho nhãn khoa

Bảng 1.1: Một số nghiên cứu về nhũ tương nano dành cho nhãn khoa

Năm Tác giả Hoạt chất PP

BC

Thành phần Kết quả Nhận xét

Phân cắt tốc

độ cao

DC 0,01%;

Lecithin 0,1%;

triglycerid mạch trung bình 0,5%;

Sorbitol 0,5%;

Chitosan 0,1%;

Pluronic F68 0,125%

KTTP 230±8,35 d.nm; thế zeta +23 mV; tỷ lệ

DC được nhũ tương hóa 89%;

tỷ lệ DC giải phóng

in vitro sau

24 giờ là 86% (sử dụng thiết

bị thử hòa tan, ống hình trụ, màng thẩm tích 12 kDa)

So với vi nang nano (nanoparticles), NTN thể hiện hiệu quả hơn trong việc giảm viêm loét giác mạc ở thỏ, KTTP nhỏ hơn

ít tan trong nước)

ĐNH

ở áp suất cao

DC 1%;

triglycerid 8,5%;

Lecithin đậu nành 1,8%;

Stearylami

n 0,3%; tocopherol 0,05%;

α-Tween 80 0,4%;

Cremophor

EL 0,3%;

Glycerin 2,2%

KTTP 124,5±25,6 d.nm; thế zeta +23,5±5,5 mV; tỷ lệ

DC được nhũ tương hóa là 90,62±2,4

% (phương pháp siêu lọc, màng thẩm tích

10 kDa)

So với dung dịch

DC 1%, NTN có sinh khả dụng cao gấp 1,73 lần và có thời gian lưu ở kết mạc lâu hơn do tiểu phân tích điện dương

Phân cắt tốc

độ cao kết hợp ĐNH

ở áp suất cao

DC 0,1%;

Tween 80 0,4%; Dầu thầu dầu 0,5%;

Glycerin 2,2%;

Carbopol

974 0,125%

KTTP 143,6±1,89 d.nm; tỷ lệ

DC được nhũ tương hóa là 98%

(sử dụng thiết bị siêu lọc Vivaspin

500, màng thẩm tích

10 kDa)

Tỷ lệ DC được nhũ tương hóa cao, khả năng thấm ướt tốt làm tăng thời gian lưu thuốc trên giác mạc, sinh khả dụng cao gấp 6,7 lần

so với dung dịch

DC trong dầu

Phân cắt tốc

độ cao kết hợp ĐNH

ở áp suất cao

DC 0,043%;

IPM 5%;

Lecithin đậu nành 1%; Tween

80 1%;

Glycerin 2,5%;

EDTA 0,1%;

Chitosan;

PVA, PEG

KTTP 71,0±0,8 d.nm; pH 5,1; thế zeta +34,90 mV; độ nhớt 1,87 mPa s; ổn định ở 25ºC và 40ºC sau 6 tháng;

dung nạp tốt với mắt thỏ

Giọt dầu tích điện dương tương tác tĩnh điện với các mucin tích điện âm của giác mạc nên tăng độ hấp thu DC qua giác mạc

1.6 Một số chế phẩm nhũ tương nano trên thị trường

Các chế phẩm nhũ tương nano trên thị trường hiện nay chủ yếu là dạng thuốc tiêm Một số chế phẩm được trình bày ở bảng 1.2 Trong đó, chế phẩm Diprivan – thuốc tiêm dạng nhũ tương nano chứa propofol sử dụng để gây mê (Astra Zeneca – Singapor) hiện đã có mặt trên thị trường Việt Nam

Trên thị trường thế giới đã có chế phẩm Cationorm® (Novagali Pharma, Pháp)

là NTN cation không chứa DC, chỉ định cho các trường hợp khô mắt Ngoài ra, Novagali cũng đang có các chế phẩm: Vekacia® (0,1% cyclosporin A, điều trị bệnh giác mạc xuân) đang trong quá trình đăng ký, Cyclokat (0,1% cyclosporin A, điều trị khô mắt nặng) đã hoàn tất thử nghiệm lâm sàng phase III, Catioprost (0,005% latanoprost, điều trị bệnh tăng nhãn áp) đã hoàn tất thử nghiệm lâm sàng pha IIb [29], [19] Thị trường Việt Nam chưa có chế phẩm thuốc nhỏ mắt nhũ tương nano nào

Limethason Dexamethason Tiêm 4 mg/mL Mitsubishi (Nhật) Ropion Flurbiprofen axetil Tiêm 50 mg/ 5 mL Kaken (Nhật) Vitalipid Vitamin A, D, E, K Tiêm 10 mL Fresenius Kabi

Liple Palmitat alprostadil Tiêm 5 µg/mL;

10µg/mL Mitsubishi (Nhật)

1.7 Nghiên cứu về nhũ tương nano nhỏ mắt chứa diclofenac

 Trên thế giới chưa có nghiên cứu nào về nhũ tương nano nhỏ mắt chứa diclofenac được công bố

 Ở Việt Nam, Bộ môn Bào chế - trường Đại học Dược Hà Nội đã tiến hành các đề tài nghiên cứu bào chế và đánh giá một số đặc tính của NTN nhỏ mắt chứa diclofenac Phương pháp và kết quả các nghiên cứu được thể hiện ở bảng 1.3

Bảng 1.3: Các nghiên cứu về nhũ tương nano nhỏ mắt chứa diclofenac

Năm Tác giả PP BC Thành phần Kết quả Nhận xét

80 1%;

Cremophor EL 1%; Glycerin 5%; đệm borat 0,14M

KTTP 174,7 d.nm;

thế zeta -15,20 mV; độ nhớt 5,08 cPs; chỉ số khúc xạ 1,3446; pH 7,5; tỷ lệ DC giải

phóng in vitro sau 6

giờ là 85,2% (sử dụng bình Franz với màng cellulose acetat 0,2 µm)

Nồng độ đệm càng cao và

pH càng thấp thì hệ càng bền; nồng độ CDH thân nước, Transcutol HP thấp, nồng độ dung môi pha dầu cao thì hệ càng bền

áp suất cao

DC 0,093%;

Isopropyl myristat 2%;

Span 80 1%;

Transcutol HP 1,5%; Tween

80 1%;

Cremophor RH40 1%;

Glycerin 5%;

đệm borat 0,1M

KTTP 66,25 ± 3,09 d.nm; thế zeta -45,5±2,0 mV; độ nhớt 5,24 cPs; chỉ số khúc xạ 1,3473; tỷ lệ

DC được nhũ tương hóa 98,55%; tỷ lệ

DC giải phóng in

vitro là 88,84% sau

6 giờ (sử dụng màng cellulose acetat 0,2 µm) và 10,47% sau

4 giờ (sử dụng màng thẩm tích 12 kDa)

KTTP thu được nhỏ hơn KTTP bào chế bằng phương pháp siêu âm;

tỷ lệ DC được nhũ tương hóa cao, NTN có khả năng kéo dài thời gian tác dụng

2012 Nguyễn

Hồng

Vân [8]

Phân cắt tốc

độ cao

DC 0,093%;

Isopropyl myristat hoặc Miglyol 1%;

Tween 80 hoặc Cremophor RH40 1 – 2%;

Span 80 0,1 – 0,5%;

Transcutol HP

0 – 0,03%; PG

5 – 15%; đệm phosphat 0,1M

KTTP 50 – 250 d.nm; tỷ lệ DC được nhũ tương hóa

là trên 90%; tỷ lệ

DC giải phóng in

vitro sau 4 giờ là 14

– 23% (sử dụng màng thẩm tích 12 kDa); sau 6 tháng, các thông số của hệ đều thay đổi nhưng vẫn có tác dụng kéo

dài

KTTP giảm khi tăng tốc

độ, thời gian phân cắt, lượng CDH thân nước và

tỷ lệ PG; thế zeta phụ thuộc chủ yếu vào hệ đệm; tỷ lệ DC giải phóng giảm khi lượng CDH thân nước tăng

Năm 2011, trong khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ đại học, Vũ Ngọc Mai đã xây

dựng công thức cơ bản, đánh giá độ ổn định vật lý và tỷ lệ giải phóng DC in vitro

(sử dụng màng cellulose acetat 0,2 µm) của NTN Lựa chọn từ bảng thiết kế thí

nghiệm 4 CT có độ ổn định vật lý và tỷ lệ DC giải phóng in vitro khác nhau để tiến

hành các nghiên cứu tiếp theo [5] Thành phần, độ ổn định vật lý, tỷ lệ DC giải

phóng in vitro sau 6 giờ của 4 CT được lựa chọn được trình bày ở bảng 1.4

Bảng 1.4: Công thức NTN được lựa chọn để tiến hành các nghiên cứu tiếp theo

pH 6,5)

Borat (0,1 M;

pH 7,5)

Borat (0,2 M;

pH 7,5)

Borat (0,14 M;

pH 7,5)

Nước cất vừa đủ

100mL

vừa đủ 100mL

vừa đủ 100mL

vừa đủ 100mL

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Nguyên liệu, thiết bị

2.1.1 Nguyên liệu

Bảng 2.1: Nguyên liệu sử dụng trong quá trình thực nghiệm

9 Natri dihydrophosphat Trung Quốc Tinh khiết phân tích

10 Dinatri hydrophosphat Trung Quốc Tinh khiết phân tích

11 Kali dihydrophosphat Trung Quốc Tinh khiết phân tích

2.1.2 Thiết bị

- Hệ thống đánh giá giải phóng thuốc qua màng Hanson Research (Mỹ)

- Thiết bị lọc nén Sartorius SM 16249 (Đức); màng lọc cellulose acetat, kích thước

lỗ lọc 0,2 µm; 0,45 μm

- Máy đo pH Eutech Instruments pH 510

- Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao Aligent 1260 Infinite (Mỹ)

- Bể siêu âm Ultrasonic LC_60H

- Máy đồng nhất hóa phân cắt Unidriver X1000

- Máy đồng nhất hóa ở áp suất cao Avestin EmulsiFlex – C5 (Canada)

- Máy đo phân bố KTTP và thế zeta Zetasizer Nano ZS90 – Malvern (Anh)

- Máy siêu âm cầm tay Labsonic® M – Sartorius (Đức)

- Máy ly tâm lạnh Universal 320R (Anh)

- Tủ vi khí hậu Climacell (Anh)

- Máy lọc nước PURELAB Classic UV, ELGA (Anh)

- Cân phân tích, cân kỹ thuật, các dụng cụ thủy tinh khác…

2.2 Nội dung nghiên cứu

- Thẩm định phương pháp HPLC để định lượng DC diclofenac trong NTN

- Bào chế và đánh giá một số đặc tính của NTN: KTTP, tỷ lệ DC giải phóng in

vitro, tỷ lệ DC được nhũ tương hóa

- Bào chế NTN với DC acid diclofenac ở quy mô 1 L bằng phương pháp siêu âm

- Đánh giá sự thay đổi KTTP, tỷ lệ DC được nhũ tương hóa, tỷ lệ DC giải phòng in

vitro của một số mẫu NTN sau 1 tháng bảo quản ở điều kiện lão hóa cấp tốc

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3.1 Phương pháp bào chế nhũ tương nano

NTN được bào chế theo 3 phương pháp sau:

 Phương pháp siêu âm:

- Bước 1: Hòa tan hoàn toàn DC vào pha dầu (dung môi pha dầu, Span 80, Transcutol HP), đun nóng 60 - 650C

- Bước 2: Hòa tan, đun nóng pha nước (dung môi – nước cất, CDH thân nước, glycerin, hệ đệm) lên 65 - 700C

- Bước 3: Kết hợp hai pha Siêu âm 5 phút bằng máy siêu âm cầm tay Labsonic® M (tần số 30000 Hz, biên độ 100 µm, siêu âm liên tục)

- Bước 4: Điều chỉnh pH bằng dung dịch natri hydroxyd 0,1 mol/L Thêm nước vừa

đủ thể tích

- Bước 5: Tiệt khuẩn: lọc qua màng cellulose acetat 0,2 µm

- Bước 6: Đóng gói vào bao bì đã xử lý, dán nhãn, hoàn chỉnh thành phẩm

 Phương pháp siêu âm kết hợp ĐNH ở áp suất cao:

- Bước 1, bước 2, bước 3, bước 4: như phương pháp siêu âm

- Bước 5: Tiến hành ĐNH nhũ tương sử dụng máy ĐNH ở áp suất cao: đồng nhất liên tục với thời gian thích hợp ở áp suất 500 bar

- Bước 6: Tiệt khuẩn: lọc qua màng cellulose acetat 0,2 µm

- Bước 7: Đóng gói vào bao bì đã xử lý, dán nhãn, hoàn chỉnh thành phẩm

 Phương pháp siêu âm kết hợp ĐNH phân cắt tốc độ cao:

- Bước 1, bước 2, bước 3, bước 4: như phương pháp siêu âm

- Bước 5: Tiến hành ĐNH nhũ tương sử dụng máy phân cắt: tốc độ 6000 vòng/phút – 9000 vòng/phút, thời gian 5 - 20 phút

- Bước 6: Tiệt khuẩn: lọc qua màng cellulose acetat 0,2 µm

- Bước 7: Đóng gói vào bao bì đã xử lý, dán nhãn, hoàn chỉnh thành phẩm

2.3.2 Phương pháp đánh giá một số đặc tính của hệ

2.3.2.1 Phương pháp xác định kích thước tiểu phân và phân bố kích thước tiểu phân

Kích thước hạt được xác định bằng phương pháp tán xạ laser Nguyên lý của phương pháp: khi chiếu chùm tia laser vào các hạt có kích thước khác nhau sẽ thu được mức độ tán xạ ánh sáng khác nhau Dựa vào độ tán xạ của chùm tia sau khi va chạm vào hạt ta có thể tính được kích thước hạt theo thuyết Mie Phương pháp tán

xạ laser đưa ra kết quả tỷ lệ phần trăm thể tích của các hạt theo đường kính hạt

Sử dụng máy đo phân bố KTTP và thế zeta Zetasizer Nano ZS90, đo kích thước hạt trong khoảng 0,01 – 10000 nm Ánh sáng tán xạ đo ở góc 900, nhiệt độ đo

25oC Để giảm hiện tượng đa tán xạ, tiến hành pha loãng mẫu NTN 100 lần trước khi đo

2.3.2.2 Phương pháp đo thế zeta

Sử dụng máy đo phân bố KTTP và thế zeta Zetasizer Nano ZS90 Mẫu NTN được pha loãng 100 lần trước khi đo, nhiệt độ đo 25ºC

2.3.2.3 Phương pháp đánh giá độ ổn định của hệ

Bảo quản các mẫu NTN trong bình thủy tinh, có nắp cao su, thể tích 100 mL,

ở điều kiện nhiệt độ 40±20C, độ ẩm 75±5% trong 1 tháng Sau đó, quan sát các hiện tượng kết váng, kết tụ, thay đổi màu sắc, đồng thời xác định một số thông số của

NTN: KTTP, pH, tỷ lệ DC trong NTN, tỷ lệ DC giải phóng in vitro, tỷ lệ DC được

- Pha tĩnh: Cột Eclipse XDB-C8 5 μm, kích thước 4,6 mm × 150 mm

- Pha động: hỗn hợp methanol và dung dịch đệm phosphat pH 2,5 với tỷ lệ 75/25,

lọc qua màng cellulose acetat 0,45 µm, rồi siêu âm 15 phút

- Định lượng DC giải phóng in vitro: 1 mL mẫu lấy được từ môi trường khuếch tán

trực tiếp đem đi phân tích

- Định lượng DC có trong mẫu NTN: Pha loãng mẫu NTN 20 lần bằng pha động,

lọc qua màng lọc 0,45 µm

- Định lượng DC có trong pha nước: xử lý mẫu, lấy pha nước đem pha loãng 10 lần

bằng pha động, lọc qua màng lọc 0,45 µm

mc: Khối lượng DC cân ban đầu để pha mẫu chuẩn (mg)

St: Diện tích pic chính của mẫu NTN (mAU.giây)

Sc: Diện tích pic của mẫu chuẩn (mAU.giây)

- Phần trăm DC giải phóng từ NTN được tính toán như trình bày ở mục 2.3.5

- Phần trăm DC có trong pha nước được tính toán như trình bày ở mục 2.3.4

- Phần trăm DC chứa trong mẫu NTN được tính theo CT:

H = 100

Trong đó:

H: phần trăm DC chứa trong mẫu NTN (%)

Ct: Nồng độ DC trong mẫu NTN (mg/mL)

C0: Nồng độ lý thuyết của DC trong NTN bào chế (mg/mL), C0 = 0,93 mg/mL

2.3.4 Phương pháp xác định tỷ lệ dược chất được nhũ tương hóa

 Nguyên tắc: dựa vào sự chênh lệch tỉ trọng giữa 2 pha, ly tâm để tách riêng pha

nước và pha dầu

 Tiến hành

- Bước 1: Hòa tan natri clorid đến bão hòa vào NTN để làm tăng tỉ trọng pha nước

- Bước 2: Ly tâm NTN đã được làm bão hòa pha nước ở bước 1, điều kiện ly tâm:

a = k 100

Trong đó:

a: Tỷ lệ DC trong pha nước (%)

Sn: Diện tích pic của pha nước (mAU.giây)

Sntn: Diện tích pic chính của mẫu NTN (mAU.giây)

k: Hệ số pha loãng NTN được pha loãng 20 lần, pha nước được pha loãng 10 lần

nên k =

- Tỷ lệ DC được nhũ tương hóa (%): b = 100 - a

2.3.5 Phương pháp đánh giá giải phóng dược chất in vitro

 Điều kiện:

- Màng giải phóng: màng thẩm tích 12000 Dalton

- Diện tích bề mặt màng khuếch tán: 1,76 cm2

- Môi trường khuếch tán: dung dịch đệm phosphat pH 7,4

- Nhiệt độ môi trường: 37±0,50C

- Tốc độ khuấy: 400 vòng/phút

- Thể tích môi trường khuếch tán: 7 mL

- Lượng mẫu đem thử: 1,0 mL NTN (chứa 0,93 mg acid diclofenac)

 Thiết bị: Sử dụng hệ thống đánh giá giải phóng thuốc qua màng Hanson

Research Ngăn nhận chứa 7 mL môi trường khuếch tán Ngăn cho là 1 khối trụ tròn khuyết giữa đường kính 1 cm, chứa được 1 mL mẫu Màng giải phóng được đặt

giữa hai ngăn

 Lấy mẫu: Lấy mẫu trong 4 giờ, lấy mẫu bắt đầu tại thời điểm 30 phút, sau đó

cách 30 phút lấy mẫu 1 lần, mỗi lần lấy 1 mL rồi bổ sung 1 mL môi trường khuếch tán mới Lượng DC giải phóng từ NTN được xác định bằng phương pháp HPLC

trình bày ở mục 2.3.3

 Cách tính tỷ lệ DC giải phóng tại các thời điểm

- Nồng độ DC trong môi trường khuếch tán tại thời điểm t: