Bài báo cáo thực hành hoá sinh

Nước từ bên ngoài thấm vào hạt sẽ hòa tan các chất dự trữ, hoạt hóa các enzyme xúc tác quá trình phân giải các hợp chất cao phân tử trong hạt thành những chất đơn giản cung cấp cho hoạt

TRƯỜNG ĐẠI HỌC THỦ DẦU MỘT

VIEN PHAT TRIEN UNG DUNG

CHUONG TRINH HOA HOC

BAI BAO CAO THUC HANH HOA SINH

Đoàn Lễ Ngọc Châu Dương Nguyễn Bảo Trân

THÁNG 11/2022

Bài 4 ENZVME

4.1 Thí nghiệm 1: Thu nhan enzyme amylase

4.1.1 Nguyên liệu và hóa chất:

> Nguyên liệu:

Mầm lúa

4.1.2 Thực hành:

1 Gieo mam

2 Ngâm hạt: Trong hạt lúa khô có san | lượng nước ở dạng liên kết Nước từ bên ngoài thấm vào hạt sẽ hòa tan các chất dự trữ, hoạt hóa các enzyme xúc tác quá trình phân giải các hợp chất cao phân tử trong hạt thành những chất đơn giản cung cấp cho hoạt động tăng trưởng của phôi đề hình thành cây mắm Phôi là nới hút nước mạnh nhất Tốc độ hút nước rất mạnh ở thời gian đầu, càng về sau sức hút nước của hạt cảng giảm

3 Ủ hạt: Việc ủ hạt trải qua 3 giai đoạn:

e© Giai đoạn l: kéo dải 3 ngày, ở ngày thứ 3 hạt bắt đầu nảy mầm, nhiệt

độ của khối hạt tăng nhanh do hoạt động hô hấp mạnh Khối hạt cần được đảo 2-3 lần/ngày

e© Giai đoạn 2: kéo dài 3 ngày Lúc này chồi mầm và rễ mầm tăng trưởng mạnh, nhiệt độ khối hạt cũng tăng nhanh do hoạt động hô hấp cao Khối hạt cần được đảo 2-3 lần/ngày

¢ Giai đoạn 3: những ngảy sau quá trình nảy mầm xảy ra chậm dần, nhiệt độ tăng yếu và khối hạt cần được đảo 2-3 ngày/lần

“ Trong quá trình ủ hạt cần hạn chế ánh sáng để ngan cản hoạt động của diệp lục tô làm phát triển thân, lá trong giai đoạn đầu của quá trình nảy mầm không đậy khối hạt đề tăng cường việc cung cấp cho phôi, sau đó cần đậy kín đề che cho ánh sảng chiêu vao

4.2 Thí nghiệm 2: Trích ly enzyme amylase

4.2.1 Nguyên liệu và hóa chất:

> Nguyên liệu:

Cối Giấy lọc Phéu

Ông nghiệm kẹp ống nghiệm

> Héa chất:

Nước cất

4.2.2 Thực hành:

Cân 10g lúa nảy mầm vào cối với 30ml nước cất, nghiền trong nước Đề yên trong

15 phút, đem lọc Đề lắng, đỗ phần nước bên trên qua 1 giấy lọc Chất kết tua lang dưới đáy Cho phần dung dịch trong qua giấy lọc Đề 1 ống nghiệm sạch dưới phễu

dé lay phan dung dich trong Sau khi loc ta duoc dung dich amylase

4.2.3 Kết quả và giải thích:

4.3 Thí nghiệm 3: Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính của enzyme (Nhiệt độ) 4.3.1 Nguyên liệu và hóa chất:

> Nguyên liệu:

Nồi cách thủy Ống nghiệm và kẹp ống nghiệm

Nỗi nước đá

> Hóa chất:

Dung dịch enzym amylase thương mại pha loãng 10 lần (5ml enzyme amylase cho vào 100ml nước )

Dung dịch tĩnh bột 1% Thuốc thử lugol

4.3.2 Thực hành:

Chuẩn bị 6 ống nghiệm, cho vào mỗi ống 2ml dung dịch tinh bột 1% Đặt ống | va ống 4 vào nước sôi 100°c, ống 2 và ống 5 ở nhiệt độ phòng, ống 3 và ông 6 trong

nước đá Giữ trong 15 phút Cho enzyme amylase mầm lúa vảo ống 1, 2 va 3 Cho enzyme amylase thuong mai vao éng 4, 5 va 6 Nhỏ vài giọt thuốc thử lugol vào các ông nghiệm

4.3.3 Kết quả và giải thích:

Kết quả:

Ông 2, 3, 5, 6 bị biến tính Ông 1 và ống 4 không bị biến tính

w Giải thích:

Tuy vao nhiét d6, enzyme sẽ có hoạt động khác nhau Ở ống 1 có màu vàng enzyme chịu nhiệt cao, ống 2 và 5 là nhiệt độ phòng chưa phải là nhiệt độ cho enzyme hoạt động, ống 3 và ống 6 enzyme bị bắt hoạt, việc thủy phân diễn ra ít Màu đậm hơn là màu của enzyme được chiết ra từ mâm lúa

4.4 Thí nghiệm 4: Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính của enzyme (pH) 4.4.1 Nguyên liệu và hóa chất:

> Héa chất:

Na2HPO4 1/15 M, KH2PO4 1/15M (Dung dịch dinatri hydrophosphate 1/15M:(a) 23,9» Na2HPO4.12H2O hòa tan và định mức đến 100ml)

Dung dich tinh b6t 0,5% trong NaCl0,1% (Dung dich Kali dihydrophosphate 1/15M:(b) 9.07ø KH2PO4 hòa tan và định mức đến 100m])

Ị

_¬

Thuốc thử lugol

" Dung dịch đệm có pH khác nhau phụ thuộc vào s6 ml dung dich (a) va s6 ml dung dich (b)

= Dung dich photphat duge goi la dém photphat, điều chỉnh độ pH

4.4.2 Thực hành:

Chuân bị 6 ống nghiệm sạch, đánh số thứ tự vào mỗi ống Cho vào mỗi ống các

dung dịch Na2HPO4 và KH2PO4 theo các thê tích phí trong bảng, lắc đều Cho vào

mỗi ống 1ml dung dịch tinh bột 0,5% lắc đều, thêm vào mỗi ống 1ml dung dịch enzyme amylase thuong mai, lac déu

Bảng xác định pH thích hợp của œ-amilaz nước bọt

Màu với thuốc thử Liugôn

Dung dịch nước bot (mi)

Dung dịch tỉnh

bột 0,5%

qm)

pH

dung

dich

5.3

742

77

115M (mi)

KH,PO,

47

40

25

05

9,

Na,HPO,

115M

(mi)

0.3

1,0

25

3.5

45

49

Số

vu

4.4.3 Kết quả và giải thích:

Kết quả:

Cho mau vang hon so véi enzyme Enzyme c6 d6 pH=7

4.5 Thí nghiệm 5: Ảnh hưởng của NaCl và CuSO4 đến hoạt độ amylase

4.5.1 Nguyên liệu và hóa chất:

> Nguyên liệu:

Ông nghiệm và kẹp ống nghiệm

> Hóa chất:

1—t

Dung dich tinh b6t 0,5% trong NaCl 1%

4.5.2 Thực hành:

Chuẩn bị 5 ống nghiệm, cho vào ống 1 là Iml nước cất, ống 2, 3 ,4 và 5 là 0,8ml

nước cất Cho vào ống 2 và ống 4 0,2m] NaCl, cho vào ông 3 và ống 5 0,2ml

CuSO4 Lắc đều, cho vào mỗi ống 1ml dung dịch tình bột 0,5% Cho vào ống 1,2,

3 Iml dung dich enzyme amylase thương mại, ông 4 và 5 Iml dung dich enzyme mâm lúa Sau vài phút, cho vào môi ông vải øiọt thuộc thử lugol, lắc đều

4.5.3 Kết quả và giải thích:

* Kết quả:

Ở ống I k bị biến tính, màu vàng Ở ống 2,3 bị biến tính màu đậm hơn ống nghiệm, ở ống 4 và 5 bị biến tính cho màu đậm hơn ống 1,2,3

4.6 Thí nghiệm 6: Xác định hoạt độ a-amylase theo phương pháp

Wohlgemuth

$ Nguyên tắc: Dùng dung dịch amilaz có nồng độ pha loãng khác nhau tác dụng với I lượng tĩnh bột như nhau Tìm nồng độ enzyme nhỏ nhất có thể phân giải hoàn toàn lượng tĩnh bột đó Biểu diễn hoạt độ bằng don vi Wohlgemuth

4.6.1 Nguyên liệu và hóa chất:

> Nguyên liệu:

tu a Ỹ = 3

Nồi cach thuy 6n nhiét (37°c) Ông nghiệm và kẹp ống nghiệm

»> Hóa chất:

Enzyme amylase pha loãng 10 lần

NaCl 0,9%

Dung dịch iot 0,02N (2g KI hòa tan trong 3-5ml nước, thêm 0,25g iot và dẫn nước dén 100ml)

4.6.2 Thực hành:

Chuân bị 7 ống nghiệm, đánh số thứ tự Cho vào mỗi ống 1ml NaCl 0,9% Thêm

vào ống 1 1ml dung dịch enzyme, lắc đều, lấy ra 1ml từ ống 1 cho vào ông 2, lắc

đều, lây ra 1ml cho vào ống 3.Tiếp tục đến ống 7, lấy Iml từ ống 7 bỏ đi Sau đó cho vào mỗi ống 2ml dung dịch tính bột 0,1%, lắc đều, đề ở nhiệt độ 37°C trong 30

phút Khi thời gian hết làm nguội đến nhiệt độ phòng, cho vào mỗi ống 2 giọt dung dịch iot 0,02N

4.6.3 Kết quả và giải thích:

Kết quả:

Enzyme amilaz 10% tình bột bị thủy phân hoàn toàn

Từ ống 1->5

2^5 x1000x2= đơn vị

Từ ống 1->7

2^7 x1000x2= don vi

Y Giai thich:

Enzyme co hoat độ cao nên đên ông số 7 con mau vang->Gia su dén ong 7 con mau vang nhung qua dén éng 8 thi dung dich chuyén qua mau do