Khảo sát tác dụng của nước sắc hoa Đu Đủ Đực carica papaya l lên lượng Đường huyết và một số chỉ tiêu sinh lí máu Ở chuột nhắt trắng bị Đái tháo Đường type ii

Khoá luận tốt nghiệp với tên để tài “Khảo sát tác dụng của nước sắc hoa đu đủ đực Carica papaya L lên lượng đường huyết và một s chỉ tiêu sin If mau shuột nhất rắng bị đái tháo đường typ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRUONG DAI HQC SƯ PHẠM THÀNH PHÓ HỖ CHÍ MINH

TONG TUYET LINH

KHAO SAT TAC DUNG CUA NƯỚC SAC

HOA DU DU BUC (Carica papaya L.)

LEN LUQNG DUONG HUYET VA MOT SO CHÍ TIÊU SINH LÍ MÁU Ở CHUỘT NHÁT TRÁNG

BỊ ĐÁI THÁO ĐƯỜNG TYPE II

KHOA LUAN TOT NG

NGÀNH SƯ PHẠM SỈ 1 HOC

THÀNH PHÓ HÒ CHÍ MINH - 2024

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

‘TRUONG DAI HQC SU’ PHAM THANH PHO HO CHi MINH

TONG TUYET LINH

KHAO SAT TAC DUNG CUA NUGC SAC HOA DU DU DUC (Carica papaya L.) LEN LUQNG DUONG HUYET VA MOT SO CHÍ TIÊU SINH LÍ MÁU Ở CHUỘT NHẤT TRÁNG

BỊ ĐÁI THÁO ĐƯỜNG TYPE II KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC

NGANH SU’ PHAM SINH HỌC:

NGƯỜI HƯỚNG DAN KHOA HOC PGS TS Nguyén Thị Thương Huyền

CN Hỗ Linh Kiều Nhĩ

“THÀNH PHÓ HỖ CHÍ MINH - 2024

Khoá luận tốt nghiệp với tên để tài “Khảo sát tác dụng của nước sắc hoa đu

đủ đực (Carica papaya L) lên lượng đường huyết và một s chỉ tiêu sin If mau shuột nhất rắng bị đái tháo đường type II” do tôi thục hiện với sự hướng dẫn của Cô

—PGS.TS Nguyễn Thị Thương Huyền và CN Hỗ Linh Kiều Nhĩ Tôi xin cam đoan các kết quả trong khoá luận là trung thực và chưa tờng

Trong hành trành hoàn thành đề tài khoá luận em đã nhận được rất nhiễu sự

iip đỡ hỗ tự để có được kế! quả ngày hôm nay

Với tình cảm chân thành, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Cô- PGS TS

Thị Thương Huyễn người đã tận tình hưởng dẫn, chỉ bảo, hỗ trợ kinh phí và

tạo điều kiện cho em trong suốt thời gian hoàn thành khoá luận tốt nghiệp

ôi tắt cả lòng biễt ơn, em xi gửi lời cảm ơn sâu sức tới cô - CN Hỗ Linh Kiều Nhi, người đã tận tình hướng dẫn, hỗ trợ kinh phí, truyền đạt những kiến nhức

quan trọng, kinh nghiệm quý báu trong suốt quá trình hoàn thành khoá luận tốt

"nghiệp Đú không cỉ là nằn tăng cho quá trình thực hiện khoá luận mà còn là hành

trang cho chặng đường phía trước

Em xin girl cảm ơn chân thành nhất đến toàn bộ Quý Thầy Cô Khoa Sinh

học, Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hỗ Chí Minh đã giảng dạy các kiến thức,

truyền đại những kinh nghiện quý bắu cho em trong suỗt 4 nm học tập và rên luyện

“Nguyễn Thị Thanh Hằng đã giúp đờ chỉ dạy và to điều kiện cho cm trong quá trinh nghiên cứu

Em cũng xin cảm ơn bạn Nguyễn Kim Mi, Lâm Thị Khánh Phương, Đặng Bảo

Ngôn, Trần Nguyễn Hoàng Uyên, Võ Hoàng Gia Lạc, Trần Thỉ Phương Nga vì đã

giúp đỡ trong quá trình thực hiện khoá luận tại phòng thí nghiệm

Chân thành cảm ơn bạn Bài Thị Lan, Nguyễn Kinh Kha, Đăng Trần Gia Hân, Tổng Phú Tân, L¿ Trúc Phương,

Lê Hồ Minh Trung, Nguyễn Quốc Trung, đã nhiệt

tình hỗ trợ giúp đỡ em trong thời gian hoàn thành khoá luận

Cuối cùng, em muỗn gửi lời cảm ơm tới mẹ, ôi gia đình và bạn bè những

người đã hết sức ng hộ, giúp đỡ và động viên em trong suốt quá trình học tập đã

ua Khoá luận của em còn những hạn chế về năng lực và những thiễu sốt tong quá trình nghiên cứu Em xi lắng nghe và tp thụ những ý kiến, nhận xế để hoàn thiện,

bổ sung kiễn thức Em xin chân thành cảm ơn!

TP Ha Chi Minh, ngày 02 tháng 05 năm 2024 SINH VIÊN Tổng Tuyết Linh.

2 Mục tiêu nghiên cứu

1.2.1, Đặc tinh, trang thi lồn tại của dreptozotoci 5 1.2.2 Vai rd cia streptozotocin dé vim inh chug Ba tháo đường s

1223 Cơ chế gây bệnh của dreptozoci đối với tế bảo B đảo ty 6

1.2.5 Mô hình đáp ứng đái tháo đường type TI do STZ có kết hợp nicotinamide (NA)S

2.1 Phuong phip chim sốc chuột

3.2 Phương pháp gây mổ hình chuột đái tháo đường typeI 23 2.3.Co s6 xe din itu ding nude sic hoa du di dye 23

3.5 Phương pháp chuẳn bị nước sắc hoa đu đủ dye 2

2.8.2 Phương pháp xác định số lượng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, kích thước hồng

sầu, bảm lượng Hồ, eis hematocrit vith gian đông máu 2»

CHUONG 3 KÉT QUÁ VÀ THẢO LUẬN “ 3.1 Te dung dn định của nớc sắc hoa đu đủ đực ên độ tng trọng trưng bỉnh của shuột đái tho đường type Il qua các tun mudi 4

3.2 Tác dung ôn định của nước sắc hoa đu đủ đực lên một số các chỉ số huyết học ở

3.3.2 Ảnh hưởng lên số lượng hồng câu trung bình 37

SỐ LIEU CUA KHOA LUAN

1 KHÔI LƯỢNG - ĐỘ TĂNG TRỌNG

2 SO LIEU DUONG HUYET

3 80 LIEU HONG CAU

4 SỐ LƯỢNG BACH CAU,

5 SỐ LƯỢNG TIỂU CÂU,

6, HAM LUONG HEMOGLOBIN

7 CHi SO HEMATOCRIT

8 BAN KINH HONG CAU

9 THOIGIAN BONG MAU,

TER Tnsttute of Cancer Research

DF The Intemational Diabetes Federation STZ Sireptorotocin

STZ+HD Sirepiozotocin + nude sic hoa ấu đu đực SIZ+NA ‘Sireptozotocin + Nicotinamide

STZ+M Streptozotocin + Metformin

thí nghiệm cảm ứng bệnh đái tháo đường trên chuột bằng

Bảng 1.1 Mét sé mo

s12 8 Bảng L2 Vị tí phân loi 1s Bảng 1.3 Vai trò được iệu của hoa đu đủ đực 7 Bảng 2.1 Dụng cụ, thiết bị chăm sóc và lấy máu chuột 9 Bang 2.2 Hos chit sir dung cho thi nghigm 20 Bảng 2.3 Quy tình thu nước sắc hoa đu đủ đực (Cariea papaya L.) 26 Bảng 3.1 Độ tăng trọng của chuột ” Bảng 32 Chỉ số đường huyết của chuột (mg/dL) 36

Bang 3.4 Số lượng tế bào bạch cầu của chuột (x103 TB/mm') 39 Bảng 3.5 Số lượng tế bào tiễu cầu của chuột (x105 T/mm)) 41

Bảng 36 Một số chỉ số huyết học khác ở chuột 2

loạt động của streptozotocin trong té bio đão tụy

í nghiệm tổng thể

le nuôi chuột thí nghiệm

Hình 26 Minh họa thao tá thử đường huyết Hình 27 Minh họa đo lách thước hồng cầu bằng phần mễm S

Bệnh đái tháo đường là một rối loạn chuyển hoá mãn tính, phát sinh khi tuyển

tụy không sản xuất đủ insulin hoặc cơ thể không đáp ứng hiệu quả với insulin Day

là một trong những bệnh phổ biển nhất trên toàn cầu Bệnh này được phân loi thành

bốn loại chính dựa trên nguyên nhân và triệu chứng lâm sàng: đái tháo đường loại I,

loại II thai kì và các trường hợp đặc biệt khác Trong số đó, đái tháo đường loại II

triển và tí lệ này còn cao hơn ở các quốc gia đang phút triển Tình trạng này được cho

là đo sự gi đ cũn dân số, đô thị hoá thôi quen ăn uống không lành mạnh,

vào năm 2019, có khoảng 463 triệu người trên thé giới mắc bệnh đái tháo đường với

cdẫn đến nhiều bi chứng nguy hiểm, bao gồm tổn thương thận mạc và các vẫn để liên quan đến tìm mạch như đột quy, lot chân do đái tháo đường, nhiễm trần đặc iệtlà tôn thương thần kinh, Biến chứng tổn thương thẫn kinh ngoại vi là một trong những biến chứng nguy hiểm và phổ biển nhất, với tỷ lệ mắc từ 26 đến 47%

Mặc dù thường ít gây tử vong, nhưng nó có thẻ gây ra tàn phê, buộc phải cắt cụt chỉ [2]

“Trong thời đại hiện nay, bên cạnh việc sử dụng các loại thuốc thương mại để

điều tị đái tháo đường, sự tin dùng vào dược liệu cổ truyền đang ngày cảng tăng lên

ddo nguồn gốc lâu đời và tính ứng đụng truy thông của chúng Do đỏ, việc nghiên

đang thu hút sự quan tâm rộng rãi [1], [2] Các nghiên cứu hiện nay về các dược liệu

từ thực vật đã cho thấy khả năng giảm đường huyết [3-7] Tuy nhiên không chỉ cằn

tìm ra các dược liệu có thể hạ đường huyết mà còn cần phải xem xét về khả năng

giảm biển chứng của bệnh đái tháo đường IS]

“Trong thời gian dai, hoa du du dye (Carica papaya L.) đã được công nhận là

một loại được liệu quý gi

các thành phần như alkaloid, favonoid, saponin, steroid, coumarin diterpenes, á trong các phương pháp y học đân gian, nhờ vào hàm lượng

quinones, phenol va tannin, Trong sé cae chat nay, flavonoid trong hoa du di được

xem là một hoạt chất quan trọng có khả năng ôn định đường huyết bằng cách thúc

1

khỏe và các hoạt động sinh học như khả năng kháng oxy hoá, kháng khuẩn, ức chế

ự phát triển của tế bảo ung thư và ôn định đường huyết [9], [10], [I2]

Nhằm đánh giá tác dụng của nước sắc hoa đu đủ đục đối với mức độ đường

huyết và một số chỉ tiêu sinh lí máu ở chuột nhắt trắng mắc bệnh đái tháo dug type

11, kết quả của nghiên cứu có thể cung cấp cơ sở khoa học cho việc sử đụng hoa đu

chứng minh, nước sắc hoa đu đủ đực có thể trở thành một phương pháp điều trị bố

sung cho bệnh đãi tháo đường typeI, góp phần cải thiện chất lượng cuộc sống của

người bệnh và giảm gánh nặng chỉ phụ

tế, Ngoài ra, đề tài này cũng có ý nghĩa trong

việc bảo tồn và tôn vỉnh giá trị y học của cí

đu đủ, một nguồn dược liệu quý giá trong y học dân gian Việt Nam, cũng như nâng cao nhận thức của cộng đồng về việc

sử đụng các cây thuốc trong điều trị bệnh đái thảo đường

Chính vì các lí do trên, đề tải "Khảo sát tác dụng của nước sắc hoa đu đủ dye (Carica papaya L.) len lượng đường huyết và một số chỉ tiêu sinh lí máu ở chuật nhất trắng bị Đái tháo đường type II” la mot hung ne

n cứu có ý nghĩa

khoa học và thực tiễn cao

2 My tiêu nghiên cứu

Khảo sát tác dụng của nước sắc hoa đu đủ đục (Corica papaya L.) lên lượng đường huyết và một số chỉ tiêu sinh lí máu ở chuột nhất trắng bịđái háo đường type

II, Nghiên cứu này nhằm cung

p thêm thông tin về tác dụng của hoa du đủ đực trong việc kiểm soát đường huyết và cái thiện các chỉ tiêu sinh lí máu ở bệnh nhân

tiểu đường type II

3 Đối trợng nghiên cứu

CChuột nhất rắng cái chủng ICR 6 tuẫn tuổi

4 Nội dung nghiên cứu

>- Khảo sátác dụng của nước sắc hoa Du Dù đực ở chuột bị bệnh đã tháo đường type II lên độ tăng trọng:

v 'Khảo sát tác dụng của nước sắc hoa Ðu Đủ đực ở chuột bị bệnh đái tháo

đường type II lên tẾ bào máu chuột hồng

thước hồng cầu;

>- Khảo sát tác dụng của nước sắc hoa Bu Đủ đực ở chuột bị bệnh đổ tháo

u, bạch cầu, tiểu cầu và kích

‘using type TI lên một số chỉ số huyết học: hàm lượng glucose trong máu, hàm lượng hemoglobin, chỉ số hematocri, thời gian đông mầu

5 Phạm vi nghiên cứu

- ĐỀ tải được thực hiện tiên chuột nhất rắng cát bị đái thio ding type IL

êu nước sắc hoa đu đủ đực

- Thời gian bỗ thí nghiệm: 6 tuằn/đợt thí nghiệm

- Độ tăng trọng cơ thể chuột

- Các chỉ số huyết học: hàm lượng glucose trong máu, tiểu cầu), hàm lượng hemoglobin, chỉ số hematoeri, bán kính hồng

số lượng t bào máu (hồng

cần, bạch c

cầu và thời gian đông mau

1.1 Tổng quan về bệnh đái tháo during type II

1.1.2 Nguyên nhân va ede yéu td nguy eo

"Bệnh đái tháo đường type II có nguyên nhân chính là sự kháng insulin và thiểu

hut insulin, Sw kháng insulin xảy ra khi tế bảo trong cơ thể không phản ứng tốt với

insulin, din dén ting glucose trong máu, Trong khi đồ, thiểu hụt insulin xảy ra khi

sử gia đình, thừa cân hoặc béo phi, lỗi ống ít vận động, chế độ ăn uống không lành

nữ:Có nhiều yếu tố nguy cơ góp phần vào sự phát triển của bệnh này, bao gồm tuổi

é khích, kết hợp với

uống cân đối và tập luyện thể dục đều đặn thường được khuy' việc sử dụng thuốc uống hạ đường huyết hoặc insulin Đẳng thời, để phòng ngừa căn xuyên, tuân thủ chế độ ăn uống lành mạnh, ngừng hút thuốc lá, đầm bảo uống đủ một bệnh lí mãn tính nguy hiểm, nhưng có thể kiểm soát tốt bằng chế độ sinh hoạt hợp lí và tuân thủ điều trị Phát hiện sớm và điều trị kịp thời có thể giúp ngăn ngừa

shững và nâng cao chất lượng cuộc sống cho người bệnh

1.2 Tổng quan về Streptozocin

1.2.1 Đặc tinh, trang thdi ton tai ctia streptozotocin

Streptozotocin (STZ) là một dẫn xuất nirosourea đơn chức, được phân lập từ

Streptomyces achromogenes vio nim 1960, STZ khong chỉ có hoạt tính kháng sinh

phổ rộng mã còn được biết đến với đặc tính chống ung thư Trong các nghiên cứu,

STTZ thường được sử dụng để sâyra bệnh đáitháo đường ở động vật thí nghiệm thông

qua tác động độc hại lên tế bào của tuyến tụy Là một tác nhân alky] hoá mạnh, STZ

có khả năng methyl hoá trực tiếp DNA sây ra sự đất gấy chuỗi DNA tại các vị trí

không bền với kiềm, tổng hợp DNA đột xuất, gắn thêm DNA, gây quang sai nhiễm

sắc thể, ví nhân, trao đôi nhiễm sắc thể chị em và gây chất ế bào Nó cũng đã được

phát hiện có khả năng gây đột biến trong các xét nghiệm vi khuẩn và tế bào nhân

chuẩn STZ cũng có khả năng gây ung thư Việc sử dụng STZ có thể gây ra các k

tớ thận, gan và tuyển tụy của chuột chỉ au một lẫn sử dụng Một số bằng chứng cồn

cho thấy mỗi liên quan giữa các gốc tự do và tôn thương DNA, nhiễm sắc thể bởi hợp

chất này, Do việc sử dụng STZ như một chất chống ung thư, nghiên cứu vỀ độc tính

di truyền của nó có ý nghĩa thực tiễn đáng kẻ [14]

1.2.2 Vai tr cia streptozotocin déi với mổ hình chuột Đái thấu đường

"uy được phân lập từ năm 1960, nhưng vai trồ của sưeptozotocin đi với bệnh

Dai tháo đường không được mô tả trong vòng 3 năm Cho đến năm 1967 - 1969, tác

động gây Đái tháo đường của STZ mới được làm rõ STZ phá hủy có chọn lọc các tế

bảo đảo tụy ÿ dẫn đến cơ thể động vật bị thiểu hụt insulin, tăng đường huyết, khát

nụ khi

nước, đào thải nước tiểu liền tục (đặc trưng cho Đái tháo đường type 1) Ng:

mô hình thiểu insulin mà không phải kháng insulin (Bai théo đường type 2) Nó được đặc trưng bởi sự ổn định, tăng đường huyết và mắt khoảng 60% chức năng tế bào (15-18|

1.3.3 Cơ chế gây bệnh của streptozocin đãi với té bào fp déo tụy

§TZ là sự kết hợp của nhóm nitramine methylnitrosourea có tính phản ứng cao

ở ịtrí C2 và phân tử glucose Nhóm nitramine methylnitrosourea gây ra tính độc của nhắm mục tiêu đặc hiệu vào các tế bào j đảo tụy bằng cách nhận diện GILUT2, một

trên màng tế bảo j (Hình 1.1) [20-22] Do GLUT2 cũng tôn tại rong gan và thận, liều cao STZ có thể gây hại cho các cơ quan nảy; tuy nhiên, chúng nhanh chóng được thận chuyển hoá và bài ết J22] Khi ức chế biểu hỏi các hoạt động gây độc tế bào và gây bệnh đái tháo đường của STZ [23]

Hinh 1.1 Cơ chế hoạt động cia streptozotocin trong tẾ bào j đảo tụy [24]

Sau khi STZ xâm nhập vào các tế bảo đảo tụy, nó phá vỡ sự liên tục của sợi DNA, kích thích enzyme «ng hep poly (ADP-ribose) va làm giảm mức NAD* va NADP", li cdc nucleotide dng vai trd quan trọng trong các quá trình hô hấp tế bào Điều nây đồng vai trỏ quan trọng trong việc ức chế sự tổng hợp tiền insulin

‘urge kich hoat trong céc té bio vi hydrogen peroxide được tạo ra [25] Các loại oxy hoạt tỉnh (ROS) cũng có thể hình thành trong các tế bào trong quá trình tich ty STZ trong các tbảo đo tỉnh bất ôn hoá học của chúng [26] [27] Theo nghiên cứu, các

6

alkyl của STZ [27] [28]

1.2.4 Mô hình cảm ứng bệnh đái tháo đường do STZ

CCơ chế gây ra bệnh đái tháo đường do SFZ có thể khác nhau tùy thuộc vào liễu dang Vi vay, có hai phương pháp được sử dụng thường xuyên để xác định là STZ

lu cao hoặc nhiều iễu thấp được thể trong Hin 1.2 va Bing 1.1

được tiêm một li

dưới đây:

Hình L2 Mô hình cảm ứng bệnh đái tháo đường bằng STZ [29]

(Ä) Cuchế gây tấn thương t bà ba nyễn ay khỉ dling mt hoe nha lide STZ (8) Cơ ch hoại động ca SIZ ung nhận bàn?

Bang 1.1 Một số mô hình thí nghiệm cảm ứng bệnh

chuột bằng STZ [24] tháo đường trên

trong Š ngày 10~ 12 tần tổ), 2372863 mgdL (ái Tia day ahr Sprague-Dawley 20392 1,72 mmol 7

30 mefkg baw (đực 6 tuần tuổi) 5 367 431mg (AL saw 1 twin Tiga day nae Wistar 426 £31 mgidL

200 mg/kg b.w (due, 8 twin tdi)

125 Mé hinh dip sing đi tháo đường type H do STZ có kết hop

nicotinamide (NA)

tong số tắt cả các mô hình được báo cáo, mô hình gây đái tháo dudng bi

hoá chất với sreptozotocin được cho là phổ biển nhất Để đạt được mục tiêu

type II, các phương pháp kết hợp giữa STZ và các hoá chất khác như NA đã được

phát triển Phương pháp này mang lại nhiễ

Hyperslycemia impaired Beelle

Type 2 Diabetes Mellitus

Hinh 1.3 Cơ chế đáp ứng đái tháo đường type TI trong nghiền cứu [30] Khi STZ xâm nhập vào tẾ bảo J, gây tôn thương DNA và tăng hoạt động của

enzyme sửa chữa DNA poly (ADP-ribose) polymerase (PARP-1) Hogt động quá

cạn kiệt NAD (+) va ATP nội bào, làm cho các tễ bào

mức của enzyme này dẫn

tiết insulin bị hoại tử Nieotinamide (NA) cho thấy một phần bảo vệ bằng cách

PARP-I, ngăn ngừa sự cạn kiệt NAD (+)

«dng của TZ Bệnh đái tháo đường type II được gây ra theo cách này cũng thể hiện

[30] các triệu chứng rồi loan lipid méu, dung nigu va keton ni 1.3 Tổng quan vé insulin

13.1 Co ché dip ting của insulin đối với glucose trong té bào và cơ quan

Insulin - hormone duge tit ra tir té bio B dio ty -e6 chức năng điều hòa hoạt động của enzym, tham gia vào quá trình đồng hoá và dị hoá 3 thành phần quan tong như dành cho trẻ suy định dưỡng, sằy gò, đặc biệt được dùng như thuốc quan trọng

đối với bệnh nhân đái tháo đường (cá type I va ID)

9

glucose (Hình 1-4) để cho phép các tẾ bào cia eo thé si dung glucose lam năng

bi

của lượng đường trong máu ví đụ sau khi ăn một bữa ăn nhiều đường Điều

này là đo insulin hoạt động như một chìa khoá dùng để mở các tế bào trong cơ thể

và cho phép glucosc được sử dụng làm nguồn năng lượng

1 Ingutin binds

Hình 1.4 Cơ chế tác động của insulin trên kênh vận chuyển glucose

‘Thy thé insulin (insulin receptor IR) là một protein xuyên màng, gồm tiểu phần

«anim mặt ngoài màng, nằm mặt tong màng Tiề phần œ bên ngoài t bo liên kết

với insulin và kích hoạt B xúc tá tyrosine kinase (Tr-K) nằm trong tế bảo Ngược

lại, Tyr-K kích hoạt nhiều loại prolein khác trong một tẳng tín hiệu dẫn đến các chức 1.5, bao gồm: khi insulin kết nối với IR, một loại epzyme đặc biệt gọi là tyrosine kinase được kích hoạt Quá trình này gây ra việc sẵn thêm nhém phosphate (Phosphorylation) vào các phần tử tyrosine trên IR và các protein khác

biệt à khi cơ thể cần năng lượng nhiều hơn, chẳng hạn khi tập thể dục Sau khi xâm

nhập vào các tế bào (ví dụ, được GI.UT4 tạo điều kiện), glucose được chuyển hoá thành năng lượng, được chuyển đổi thành glycogen để lưu trữ, được lưu trữ dưới dạng

triglyceride va / hoặc được sử dụng cho các quá tình tăng trưởng tế bào

* ĐI với cic co quan

Trong gan dòng chảy dưỡng chất được tối ưu hoá nhờ sự phối hợp của các tín

hiệu hormone và đường chit Insulin, thong qua AKt2, kich hoat glycogen synthase

và giảm sự phiên mã cia cée enzyme ghiconcogenesis thong qua sự bất hoạt của chế quá tình phân giải glyeogen và khi được chuyển hoá, có thé kich hogt ChREBP

Cả SREBPI và Ch&EBP đều thúc đấy qua tinh tg lipid méi (DNL) Gan cing hip

thụ axit béo từ các mảnh chylomicron hoặc từ quá trình phân giải lipid ngoại bi góp phần vào tổng hợp lipid thông qua quá trình tái ester hoá [31]

“Trong cơ xương, insulin kích hoạt sự dĩ chuyển của các túi chứa glucose (GSV),

đến màng ào, tăng cường sự bắp thu glucose và tổng hop glycogen Sy di chuyén ccủa GSV cũng có thể được kích hoạt bởi hoạt động thể dục, Cơ xương cũng hấp thụ

snặt béo để oxy hoá, cũng cấp năng lượng cho cơ thể [31]

Trong mô mỡ, insulin ức qué tinh phân giả lipid va thúc dy sự bắp thụ glueose Mô mỡ là nơi lưu trữ chính của lïd, với sự ắp thu phối hợp của chất béo

tr chylomicrons va lipoprotein ty trọng rất thấp (VLDL) [31]

“Tóm lại, các quả trình này đảm bảo sự cân bằng năng lượng và chuyển hoá trong

cơ thể, đồng vai trò quan trọng trong việc duy trì sức khỏe toàn điện

1.3.2 Khéng insulin

Tình trạng kháng insulin xuất hiện khi cơ chế lưu trữ dưỡng chất phát triển để

tôi ưu hoá việc sử dụng năng lượng hiệu quả gặp phải tình trạng dư thừa năng lượng

kếo dài Sự tích tụ ipid lạc chỗ ở gan và eơ xương kích hoạt các con đường làm suy elycogen & gan, Khéng insulin ở cơ, do lipid lạc chỗ, xây ra trước kháng insuin ởi gan và chuyỂn glueose ăn vào vào gan, dẫn đến tăng quá trình tạo mỡ mới ở gan và

tang lipid mau Cơ chế kháng insulin được thể hiện ở Hình 1.6 [31]

Sự xâm nhập của đại thực bào vào mô mỡ trắng (WAT) dẫn đến tăng phân giải

mỡ, làm tăng thêm quá trình tổng hợp triglyceride & gan và tăng lipid méu do ting

.quấ trình ester hoá axit béo Quá trình phân giải mỡ WAT do đại thực bảo gây ra cũng

kích thích tân tạo glueose ở san, dẫn đến tăng đường huyết lúc đối và sau bữa ăn trong gan, một chất kích hoạt mạnh mẽ pyruvate cartboxylase và tăng chuyển đổi

glycerol thanh glucose [31],

CCác quá tình điều hòa cơ chất này chủ yếu không phụ thuộc vào tín hiệu insulin

ở gan nhưng phụ thuộc vào tín hiệu insuin trong WAT, cơ quan bị khiếm khuyết do

đo đại thực bào gây ra sẽ đảo ngược nguyên nhân gốc rễ của bệnh đái tháo đường

type II [31]

Trong gan, việc kích hoạt PKCe qua trung gian DAG làm suy yếu tín hiệu

insulin, hạn chế quá trình tổng hợp glycogen do insulin kích thích, trong khi quá trình

tổng hợp lipid ở gan vẫn tiếp tục không bị suy giảm Tại cơ xương, sự kích hoạt PKC0

‘qua trung gian DAG lam suy yêu tí hiệu insuli, cản trởsự hp thu glucose do insulin

kích thí và dẫn đến tăng cung cấp lucose đến gan Tuy nhiên, tập thể dục vị có

thể thúc đầy sự bắp thu glueose ở cơ Trong mô mỡ, sự giải phóng cytokine từ các

cđại thực bảo liên quan đến mô (ATM) thúc đầy quá nh phân giải mờ và dẫn n

tăng giải phông sxitbéo (FA) Điều này sẽ thúc đây quá tình tổng hợp pH ở gan và gin acetyl-CoA, ting sin xuất glucose thông qua quá tình chuyển đổi cơ chất [31]

“Tổng quan sơ lược vỀ chuột nhất trắng

ĐỀ ải được thự hiện tên chuột nhất trắng 6 tuần tuổi chủng ICR (Institute

of Cancer Research)

1.41 Vj tri phin log [33]

Giới - Động vat Animalia

SI roan Coon ng Vesa hay 66 Np so Cran

‘Chuge Mus Linnaeus, 1785

Mus musculus innaeus, 1785

Chuột trắng

Chuột nhất trắng Mus musedlus var albino Linnaeus,

Chuột nhất trắng - Mac muscvlus var, albinơ chùng ICR có hình dạng tương

tự với chuột nhất nhà Chuột trắng; mắt sáng, li: tử vễnh; đuôi trần dhi: miệng thuyền; năm ngồn chân rên mỗi bàn chân Cân nặng ừ 1 - 2 đối với

tuổi, Chuột nhất

tuổi chuột bước vào độ

chuột mới sinh, 20 - 40g đối với chuột trưởng thành (5 - 8 tui

trắng chủng ICR có tuổi thọ từ 2 đến 2.5 năm, 6 đến 8

tuổi thuần thục giới tính và có thời gian mang thai là 19 đến 21 ngày [34

*Đặc điểm sinh lí máu [34]

1s

- Phema: Chiếm khoảng 55⁄0 th tích máu chứa nước, protin, các chất điện giải, alueose, hormone, và các chất xận chuyển khác,

- TẾ bào máu: Chim khoảng 45% thể tí

+ Hồng cầu: Chiêm khoảng 955% ế bào máu, có chức năng vận chuyển oxy va COs,

1.5 Tổng quan về hoa đu đủ đực (Carieø papsya L.)

Du dit (Carica papaya L.) e6 ngubn gic te Trung vi Nam Mỹ và là một tong những loại cây ăn quả được trồng nhiều nhất rên thể giới, đặc biệt là ở các vàng nhiệt

đới và cận nhiệt đới, trong đó có Việt Nam Ðu đủ (Carica papaya L.) là một loại cây

thân thảo lầu năm, cỏ mũ mầu trắng đục, có th cao tới lÖm Nó cho quả quanh năm

và mỗi quả nặng từ 1000 đến 3000g Ðu đủ được chỉa thành cây đực và cái Hoa đu

đủ là bộ phận lưỡng tính, mọc thành cụm ở định ngọn hoặc nách lá của cây đu đủ Hoa trắng nhạt hay xanh nhạt, trong đó, hơa đu đủ đực mọc ở kế lí thành chùy có

“cuống rất dài; hoa cái có tràng dài hơn tràng của hoa đực, mọc thành chùy ở kẽ lá

Hoa đu đã có 5 cánh hoa mông manh nhụy hoa mầu cam sáng, và nhiễu nhị hoa màu

vàng [36], [37] Hiện nay, nhiều thành phẩn hoạt chất thực vật đã được tìm thấy tir

động sinh học như kháng oxy hoá, chống tăng huyết ấp chẳng khối u, chống đái tháo

khái thác nguồn hoạt chất sinh học thực vật tự nhiên để cung cấp cho cơ thể Theo câu đực nói riêng để cổ đủ cơ sở khoa học đây đủ

l6

Hoa du dit (Carica papaya L.) tir âu đã được sử dụng trong y hoe dn gian dé điều tị nhiều bệnh If khác nhau Ngày nay, các nghiên cứu khoa học đã dẫn chứng, mình những ác dụng được liệu quý áu của hoa du đủ, cụ thể hơn la hoa du dit dye

đã góp phần khẳng định vị trí quan trọng của nó trong lĩnh vực y học Vai trỏ dược liệu của hoa đu đủ đực được thé hign trong Bang 1.3

Bang 13 Vai trò dược liệu của hoa đu đủ đực [9], [10], [12] Enzyme papain vi chymopapam 68 Khả năng phần giải

Hỗ tợ tiêu hoá _ protein, giúp tiêu hoá thúc ăn hiệu quả, giảm diy bung, khó tiêu, táo bón

"Các hợp chit polyphenol và vitamin C có tác dụng chông

hệ miễn địch bệnh truyền nhiễm se

‘Cie hep chit polyphenol vi iavonoid có tác dung chong Giảm viêm _- viêm, giảm đau, hỗ trợ điều tị các bệnh viêm khóp, thoái hoá khớp,

Hỗ trợ điều trị bệnh _ Một xô nghiên cứu cho thấy hoa đu đủ có khả năng hạ

¡ thiện

đái tháo đường — đường huyết l trạng bệnh đái tháo đường

- Tông quan về các công trình nghiên cứu trên thể giới và ở Việt Nam Khả năng ôn định dường huyết của hoa đu đủ đục (Cariew papaya L.) duge các nhà khoa học trên giới ất quan tâm, đặc gt trong cée năm gằn đây có các nghiên

cửa liên quan tiêu biểu sau

1.2.1 Tầng quan về các công trình nghiên cứu trên thể giới Năm 2018, Wahyuni và cộng sự đã công bố, hoa đu đủ (Cariea papaya L.) chứa chất chuyển hoá thứ cấp nhur flavonoid, tannin, steroid va terpenoid Chiết xuất hoa thông qua việc giảm lượng đường trong máu ở chuột [38]

7

tanin và steroid triterpenoid có chức năng chống bệnh Đái tháo đường do sucrose

(liga 160 mgfkg thể trọng) với các nồng độ chiết suất hoa đu đủ khảo sát 200, 400 và trọng có hiệu quả ổn định đường huyết tốt nhất thông qua khảo sát khối lượng chuột cứu vẫn chưa có những đánh giá nhất định v ác chiêu sinh í máu khác ở chuột 1.22 Tầng quan về các công trình nghiền cứu tại Việt Nam Nam 2019, Nguyễn Thị Xuân Thu dã ú

hành sàng lọc một số thực vật có khả năng hạ đường huyết trên mô hình chuột đái háo đường type II do streptozocin gy

ra, Kết quả nghiên cứu cho thấy cao chiết từ lá và hạt đu đú lẫn lượt có khả năng hạ

đường huyết là 52,38% và 53,16% Ngoài ra, cao chiết ethanol từ hạt và lá đu đủ đều

cố khẽ năng ức chế hoạt động của enzame alueosidase và chzyme o-ammylasc Các

có tác dụng cải thiện tổn thương các tiểu đảo tụy đo streptozocin gây ra [39]

Nghiên cứu của Nguyễn Thị Huỳnh Như và đồng nghiệp (2020) đã chứng mình

rằng cao chiết từ hạt đu đủ chứa một số thành phần hoá học có hoạt tính kháng oxy

hoá, được biểu hiện qua khả năng khử và bắt gốc tự do, Điễu này đưa ra tểm năng

hỗ trợ trong việc điều trị bệnh tiểu đường [40] Cùng năm đó, một nghiên cứu khác

của Giang Thị Kim Liên và Đỗ Thị Lệ Uyên (2020), cho thấy các hợp chất hoá học

mg với các chất thuộc nhóm digoxin, Trong số các chất này, Stigmasterol là một

chất chống oxy hoá mạnh, có tác dụng hạ đường huyết và giảm cholesterol [41]

3⁄1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIÊM NGHIÊN CỨU

31-1 Thời gian nghiên cứn

Dé tai được tiến hành từ tháng 10/2023 đến tháng 5/2024

2.1.2, Bja diém nghién ei

"Để tài được thực hiện tại phòng thí nghiệm Giải phẫu ~ Sinh lí Người và Động vât (M103), Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hỗ Chí Minh

2.2 DỤNG CỤ, THIẾT BỊ VÀ HOÁ CHAT

-3221 Dụng cụ thiết bj ding cham sóc chuột và lẫy máu chuột

"Bảng 2.1 Dụng cụ, thiết bị chăm sóc và lấy máu chuột

* Dụng cụ, hiết bị chăm sóc chuật

3 _— Bình nhựa đựng nước uông cho chuột (75 mì) Việ Nam

3 Budngdémbhong chu, bach eau Heinz Herenz Hamburg Đức

W— Bo dung ep Huyet sic ke Sahl Marienfeld Đức

ia pot

17 Diu camera Seye

ich thi neh

Bảng 22 Hoá chất và dung dịch sử đụng cho thí nghiệm

* Hoá chất sử dụng cho thí nghiệm

Shab ST Tay Ban Nia

5 Nmdom Shab ST Tay Ban Nia T—MrmeE Shab ST

3 an metiyion

Magnesium sate Shab ST Ty Ban Nha

TO Kali dihydrogen phosphate Merck Dic

TI GEN hydrogen phosphate Merck Đức T5 Gemaba nde

13 Methanat Xiong Saeniic — Trang Qube

—_ TH n Ta can T5 Formaldehyde XiongSaemiie— Tring Qube

* Dũng dịch sử đụng cho thí nghiệm

20

PHS edt vita da 100ml dung dich

=> 4,7ml (a) + 5,3ml (b) + nước cắt vừa đủ 100ml dung dịch

(điều chỉnh pH bằng acid citric)

— Ñước muỗi sinh lí Cân 0,9g Nami chlorua + nước cất vừa đủ 100ml dung địch

09

Tang dịch hông cầu 5 gNaSO;+ 1 g NaCl > nuGe eat via du 100 ml dung dich Hayem

Dung địch bạch cầu _ 5 ml axid acetic nguyen chất + 2 giọt Xanh metylen 0,3% +

Lazarus nude eft vita di: 100 ml

Dungdịh — MgSO4: 14g; muae oat viva du 100 ml Magie sulphat 14%

Dung dich Giemsa 7,6 g Giemsa + 750 mL methanol + 250 mL glycerin

'Toàn bộ thí nghiệm của khoá luận được bổ trí theo sơ đồ Hình 2.1

'Hình 2.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm tổng thể

ĐC: Đichứng NT: Ngiện Hãu STZ: Rriuezooci HD: Nước sắc lưu Đ Đã đc

221 Phương pháp chăm sóc chuột

Chase hit tring de ching ICR (Mus musculus va albino) 4 twin tui, doe

mua từ Trung tâm Công Nghệ Sinh học Thành phố Hồ Chí Minh Chuột được nuôi

ổn định ở đi kiện phòng tí nghiệm trong 2 tuin cho đạt trong lugng 19 - 23g (6 tuần tuổi) tước Khí iến hành thí nghiệm

Điều kiện nuôi: chuột được nuôi trong lồng kinh kích thước 30x9x19 cmÌ, dưới

Dựa trên nghiên cứu của Koji Hayashi và đồng nghiệp (2006) trên chuột ICR

8 tuần tuổi, việc sử dụng liễu dom 100mgikg BW va 125mg/ky BW streptozotocin da

gây ra sự cảm ứng và tạo ra mô hình chuột Đãi thảo đường sau ba tuần [51] Nghiên cứu cia Sachin Arora vi ding nghiép (2009) trén ching Swiss Albino trọng lượng 25 - 30g đã chỉ ra rằng liều 100mg/kg BW chỉ tăng đường huyết mà

theo dõi [52]

Nghiên cứu của Vũ Kha Thanh Thanh và đồng nghiệp (2017) trên chuột nhất tring Mus musculus Swiss Albino (giéng duc, 4-6 twin tui) xe dinh rng liu

125 mg/kg BW có thể đạt được tỷ lệ chuột tiểu đường đáng kể so với liễu 150 mg/kg

BW,những cao hơn so với iễu 100 mg/kg BẦW ở tuẫn 5, Nhóm chuột với trọng lượng

tir 12-20g va tiém lidu 125 mg/kg đã có tỷ lệ 39% và 62% chuột tiểu đường đạt chuẩn sức khỏe ở tuẫn 3 và 5 sau tiêm Đặc biệt, tắt cả chuột tiêm liễu 125 mgikg BW đã

sống sốt đến twin thứ 3 Chuột với trọng lượng từ 2U - 28y trước khi tiêm steptozotocin đã có tỷ lệtiêu đường cao hơn đáng kể so với nhóm chuột trọng lượng

từ 12<20g |53]

Từ đó, dé tài sẽ lựa chọn kết hợp nồng độ Sưeptozolocin (STZ) và

Nicotinamide (NA) phit hgp để gây mô hình chuột Đái tháo đường typc II

2.3.Cơ sở xác định liều đùng nước sắc hoa đu đủ đực

‘Theo Ths.Bs Nguyễn Văn Toàn - bệnh viện y học cô truyền tỉnh Bắc Giang,

lạm dụng dược iệu thiên nhiên mỗi ngày trong thôi gian đi sẽ mang lại nhiễu hậu quả đáng tiếc như ngộ độc, ảnh hưởng chức năng gan, thận, có thể không gây tử ong hoặc biển chứng tức thì nhưng về lu dài có thể ảnh hướng đến cơ th bởi những chất độc bại n chứa bên tong nó [54] ĐỂ ải đã tham khảo một số sich cũng như ý

kiến của bác sĩ và dược sĩ tại Bệnh viện y học cổ truyền thành phổ Hồ Chí Minh, với

bối cảnh hiệ có, đề ải quyết định lựa chọn hai liều dũng nước sắc: liều 1 - uống liên

tục ba ngảy, nghỉ 1 ngây; liễu 2 - uỗng liên tục năm ngày và nghỉ 2 ngày Ngoài ra,

để ti sử dụng thuốc Metformin thuomg mại đ làm đối chứng dương cho thí nghiệm

24, Bồ trí thí nghiệm,

Chuột đạt tiêu chuẩn lâm thí nghiệm được phân chia vào các nghiệm thức và đánh đấu theo thứ tự cổ định cho tùng nghiệm thức Thí nghiệm gằm 54 chuột, chỉa làm 6 nghiệm thức (9 chuộtnghiệm thúc) (Hình 22)

Hình 2.2 Bồ trí chuồng nuôi chuột thí nghiệm + Nghiệm thức 1 - Đồi chứng (ĐC): chỉ cho uống nước máy khử Chlorua và tiém dung dich gm citrate vio ming bung

+ Nghiệm thức 2 ~ Streptozotocin + Nicotinamide (STZ + NA): chuột được

uống nước máy khử Chlorua và tiêm Streptozotocin + Nieotinamide theo nồng độ

yêu cầu vào ming bung, Sau 72 gi tiêm ST ~ NA, định lượng glueose máu, những

chuột có nồng độ glucose máu khi no cao hon 180-200 mg/dL duge xem la chuột đái

thảo đường type II thành công và được sử dụng trong nghiễn cửu + Nghiệm thức 3 ~ streptozotocin + Metformin (STZ + M): chuột được uống

nước máy khử Chlorua, tiêm Streptozotoein + Nicotinamide theo nông đội

vào màng bụng Sau 72 giờ tiêm STZ - NA, định lượng glueose mẫu, những chuột

có nỗng độ glucose máu khi no cao hơn 180-200 mg/dL được xem là chuột đái tháo

đường type I thành công và được sử dụng tong nghiền cứu và được điều tị bằng Metformin thuong mai

+ Nghiệm thức ~ Nước sắc hoa đu đủ đực iễu 2(HD2): chuột đợc tổng nước máy khử Chloria và bổ sung thêm nước sắc hoa đu đủ đực theo liễu yêu cầu (uống

liên tục 5 ngày, nghỉ 2 ngày)

24

HD1): chuột được ống nước máy khử Chlorua, tiêm Streptozotocin + Nicotinamide theo nồng độ yêu cầu vào màng bụng Sau 72 giờ tiêm STZ.~ NA, định lượng glucose mầu, những chuột ö nồng độ glucose máu khi no cao hơn 180-200 mg/dL được xem

là chuột đái tháo đường type IÍ thành công và được sử dụng trong nghiên cứu và được

điều bằng nước sắc hon đu đủ đực theo liễu yêu cầu (ông tục 3 ngày, nghĩ Ï ngày)

“+ Nghiệm thie 6 ~ Streptozotocin + Nước sắc hoa du đủ đực liễu 2 (STZ + D2): chuột được uống nước máy khử Chlorua, tiêm Streptozotocin + Nicotinamide

theo nồng độ yêu cầu vào mắng bụng Sau 72 giờ ém STZ ~ NA định lượng glucose máu, những chuột có nồng độ glueose máu khi no cao hơn 180-200 mẹ/dL được xem điều bing nude sic hoa du ds dye theo liều yêu cầu (uống liên tục 5 ngày, nghỉ 2 ngày) 2.5 Phuong pháp chuẩn bị nước sắc hoa đu đủ đực

2.5.1 Phương pháp xử lí mẫu [5S]

* Thủ hái: với bộ phận cần thu hái là hoa thì nên thu hái khi hoa sắp nở hoặc

chớm nỗ, nếu để khi hoa nở mới thu hãi thì cánh hoa sẽ ất dễ bị ng Hát hos bằng tay, động tác hái nhẹ nhàng: xếp hoa vào rổ cứng, không xếp quá nhiễu, không lê chặt

* Lâm sạch: rửa bằng nước để loại bổ các tạp chất côn lẫn hay bám dính vào dược liệu nh đất, cất, bụi Cần thao tác nhanh, không nên ngâm hoa lâu trong nước

* Phơi, sấy hoa: hoa đã io née s tiền hành được phơi dưới bóng rầm trong 2 ngày để hoa khô dẫn, tránh phơi trụ tiếp đưới nắng gắt sẽ làm hoa thâm đen giảm chất lượng Khi hoa đã khô, sẽ tiến hành cho vào túi giấy, đem cân và ghi chú, sau đó

khô tong tủ sẩy ở nhiệt độ 50'C đến khi khôi lượng không đổ

* Bảo quản: mẫu hoa sau thành phẩm sẽ được bảo quản trong te giấy kín và

để ở nơi khô ráo, thoáng mác

2.5.2 Pharang pháp thu nhận mước sắc

Sau khi đã có mẫu khô thành phẩm của hoa du đủ dye (Carica papaya L.), tién

hành theo các bước trong Bảng 2.3 đẻ thu được nước sắc

Bing 2.3 Quy trinh thu nude sic hoa du di de (Carica papaya L561

a 'Cân và ngâm mẫu với nước cất trong 15 phút

Buse 6 Hòn nước sắc làn một và hai

Buse 7 Lytâm loại cặn với tốc độ 3 000 vòng ong 10 phút

Bước 8 Co die nae se trong DE ôn nhệ (60C) tới Kh at lệ giữa mẫu và

thể tích là I:1 (gmL)

2.6 Phuong pháp cho chuột uống nước sắc hoa đu đủ đực

“Chuột được uồng nước sắc hoa đu đủ đực (Cariea papaya L.) bằng cách dùng

xi lanh dung tích 1 mLÄ, gắn với đầu kim chuyên dụng (đầu kim số 8) bơm trực tiếp từ

ho chuột tống không quá 0.Š m[,Iần uỗng Thời gian cho tống nước sắc hoa đu đủ

dấu hiệu bất thường hằng ngày sau khi cho chuột uống nước sắc hơa đu đã đục

(Carica papaya L.) vào số nhật kí

2.7 Phuong pháp khảo sát độ tăng trọng

“Cân trọng lượng từng con chuột tương ứng với mỗi nông độ trong từng nghiệm thức vào buổi sảng trước khi cho ăn với chủ ki 1 tuằn lần (Hình 2.4) Ghỉ chép thông

số theo nghiệm thức

'Từ kết quả này sẽ tính được độ tăng trọng của chuột sau mỗi tuần môi ở từng

nghiệm thức, Độ tăng trọng của chuột tại thời điểm khảo sát được tính bằng cách lấy

khối lượng cơth chuột ạithồi điểm khảo ắt trừ cho khối lượng cơ thể chuột ti thôi điểm đưa vào thí nghiệm (tuần 0)

Hình 2.4 Minh họa khảo sát trọng lượng chuột

2.8 Phuong pháp thu nhận mẫu máu chuột

Trước khi lấy mảu, cho chuột nhịn đối 1 đềm hôm trước, sáng hôm sau tiền hành lấy máu Lấy máu vào thời điểm trước khi thực hiện thí nghiệm và chủ kỉ 2 tuằn lần, lấy máu ở tĩnh mạch đuôi chuột để đánh giá một số chỉ số huyết học: số lượng hồng edu, bach edu, tiểu cầu, Hồ, tốc độ đông máu, hematocrit, kich thước Sinh í học người và động vật,trong đó số lượng tiễu cầu được xác định theo phương

Hình 2.5 Minh họa thao tác thu máu chuột

2.8.1 Phurong pháp xác định giá trị đường huyét

Đầu tiên, lắp pin và chịp vào máy đo đường huyết, sau đó gắn que thử Đảm

báo rằng ngón tay không tiếp xúc với vùng nhận máu Tiếp theo, sử dụng bông gin

cồn để sắt rừng vàng lấy máu và chữ cho nó khô hoàn toàn Dũng kim tích máu võ

hứng và đợi cho kết quả hiển thị (Hình 2.6)

Tình 26 Minh họa thao tác thữ đường huyết 2.8.2 Phương phấp xác định sổ lượng hồng cầu, bạch cầu, tẫu cầu, kích

thước hằng cầu, hàm lượng Hb, chỉ số hematocri và thời gian đông máu

*Phương pháp xác định số lượng hồng cầu

Bước Ì: Chuẫn bị buồng đếm,

Làm vệ sinh buồng đếm, lamella và ống trộn hồng cầu Đậy lamella lên lưới

đếm của buồng đếm theo chiều đọc và đưa lên kính hiển vi kiểm tra ở vật kinh X10

Bước 2: LẤy máu và pha loãng máu

Dùng bông gòn thấm cồn lau đuôi chuột tại vị trí lấy máu, chờ cồn khô hẳn

Ding kim trich mau vô trừng để lấy máu Lấy bông gan lau sach gigt mắu đầu tiên

dùng tay nặn và chờ cho máu tiếp tục chảy ra để lấy máu Dùng ông trộn hồng cầu hút máu đến vạch 0,5 Nếu máu l quá vạch thì đăng bông gòn thấm nhẹ ở đầu ông Tiếp tục hút thêm dung dịch hồng cầu vào ống trộn hồng cầu đến vạch IÓI Như vậy,

máu đã được pha loãng 200 lần

Bước 3: Dân máu vào buồng đếm

Tháo đầu hút, dùng ngôn tay cái và ngôn giữa bịt ai đầu ông trộn và lắc đều nhẹ nhàng để trộn máu với dung dịch pha loãng Bỏ vài giọt đầu trong ống trộn, đặt

đầu ống trộn vào cạnh của lamlle tiếp giáp với buồng đếm, nhờ lực mao din, miu

pha loãng sẽ trần đều vào buồng đm, Đưa buồng đm lên kinh hiễn vỉ và tiễn hành đếm số lượng hồng cầu

Bước 4: Cách đếm

hồng cầu thuộc 5 ð rung bình (80 ö nhỏ) bao gồm đễm 4 ð ở4 góc lưới dém và 1 ôở giữa

vi tí rùng tâm, Việc xác định hồng cầu thuộc một ô được tuân theo nguyên tắc Egorov Tổng số lượng hồng cầu đếm được trong 80 ö vuông nhỏ là A Mỗi mẫu máu được đếm tối thiểu 3 lần, sau đó lấy số trung bình của các lần đếm (A) Sổ lượng hồng

cẵu/mmẺ máu (Ñ) được tỉnh theo công thức

(Ax 4000 x 200): 80)

Phuong pháp xác định số lượng bach cầu

Bước 1: Chuẩn bị buồng đếm

Dùng bông gồn thắm cồn lau đuôi chuột tại vị trí lấy máu, chờ cồn khô hẳn Dùng kim trích máu vô trùng để lấy máu, Lấy bông gòn lau sạch giọt máu đầu tiên, dũng tay nặn và chờ cho máu tiếp tục chảy ra để lấy máu Dũng ống trộn bạch cầu hút máu đến vạch 0,5 Nếu máu lên quá vạch thì đùng bông gòn thắm nhẹ ở đầu ống

tue hit thêm dung địch bạch cầu vào ống trộn bạch cầu đến vạch 11.Như vậy, mắu đã được pha loãng 20 lần

Bước 3: Dân máu vào buồng đếm

Thao đầu hút, dùng ngón tay cái va ny ôn giữa bịt hai đầu ống trộn và ắc đều

“để trộn máu với dung dich pha loãng Bỏ vải giọt đầu trong dng trộn, đặt đầu ống trộn vào

cạnh của lamelle ếp giáp với buông dém, nhờ lục mao dẫn, máu pha loãng sẽ trăn đều vào buồng đếm, Đưa buồng đếm lên kính hiễnvỉ và tiếng hành đếm số lượng bạch cầu

NE (B x 4000 x 20): 80 = B x 200