bước đầu tìm hiểu vai trò của vi khuẩn trong hiện tượng chết hàng loạt của ấu trùng cua biển (scylla spp) giai đoạn zoea3 – zoea5 trong các trại sản xuất giống tại nha trang, khánh hoà

PHẦN 1: MỞ ĐẦU Nuôi trồng Thuỷ sản (NTTS) nghành kinh tế mũi nhọn góp phần không nhỏ vào tăng trưởng kinh tế Việt Nam Với diện tích nuôi trồng rộng lớn với thời tiết, khí hậu thuận lợi nên nuôi trồng thuỷ sản nước ta phát triển mạnh với nhiều hình thức nuôi nhiều đối tượng nuôi Vùng ven biển nước ta trước thường nuôi đối tượng có giá trị kinh tế lớn tôm, với tình hình khó khăn tôm người nuôi chuyển hướng sang nuôi cua biển Cua biển loài có giá trị kinh tế cao loại thực phẩm đươc ưa chuộng thị trường nước nên có giá trị xuất cao Hiện nghề nuôi cua nước ta phát triển mạnh tỉnh đồng sông Cửu Long, tỉnh thành phố Hải Phòng, Nam Định, Ninh Bình, Thái Bình, Huế, Phú Yên, Khánh Hoà… Hình thức nuôi chủ yếu dừng lại nuôi quảng canh quảng canh cải tiến Tuy nhiên người nuôi gặp nhiều khó khăn giống hao hụt nhiều trình nuôi Nguồn cua giống có chủ yếu khai thác từ tự nhiên, nguồn cua giốâng có việc sản xuất nhân tạo hạn chế tỷ lệ sống ấu trùng cua đợt ương nuôi ấu trùng thấp Việc sản xuất giống cua biển thành công việc phát triển rộng rãi nghề sản xuất cua giống nhân tạo toàn quốc thành tựu lớn góp phần phát triển đa dạng nghề nuôi thuỷ sản Việt Nam Tuy nhiên, cần có nghiên cứu nhằm hoàn thiện quy trình sản xuất nhân tạo giống cua biển Có nhiều nguyên nhân khiến cho tỷ lệ sống đến cua giống thấp, nguyên nhân quan trọng tỷ lệ chết cao giai đoạn Zoea3 – Zoea5 Theo số tác giả ấu trùng Zoea3 – Zoea5 chết phân lập nhiều chủng vi khuẩn chưa xác lập mối quan hệ Sự hoạt động vi khuẩn ảnh hưởng tới ấu trùng cua khiến ấu trùng cua chết hàng loạt Như vai trò vi khuẩn đến tượng chết hàng loạt giai đoạn phát triển ấu trùng cua biển từ Zoea3 – Zoea5 trại sản xuất giống nào? Xuất phát từ yêu cầu thực tế lý trên, khoa Nuôi trồng thuỷ sản trường Đại học Thuỷ sản với giúp đỡ phòng Bệnh thuộc Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thuỷ sản III thực đề tài: “Bước đầu tìm hiểu vai trò vi khuẩn tượng chết hàng loạt ấu trùngcua biển (Scylla spp) giai đoạn Zoea3 – Zoea5 trại sản xuất giống Nha Trang, Khánh Hoà.” * Đề tài thực với nội dung sau: • Điều tra tình hình bệnh ấu trùng trại sản xuất cua giống Nha Trang _ Khánh Hoà • Xác định thành phần loài vi sinh vật phân lập từ ấu trùng cua giai đoạn Zoea3 – Zoea5 • Xác định khả gây bệnh cá loài vi khuẩn phân lập từ ấu trùng cua (Zoea3 – Zoea5) với tần số phân lập cao trình nghiên cứu Do khối lượng thông tin, thời gian khả nghiên cứu với trang thiết bị, sở vật chất hạn chế nên đề tài không tránh khỏi khuyếm khuyết Tôi mong góp ý quý thầy cô bạn sinh viên để đề tài hoàn thiện Nha Trang, tháng 11 năm 2005 Sinh viên thực Bùi Thị Hiên PHẦN 2: TỔNG LUẬN 2.1.Vài nét đối tượng nghiên cứu Hệ thống phân loại cua biển Nghành : Arthropoda Lớp : Crustacea Bộ : Decapoda Họ : Porturidae Giống : Scylla Loài : Scylla serrata S paramamosain S olivacea S tranquebarica Tên tiếng Anh : Blue crab, Mud crab, Mangrove crab… Tên tiếng Việt : Cua xanh, cua bùn, cua biển 2.1.1 Đặc điểm hình thái: Cua Xanh (còn gọi cua biển) có kích thước tương đối lớn đạt khối lượng 2kg cua có màu xanh lục mầu vàng sẫm, mặt bụng thường có màu sáng mặt lưng Cơ thể dẹp theo hướng lưng bụng chia thành hai phần: phần đầu ngực lớn nằm giáp đầu ngực (mai cua), phần bụng nhỏ gập lại giáp đầu ngực (yếm cua) (Hoàng Đức Đạt 1995) Hình 1: Hình thái bên cua - Anten I - Mắt - Chân bò – Bụng ( yếm) - Anten II - Càng - Chân bơi – Vùng dày - vùng gan tụy 10 - Vùng tim 11 - Vùng mang 12 - vùng tuyến sinh dục 13 – Vùng ruột 2.1.2 Đặc điểm sinh học cua biển • Tập tính sống Vòng đời cua biển trải qua nhiều giai đoạn phát triển khác giai đoạn có hình thái tập tính sống khác - Giai đoạn ấu trùng: Ấu trùng Zoea bơi lội nước có tính hướng quang mạnh, ăn loại tảo đơn bào, luân trùng, Artemia Sau lần lột xác chuyển thành ấu trùng Megalope, ấu trùng Megalope bơi lội nhanh nhẹn bò bám đáy bắt mồi tích cực Sau -10 ngày ấu trùng Megalope lột xác thành cua - Giai đoạn cua con: Sống ẩn vật nằm đáy, bắt mồi tích cực ăn động thực vật thủy sinh nhỏ, thức ăn chế biến Cua lột xác nhiều lần để sinh trưởng phát triển - Giai đoạn trưởng thành: Cua sống hang đất ăn thức ăn chế biến thức ăn tươi sống Cua có tập tính trú ẩn vào ban đêm, di cư vào vùng nước mặn ven biển để sinh sản Từ ấu trùng đến cua trưởng thành phải trải qua nhiều lần lột xác, cua vừa sinh trưởng vừa biến thái thay đổi kích thước, hình thái cấu tạo để đạt hình dạng cấu tạo thực thụ.(Hoàng Đức Đạt, 1995) • Điều kiện sinh thái cua biển Cua sống vùng nước lợ có pH từ 7,5 – 9,2 Thích hợp từ 7,5 – 8,2 Tuy nhiên cua chịu đựng pH thấp 6,5 - Cua thích ứng cao với thay đổi độ mặn nước Độ măn thích hợp từ 28-30ppt - Nhiệt độ thích hợp từ 25-290C Nhiệt độ cao có ảnh hưởng xấu đến hoạt động sinh lý cua nguyên nhân gây chết cua - Cua thích sống nơi có nhiều thực vật thủy sinh, có bờ để đào hang trú ẩn Rừng ngập mặn ven biển nơi thích hợp cho cua sinh trưởng phát triển • Tập tính hoạt động - Tập tính đào hang: Cua thường đào hang làm nơi trú ẩn, cua đào hang giỏi có hang dài đến 1m, xuyên qua bờ ao (đây nguyên nhân gây hao hụt cua trình nuôi ) - Bò qua bờ, rào cản: Cua bò cạn, qua rào chắn để thoát khỏi ao, đầm thời kỳ thành thục - Tính khả tự vệ: Tính có từ ấu trùng Megalope đến cua trưởng thành Khi đói, thiếu thức ăn chúng ăn lẫn Con khỏe công yếu, lột xác Bộ phận phần phụ bị cua tái sinh sau lần lột xác - Hoạt động bắt mồi: Cua loài ăn thịt thường kiếm ăn vào ban đêm, cua bắt tích cực nhịn đói nhiều ngày điều kiện bất lợi • Đặc điểm sinh sản - Kích thước thành thục: Hầu toàn cá thể có chiều rộng giáp đầu ngực ≥ 10cm, tương ứng với trọng lượng trung bình toàn thân ≥ 276g thành thục có khả tham gia sinh sản (Nguyễn Cơ Thạch, 1998) - Mùa vụ sinh sản: Cua xanh đẻ trứng quanh năm nhiên mùa vụ sinh sản tập chung từ tháng đến tháng từ tháng đến tháng năm (Nguyễn Cơ Thạch, 1998) - Di cư sinh sản: Cua có tập tính di cư vùng biển có độ mặn cao 30 – 35ppt, để giao vó đẻ trứng, ấp nở ấu trùng 2.2 Sơ lược tình hình sản xuất giống cua biển nhân tạo: 2.2.1 Tình hình sản xuất cua giống giới Trên giới có công trình nghiên cứu về: vòng đời, đặc điểm sinh lý, sinh hóa, kỹ thuật sinh sản nhân tạo, tác động yếu tố môi trường như: nhiệt độ, độ mặn…đến sinh trưởng phát triển cua xanh Từ kết nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh sản nhiều tác giả thử nghiệm cho cua xanh đẻ ương nuôi ấu trùng điều kiện nhân tạo Năm 1974 Brick thử nghiệm tìm hiểu ảnh hưởng chất lượng nước, thuốc kháng sinh, phytoplankton thức ăn đến tỷ lệ sống ấu trùng cua xanh Scylla cerrata (Forskal) thu kết là: ấu trùng cua xanh nuôi thành công sử dụng phối hợp thuốc kháng sinh – Phytoplankton – Nauphius Artermia Tảo chlorella có tác dụng làm tăng tỷ lệ sống ấu trùng Zoae, Nauplius Artemia coi thức ăn thích hợp nhất, lọc nước khử nước tia cực tím không làm thay đổi tỷ lệ sống ấu trùng Nhiệt độ nước từ 260C – 300C, độ mặn 25 –30ppt pH từ 7,0 – 8,5 coi điều kiện thích hợp để ương ấu trùng cua xanh (Cheng; Teng 1980) Năm 1983 Heasman Fielder thử nghiệm cho đẻ phòng thí nghiệm nuôi đại trà cua xanh từ giai đoạn Zoae đến cua bột, tác giả cho rằng: cần trì chất lượng nước hệ thống lọc nước tuần hoàn, điều kiện nhiệt độ nước 270C, độ mặn 28 – 30ppt, mật độ thức ăn (Nauplius Artemia) từ – 30 con/lít coi điều kiện thích hợp cho trình ương nuôi ấu trùng Với điều kiện thời gian chuyển từ Zoae đến cua bột 30 ngày, tỷ lệ sống giai đoạn Zoae 1- 4% Các nhà khoa học Đài Loan ương nuôi ấu trùng cua đạt tỷ lệ sống 60% sử dụng kháng sinh, bổ sung thức ăn ấu trùng veliger nhuyễn thểå, copepoda, rotifer (Cowan Lynda,1984) 2.2.2.Tình hình sản xuất cua giống Việt Nam Những năm gần nghề nuôi tôm gặp phải nhiều khó khăn dịch bệnh, giá thị trường bấp bênh… người nuôi tôm có hướng chuyển dần sang nuôi cua xen canh vụ tôm vụ cua Mô hình nuôi vụ cua vụ tôm sú ứng dụng rộng rãi, đem lại hiệu kinh tế cao, phần hạn chế dịch bệnh tôm Song nhu cầu phát triển nghề nuôi cua nẩy sinh khó khăn lớn giải nguồn cua giống Nguồn cua giống chủ yếu khai thác tự nhiên, tiếp tục khai thác nguồn cua giống tự nhiên ảnh hưởng đến nguồn lợi cua tự nhiên Để giải vấn đề cua giống, Bộ Khoa Học Công Nghệ - Môi trường Bộ Thủy sản quan tâm giao nhiệm vụ cho viện nghiên cứu triển khai thực từ năm 1980 Trong năm 1980, Nguyễn Văn Chung tập trung nghiên cứu định loại loài số đặc điểm sinh học làm sở cho nghiên cứu sau Trong năm 1990, Hoàng Đức Đạt, Đoàn Văn Đẩu Nguyễn Cơ Thạch nghiên cứu đặc điểm sinh học sản xuất giống nhằm xây dựng quy trình sản xuất cua giống nhân tạo, song kết nhiều hạn chế Từ năm 1998, Bộ KHCN – MT giao cho trung tâm NCTS III Viện NCTS III thực đề tài “Nghiên cứu sinh sản nhân tạo xây dựng quy trình kỹ thuật sản xuất giống cua xanh Scylla paramamosain” Kết nghiên cứu đề tài ứng dụng vào sản xuất, nhằm tạo nhiều giống để phát triển nghề nuôi cua nước Năm 2003, Nguyễn Cơ Thạch công bố quy trình sản xuất cua giống loài S.paramamosain Estampado (1949) Công nghệ sản xuất giống nhân tạo cua xanh chuyển giao tới trung tâm khuyến ngư nhiều địa phương: Nam Định, Ninh Bình, Hải Dương, Khánh Hoà, Cà Mau… bắt đầu lan rộng, phát triển rộng khắp nước Người dân bắt đầu làm quen sản xuất đối tượng Tuy nhiên trình sản xuất gặp không khó khăn đặc biệt tình hình dịch bệnh xẩy làm cho tỷ lệ sống ấu trùng thấp, ảnh hưởng không nhỏ tới hiệu sản xuất Một vấn đề đặt phải nghiên cứu để tìm biện pháp phòng trị bệnh cho ấu trùng cua từ nâng cao tỷ lệ sống ấu trùng tăng hiệu sản xuất Hình 2: Các giai đoạn phát triển ấu trùng cua xanh (Scylla spp) 2.3 Tình hình nghiên cứu bệnh cua 2.3.1 Tình hình nghiên cứu bệnh cua giới Bảng 1: Danh mục bệnh cua xanh (Sindermann 1983) Vị trí Tác hại gây cảm nhiễm Tác nhân bệnh Virus Reo-like virus Gan, cơ, disease hệ thần ( RLV) kinh, hệ bạch huyết Rhabdo-like virus Tế bào “A” thần (RHVA) kinh, tế bào máu mô Phân bố Có thể gây chết Vịnh ngày Chincoteague Chesapeake Nguồn liệu Johnson & Bodammese r, 1975 Có thể gây chết Đại Tây Jharomi, hàng loạt Dương 1977 Mê-Hi-Cô tài Picorna-like virus Tế bào (CBV) thần, tế bào biểu bì, mang Herpes-like virus Tế bào (HLV) máu Vi khuẩn Vibrio parahemolyticus Các loài vi khuẩn Nấm Lagennidium callinectes Protozoa amesonmichaelis Gây chết Vịnh khoảng tuần Chesapeake đến tháng Johnson, 1983 Tỷ lệ cảm nhiễm Vịnh cao, gây chết Chincoteague 1-2 tháng Asswoman Johnson, 1983 Hệ bạch Gây chết cao giai đoạn lột xác huyết thời gian ngắn Hệ bạch Nhiễm cao huyết Vịnh Chesapeake Krantz 1969 Vịnh Chesapeake Colwell 1975 Trứng Nhiễm cao từ 25 Đại ấu trùng – 50% Dương Mô Gây chết nhanh Tây Couch, 1942; Rogers Talbert, 1948 Đại Tây Dương Tây Paramoebapernic Mô Nhiễm cao, gây Đại chết khoảng Dương iosa bệnh 30 ngày bạch huyết Tây Hematodinium Hệ bạch Nhiễm cao, giai Đại perezi huyết đoạn tiền trưởng Dương thành gây Mê- hi- cô chết 100% Helminths (worms) Microphallus Trong Không gây chết Đại Tây bệnh chấm tiêu mô Dương (Pepper-spot Mê-hi-cô disease) Carcinonemertes Trứng Tỷ lệ cảm nhiễm Đại Tây caricinophila cao từ – 25% Dương Mê-hi-cô - Sprague, 1970 Overstret, 1978; Couch, 1974 Newman & Johnson, 1975 Overstret, 1978; Couch,1974 Humes, 1942 • Bệnh virus: Virus tác nhân vô nguy hiểm, cua bị nhiễm virus tuỳ loài virus mà thời gian phát bệnh dài hay ngắn từ ngày tháng Cua chết hàng loạt bệnh xảy Theo nghiên cứu nước có loại virus gây bệnh cho cho cua Trong loại virus tìm thấy cua xanh có loài biết nguyên nhân gây nên dịch bệnh vịnh Chesapeake Chincoteague (Johnson, 1983) Picorna-like virus (CBV) nhiễm cua với số lượng lớn làm cho cua bị tress chết, biểu bên chân run nhẹ, tê liệt bị mù, vận động không bình thường Bệnh phát triển chậm cua nhiễm bệnh chết sau tuần đến tháng Reolike virus (RLV) có kích thước vô nhỏ, vòng đời ngắn gây bệnh cấp, thí nghiệm cho thấy cua bị nhiễm bị chết vòng ngày (Johnson Bodanmser 1975) Virus tác động lên hệ thần kinh, làm giảm chức hệ miễn dịch làm cua hoạt động hệ bạch huyết bị phá huỷ Bệnh tự nhiên không kiểm tra lây nhiễm thời gian dài RLV quan tâm lớn quan trọng nghề nuôi cua công nghiệp (Johnson, 1983) Herpeslike virus (HLV), virus thuộc giống Baculavirus dạng không ẩn nhiễm vào hệ thống sinh dục, phá huỷ biểu mô quan cảm giác xâm nhập vào tế bào máu gây chết vòng 1-2 tháng (Anderson and Prior 1992) • Bệnh vi khuẩn Vi khuẩn tác nhân gây hại lớn đến cua nuôi loại động vật thủy sản khác Vi khuẩn tác nhân trực tiếp gián tiếp làm cho đối tượng nuôi bị chết Bệnh vi khuẩn nhóm đối tượng phổ biến nuôi trồng, làm ảnh hưởng tới suất sản lượng nuôi Bệnh vi khuẩn phổ biến loài giáp xác bào mòn vỏ kitin, phá hủy voû kitin (Benton 1935; Zoobell & Kittenberg 1938, Hock 1940, 1941; Hood & Meyrs 1974) Nhiều 10 Ghi chú: “+”: > 90% phản ứng dương tính “-”: > 90 % phản ứng âm tính “d”: 11 – 89% phản ứng dương tính “nd”: không thực phản ứng kiểm tra * Đặc điểm giống Vibrio: Giống Vibrio thuộc họ Vibrio nacaea Đặc điểm chung loài vi khuẩn thuộc giống Vibrio: Gram âm, hình que thẳng uốn cong hay gọi phẩy khuẩn, kích thước 0,3 – 0,5 x 1,4 – 2,6 µm Chúng không hình thành bào tử chuyển động nhờ tiêm mao, tất đêu yếm khí không bắt buộc hầu hết có khả Oxi hoá lên men môi trường O/F glucose Oxidase dương tính, Cataze dương tính, Hầu hết không sinh Các loài phát triển môi trường nước, đặc biệt nước biển cửa sông * Đặc điểm Pseudomonas Pseudomonas giống vi khuẩn thuộc họ Pseudomonadacae, vi khuẩn gram âm, có dạng hình que, không sinh bào tử, kích thước tế bào khoảng 0,5 – 1,0 x 1,5 – 5,0µm chuyển động nhiều tiêm mao Pseudomonas phát triển môi trường đơn giản hiếu khí Đa số loài thuộc Pseudomonas có phản ứng oxy hoá, số không oxy hoá không lên men môi trường O/F Glucose Giới hạn nhiệt độ phát triển rộng từ – 430 C Chúng phân bố rộng khắp môi trường, đất nước gây bệnh cho người, động vật thực vật 30 Hình 3: Vi khuẩn Vibrio harvey môi trường TCBS Hình 4: Vi khuẩn V alginolyticus môi trường TCBS 31 Hình 5: Vi khuẩn Pseudomonas putida môi trường CA Hình 6: Nhuộm Gram vi khuẩn Vibrio harvey 32 4.4.3 Cảm nhiễm vi khuẩn Vibrio alginolyticus, V harvey Pseudomonas putida ấu trùng cua Sau nuôi cấy phân lập vi khuẩn từ mẫu ấu trùng cua yếu có dấu hiệu bị bệnh phát vài chủng vi khuẩn có tần số bắt gặp cao Để xác định vai trò chủng việc gây chết cao ấu trùng Đồng thời đánh giá vai trò tác nhân chủ yếu, cần tiến hành cảm nhiễm vi khuẩn nghiên cứu đàn ấu trùng cua khoẻ * Diễn biến số yếu tố môi trường thí nghiệm Trong trình thực thí nghiệm cảm nhiễm, nhiệt độ nước ổn định phạm vi từ 25,0 – 29,50C, độ mặn 31 ppt pH = 8,4 * Kết theo dõi chết ấu trùng cua Zoea thời gian thí nghiệm Bảng 7: Kết cảm nhiễm vi khuẩn Pseudomonas putida ấu trùng cua giai đoạn Zoea3 Thời gian theo dõi 16h 22h 28h 34h 40h 46h 52h Số sống Tỷ lệ sống (%) Số lượng ấu trùng chết lô thí nghiệm đối chứng 19 11 10 13 12 17 17 105 tb/L 17 12 12 16 10 12 13 8 33 106 tb/L 20 14 19 11 13 12 2 107 tb/L 55 15 17 11 0 Tỷ lệ chết tích lũy (%) 100 80 Đối chứng 60 105 tb/l 106tb/L 105 tb/l 40 106 tb/l 107tb/L 107tb/L 20 16 22 28 34 40 46 52 Thời gian (giờ) Hình 7: Tỷ lệ chết tích lũy ấu trùng cua giai đoạn Zoea3 gây cảm nhiễm với vi khuẩn P putida nồng độ gây nhiễm khác Nhìn vào số liệu hình bảng ta nhận thấy tỷ lệ chết lô cảm nhiễm với mật độ 105tb/L lô 106tb/L so với lô đối chứng suốt thời gian thí nghiệm ngang sai khác tỷ lệ chết lô mật độ 107tb/L so với lô đối chứng có sai khác Ấu trùng lô 107tb/L chết hết sau 40h thí nghiệm Điều nói lên mật độ vi khuẩn 105 tb/L 106tb/L vi khuẩn không gây chết ấu trùng mà ấu trùng chết tự nhiên yếu mang mầm bệnh trước biến động môi trường điều kiện thí nghiệm Khi kiểm tra ấu trùng cua bị chết thí nghiệm cảm nhiễm vi khuẩn cho thấy: không phát thấy nấm, ký sinh trùng Các chủng vi khuẩn phân lập từ ấu trùng cua thí nghiệm cảm nhiễm dạng trực khuẩn Gram âm Khi phân lập lại vi khuẩn 34 gặp Vibrio spp, Pseudomonas spp, không phân lập P putida Như ấu trùng chết lô cảm nhiễm P putida chết nhiễm vi khuẩn cho dù lô mật độ vi khuẩn 107tb/L ấu trùng Zoea chết với tỷ lệ cao nói lên vai trò gây chết P putida Bảng 8: Kết cảm nhiễm vi khuẩn Vibrio harvey ấu trùng cua giai đoạn Zoea3 Thời gian theo dõi 16h 22h 28h 34h 40h 46h 52h Số sống Tỷ lệ sống(%) Số lượng ấu trùng chết lô thí nghiệm Đối chứng 105 tb/L 106tb/L 107tb/L 10 25 20 18 16 19 19 10 16 16 13 13 18 11 10 14 13 52 52 Tỷ lệ chết tích lũy (%) 100 80 Đối chứng 60 10 tb/L 105 tbvk/l 106tb/L 106tbvk/l 40 107tb/L 107tbvk/l 20 16 22 28 34 40 46 52 Thời ấu trùng Hình 8: Tỷ lệ chết tích lũy củagian (giờ) cua giai đoạn Zoea3 gây cảm nhiễm với vi khuẩn V harvey nồng độ gây nhiễm khác 35 Từ hình bảng ta thấy sau 52 thí nghiệm ấu trùng lô cảm nhiễm vi khuẩn gần chết hết Giữa lô cảm nhiễm lô đối chứng có sai khác tỷ lệ sống Lô đối chứng sống 52% lô cảm nhiễm tỷ lệ sống giảm dần theo mật độ cảm nhiễm 8%, 4%, 2% Điều nói ấu trùng chết lô cảm nhiễm có chịu ảnh hưởng loài V harvey Tuy nhiên với mật độ vi khuẩn đem cảm nhiễm lô khác tỷ lệ sống lại sai khác Có thể yếu tố vi khuẩn đem cảm nhiễm làm cho ấu trùng chết nguyên nhân khác biến động điều kiện thí nghiệm ấu trùng mang mầm bệnh trước Trong thời gian thí nghiệm cảm nhiễm tiến hành kiểm tra ấu trùng cua bị chết thí nghiệm cảm nhiễm vi khuẩn cho thấy: không phát thấy nấm, ký sinh trùng, chủng vi khuẩn phân lập từ ấu trùng cua thí nghiệm cảm nhiễm dạng trực khuẩn Gram âm phân lập loài V harvey Từ ta nói ấu trùng chết thí nghiệm chịu ảnh hưởng V harvey Vậy tác nhân gây bệnh cho ấu trùng cua Bảng 9: Kết cảm nhiễm vi khuẩn V alginolyticus ấu trùng cua giai đoạn Zoea3 Thời gian theo dõi 16h 22h 28h 34h 40h 46h 52h Số sống Tỷ lệ sống (%) Số lượng ấu trùng chết lô thí nghiệm Đối chứng 105 tb /L 106tb /L 107 tb /L 12 32 45 10 15 21 15 16 17 13 24 11 13 14 16 20 11 15 13 17 0 0 36 Tỷ lệ chết tích lũy (%) 100 80 Đối chứng 60 105tb/L 106tb/L 40 107tb/L 20 16 22 28 34 40 46 52 Thời gian (giờ) Hình 9: Tỷ lệ chết tích lũy ấu trùng cua giai đoạn Zoea3 gây cảm nhiễm với vi khuẩn V alginolyticus nồng độ gây nhiễm khác Qua kết bảng ta thấy sau 52h thí nghiệm ấu trùng Zoea3 đem cảm nhiễm mật độ khác chết hết ngo trừ lô đối chứng tỷ lệ sống 5% Tuy nhiên so sánh tỷ lệ chết lô đối chứng lô cảm nhiễm vi khuẩn sai khác Nhưng từ hình bảng cho ta thấy mật độ vi khuẩn cao ấu trùng chết nhanh hơn, mật độ vi khuẩn 107 tb/L ấu trùng chết hết sau 40h thí nghiệm Với kết phần cho thấy ấu trùng chết ảnh hưởng vi khuẩn đem cảm nhiễm Nhưng ấu trùng chết nhiều lô thí nghiệm ấu tùng yếu có bệnh trước biến động điều kiện thí nghiệm mà ấu trùng chưa thích nghi Khi tiến hành phân tích ấu trùng chết thí nghiệm cảm nhiễm vi khuẩn cho thấy: không phát thấy nấm, ký sinh trùng, chủng vi khuẩn phân lập từ ấu trùng cua thí nghiệm cảm nhiễm dạng trực khuẩn Gram âm 37 phân lập loài V alginolyticus Với kết ta nói V alginolyticus có khả giữ vai trò vi khuẩn hội gặp vi khuẩn gây bệnh có tượng tiếp hợp V alginolyticus chuyển gen sang cho vi khuẩn gây bệnh vi khuẩn gây chết cho ấu trùng mật độ vi khuẩn 107tb/L 4.4.4 Kết thử độ nhạy kháng sinh vi khuẩn V harvey Vi khuẩn tác nhân gây bệnh nguy hiểm ấu trùng cua việc dùng kháng sinh biện pháp để phòng trị bệnh vi khuẩn gây ấu trùng cua Để làm sở khoa học cho việc dùng kháng sinh phòng trị số bệnh bể bể ương nuôi, thử độ nhạy số kháng sinh vi khuẩn V harvey Kết cho bảng sau Bảng 10: Kết thử độ nhạy kháng sinh vi khuẩn Vibrio havey phân lập ấu trùng cua Zoea3 Loại kháng sinh Hàm lượng kháng sinh (µg/đóa) Đường kính vòng vô khuẩn (mm) Độ nhạy chuẩn (mm) Tetracyline Erythomycine Ampicilline Cefalecine Norfloxacine Streptomycine Ciprofloxacine Kâanamvcine 30 15 10 30 10 300 30 20 20 13 18 22 18 23 14 ≥ 22 ≥ 22 ≥ 19 ≥ 18 ≥ 22 ≥ 14 ≥ 22 ≥ 18 Kết bảng 10 cho thấy có loại kháng sinh có độ nhạy với vi khuẩn V harvey điều kiện thí nghiệm như: Norfloxacine, Ciprofloxacine, Streptomycine, Cefalecine Còn kháng sinh khác mức trung gian.Tuy vậy, có hiệu trị bệnh, thành công đợt sản xuất thất bại đợt sản xuất khác Có nhiều nguyên nhân dẫn đến kết này, nồng độ 38 kháng sinh dùng nước hay thức ăn thường thấp nồng độ cần thiết nguyên nhân quan trọng khác tượng kháng thuốc vi khuẩn Do làm kháng sinh đồ để tìm loại kháng sinh thích hợp để phòng trị bệnh có ý nghóa thời điểm định trại, khu vực sản xuất ý nghóa cho tất khu vực Cho nên trước muốn trị bệnh cho ấu trùng đợt sản xuất ta cần tiến hành làm kháng sinh đồ thời điểm có hiệu Hình 10: Kết thử độ nhạy kháng sinh vi khuẩn Vibro harvey Việc lạm dụng chất kháng sinh nghề nuôi trồng thuỷ sản để lại hậu nặng nề việc tạo chủng vi khuẩn gây bệnh kháng thuốc, làm cho việc phòng trị bệnh nghề nuôi trồng thuỷ sản, thú y y học trở nên khó khăn Có thể nói khuẩn việc lạm dụng kháng sinh trở thành nguyên nhân gây nhiều chủng vi khuẩn gây bệnh gọi bệnh y học đại Mặt khác, việc lạm dụng kháng sinh ảnh hưởng tới sức khoẻ người nuôi giá trị thương phẩm đối tượng nuôi Người ta khuyến cáo sử dụng kháng sinh nghề nuôi trồng thuỷ sản nên dùng kháng sinh biết rõ tác nhân gây bệnh vi khuẩn Nên dùng nồng độ hữu hiệu, 39 thời gian từ 5–7 ngày Không nên dùng nồng độ thấp hạn chế dùng đến mức thấp Cũng lý mà Bộ Thuỷ sản có nhiều định việc cấm hạn chế việc dùng kháng sinh nuôi trồng thuỷ sản Ngày 24/2/2005, Bộ trưởng Bộ Thuỷ sản ký định số 07 việc cấm hạn chế sử dụng kháng sinh sản xuất, kinh doanh thuỷ sản Bộ cấm sử dụng 17 loại kháng sinh chứa chất Chloramphenicol áp dụng cho tất khâu sản xuất giống, đồng thời Bộ quy định 34 loại hoá chất kháng sinh khác chứa chất: Amoxillin, Ampicillin Benzylpennicillin thường dùng làm nguyên liệu sản xuất thuốc thú y cho động vật thuỷ sản lưỡng cư bị hạn chế sử dụng.( Trương Tất Thọ 2005) 40 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Ý KIẾN 5.1 Kết luận Nha Trang _ Khánh Hoà nơi có điều kiện tự nhiên thuận lợi cho NTTS nói chung lónh vực sản xuất giống nói riêng Trong sản xuất giống cua nhân tạo ngày quan tâm Tuy nhiên số trại sản xuất giống nhân tạo nên việc nắm bắt thông tin trao đổi kinh nghiệm nhiều khó khăn Do chưa có nguyên cứu công bố tình hình bệnh biện pháp phòng trị bệnh ấu trùng cua, người sản xuất thường áp dụng phương pháp phòng trị giống tôm Vì hiệu phòng trị bệnh cho ấu trùng cua không cao gây ô nhiễm môi trường nước nuôi Những bệnh thường gặp bể ương nuôi ấu trùng cua bệnh “phát sáng”, “trùng loa kèn”, “nấm đỏ” bệnh “phát sáng” bệnh “trùng loa kèn” xuất quanh năm gặp hầu hết trại sản xuất Kết phân lập vi khuẩn ấu trùng Zoea3 – Zoea5 cuả cua xanh loài thuộc hai giống Vibrio Pseudomonas Trong loài V alginolyticus có tần số bắt gặp cao mẫu nghiên cứu chiếm tỷ lệ 33,3%, loài P putidacó tần số bắt gặp cao chiếm tỷ lệ 20%, loài V harvey có tần số bắt gặp thấp chiếm tỷ lệ 13,3% tổng số mẫu phân lập Kết gây cảm nhiễm cho thấy loài V harvey tác nhân gây bệnh cho ấu trùng cua mật độ 105tbvk/lít Đối với loài P putida chưa xác định rõ chúng tác nhân gây bệnh hay không Còn V alginolyticus tác nhân gây bệnh hội 5.2 Đề xuất ý kiến Khuyến cáo người sản xuất giống không nên dùng loại hoá chất bị cấm Malachit Green treplan 41 Nghiên cứu tiếp tục: cảm nhiễm V alginolyticus mật độ cao để kết luận thêm vai trò vi khuẩn Nghiên cứu sâu bệnh vi khuẩn ấu trùng Zoea3 – Zoea5 cua xanh để đưa biện pháp phòng trị hữu hiệu 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt: Nguyễn Lân Dũng (1986): Vi sinh vật học - Nhà xuất khoa học kỹ thuật Hoàng Đức Đạt (1995): Kỹ thuật nuôi cua biển Nhà xuất Nông nghiệp TP Hồ Chí Minh 1995 Đỗ Thị Hoà (2003): Bài giảng bệnh học thuỷ sản Trường Đại học Thủy sản Nha Trang Bùi Quang Tề, Đỗ Thị Hoà, Nguyễn Hữu Dũng, Nguyễn Thị Muội (2005): Bệnh học thuỷ sản Nhà xuất Nông Nghiệp Đỗ Thị Hoà (1996) Nghiên cứu số bệnh chủ yếu tôm sú (Penaeus monodon Fabricius 1798) Nuôi khu vực Nam Trung Bộ Nguyễn Cơ Thạch (2000) Nghiên cưu sinh sản nhân tạo cua biển Scylla cerrata Báo cáo đề tài khoa học Tuyển tập công trình nghiên cứu nghề cá biển Nhà xuất Nông nghiệp Hà Nội 1998 Tuyển tập công trình nghiên cứu khoa học công nghệ (1984 – 2004): “Đặc điểm sinh học sinh sản quy trình kỹ thuật sản xuất cua giống loài Scylla serrata, S paramamosain Estampodo 1949” trang 227 – 266 Trung tâm Nghiên cứu Thủy sản III Nha Trang Nguyễn Thị Hải Xuân (2004) “ Bước đầu tìm hiểu hội chứng đốm vỏ cua biển (Scylla spp) nuôi Khánh Hòa” Luận văn tốt nghiệp đại học, Đại học Thủy sản Nha Trang 10 Vi sinh vật y học: ( Viện pasteur Nha Trang) - Nhà xuất y học – Hà Nội 1995 43 Tài liệu tiếng Anh: Johnson, P.T.1983: Diseases caused by viruses, rickettsia, bacteria and fungi, pp 2- 78 In: The Biology of the Crustacea, Vol 6, Pathobiology, (Ed A.J.Provenzano, Jr) Academic Press, New York, NY Couch, J.A 1983: Diseases caused by protozoa, pp 79-111.In:The Biology of the Crustacea, Vol 6, Pathobiology, (Ed A.J.Provenzano, Jr) Academic Press, New York, NY Jean F MacFADDIN Biochemical tests for identification of medical bacteria second edtion Celia R Lavilla-Pitogo, Leobert D de la pena and Demy D Catedral (2004) Disease in Farmed Mud Crabs Scylla spp: Diagnosis, prevention, and Control Một số trang wed : http://www-sci.pac.dfo-mpo.gc.ca/ http://www.blue-crab.org/ http://www.reefkeeping.com/ http://www.ykhoa.net/SKDS/THUOC/67-22.html 28/2/2005http://www.vista.gov.vn/vietnam/khtn/tn03/200502280498434118 44 ... thuộc Vi? ??n Nghiên cứu Nuôi trồng Thuỷ sản III thực đề tài: ? ?Bước đầu tìm hiểu vai trò vi khuẩn tượng chết hàng loạt ấu trùngcua biển (Scylla spp) giai đoạn Zoea3 – Zoea5 trại sản xuất giống Nha Trang,. .. bệnh Trong trại sản xuất cua giống Nha Trang thường xảy tượng ấu trùng cua chết với tỷ lệ cao giai đoạn đầu Zoea3 – Zoea5 Nguyên nhân tượng chưa biết rõ Để nghiên cứu vấn đề mẫu ấu trùng cua yếu... putida chết nhiễm vi khuẩn cho dù lô mật độ vi khuẩn 107tb/L ấu trùng Zoea chết với tỷ lệ cao nói lên vai trò gây chết P putida Bảng 8: Kết cảm nhiễm vi khuẩn Vibrio harvey ấu trùng cua giai đoạn Zoea3