Nghiên cứu bào chế viên nang cứng chứa dược liệu lạc tiên (passiflora foetida l )

Tỉ lệ dung môi và dược liệu được chọn dựa vào hàm lượng Vitexin chiết được.. Viên nang cứng chứa dược liệu Lạc Tiên được bào chế và kiểm nghiệm đạt yêu cầu chất lượng theo tiêu chuẩn DĐV

Giới thiệu về chi Passiflora

Chi Passiflora xuất phát từ tiếng Latin “Passio” được người Tây Ban Nha phát hiện đầu tiên năm 1529 Chi Passiflora là loài lớn nhất thuộc họ Passifloraceae, có khoảng 400 loài Chi Passiflora phân bố chủ yếu ở các vùng ôn đới và nhiệt đới trên khắp thế giới

Các loài thuộc chi Passiflora là cây bụi, thân thảo, chủ yếu là loại cây dây leo có nhánh phụ Lá to mọc so le, hình chân vịt có xẻ sâu hoặc nhiều hình dạng khác Cuống lá dài, có lá kèm mọc ở cuống lá Hoa thường nở từ giữa trưa là thời gian nóng nhất trong ngày, cho đến cuối buổi chiều Các loài thuộc chi Passiflora ra hoa kéo dài trong suốt thời gian thụ phấn, khi côn trùng thu thập mật hoa, chuyển phấn hoa từ hoa này sang hoa khác Đài hoa mang 3-5 lá đài xếp chồng lên nhau tự do hoặc hợp sinh ở cuối Nhị hoa 3-5 đính ở đáy bao hoa hoặc ở đáy Bầu một ô, chứa 3-5 noãn Quả hình cầu, hình trứng có nhiều hạt màu nâu và được bao bọc bởi lá bắc Một số cây điển hình của chi Passflora: cây LT, cây Chanh leo.[3].

Tổng quan về Lạc Tiên

Tên khoa học và phân loại

- Tên khoa học: Passiflora foetida L

- Tên khác: Chùm bao, dây nhãn lồng, tây phiên liên, mò pì…

- Lạc Tiên là cây dây leo dài Thân mềm, tròn và rỗng, có lông thưa

- Lá mọc so le, hình tim, dài 6-10 cm, rộng 5-8 cm, chia 3 thuỳ, thuỳ giữa lớn hơn hai thuỳ bên, mép uốn lượn có lông mi nhỏ Các gân lá mọc so le, hiện rõ ở mặt dưới của lá Lạc Tiên là cây có tua cuốn dài không phân nhánh [5],[6]

- Hoa LT to, đơn độc, màu trắng, lưỡng tính, đều Hoa gồm 5 cánh rời, xếp xen kẽ với các lá đài, còn ở giữa có màu trắng pha tím Tổng bao hoa gồm 3 lá bắc màu xanh, tách rời nhau chia thành nhiều dải sợi nhỏ Bao hoa gồm 5 lá đài màu xanh lục Có một phần phụ hình sừng nhọn ở mặt ngoài mỗi lá đài Lá đài màu trắng, phía dưới có gân xanh, phía dưới có 3 gân chín Một vòng tua gồm rất nhiều phần phụ của cánh hoa, hình sợi chỉ màu tím Ở giữa hoa có một cuống hình trụ mang 5 nhị, có bao phấn đính lưng màu vàng Bầu nhụy gồm 3 lá noãn, bầu thượng 1 ô

- Quả khi xanh có màu xanh còn khi chin vỏ có màu vàng Quả hình trứng nhỏ, hình cầu, đường kính 2-3 cm, khi chín có vị ngọt nhẹ, được bao bọc bởi lá bắc [2]

- Hoa thường nở vào tháng 5 -7 và có quả vào tháng 8 – 10 [4],[7]

- Ngoài ra còn có một số loài LT khác cũng được dùng như sau:

- Chi Passiflora L có 15 loài Ở Việt Nam LT là loài mọc tự nhiên, có vùng phân bố rộng rãi Lạc Tiên phân bố khắp tất cả các tỉnh trung du, vùng núi thấp (dưới 1000m) và cả vùng đồng bằng một số tỉnh có nhiều LT như là Bắc Giang, Lạng Sơn, Cao Bằng, Tuyên Quang, Yên Bái… và một số tỉnh ở phía đông Trường Sơn

- Trên thế giới LT có ở một số nước Đông Nam Á như Lào, Campuchia…

- Lạc Tiên là cây thích ẩm, ánh sáng, thường mọc trùm lên các bụi cây ven rừng, đồi, tái sinh sau nương rẫy Cây sinh trưởng mạnh từ khoảng giữa tháng 3 đến tháng 8 Hoa quả nhiều hàng năm Mùa đông cây có hiện tượng rơi rụng lá Tái sinh tự nhiên nhờ vào hạt Sau khi chặt thì phần gốc sẽ mọc chồi lại

- Nguồn Lạc Tiên ở nước ta dồi dào Lượng khai thác hàng năm không ảnh hưởng tới dữ trữ tự nhiên Cây bị tàn phá chủ yếu do phá rừng làm nương rẫy.[4],[2]

Phần trên mặt đất (tốt nhất là cành mang lá), thu hái vào mùa xuân – mùa hạ, phơi hoặc sấy đến khô [4]

Hình 2 Lạc Tiên sấy khô

- Lạc Tiên có hai thành phần hóa học chính là flavonoid và alkaloid Ngoài ra còn có các nhóm như là: Steroid, tannin, saponin, anthraquinone

- Các flavonoid có phần genin cấu trúc flavon như apigenin, luteolin; và có 2 dạng O-glycosid và C-glycosid [8],[4],[9],[10]

Bảng 1 Thành phần hoá học của Lạc Tiên

Alkaloid Harman; harmin; harmol; harmalin

Muối khoáng lớn như P, Ca, Fe Acid linoleic và acid linolenic; các α- pyron là passifloricin và polyketid α-pyron [13]

Một số công thức hoá học thuộc nhóm Flavonoid:

Hình 3 Một số công thức hoá học nhóm Flavonoid

Trong đó: A1; A2; A3; A4; A5; A6; A7 lần lượt theo thứ tự là: 4҆ ,7-O-dimethyl naringenin; 7,4҆ -dimethoxyl apigenin; 7,4҆ -dimethoxyl apigenin; Pachypodol; ermanin; Isovitexin; Vitexin

Một số công thức hoá học thuộc nhóm Alkaloid:

Hình 4 Một số công thức hoá học nhóm Alkaloid

Trong đó: E1 là Harman; E2 là Harmalin; E3 là Harmin, E4 là Harmol

Các phương pháp kiểm nghiệm Lạc Tiên Định tính:

A Cân 2g bột dược liệu LT, thêm 10ml ethanol 96% Đậy kín, đun nóng đến sôi trong

5 phút, lọc nóng dịch chiết qua than hoạt tính trên giấy lọc gấp nếp, thu được 5ml dịch lọc Lấy 2ml dịch đã lọc cho vào ống nghiệm, thêm ít bột magnesi rồi thêm từ từ 0.2ml HCl Để yên vài phút, dung dịch sẽ có màu đỏ cam

B Lấy 10g bột DL cho vào bình nón 250ml, thấm ẩm bằng dung dịch amoni hydroxyd

10% trong 15 phút Thêm 40ml cloroform, lắc đều Sau 30 phút, tiến hành lọc, cô dịch lọc đến còn 10ml rồi chuyển vào bình gạn Thêm vào bình gạn 5ml dung dịch acid sulfuric 1% Lắc kỹ và gạn lớp acid, chia dịch chiết thu được vào 3 ống nghiệm: [14]

₊ Ống nghiệm 1: Thêm 1 giọt thuốc thử Mayer, xuất hiện tủa trắng đục

₊ Ống nghiệm 2: Thêm 1 giọt thuốc thử Bouchardat, xuất hiện tủa đỏ nâu

₊ Ống nghiệm 3: Thêm 1 giọt thuốc thử Dragendorff, xuất hiện tủa vàng cam

C Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4)

- Bản mỏng: Silica gel GF254

- Dung môi khai triển: EtOAc - MeOH - H2O - HCOOH (100:17:13:0.05) [13]

- Dung dịch thử: Cân 0.25g bột dược liệu, cho vào bình nón, thêm 20ml ethanol 96%, đun cách thuỷ trong 30 phút, lọc cô cắn, hoà tan hoàn toàn cắn bằng MeOH, thu được dung dịch thử

- Dung dịch dược liệu đối chiếu: Cân 0.1mg Vitexin (mẫu chuẩn) Hoà tan bằng methanol vừa đủ vào bình định mức 10ml Thu được dung dịch đối chiếu

- Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên cùng bản mỏng dung dịch thử và dung dịch dược liệu đối chiếu Chấm dải dài 7 mm Sau khi triển khai sắc ký, lấy bản mỏng để khô Soi UV ở hai bước sóng 365 – 254 nm

- Tính toán kết luận.[8] Độ ẩm: Không quá 13.0 % (Phụ lục 9.6, 1 g 85 °C, 5 h)[14]

Tro toàn phần: Không quá 10.0 % (Phụ lục 9.8).[14]

Tro không tan trong HCl: Không quá 2.0 % (Phụ lục 9.7).[14]

- Tạp chất hữu cơ: Không quá 1.0 %.[14]

- Tỷ lệ lá trên toàn bộ dược liệu: Không ít hơn 25.0 %.[14]

Chất chiết trong dược liệu:

- Không được dưới 18.0 % tính theo dược liệu khô kiệt

- Tiến hành chiết theo phương pháp chiết lạnh (Phụ lục 12.10) Dùng nước làm dung môi chiết.[14] Định lượng:

Dung dịch thử: Cân chính xác khoảng 0.25 g bột LT (qua rây số 250) cho vào bình nón 250ml, thêm 40ml ethanol 60 % và đun hồi lưu trên bếp cách thủy 30 phút Để nguội,

8 lọc dịch chiết qua giấy lọc vào bình định mức 100ml Chuyển toàn bộ giấy lọc và bã dược liệu vào bình nón và tiếp tục chiết thêm 2 lần nữa, mỗi lần 30ml ethanol 60 % Lọc, gộp các dịch lọc vào bình định mức trên, thêm ethanol 60 % tới vạch, lắc đều, thu được dung dịch A

Lấy 5ml dung dịch A cho vào cốc có mỏ, cô trong cách thủy tới cắn khô Dùng 10ml hỗn hợp methanol – Acid acetic băng (10:100) để hòa tan và chuyển toàn bộ cắn vào bình định mức 25ml, thêm 10ml hỗn hợp chứa Acid boric 2,5% và Acid oxalic 2% trong Acid formic khan Bổ sung acid acetic khan tới vạch, lắc đều

Dung dịch mẫu trắng: Lấy chính xác 5ml dung dịch A cho vào cốc có mỏ, cô cách thủy tới cắn khô Dùng 10ml hỗn hợp methanol – Acid acetic băng (10:100) để hòa tan và chuyển toàn bộ cắn vào bình định mức 25ml, thêm 10ml acid formic khan Bổ sung Acid acetic khan tới vạch, lắc đều

Sau 30 phút, đo độ hấp thu (Phụ lục 4.1) của các dung dịch trên ở bước sóng 401 nm Tính hàm lượng phần trăm flavonoid toàn phần (tính theo Vitexin) theo A (1%, 1cm) Lấy 628 là giá trị của A (1%, 1cm) của Vitexin ở bước sóng 401nm

Hàm lượng flavonoid toàn phần trong dược liệu tính theo Vitexin không được ít hơn 0.6% tính theo dược liệu khô kiệt.[15]

Tác dụng dược lý và hoạt tính sinh học

Tổng quan viên nang cứng

Viên nang là dạng thuốc uống chứa một hay nhiều dược chất trong vỏ nang với nhiều hình dạng và kích thước khác nhau Vỏ nang được làm chủ yếu từ gelatin hoặc polyme Ngoài ra trong vỏ nang còn chứa các tá dược khác như chất hóa dẻo, chất màu, chất bảo quản… Thuốc chứa trong nang có thể là dạng rắn (viên nang cứng) hay lỏng, nửa rắn (viên nang mềm)

Vỏ nang cứng gồm nắp nang và thân nang hình trụ lồng khít vào nhau bằng khớp trên vỏ nang hoặc được hàn kín sau khi đóng thuốc.[14] Ưu điểm, nhược điểm viên nang cứng Ưu điểm:

- Viên nang cứng có sinh khả dụng cao hơn viên nén quy ước và có khả năng giải phóng dược chất

- Kỹ thuật bào chế không quá phức tạp Thành phần khối thuốc đóng nang tương đối đơn giẩn hơn viên nén

- Giúp cách ly các thành phần tương kỵ hoặc điều chế các viên nang phóng thích kéo dài bằng phương pháp phối hợp

- Hình thức, màu sắc đẹp

- Viên nang cứng giúp che dấu được mùi của dược chất, dễ sử dụng, đóng gói, vận chuyển, bảo quản

- Dễ xây dựng công thức, dễ triển khai sản xuất ở các quy mô, điều kiện khác nhau

- Viên nang thường có giá thành cao hơn viên nén, do năng suất sản xuất thấp và chi phí sản xuất thường cao hơn viên nén

- Dễ bị giả mạo hoặc thay đổi dược chất bên trong

- Không áp dụng được với các dược chất hút ẩm mạnh

- Khi uống có thể gây kích ứng đường tiêu hoá, do tập trung nồng độ dược chất cao tại chỗ nhanh khi vỏ rã

- Viên nang thường tương đối khó bảo quản

Công thức viên nang cứng

- Thành phần chính của vỏ nang là gelatin ngoài ra còn có các thành phần khác như chất tạo màu, chất tạo độ đục…

- Vỏ nang cũng có thể được chế tạo từ các polyme là dẫn chất cellulose, loại vỏ này ít được sử dụng vì độ tan kém, giá thành cao

- Hình dạng: Vỏ nang cứng có hình thuôn dài, gồm hai nửa hình trụ được gọi là nắp nang và thân nang lồng khít vào nhau Vỏ có nhiều cỡ, thể tích khác nhau và được đánh số tương ứng với thể tích

- Bảo quản vỏ nang: Quá trình bảo quản vỏ nang phù hợp với từng loại nang để đảm bảo để duy trì tiêu chuẩn cho sản phẩm.[19], [20]

- Khối thuốc sử dụng đóng nang cần đạt một số tiêu chuẩn nhất định, trong đó có hai đặc tính quan trọng là độ trơn chảy và lưu tính của khối thuốc

- Để tăng lưu tính và tính chịu nén của khối thuốc, có thể áp dụng các phương pháp xát hạt khô hoặc xát hạt ướt Kích thước, hình dạng của các hạt đồng đều nhau để đảm bảo hạt chảy đều vào nang hạn chế được sai số khối lượng trong nang

- Cao đặc dược liệu thường được phối hợp với các tá dược thích hợp, bào chế thành cốm thuốc để nạp vào nang Tá dược được lựa chọn phù hợp với tính chất của cao

- Tá dược độn: Tinh bột, Lactose, Dicalci phosphate, Avicel

- Tá dược chống dính: Có tác dụng vừa làm tăng lưu tính của khối bột, vừa tránh sự kết dính của khối thuốc

- Tá dược rã: Giúp phóng thích hoạt chất nhanh Các tá dược rã thường được sử dụng như natri starch glycolat, natri croscarmellose

- Tá dược trơn: Tá dược trơn giúp cho hạt chảy đều Sự trơn chảy của khối hạt hoặc bột cần thiết cho tất cả các máy đóng nang khác nhau Các tá dược trơn thường dùng là magnesi stearat, talc, tinh bột bắp…[21]

Quy trình sản xuất viên nang cứng từ dược liệu

Quy trình tạo hạt: Bằng phương pháp xát hạt ướt [22]

- Xử lý nguyên liệu: Cao dược liệu, tá dược được nghiền, rây để có độ mịn thích hợp Kích thước và hình dạng của khối thuốc có ảnh hưởng đến tính trơn chảy của bột, tính xốp của cốm và độ hoà tan của thành phẩm

- Trộn bột kép: Các thành phần ban đầu cần phải được trộn kỹ để đảm bảo sự phân bố đồng đều của hoạt chất trong khối thuốc

- Tạo khối ẩm: Tuỳ vào từng loại cao dược liệu thêm các tá dược dính phù hợp để tạo khối ẩm

- Xát hạt: Khối thuốc sau khi trộn đều, để ổn định trong một khoảng thời gian nhất định rồi xát qua cỡ rây quy định Kiểu rây xát hạt và cách xát ảnh hưởng đến hình dạng và mức độ liên kết của hạt

- Sấy hạt: Khối thuốc sau khi xát hạt, thường làm khô bằng nhiệt độ cao trong tủ sấy hay máy sấy Nếu dung môi là ethanol cần có giai đoạn khử hơi cồn với máy sấy có bộ phận thông khí khô, lạnh để chống cháy nổ Nhiệt độ sấy khô thường trong khoảng 50-70 o C để tránh mất tác dụng của hoạt chất, làm thay đổi tính chất của tá dược Thời gian sấy tuỳ thuộc vào từng loại khối thuốc, đạt độ ẩm khối thuốc

- Sửa hạt: Tiến hành sửa hạt qua rây tạo kích thước đồng nhất

- Đóng nang: Có hai cách để đóng nang là phương pháp đóng nang thủ công hoặc phương pháp sử dụng máy móc Tuỳ trường hợp, để lựa chọn phương pháp đóng nang phù hợp Trong trường hợp điều chế một lượng nhỏ viên nang, để dùng cho một số ít bệnh nhân hoặc thử nghiệm lâm sàng các thuốc mới, khối thuốc có thể được đóng vào nang bằng tay (đóng thủ công) Trong sản xuất số lượng lớn, có thể sử dụng các máy đóng nang bán tự động hoặc máy đóng nang tự động tùy theo quy mô sản xuất khác nhau

Quy trình chung đóng nang gồm các bước:

- Cấp vỏ: Vỏ nang được đổ vào phễu, rơi vào khe hẹp ở cuối phễu và định hướng di chuyển theo hàng dọc

- Chỉnh hướng nang: Vỏ nang được chỉnh hướng nhờ cơ cấu đặc biệt để sao cho thân nang luôn đi trước

- Mở nắp: Vỏ nang được nạp vào khuôn nhờ lực hút chân không Khuôn có hai phần: phần trên có kích thước vừa khít nắp nang, phần dưới có kích thước vừa khít thân nang Nắp nang được giữ bởi hai gờ nhỏ, thân nang được hút xuống nhờ hệ thống chân không Nắp nang và thân nang được mở tách đôi và thân nang được chuyển đến khu vực nạp thuốc

- Đóng thuốc vào thân nang: Có nhiều nguyên lý phân liều và nạp thuốc vào thân nang, ứng dụng trên các loại thiết bị khác nhau và dùng để phân liều các dạng bào chế khác nhau vào nang (bột, hạt, pellet, viên mini…)

- Đẩy nang ra khỏi máy Hàn nang

- Lau nang - đánh bóng: Sau khi đóng thuốc vào nang, các viên nang cần được loại bụi và đánh bóng trước khi đóng gói Tùy theo điều kiện trang thiết bị có sẵn, có thể áp dụng các phương pháp: loại bụi bằng phương pháp thủ công, loại bụi và đánh bóng trong nồi bao, loại bụi bằng hệ thống lau và đánh bóng viên

- Đóng gói và cho ra thành phẩm

Kiểm nghiệm viên nang cứng

- Độ đồng đều khối lượng

- Tính chất: kiểm tra bằng cảm quan

- Định tính, định lượng: theo quy định trong chuyên luận riêng

- Độ hoà tan: theo quy định trong chuyên luận riêng

- Bảo quản: Trong bao kín, nhiệt độ không quá 30 o C

- Độ rã: Dùng nước làm dung môi thử, thời gian trong vòng 30 phút [14]

NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Nguyên liệu

Cây LT thu hái ở Bình Dương vào tháng 10/2023 Mẫu được thu hái là phần trên mặt đất Dược liệu sau khi thu hái, được sơ chế, làm khô, bảo quản đúng quy định Dược liệu được định danh bằng cách so sánh hình thái thực vật với tài liệu công bố [14],[1]

Phương pháp nghiên cứu

Trang thiết bị máy móc, dụng cụ

Trang thiết bị, máy móc cần sử dụng trong bài nghiên cứu được trình bày ở bảng 3:

Bảng 3 Một số trang thiết bị máy móc

Stt Dụng cụ Xuất xứ

1 Cân phân tích OHAUS EX225D Trung Quốc

3 Tủ sấy Kenview Việt Nam

4 Máy xay bột Việt Nam

5 Thiết bị cô quay chân không Taisite Nhật Bản

6 Máy đo độ ẩm OHAUS MB 27 Mỹ

7 Máy đo UV-Vis Nhật Bản

8 Máy siêu âm Biobase Trung Quốc

9 Bếp cách thuỷ MEMMERT WTB15 Đức

10 Máy đo độ rã PHARMA Test Đức

11 Buồng soi UV WFH-203B Trung Quốc

Các thuốc thử, dung môi, hoá chất cần sử dụng trong bài nghiên cứu được trình bày bảng 4:

Bảng 4 Một số dung môi hoá chất

STT Tên nguyên liệu Nguồn gốc/xuất xứ Tiêu chuẩn

1 Acid formic Xilong Scientific Co Trung Quốc

2 Acid hydrocloric Xilong Scientific Co Trung Quốc

4 Sắt (III) chloride Trung Quốc

5 Ethanol Công ty TNHHTM Việt Xanh- Việt

6 Ethyl acetat VN-CHEMSOL CO Việt Nam

7 Nhôm (III) clorua Fisher Scientrtic U K

8 Methanol Xilong Scientific Co Trung Quốc

Khoa dược ĐHYD Thành phố Hồ Chí

12 Avicel 102 Công ty Thịnh Phát- Ấn Độ

15 Vỏ nang size số 0 Việt Nam

Kiểm nghiệm Lạc Tiên Đặc điểm hình thái và định danh Lạc Tiên

- Quan sát, mô tả đặc điểm hình thái: Dựa trên quan sát một số bộ phận của cây tươi

LT sau khi thu hái [23], [24]

- Soi bột dược liệu: Sử dụng kính hiển vi.[24]

- Quan sát đặc điểm bột dược liệu: Về màu sắc, mùi vị

- Xác định độ ẩm: Sử dụng máy đo độ ẩm máy đo độ ẩm OHAUS MB 27 (Mỹ) Theo tiêu chuẩn của dược điển Việt Nam V, độ ẩm dược liệu không quá 13%.[14] Định tính dược liệu Lạc Tiên Định tính thành phần LT: Chiết xuất và định tính các thành phần hoá học của LT bằng các phản ứng hoá học theo dược điển Việt Nam V [14]

Các bước thực hiện: Lấy 2g bột dược liệu, thêm 10ml ethanol 96% Đun sôi trong 10 phút, lọc nóng dịch chiết qua 0.1g than hoạt tính trên giấy lọc gấp nếp, thu được 5ml dịch lọc Lọc lấy dịch, hút 2ml dịch lọc cho vào ống nghiệm, thêm bột Mg, rồi thêm 0.2ml HCl Để yên vài phút, dung dịch sẽ đổi màu từ xanh vàng sang màu nâu đỏ Định tính bằng phương pháp sắc kí lớp mỏng: Dịch chấm sắc kí là dịch chiết MeOH, của bột dược liệu LT Bản mỏng: Silica gel GF254 [8]

₊ Dung môi khai triển: EtOAc - MeOH - H2O - HCOOH (100:17:13:0.05)

₊ Dung dịch thử: Cân 0.25g bột dược liệu, cho vào bình nón, thêm 20ml ethanol 96%, đun cách thuỷ trong 30 phút, lọc, cô đến cắn, hoà tan cắn bằng MeOH được dung dịch thử

₊ Dung dịch đối chiếu: Cân 0.1mg Vitexin (mẫu chuẩn) Hoà tan bằng MeOH vừa đủ vào bình định mức 10ml, được dung dịch đối chiếu

₊ Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên cùng bản mỏng dung dịch thử và dung dịch đối chiếu Chấm dải dài 7 mm Bản mỏng sau khi được triển khai sắc ký, để khô, soi UV ở hai bước sóng là: 365nm, 254nm và sử dụng thuốc thử FeCl3

₊ Yêu cầu: Sắc ký đồ của dung dịch thử phải có vệt cùng màu sắc và giá trị Rf tương ứng với vệt trên sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu

Xác định hàm lượng flavonoid toàn phần trong dược liệu Lạc Tiên

- Định lượng flavonoid toàn phần trong dược liệu LT: theo DĐVN V [14], dược điển châu Âu [25]

- Pha mẫu chuẩn Vitexin: Cân chính xác khoảng 1mg Vitexin vào bình định mức 10ml Thêm 5ml dung môi MeOH, siêu âm đến khi hoạt chất tan hoàn toàn, thêm vừa đủ dung mụi tới vạch Dung dịch chuẩn gốc cú nồng độ 100àg/ml Từ dung dịch chuẩn gốc pha loóng thành cỏc nồng độ lần lượt là: 50àg/ml; 25àg/ml; 12.5àg/ml; 5àg/ml

- Lựa chọn bước sóng:[26], [14] Theo DĐVN, định lượng flavonoid toàn phần trong dược liệu LT bằng phương pháp UV- Vis ở bước sóng 401nm theo Vitexin Đồng thời, tiến hành quét phổ để xác định lại bước sóng hấp thu cực đại của Vitexin Sau khi lựa chọn được bước sóng, tiến hành đo UV-Vis các dung dịch chuẩn đã pha loãng ở trên, tại bước sóng đã lựa chọn

Lập phương trình hồi quy tuyến tính cho Vitexin

Pha mẫu thử dược liệu LT: Cân 0.25g bột dược liệu, cho vào bình nón thêm 40ml ethanol 96%, đậy kín, chiết 30 phút, sau đó lọc, thu được dịch chiết Hút 25ml dịch lọc đem cô cắn Hoà tan cắn với MeOH, lọc kĩ, lấy dịch cho vào bình định mức 25ml, thêm MeOH vừa đủ Mẫu thử thêm AlCl3 2% để phản ứng tạo phức Tiến hành đo theo bước sóng đã khảo sát Tính toán kết quả, kết luận [27]

Bào chế cao đặc Lạc Tiên

Khảo sát dung môi chiết

Khảo sát dung môi chiết:

- Chất điểm chỉ lựa chọn đối với LT là Vitexin Tiến hành khảo sát với các dung môi sau: nước, ethanol 50%, ethanol 70% và ethanol 96% để lựa chọn dung môi điều chế cao có hàm lượng hoạt chất tối ưu

- Quy trình khảo sát dung môi chiết: Cân 25g bột dược liệu cho vào bình nón, đậy kín, chiết trong 30 phút, lọc dịch chiết, tỉ lệ chiết 1:4 Hút 1ml dịch lọc đem cô cắn, hoà tan cắn bằng 40ml MeOH, lọc Thu được mẫu thử, thêm AlCl3 2% Làm tương tự với các dung môi khảo sát, mỗi dung môi lặp lại hai lần Tiến hành đo UV- Vis với các

18 mẫu thử Dựa vào phương trình tuyến tính, tính được nồng độ của hoạt chất flavonoid dựa theo Vitexin Lựa chọn dung môi chiết sao cho hàm lượng flavonoid toàn phần trong dịch chiết tối ưu

Lựa chọn tỉ lệ dung môi và dược liệu:

- Quy trình: Cân 1kg dược liệu, tiến hành làm ẩm với dung môi chiết đã lựa chọn sau khi khảo sát Ghi nhận thể tích dung môi làm ẩm Tiến hành chiết bằng phương pháp ngấm kiệt Chiết tới khi màu của dịch chiết nhạt dần Lấy 25ml dịch chiết ở mỗi tỷ lệ, đo độ hấp thu của dịch chiết, dựa vào phương trình tuyến tính để xác định nồng độ flavonoid toàn phần theo Vitexin ở các tỉ lệ Tính toán lựa chọn tỷ lệ dung môi và dược liệu thích hợp

Quy trình bào chế cao đặc Lạc Tiên

Quy trình điều chế cao đặc:

Bước 1: Sơ chế, kiểm nghiệm nguyên liệu Dược liệu LT sau khi sơ chế tiến hành xay Bước 2: Cân khối lượng bột dược liệu, làm ẩm dược liệu bằng dung môi đã lựa chọn Nạp dược liệu vào bình ngấm kiệt Thêm từ từ dung môi cho đến khi ngập dược liệu khoảng 3 cm Ngâm lạnh 24 giờ Rút dịch chiết, vừa rút vừa thêm dung môi ngập dược liệu 3 cm Chiết dược liệu 2 lần, mỗi lần 24 giờ

Bước 3: Thu được dịch chiết dược liệu

Bước 4: Cô quay, thu hồi dung môi Cao đặc

Bước 5: Kiểm nghiệm cao đặc theo tiêu chuẩn riêng (độ ẩm, định lượng, định tính)

Kiểm nghiệm một số chỉ tiêu chất lượng của cao đặc Lạc Tiên

- Kiểm nghiệm một số chỉ chất lượng của cao đặc LT:

₊ Đặc điểm: Kiểm tra bằng cảm quan (màu sắc, mùi vị)

₊ Định tính: Sử dụng phương pháp sắc kí lớp mỏng Bản mỏng: Silica gel GF254

Dung môi khai triển: EtOAc - MeOH - H2O - HCOOH (100:17:13:0.05)

Dung dịch thử: Cân 0.1 g cao đặc LT, cho vào bình nón, thêm 20ml MeOH hoà tan hoàn toàn và lọc lại bằng giấy lọc

Dung dịch chuẩn: Cân 0.1mg Vitexin (mẫu chuẩn) Hoà tan bằng MeOH vừa đủ vào bình định mức 10ml

Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên cùng bản mỏng dung dịch thử và dung dịch dược liệu đối chiếu Chấm dải dài 7 mm Sau khi triển khai sắc ký, soi UV ở hai bước sóng là: 365nm, 254nm và sử dụng thuốc thử FeCl3.

Yêu cầu: Sắc ký đồ của dung dịch thử phải có vệt cùng màu sắc và giá trị Rf tương ứng với vệt trên sắc ký đồ của dung đối chiếu

Kiểm nghiệm nguyên liệu Lạc Tiên

Đặc điểm hình thái Lạc Tiên

Mẫu LT được thu hái ở Bình Dương vào tháng 10 năm 2023, có đặc điểm hình thái như sau: LT là cây dây leo, thân nhỏ, có lông bao phủ và có mùi đặc trưng Lá hình tim, mọc đơn, xẻ sâu, đỉnh lá nhọn, có lông trắng bao quanh, cuống lá dài 2-6 cm LT có các tua cuốn nhỏ dài, mọc ở gốc cuống lá

Hoa LT mọc từ nách lá, mỗi nách 1 hoa với tua cuốn Cuống hoa dài, có lông thưa, 3 lá bắc Hoa to có màu trắng pha một chút tím nhạt, cánh hoa mỏng, có đài nhuỵ dễ thấy

Quả hình trứng, màu xanh, khi chín có màu vàng, vỏ nhẵn, được bao bởi ba lá bắc Quả có hạt nhiều, bao bởi áo hạt

Một số bộ phận LT sau khi thu hái được trình bày ở hình 8:

Hình 8 Một số bộ phận cây Lạc tiên Đặc điểm bột dược liệu:

Bột LT lấy từ phần trên mặt đất của cây, sau khi sơ chế có màu vàng nâu, vị hơi đắng, mùi thơm đặc trưng của dược liệu

Kết quả đo độ ẩm của bột dược liệu được trình bày ở bảng 9:

Bảng 9 Kết quả đo độ ẩm bột dược liệu

Nhận xét: Bột dược liệu LT có độ ẩm trung bình 10%, đạt tiêu chuẩn độ ẩm theo tiêu chuẩn dược điển Việt Nam V (dưới 13%) Bột dược liệu thô LT sau khi sơ chế và xay được trình bày ở hình 9:

Hình 9 Bột dược liệu thô

- Phép thử định tính dựa vào phản ứng hoá học: Phản ứng hoá học Cyanidin là phản ứng đặc trưng của nhóm flavonoid Màu phản ứng của bột dược liệu LT được trình bày ở hình 10:

Hình 10 Màu phản ứng Cyanidin của bột dược liệu Lạc Tiên

Nhận xét: Từ dung dịch màu xanh đen chuyển sang dung dịch ngả màu nâu cho thấy kết quả phản ứng dương tính Tuy nhiên, phản ứng màu xảy ra không rõ do trong mẫu

LT có diệp lục Để khắc phục: Loại bớt diệp lục của dịch chiết Loại diệp lục bằng cách: Sau khi chiết tiến hành lọc thu lấy dịch lọc, cô đến cắn, hoà tan cắn bằng MeOH Tiếp tục lọc lấy dịch, hút 2ml dịch lọc cho vào ống nghiệm, thêm một ít bột Mg, thêm tiếp 0.2 ml HCl Để yên vài phút, dung dịch sẽ đổi màu từ xanh ngả vàng sang màu nâu đỏ Màu phản ứng Cyanidin của bột dược liệu LT sau khi loại diệp lục được trình bày ở hình 11:

Hình 11 Màu phản ứng Cyanidin của dược liệu Lạc Tiên sau khi loại diệp lục

- Sắc kí lớp mỏng: Triển khai bằng hệ dung môi EtOAc - MeOH - H2O - HCOOH (100:17:13:0.05) Tiến hành soi UV tại bược sóng 365 nm và 254 nm, sử dụng thuốc thử FeCl3

Tiến hành sắc kí với hệ dung môi khai triển trên, thu được kết quả được trình bày ở hình 12: a b c

Hình 12 Kết quả sắc ký dược liệu Lạc Tiên

(a): Soi UV bước sóng 254nm, (b): Soi UV bước sóng 365nm, (c): Nhúng qua FeCl3

Trong đó: C là mẫu chuẩn Vitexin, DL là mẫu thử dược liệu

Nhận xét: Sau khi triển khai sắc ký bột dược liệu, dung dịch mẫu thử có các vệt huỳnh quang màu xanh và màu vàng cam Kết quả cho thấy có một vệt trùng với vệt của chất chuẩn và Rf của mẫu thử tương đương với mẫu chuẩn Do đó, kết luận mẫu dược liệu

Xác định hàm lượng flavonoid toàn phần trong dược liệu

- Dựa vào DĐVN V, Vitexin được đo ở bước sóng 401 nm

- Đề tài thực hiện quét phổ để xác định lại bước sóng hấp thu cực đại của Vitexin Kết quả quét phổ trình bày ở hình 13:

Hình 13 Phổ hấp thu của Vitexin

Nhận xét: Sau khi quét phổ, phát hiện Vitexin có 2 bước sóng hấp thu cực đại là 342 nm và 401 nm Đề tài chọn bước sóng 401 nm vì phù hợp với tài liệu tham khảo ban đầu Đồng thời bước sóng 401 nm cũng thuộc một trong hai đỉnh hấp thu cực đại của Vitexin sau khi quét phổ

- Xây dựng phương trình hồi quy tuyến tính của Vitexin: Độ hấp thu của Vitexin ở các nồng độ khác nhau được trình bày ở bảng 10:

Bảng 10 Độ hấp thu của Vitexin theo nồng độ tương ứng

Nồng độ (g/ml) Độ hấp thu

Từ kết quả đo độ hấp thu của dung dịch chuẩn ở các nồng độ khác nhau, xây dựng được phương trình hồi quy tuyến tính: y = 0.0165x + 0.0403 với r 2 = 0.9987 trong đó y là độ hấp thu, x là nồng độ

Công thức tính hàm lượng flavonoid toàn phần theo Vitexin trong bột dược liệu LT:

(c): nồng độ mẫu thử tính từ đường chuẩn (g/ml)

Hình 14 Phương trình hồi quy tuyến tính của Vitexin

- Kết quả định lượng hàm lượng flavonoid toàn phần trong bột dược liệu LT được trình bày ở bảng 11:

Bảng 11 Kết quả định lượng dược liệu

Khối lượng thực tế (g) Độ hấp thu

Nhận xét: Lạc Tiên sau khi thu hái, sơ chế, định lượng flavonoid toàn phần bằng phương pháp đo UV- Vis Hàm lượng flavonoid toàn phần có trong bột dược liệu LT chiếm 1.16

% tính theo Vitexin Kết quả cho thấy hàm lượng Flavonoid toàn phần trong dược liệu đạt yêu cầu theo DĐVN V (không ít hơn 0.6%) Vì vậy, LT thu hái ở Bình Dương có thể sử dụng, dùng làm nguyên liệu cho bài nghiên cứu này.

Bào chế cao đặc Lạc Tiên

Khảo sát dung môi chiết

Cân 25g bột dược liệu cho vào bình nón bịt kín, chiết nóng trong 30 phút, lọc dịch chiết, tỉ lệ chiết 1:4 (tiết kiệm dược liệu và dung môi khảo sát) Hút 1ml dịch lọc đem cô cắn, hoà tan cắn bằng 40ml MeOH, lọc Thực hiện tương tự với các dung môi khảo sát, mỗi dung môi lặp lại hai lần Tiến hành đo UV với các mẫu thử Nồng độ của hoạt chất flavonoid được tính dựa vào phương trình hồi quy tuyến tính của Vitexin Lựa chọn dung môi chiết sao cho chiết được hàm lượng flavonoid toàn phần trong dược liệu LT tối ưu

Kết quả khảo sát dung môi chiết được trình bày ở bảng 12:

Bảng 12 Kết quả khảo sát dung môi chiết

M cân lần 2 (g) Độ hấp thu 1 Độ hấp thu 2

Nhận xét: Dựa vào kết quả khảo khát dung môi chiết ở bảng 12 cho thấy, nồng độ dịch chiết ethanol 96%, ethanol 70%, ethanol 50%, nước lần lượt là 68.52g/ml, 62.49g/ml, 49.55g/ml, 31.25g/ml Điều này cho thấy, nồng độ flavonoid trong dịch chiết ethanol 96% cao hơn so với các dung môi khác Mặt khác, ethanol 96% có khả năng bảo quản

34 cao, tránh được nấm mốc vi khuẩn trong quá trình bảo quản Do đó, đề tài lựa chọn ethanol 96% làm dung môi chiết để bào chế cao đặc LT

Lựa chọn tỷ lệ chiết

Kết quả lựa chọn tỷ lệ DL/DM chiết được trình bày ở bảng 13:

Bảng 13 Kết quả lựa chọn tỉ lệ chiết DL/DM

Tỷ lệ dược liệu và dung môi Độ hấp thu Nồng độ dịch chiết cuối

Nhận xét: Dựa vào kết quả đo nồng độ flavonoid ở bảng 13 cho thấy:

- Từ tỉ lệ DL/ DM (1:6) lên tỉ lệ DL/ DM (1:7) thì nồng độ flavonoid toàn phần trong bột dược liệu LT giảm từ 35.4μg xuống 20.5μg Điều này có nghĩa là khi tăng tỷ lệ dung môi từ 1/6 lên 1/7 thì có thể chiết thêm được 14.9μg/ml

- Từ tỉ lệ DL/ DM (1:7) lên tỉ lệ DL/ DM (1:8) thì nồng độ flavonoid toàn phần giảm từ 20.5g /ml xuống 15.9μg/ml, đồng nghĩa với việc chỉ chiết thêm được 4.6μg/ml Điều này có nghĩa rằng, nếu tiếp tục tăng thể tích dung môi chiết, cũng không thể chiết thêm được hàm lượng flavonoid đáng kể trong dược liệu LT

- Do đó đề tài lựa chọn tỉ lệ DL/ DM là 1:7, vì có thể chiết được tối ưu hàm lượng flavonoid toàn phần có trong dược liệu, đồng thời tiết kiệm được lượng dung môi cần thiết

- Sau khi lựa chọn tỷ lệ DL/DM 1:7, tiến hành sắc ký với hệ dung môi EtOAc – MeOH – H2O – HCOOH (100:17:13:0.05) Tiến hành soi UV tại bược sóng 365 nm và bước sóng 254 nm và sử dụng thuốc thử FeCl3 Kết quả được trình bày ở hình 15:

Hình 15 Kết quả sắc ký dịch chiết có tỷ lệ dược liệu và dung môi 1/7

(a): Bước sóng 254nm, (b): Bước sóng 365nm, (c): Nhúng qua Fecl3

Trong đó: CH: Mẫu chuẩn Vitexin, Đ: Mẫu dịch chiết ban đầu LT, C: mẫu dịch chiết cuối LT (1/7)

Nhận xét: Kết quả triển khai sắc ký đồ cho thấy, dịch chiết có tỷ lệ DM/DL (1/7) có vệt của các nhóm chất flavonoid rất mờ so với vệt của chất chuẩn, có một vệt trùng với vệt của chất chuẩn và Rf của mẫu thử tương đương với mẫu chuẩn Điều này có thể giải thích do tỷ lệ chiết DL/DM (1/7) đã chiết được gần hết các hoạt chất thuộc nhóm flavonoid trong dược liệu LT

Dựa vào kết quả khảo sát đề tài đã lựa chọn được thông số để chiết 2kg dược liệu LT như sau:

- Phương pháp chiết: Ngấm kiệt

- Độ mịn dược liệu: Bột thô

- Tỷ lệ dung môi/dược liệu: 1/7

- Thời gian chiết: Ngâm 24 giờ tiến hành rút dịch chiết lần 1, tiếp tục ngâm và rút dịch chiết lần 2, gộp dịch chiết

Sau khi thu được dịch chiết tiến hành cô quay bằng thiết bị cô quay chân không Do lượng dung môi chiết dược liệu khá lớn, đề tài sử dụng phương pháp cô quay để thu hồi lại dung môi nhằm tái sử dụng Tiến hành cô quay cho đến khi dịch chiết đặc lại, gộp các dịch cô quay lại với nhau Tiếp tục đun trên bếp cách thuỷ cho đến khi dịch cô thể chất đặc và độ ẩm dưới 20% Thu được cao đặc, là nguyên liệu cho nghiên cứu bào chế viên nang cứng

Kiểm nghiệm một số chỉ tiêu cao đặc Lạc Tiên

Cao đặc LT có đặc điểm chung: Khối đặc quánh, màu xanh đen, mùi thơm đặc trưng của dược liệu

- Độ ẩm thực hiện đo độ ẩm 3 lần riêng biệt, kết quả thể hiện bảng 14:

Bảng 14 Kết quả đo độ ẩm của cao đặc Lạc Tiên

Chỉ tiêu Lần 1 Lần 2 Lần 3 TB Độ ẩm (%) 15.14 15.31 15.06 15.17

Hiệu suất chiết: % = khối lượng cao khối lượng dược liệu∗ 100%

Nhận xét: Từ 2kg dược liệu ta thu được 349.916g cao đặc có độ ẩm 15.17% đạt tiêu chuẩn độ ẩm cao đặc dưới 20% theo tiêu chuẩn của DĐVN V, với hiệu suất chiết 17.49% Tuy nhiên, để đóng nang thì độ ẩm của cao đặc phải đạt dưới 13% Đề tài tiếp tục cô đặc cao LT trên bếp cách thuỷ Sau đó, tiến hành đo độ ẩm

Sau khi cô đặc cao, tiến hành đo lại độ ẩm và kết quả được trình bày ở bảng 15:

Bảng 15 Độ ẩm cao đặc sau khi cô lại

Chỉ tiêu Lần 1 Lần 2 Lần 3 TB Độ ẩm (%) 13.04 12.78 12.92 12.91

Nhận xét: Cao đặc sau khi cô lại trên bếp cách thuỷ, có độ ẩm trung bình là 12.91 %, phù hợp với bào chế viên nang cứng Lạc Tiên Cao đặc LT được trình bày hình 16:

Hình 16 Cao đặc Lạc Tiên

- Tiến hành định tính flavonoid toàn phần trong cao đặc LT bằng phương pháp sắc kí lớp mỏng Kết quả được trình bày ở hình 17:

Hình 17 Kết quả sắc kí mỏng cao đặc Lạc Tiên

(A): Soi UV bước sóng 254nm, (B): Soi UV bước sóng 365nm, (C): Nhúng qua Fecl3

T: Mẫu thử cao dược liệu

Nhận xét: Sắc ký đồ dung dịch thử có một vết, cùng màu với dung dịch đối chiếu Đồng thời, Rf dung dịch đối chiếu và dung dịch thử tương đương nhau Rf lần lượt mẫu chuẩn và mẫu thử là: 0.474 và 0.47 Vậy, kết luận trong mẫu cao LT có Vitexin

- Xác định hàm lượng flavonoid toàn phần theo Vitexin Thực hiện thử nghiệm 3 lần cho kết quả được trình bày bảng 16:

Bảng 16 Hàm lượng flavonoid toàn phần trong cao đặc Lạc Tiên

(g) Độ hấp thu Nồng độ

Nhận xét: Hàm lượng flavonoid toàn phần trong 0.2g cao đặc LT được đo bằng phương pháp UV-Vis và được tính dựa vào phương trình tuyến tính của Vitexin Như vậy hàm lượng flavonoid toàn phần trong cao đặc LT trung bình là 4.85%.

Bào chế viên nang cứng LạcTiên

Khảo sát lựa chọn tá dược hút và tỉ lệ tá dược hút

Nghiên cứu thử nghiệm trên hai loại tá dược hút là Aerosil và Canxi carbonat Mỗi công thức bào chế với 100 viên nang, theo phương pháp xát hạt ướt Các công thức khảo sát được trình bày ở bảng 17:

Bảng 17 Thành phần công thức khảo sát viên nang cứng Lạc Tiên

Nhận xét: Cả 4 công thức có khối bột nhão không xát được hạt Tiếp tục khảo sát bằng cách giảm hàm lượng cao trong mỗi công thức

Các công thức khảo sát sau khi giảm hàm lượng cao đặc LT được trình bày ở bảng 18:

Nhận xét: Sau khi giảm hàm lượng cao thì CT5 có khối bột vẫn dính không xát hạt được, CT6 có khối bột khi xát qua rây dính trên rây không xuống, CT7 và CT8 khối bột ướt không thể xát hạt được Qua khảo sát thực tế, cho thấy Canxi carbonat có khả năng hút kém hơn Aerosil Do đó lựa chọn Aerosil làm tá dược hút với tỉ lệ 20% trong công thức viên nang cứng LT

Vì khối bột vẫn còn dính nên tiếp tục khảo sát bằng cách giảm hàm lượng cao kết quả khảo sát được trình bày ở bảng 19:

Nhận xét: Cả hai công thức CT9 VÀ CT10, đều xát được hạt qua rây Sau khi xát hạt qua rây, tiến hành sấy ở nhiệt độ 60 o C cho đến khô (Độ ẩm dưới 5% theo DĐVN V) Qua thực tế cho thấy, CT9 có thời gian sấy lâu hơn (hơn 3h), CT10 có thời gian sấy (2h

40 phút), do lượng cao CT9 nhiều hơn

Sau khi sấy khô tiến hành sửa cốm và đo độ ẩm của cốm sau khi sấy và sau 1h Kết quả đo độ ẩm của CT9 và CT10 được trình bày ở bảng 20:

Bảng 20 Độ ẩm của cốm

Sau khi sấy Sau 1h Sau khi sấy Sau 1h

Nhận xét: CT9 và CT10 đều đạt chỉ tiêu độ ẩm cốm (dưới 5%) CT9 có hàm lượng cao nhiều hơn Do đó, đề tài lựa chọn CT9 là công thức để kiểm tra một số chỉ tiêu trước khi đóng nang

Kiểm tra một số chỉ tiêu trước khi đóng nang

Công thức được lựa chọn bào chế viên nang cứng LT là CT9, với hàm lượng cao đặc

LT chiếm 40% trong công thức Đề tài tiến hành đóng nang để kiểm tra một số chỉ tiêu của viên nang cứng chứa dược liệu LT với quy mô là 200 viên Công thức bào chế 200 viên nang cứng chứa dược liệu

LT được trình bày ở bảng 21:

Bảng 21 Công thức lựa chọn bào chế

Thành phần Tỷ lệ (%) Khối lượng (g)

Nhận xét: Sau khi sấy khối thuốc, tiến hành đo độ ẩm Kết quả đo độ ẩm đạt 3.21% đạt tiêu chuẩn độ ẩm của cốm dưới 5% Tiến hành xác định một số thông số thể hiện tính chất của khối bột như tỷ trọng, góc nghỉ Cốm thuốc được thể hiện ở hình 18:

Hình 18 Cốm Lạc Tiên trước và sau khi sửa hạt

Tỉ trọng biểu kiến: Cân 50g cốm thuốc xác định, cho vào ống đong 100ml, ghi nhận thể tích ban đầu Gõ nhẹ ống đong thẳng đứng cho đến khi thể tích cốm thuốc trong ống đong không thay đổi ghi nhận thể tích Từ đó tính được tỉ trọng biểu kiến và thể tích khối thuốc đóng vào nang

Góc nghỉ: Cho toàn bộ cốm thuốc chảy liên tục qua phễu Từ đó xác định được góc nghỉ α, dựa vào phần phương pháp

Nhận xét: Việc lựa chọn tá dược, tỷ lệ phù hợp cần dựa vào đặc tính của cốm thuốc như độ ẩm, tỷ trọng sau khi trộn hoàn tất Trong đó, tính thể tích khối thuốc trước khi đóng nang có vai trò quan trọng, ảnh hưởng đến khối lượng thuốc đóng được vào trong nang Đối với nang số 0, để đóng được 500mg cốm vào mỗi viên nang thuốc thì cốm thuốc sau khi trộn hoàn tất có thể tích khối thuốc v = 0.67ml, tương ứng khi đóng lô 100 viên thì thể tích khối cốm thuốc trước khi đóng nang nên đạt 67ml Sau khi gõ và tính được thể tích cốm thuốc thì nhận thấy thể tích đang lớn hơn 67ml (cụ thể là trước khi thể tích trước khi đóng nang là 71ml) Điều này có nghĩa là, thể chất của cốm thuốc không thể đóng nang

Cách khắc phục: Tiến hành xát lại cốm thuốc và đo lại thể tích Kết quả các thông số của công thức cốm sau khi xát hạt lại được ghi nhận ở bảng 22:

Bảng 22 Kết quả thông số của cốm thuốc trước khi đóng nang

Tỷ trọng biểu kiến trước gõ 0.66

Tỷ trọng biểu kiến sau gõ 0.741

Kết luận: Khối bột sau khi xát hạt lại có khả năng chảy tốt và đảm bảo thể tích để đóng nang Tiến hành đóng nang cứng chứa dược liệu LT

Kiểm tra một số tiêu chuẩn viên nang cứng Lạc Tiên Đánh giá tính chất của viên

Cảm quan: Viên nang cứng số 0 có vỏ màu xanh Bên trong viên nang cốm thuốc có màu xanh nhạt, có mùi đặc trưng của dược liệu Hình ảnh viên nang cứng LT được thể hiện hình 19:

Hình 19 Viên nang cứng Lạc Tiên Độ đồng đều khối lượng

Kết quả đo độ đồng đều khối lượng thực hiện ba lần được trình bày ở bảng 23:

Bảng 23 Kết quả đo độ đồng đều khối lượng

Nhận xét: Dựa vào bảng kết quả đo độ đồng đều khối lượng được trình bày ở bảng 22, không có giá trị nào nằm ngoài khoảng cho phép Vì vậy, lô sản phẩm đạt độ đồng đều khối lượng theo tiêu chuẩn DĐVN V Độ rã

Kết quả đo độ rã được trình bày ở bảng 24:

Bảng 24 Kết quả đo độ rã

Viên Thời gian rã lần 1 Thời gian rã lần 2 Thời gian rã lần 3

1 9 phút 35 giây 9 phút 10 phút 10 giây

2 10 phút 10 phút 12 giây 9 phút 18 giây

3 10 phút 15 giây 9 phút 40 giây 10 phút

5 8 phút 20 giây 9 phút 25 giây 9 phút 55 giây

6 9 phút 55 giây 11 phút 8 phút 40 giây

Nhận xét: Không có viên nào có thời gian rã lơn hơn 30 phút Chỉ tiêu độ rã lô sản phẩm đạt yêu cầu theo tiêu chuẩn dược điển Việt Nam V, không có viên nào rã hơn 30 phút Định tính

Hình 20 Kết quả định tính viên nang cứng Lạc Tiên

(A): Soi UV bước sóng 254nm, (B): Soi UV bước sóng 365nm, (C): Nhúng qua Fecl3 Trong đó:

T: Mẫu thử viên nang cứng Lạc Tiên

Nhận xét: Sắc ký đồ của cốm LT có một vết có cùng màu sắc và Rf dung dịch đối chiếu và dung dịch thử tương đương nhau Rf lần lượt mẫu chuẩn và mẫu thử là: 0.466 và 0.46 với vệt của sắc kí đồ của chất đối chiếu đã chọn Vậy cốm LT sau khi trộn hoàn tất của CT9, vẫn đảm bảo giữ được Vitexin trong thành phần cao dược liệu

Tổng hàm lượng flavonoid trong viên nang

Tổng hàm lượng flavonoid trong viên nang cứng LT được trình bày ở bảng 25:

Bảng 25 Kết quả định lượng viên nang cứng Lạc Tiên

Lần KL cân (g) KL cao Độ hấp thu

Liều dùng, cách dùng

Theo DĐVN V: Ở dạng thuốc sắc LT được dùng 20- 40g một ngày, tương ứng với 3- 6g cao đặc LT theo hiệu suất chiết thực tế Công thức cho một viên nang cứng chứa dược liệu LT là 200mg cao đặc

Liều dùng: 5 viên/lần×3 lần/ngày

Viên nang cứng được bảo quản nơi khô ráo, tránh ánh sáng trực tiếp

Trong quá trình nghiên cứu bào chế viên nang cứng chứa dược liệu LT, đề tài đã sử dụng Vitexin làm chất điểm chỉ Vitexin được dùng để định tính, định lượng hàm lượng flavonoid toàn phần trong bột dược liệu, trong cao đặc LT và trong viên nang cứng LT Theo một số bài nghiên cứu trên thế giới, LT được chiết xuất bằng dung môi methanol, ethanol [16], [28] Theo DĐVN V, phương pháp chiết xuất LT là phương pháp chiết lạnh bằng dung môi nước Do đó, đề tài đã tiến hành khảo sát với các dung môi chiết lần lượt là: ethanol 96%, ethanol 70%, ethanol 50% và nước Để chiết được hàm lượng flavonoid toàn phần trong cây LT tối ưu, đề tài đã khảo sát và lựa chọn được dung môi chiết là ethanol 96%, với tỷ lệ DL/DM là 1/7

Theo nghiên cứu của tác giả Huỳnh Lời và cộng sự, với đề tài khảo sát thành phần hoá học trong cây LT, cho thấy hàm lượng cao chiết từ lá cao hơn hẳn so với thân [8] Tuy nhiên, đề tài đã nghiên cứu khảo khát cao chiết LT, sử dụng nguyên liệu là toàn cây trên mặt đất được thu hái tại Bình Dương Đề tài đã tiến hành định lượng hàm lượng flavonoid toàn phần trong dược liệu LT Kết quả cho thấy, hàm lượng flavonoid toàn phần trong cây LT chiếm 1.16%, cao hơn so với tiêu chuẩn của DĐVN V là 0.6% Điều này có nghĩa rằng, có thể sử dụng toàn cây trên mặt đất của dược liệu LT tại Bình Dương để nghiên cứu phát triển các dạng bào chế Ở Việt Nam một số chế phẩm hỗ trợ mất ngủ, an thần thường ở dạng trà túi lọc, viên nén phối hợp nhiều dược liệu trong đó có LT, dạng cao lỏng,… [29] Tuy nhiên nghiên cứu bào chế viên nang cứng chứa dược liệu LT vẫn còn hạn chế Do đó, bài khoá luận này đã nghiên cứu thành công viên nang cứng chứa dược liệu LT, góp phần làm phong phú hơn việc lựa chọn các dạng bào chế chứa dược liệu LT Điều này cũng giúp tận dụng nguồn nguyên liệu LT sẵn có trong nước nói chung, để phát triển các dạng bào chế từ dược liệu LT có công dụng hỗ trợ mất ngủ, an thần

Trong quá trình xây dựng quy trình bào chế viên nang cứng chứa dược liệu LT Hàm lượng cao đặc LT chiếm 40% trong công thức tương đương với 200mg cao trong một viên nang 500mg Để đạt tiêu chuẩn đóng thuốc vào nang, cần sử dụng các loại tá dược

49 phù hợp Aerosil là tá dược hút có khả năng hút được lượng cao đặc dược liệu Tuy nhiên khi sử dụng lượng lớn thì làm cho khối cốm cứng, khó xát hạt, khó hoà tan Vì vậy, sử dụng thêm Avicel PH (102) là tá dược đa năng, Sodium croscarmellose để tăng độ rã, độ hoà tan cho công thức Viên nang đạt chỉ tiêu về độ ẩm, độ đồng đều khối lượng, định tính, định lượng

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ

Qua thời gian thực hiện, đề tài đã hoàn thành được hai mục tiêu chính là xây dựng quy trình bào chế cao đặc LT và xây dựng được công thức bào chế viên nang cứng chứa dược liệu LT và kiểm nghiệm Cụ thể đề tài đã đạt được kết quả như sau:

Kiểm nghiệm dược liệu LT

- Mô tả, quan sát được đặc điểm, hình thái của dược liệu LT sau khi thu hái vào tháng

- Kiểm tra được độ ẩm của và một số tiêu chuẩn của bột dược liệu như định tính, định lượng

- Xác định được hàm lượng flavonoid toàn phần trong dược liệu Lạc Tiên, chiếm 1.16% tính theo Vitexin

Bào chế cao đặc LT

- Đề tài đã tiến hành khảo sát với các hệ dung môi là ethanol 96%, ethanol 70%, ethanol 50% và nước Dựa vào nồng độ hàm lượng flavonoid toàn phần để lựa chọn dung môi chiết được hàm lượng tối ưu Sau khi khảo sát, đề tài đã lựa chọn được dung môi chiết là ethanol 96%

- Sau khi lựa chọn được dung môi chiết, tiến hành lựa chọn tỷ lệ chiết bằng cách so sánh nồng độ hàm lượng flavonoid toàn phần trong dịch chiết dược liệu theo tỷ lệ DL/DM lần lượt là 1/6, 1/7, 1/8 Đề tài đã lựa chọn được tỷ lệ chiết giữa dược liệu và dung môi là 1/7

- Sau khi lựa chọn được dung môi chiết và tỷ lệ giữa DL/DM, tiến hành chiết bằng phương pháp ngấm kiệt Dịch chiết được đem cô quay, sau đó cô trên bếp cách thuỷ thu được cao đặc Lạc Tiên Từ 2 kg bột dược liệu, thu được 349.916g cao đặc có độ ẩm 15.17% đạt tiêu chuẩn độ ẩm cao đặc dưới 20% theo tiêu chuẩn của DĐVN V

- Tiến hành kiểm tra một số chỉ tiêu của cao đặc là cảm quan, độ ẩm, định tính, định lượng Hàm lượng flavonoid toàn phần trong cao đặc LT đạt 4.85% tính theo Vitexin

Xây dựng công thức viên nang

- Đề tài đã tiến hành khảo sát các loại tá dược và tỷ lệ các loại tá dược trong công thức

Tiến hành xây dựng 10 công thức để lựa chọn công thức tối ưu, phù hợp với tính chất cao đặc LT Lựa chọn được công thức và quy trình bào chế viên nang cứng chứa dược liệu Lạc tiên ở quy mô phòng thí nghiệm

- Đề tài đã sử dụng phương pháp xát hạt ướt để bào chế viên nang cứng chứa dược liệu

- Công thức cho một viên nang cứng Lạc Tiên hoàn chỉnh như sau: Cao LT: Aerosil:

Avicel PH (102): Sodium croscarmellose: Magnesi stearate lần lượt là

Kiểm nghiệm một số chỉ tiêu của viên nang cứng chứa dược liệu Lạc Tiên

- Độ ẩm: Độ ẩm của cốm thuốc dưới 5 % đạt yêu cầu tiêu chuẩn của DĐVN V

- Độ đồng đều hàm lượng: Đạt chỉ tiêu theo DĐVN V

- Định tính, định lượng: Công thức của viên nang cứng chứa DL LT sau khi trộn hoàn tất và đóng nang Tiến hành định tính, kết quả cho thấy trong viên nang có chứa

Vitexin Định lượng flavonoid toàn phần trong viên nang cứng nằm trong khoảng

95% - 105%, so với hàm lượng flavonoid trong cao đặc LT (DĐVN V)

- Độ rã: Viên nang cứng chứa dược liệu LT có độ rã dưới 30 phút đạt yêu cầu tiêu chuẩn DĐVN V

- Kiểm tra đầy đủ tiêu chuẩn cao đặc LT trước khi nghiên cứu bào chế công thức viên nang và đóng nang

- Tối ưu hoá quy trình sản xuất viên nang cứng LT

- Nghiên cứu độ ổn định của công thức đã chọn

- Thẩm định lại quy trình định lượng viên nang cứng

- Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở cho viên nang cứng chứa dược liệu LT

- Lựa chọn bao bì đóng gói và thiết kế nhãn thuốc cho sản phẩm

[1] Đ T Lợi, Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam Hà Nội: Nhà xuất bản Y học,

[2] A Patil, H Paikrao, and S Patil, "Passiflora foetida Linn: a complete morphological and phytopharmacological review," International Journal of Pharma Bio Sciences, vol 4, no 1, pp 285-296, 2013

[3] S S Patel, H Soni, K Mishra, and A K Singhai, "Recent updates on the genus

Passiflora: A review," International Journal of Research in Phytochemistry and Pharmacology, vol 1, no 1, pp 1-16, 2011

[4] Đ H Bích et al., Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam Hà nội: KHKT,

[5] J Shah and Y Dave, "Tendrils of Passiflora foetida: histogenesis and morphology," American Journal of Botany, vol 57, no 7, pp 786-793, 1970

[6] A Patil, B Lade, and H Paikrao, "A scientific update on Passiflora foetida,"

European Journal of Medicinal Plants, vol 5, no 2, pp 145-155, 2015

[7] P H Hộ, Cây Cỏ Việt Nam-An Illustrated Flora of Vietnam Nhà Xuất Bản Trẻ,

[8] H Lời and T Hùng, "Khảo sát thành phần hoá học cây lạc tiên (Passiflora foetida

Passifloraceae)," Tạp Chí Dược Liệu, Tập 16, Số 4, 2011

[9] A Patil and H Paikrao, "Bioassay Guided Phytometabolites Extraction for

Screening of Potent Antimicrobials in Passiflora foetida L," Journal of Applied

Pharmaceutical Science, vol 2, no 9, pp 137-142, 2012

[10] A Chiavaroli et al., "Pharmacological properties and chemical profiles of

Passiflora foetida L extracts: Novel insights for pharmaceuticals and utraceuticals," Processes, vol 8, no 9, p 1034, 2020

[11] S Odewo, A Agbeja, K Olaifa, A Ojo, and S Ogundana, "Proximate and spectroscopic analysis of Passiflora foetida L," International Journal of Scientific & Technology Research, vol 3, no 9, pp 353-356, 2014

[12] K Dhawan, S Dhawan, and A Sharma, "Passiflora: a review update," Journal of Ethnopharmacology, vol 94, no 1, pp 1-23, 2004

[13] H Lời and T Hùng, "Khảo sát thành phần hóa học và phân lập flavonoid từ cây

Lạc tiên (Passiflora foetida-Passiloraceae)," Tạp Chí Dược Liệu, Tập 16, Số 4

[14] Hội Đồng Dược Điển - Bộ Y Tế, Dược điển Việt Nam V Hà Nội: Y học, 2018

[15] H L Nguyễn, T T H Phạm, T N L Đặng, T T Đoàn, and V T Phi, "Định lượng vitexin trong chế phẩm chứa lạc tiên bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao," Tạp

Chí Dược Liệu, Tập 26, Số 4, 2021

[16] P Santosh, R Venugopl, A Nilakash, S Kunjbihari, and L Mangala,

"Antidepressant activity of methanolic extract of Passiflora foetida leaves in mice," Int J Pharm Pharm Sci, vol 3, no 1, pp 112-5, 2011

[17] V Sasikala, S Saravanan, and T Parimelazhagan, "Analgesic and anti– inflammatory activities of Passiflora foetida L," Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, vol 4, no 8, pp 600-603, 2011

[18] V Sasikala, S Saravana, and T Parimelazhagan, "Evaluation of antioxidant potential of different parts of wild edible plant Passiflora foetida L," Journal of

Applied Pharmaceutical Science, vol 4, no 1, 2011.

Bàn luận

Trong quá trình nghiên cứu bào chế viên nang cứng chứa dược liệu LT, đề tài đã sử dụng Vitexin làm chất điểm chỉ Vitexin được dùng để định tính, định lượng hàm lượng flavonoid toàn phần trong bột dược liệu, trong cao đặc LT và trong viên nang cứng LT Theo một số bài nghiên cứu trên thế giới, LT được chiết xuất bằng dung môi methanol, ethanol [16], [28] Theo DĐVN V, phương pháp chiết xuất LT là phương pháp chiết lạnh bằng dung môi nước Do đó, đề tài đã tiến hành khảo sát với các dung môi chiết lần lượt là: ethanol 96%, ethanol 70%, ethanol 50% và nước Để chiết được hàm lượng flavonoid toàn phần trong cây LT tối ưu, đề tài đã khảo sát và lựa chọn được dung môi chiết là ethanol 96%, với tỷ lệ DL/DM là 1/7

Theo nghiên cứu của tác giả Huỳnh Lời và cộng sự, với đề tài khảo sát thành phần hoá học trong cây LT, cho thấy hàm lượng cao chiết từ lá cao hơn hẳn so với thân [8] Tuy nhiên, đề tài đã nghiên cứu khảo khát cao chiết LT, sử dụng nguyên liệu là toàn cây trên mặt đất được thu hái tại Bình Dương Đề tài đã tiến hành định lượng hàm lượng flavonoid toàn phần trong dược liệu LT Kết quả cho thấy, hàm lượng flavonoid toàn phần trong cây LT chiếm 1.16%, cao hơn so với tiêu chuẩn của DĐVN V là 0.6% Điều này có nghĩa rằng, có thể sử dụng toàn cây trên mặt đất của dược liệu LT tại Bình Dương để nghiên cứu phát triển các dạng bào chế Ở Việt Nam một số chế phẩm hỗ trợ mất ngủ, an thần thường ở dạng trà túi lọc, viên nén phối hợp nhiều dược liệu trong đó có LT, dạng cao lỏng,… [29] Tuy nhiên nghiên cứu bào chế viên nang cứng chứa dược liệu LT vẫn còn hạn chế Do đó, bài khoá luận này đã nghiên cứu thành công viên nang cứng chứa dược liệu LT, góp phần làm phong phú hơn việc lựa chọn các dạng bào chế chứa dược liệu LT Điều này cũng giúp tận dụng nguồn nguyên liệu LT sẵn có trong nước nói chung, để phát triển các dạng bào chế từ dược liệu LT có công dụng hỗ trợ mất ngủ, an thần