Báo cáo thực hành sắc kí nâng cao nhóm 5 dh20shc

Hình 1.3.2.1: Khối lượng của lọ thủy tinh không chứamẫu; a Khối lượng của lần lập 1; Khối lượng của lần lập 2 H%= 100∗m1−m2 Hàm lượng chiếc xuất thô của nước đạt 29,15%, nhận xét tương

GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO Ộ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC

BÁO CÁO THỰC HÀNH SẮC KÍ NÂNG CAO

Giảng viên hướng dẫn : TS Trịnh Thị Phi Ly

THÀNH PHỐ THỦ ĐỨC - 11/2023

MỤC LỤC

I ĐẶT VẤN ĐỀ ……….4

II NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU………4

2.1 Mục tiêu nghiên cứu……… 4

2.2 Phương pháp nghiên cứu… ………4

III KẾT QUẢ ……… 5

3.1 Kết quả điện di ……… ……… 5

3.2 Thảo luận kết quà 5

MỤC LỤC BẢNG

Bảng 1: Thành phần phản ứng PCR 4 MỤC LỤC HÌNH

Hình 1: Kết quả điện di 5

Hình 1.2.2.1: Khối lượng nguyên

liệu ban đầu

BUỔI 1: KIỂM TRA HÀM LƯỢNG CHẤT CHIẾT THÔ TRONG NGUYÊN LIỆU

BẰNG CÁC DUNG MÔI KHÁC NHAU

I NGUYÊN VẬT LIỆU

Thân bắp xay sấy khô, đã xay nhuyễn hơn 1mm

Dung môi: Nước cất; Etyl acetac

II KIỂM TRA HÀM LƯỢNG CHẤT CHIẾT THÔ

II.1Mục đích

Đánh giá ảnh hưởng của dung môi đến hàm lượng chất chiết thô

II.2Phương pháp thực hiện

Bước 1: Cân 1g nguyên liệu thân bắp, cho vào erlen

Bước 2: Thêm 15 ml dung môi tương ứng vào các erlen Tiến hành siêu âm trong

15 phút ở tần số 50-60 Hz; 465W và nhiệt độ 28 độ C

Bước 3: Tiến hành lọc dịch chiết qua giấy lọc lần 1 Sau đó thêm tiếp 15 ml dung môi mới và tiến hành lọc dịch chiết lần 2

Bước 4: Thu bã sau lọc và tiến hành đem sấy khô ở 105 độ C

Bước 5: Cân khối lượng của bã sau sấy và ghi nhận kết quả

b)

Hình 1.2.3.1: Khối lượng của bã thân bắp sau sấy đối với dung môi là

nước; a) Khối lượng sấy của giấy lộc 1; ) Khối lượng sấy của giấy

lộc 2

II.3Kết quả hàm lượng chất chiếc thô

Thông qua quá trình ly trích và quy trình sấy khô ta có thể tính được hàm lượng chất chiết thô có trong nguyên liệu ban đầu

H% = 100∗(m1−m2)

m1

Trong đó:

m1 (g): Khối lượng nguyên lộ khô ban đầu m2 (g): Khối lượng bã khô còn trên giấy lọc

Ta có ở dung môi là nước:

m1 = 1, 0035 g m2 = ( 1,0639+ 1,2237 – 0,7961 – 0,7806 ) = 0,7109 g

5

Hình 1.2.3.1: Khối lượng giấy lọc dùng với dung môi là

nước; a) Khối lượng của giấy lộc 1; ) Khối lượng của

giấy lộc 2

Hình 1.3.2.1: Khối lượng của lọ thủy tinh không chứa

mẫu; a) Khối lượng của lần lập 1; ) Khối lượng của

lần lập 2

H%= 100∗(m1−m2)

Hàm lượng chiếc xuất thô của nước đạt 29,15%, nhận xét tương đối cao

2.3 Thảo luận

Do trong quá trình thao tác có sự sai xót dẫn đến kết quả sau sấy của mẫu thân bắp ly trích bằng Etyl acetac bị hồi ẩm dẫn đến không thể so sánh hiệu quả chiếc suất giữa nước và Etyl acetac đối với mẫu thân bắp xay nhiễm

Giải thích nguyên nhân có sự chênh lệch và khối lượng trước và sau chiếc có thể

do có sự chên lệch về độ ấm trong mẫu vật ban đầu và hàm lượng chất chiếc bị chiết suất thông qua dung môi dưới tác dụng của sống siêu âm

III KIỂM TRA HÀM LƯỢNG CHẤT CHIẾT THÔ

III.1 Mục đích

Thông qua phương pháp sấy khô đánh giá ảnh độ ẩm của nguyên liệu

III.2 Phương pháp thực hiện

Bước 1: Cân khối lượng chén thủy tinh đã sấy khô ở 105 độ C

Bước 2: Cân 3,5g bột thân bắp cho vào chén thủy tinh đã sấy khô và làm nguội trong bình hút ẩm

Bước 3: Tiến hành sấy khô ở 105 độ C

Bước 4: Cân khối lượng sau sấy và tính toán thu nhận kết quả

a) b)

Hình 1.3.3.1: Khối lượng mẫu và lọ thủy tinh thu được sau

sấy; a) Khối lượng của lần lập 1; ) Khối lượng của lần

lập 2

b)

III.3 Xác định độ ẩm nguyên liệu

Thông qua sự chênh lệch về khối lượng trước và sau sấy để tính ra hàm lượng

ẩm có trong nguyên liệu

W% = 100∗( w1−w2)

m1

w1 (g): Khối lượng của mẫu thử và chén trước khi sấy w2 (g): Khối lượng của mẫu thử và chén sau khi sấy m1 (g): Khối lượng của mẩu thử trước khi sấy

Ta có

Lần 1:

w1 = 21,7981 + 3,5014 = 25,2905 g

w2 = 24,8295 g

W%= 100∗( w1−w2)

m1 =100∗(25,2905−24,8295)

Lần 2

7

w1 = 19,4122 + 3,5051 = 22,9173 g w2 = 22,4405 g

W%= 100∗(m1−m 2) m 1 =100∗(1,0035−0,7109)

BUỔI 2: PHÂN TÁCH SẮC TỐ THỰC VẬT

I NGUYÊN VẬT LIỆU

Cỏ lao xay sấy khô, đã xay nhuyễn hơn 1mm

Dung môi: n – hexane; Acetone

II PHÂN TÁCH SẮC TỐ THỰC VẬT BẰNG KĨ THUẬT SẮC KÍ CỘT

3.1 Quy trình thực hiện

3.1.1 Chuẩn bị dịch chiết

Bước 1: Chuẩn bị dung môi: Pha 30 ml dung môi chửa hỗn hợp n – hexane: aceton (8:2)

Bước 2: Cân 3g cỏ lào cho vào becher và thêm dung môi vào

Bước 3: Tiến hành siêu âm trong 5 phút và thu lấy dịch chiết

3.1.2 Chuẩn bị cột

Bước 1: Cân 0,75g silica gel cho vào becher ngâm với 30ml n-hexane trong 15 phút

Bước 2: Dùng pipet Pasteur làm cột chiết , nhét 1 lớp bông dưới đáy cột để ngăn cách pha tĩnh

Bước 3: Nhồi lớp silica gel đã ngâm vào cột chiết gõ nhẹ để silicagel lan đều không bị dính lại trên thành cột và không khí không bị giữ lại khi silicagel lắng xuống (châm thêm n – hexane tránh để cột khô)

3.1.3 Đưa mẫu vào cột

Khi dung môi cách bề mặt lớp silicagel 1 mm cho dịch chiết vào khi dịch chiết chảy gần hết châm tiếp n-hexane tránh để cột khô

3.1.4 Rửa giải

Carotenoid ( màu vàng cam ) được rửa giải trước , thu vào ống nghiệm Khi đã thu hết carotenoid , châm tiếp dung môi phân cực hơn là n-hexane : acetone (7:3) để rửa giải diệp lục tố Thu diệp lục tố vào ống nghiệm

Hình 2.3.2.2.: Kết quả rửa giải

thu dược ; a) Nhóm carotenoid màu vàng thu được trước; b) diệp lục tố thu nhn được sau

Hình 2.3.2.1: Cột sắc khi pha

động là n- haxane đi qua; a) Dung

môi: n – hexan : aceton (7:3); b) Nhóm

carotenoid được rửa giải

3.2 Thảo luận

Sau quá trình phân tách ta quan sát được sự phân màu trong cột sắc kí và thu được 2 ống nghiệm chứa carotenoid (màu vàng) và diệp lục tố (màu xanh) thông qua 2 loại dung môi lần lượt là n-hexane và n – hexane : acetone (7:3)

Do kĩ thuật phân tách sắc tố thực vật bằng phương pháp sắc kí cột là dựa trên nguyên lý về độ phân cực của từng loại hợp chất nên trong thí nghiệm carotenoid có khả năng phân cực cao nên khi cho dịch chiết vào thì carotenoid được rửa giải trước Còn diệp lục tố có khả năng phân cực thấp hơn nên được rửa giải sau và cần phải châm thêm dung môi khác có độ phân cực cao hơn để rửa giải và thu nhận được sau

III PHÂN TÁCH SẮC TỐ THỰC VẬT BẰNG KĨ THUẬT TLC

9

A

Hình 1.3.2.1: Kết quả TLC với

dung môi n-hexane : acetone ở

tí lệ 6:4; Đường màu vàng là của

Carotene; Đường màu xanh đậm là

Hình 1.3.2.2: Kết quả TLC với

dung môi n-hexane : acetone ở

tí lệ 7:3; Đường màu vàng là của Carotene; Đường màu xanh đậm là

III.1Chuẩn bị các pha

Bước 1: Chuẩn bị pha tĩnh: bản mỏng silicagel F254; Dùng bút chì đánh dấu 2 đường làm điểm bắt đầu và kết thúc

Bước 2: Chuẩn bị dung môi ly giải (pha động): acetone : hexan (3:7); acetone : hexan (4:6)

Bước 3: Nhỏ dịch chiết ở thí nghiệm 1 vào điểm bắt đầu của bảng khoảng 2-3 lần tại 1 điểm sau đó nhúng vào 2 loại dung môi đã chuẩn bị ở bước 1

Bước 4: Ghi nhận kết quả thu được

III.2 Thảo luận ghi nhận kết quả

3.2.1 Kết quả ghi nhận

Dưới tác động của dung môi (pha động) khác nhau ta lần lượt thu được quãng đường di chuyển trên bảng mỏng thông qua ái lực với dung môi n-hexane : acetone

ở các tí lệ 6:4 và 7:3 Các chất Carotene; Chlorophyll a; Chlorophyll b sẽ di chuyển được các quãng đường khác nhau

10

Hình 1.3.2.1: Kết quả TLC với

dung môi n-hexane : acetone ở

tí lệ 6:4; Đường màu vàng là của

Carotene; Đường màu xanh đậm là

của Chlorophyll a; Đường màu xanh

nhạt là của Chlorophyll b; Đường màu

đen của dung môi

Hình 1.3.2.2: Kết quả TLC với

dung môi n-hexane : acetone ở

tí lệ 7:3; Đường màu vàng là của Carotene; Đường màu xanh đậm là của Chlorophyll a; Đường màu xanh nhạt là của Chlorophyll b Đường màu đen của dung môi

Bảng 2.3.2.1: Độ dài quảng đường các chất trên bản mỏng TLC

3.2.2 Tính toán R f

R f ( X )=dx

d

Trong đó:

X: hợp chất ly trích

dx: quãng đường đi của chất ly trích

d: quãng đường đi của dung môi

Bảng 2.3.2.2: Kết quả tính toán R f của các chất

3.2.3 Thảo luận kết quả

Thông qua kết quả màu sắc thể hiện trên bảng mỏng ta có thể thu được các màu sắc tương đồng ở cả hai tỉ lệ: màu vàng – carotene; màu xanh đậm – Chlorophyll a: màu xanh nhạt – Chlorophyll b

11

Trong TLC các chất có ái lực mạnh với pha tĩnh sẽ di chuyển chậm hơn chất có ái lực yếu, dẫn đến sự phân tách Điều đó có nghĩa là chất có ái lực càng yếu sẽ nằm càng gần vạch xuất phát Ở đây ta có pha tĩnh là silica gel F254 có tính phân cực và hệ

số R f thu được của các chất ta có thể kết luận thứ tự các chất phân tích theo tính phân cực từ thấp tới cao như sau: Carotene < Chlorophyll a < Chlorophyll b