2469 nghiên cứu bào chế viên nang chứa cao khô mướp đắng và vỏ bưởi

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC CẦN THƠ LÊ QUANG VINH NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VIÊN NANG CHỨA CAO KHÔ MƯỚP ĐẮNG VÀ VỎ BƯỞI NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC ThS NGUYỄN NGỌC THỂ TRÂN ThS PHAN THANH PHÚ LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC CẦN THƠ – 2015 LỜI CẢM ƠN Con cảm ơn Ông, Bà, Ba, Mẹ yêu thương, ủng hộ, giúp đỡ, động viên chỗ dựa vững giúp vượt qua khó khăn đời Con xin cảm ơn gia đình Má hai, gia đình Chú thím cưu mang, xem đứa gia đình mình, giúp vững tin suốt năm học xa nhà Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Cô ThS Nguyễn Ngọc Quỳnh, Cô quan tâm, giúp đỡ, động viên, tận tình hướng dẫn tạo điều kiện để em thực tốt luận văn Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Cô ThS Nguyễn Ngọc Thể Trân, Cô quan tâm, dạy, chia sẻ kiến thức bổ ích động viên em từ ngày em thực luận văn Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Anh ThS Phan Thanh Phú – người cho em lời khuyên bổ ích, dạy kiến thức quý báu học tập, nghề nghiệp, sống Em xin chân thành cảm ơn Thầy ThS Lê Thanh Vĩnh Tuyên, Cô ThS Nguyễn Thị Trang Đài, Cô ThS Thạch Trần Minh Uyên, Thầy Trần Bá Việt Quí, Chị Nguyễn Vũ Phương Lan, Chị Ngô Thị Kim Hương giúp đỡ tạo điều kiện để em thực tốt luận văn Em xin chân thành cảm ơn Quý Thầy Cô Anh, Chị Kỹ thuật viên môn Bào chế – Công nghiệp dược, Hóa phân tích – Kiểm nghiệm – Độc chất Cảm ơn bạn nhóm đề tài LBM Dược Liệu – Thực vật Dược – Dược Cổ Truyền, LBM Hóa phân tích – Kiểm nghiệm – Độc chất, Hóa Dược đồng hành, giúp đỡ, chia sẻ kinh nghiệm quý báu cho Cảm ơn đại gia đình Dược A bạn Dược B khóa 36 Cảm ơn bạn Tiểu Mã, Hồng Thân ln giúp đỡ, đồng hành suốt thời sinh viên Cảm ơn em TN ủng hộ, giúp đỡ, chia sẻ, động viên anh Cần Thơ, tháng 06 năm 2015 LỜI CAM ĐOAN Tôi tên Lê Quang Vinh Tôi xin cam đoan kết luận văn trung thực, hoàn toàn riêng chưa công bố nghiên cứu Cần Thơ, tháng 06 năm 2015 Lê Quang Vinh i MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC HÌNH ẢNH, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ .vi ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG – TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ MƯỚP ĐẮNG 1.1.1 Đặc điểm thực vật 1.1.2 Phân bố sinh thái thu hái 1.1.3 Thành phần hóa học 1.1.4 Tác dụng sinh học 1.2 TỔNG QUAN VỀ BƯỞI 1.2.1 Đặc điểm thực vật 1.2.2 Phân bố sinh thái thu hái 1.2.3 Thành phần hóa học 1.2.4 Tác dụng sinh học 1.3 TỔNG QUAN VỀ HOẠT CHẤT CHÍNH TRONG VIÊN NANG 1.3.1 Charantin – cao khô Mướp đắng 1.3.2 Naringin – cao khô vỏ Bưởi 1.4 TỔNG QUAN VỀ VIÊN NANG 10 1.4.1 Khái quát thuốc viên nang 10 1.4.2 Thành phần viên nang 11 1.4.3.Quy trình bảo chế thuốc viên nang cứng từ dược liệu 12 1.5 MỘT SỐ CHẾ PHẨM TRÊN THỊ TRƯỜNG 13 CHƯƠNG – ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 14 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.2.1 Bào chế cao khô Mướp đắng vỏ Bưởi 16 ii 2.2.2 Xây dựng công thức viên nang 19 2.2.3 Xây dựng thẩm định quy trình định lượng charantin naringin viên nang phương pháp HPLC 21 CHƯƠNG – KẾT QUẢ 24 3.1 BÀO CHẾ CAO KHÔ QUẢ MƯỚP ĐẮNG VÀ VỎ BƯỞI 24 3.1.1 Cao khô Mướp đắng 24 3.1.2 Cao khô vỏ Bưởi 26 3.1.3 Kiểm nghiệm nguyên liệu 27 3.2 XÂY DỰNG CÔNG THỨC VIÊN NANG 28 3.2.1 Khảo sát ảnh hưởng tá dược dính 28 3.2.2 Khảo sát ảnh hưởng tá dược rã 31 3.2.3 Khảo sát ảnh hưởng chất diện hoạt 35 3.2.4 Quy trình bào chế viên nang chứa cao khơ Mướp đắng vỏ Bưởi 36 3.3 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG CHARANTIN VÀ NARINGIN TRONG VIÊN NANG BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC 36 3.3.1 Xây dựng thẩm định quy trình định lượng charantin viên nang 38 3.3.2 Xây dựng thẩm định quy trình định lượng naringin viên nang 46 CHƯƠNG – BÀN LUẬN 56 4.1 CHIẾT XUẤT CAO KHÔ QUẢ MƯỚP ĐẮNG VÀ VỎ BƯỞI 56 4.2 XÂY DỰNG CÔNG THỨC VIÊN NANG 57 4.3 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG CHARANTIN VÀ NARINGIN TRONG VIÊN NANG BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC 59 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iii DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT STT Chữ viết tắt Chữ nguyên Ý nghĩa DĐVN IV Dược Điển Việt Nam HPLC High performance liquid chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao RSD Relative standard deviation Độ lệch chuẩn tương đối SD Standard deviation Độ lệch chuẩn UV – Vis Ultraviolet – Visible Tử ngoại – khả kiến FeCl3 Iron (III) chloride Sắt (III) clorid MeOH Methanol EtOAc Ethyl acetate PVP K30 Polyvinylpyrrolidone K30 10 HPMC E6 Hydroxypropyl methylcellulose E6 11 Natri CMC Natri carboxymethyl cellulose 12 SPE Solid phase extraction Kỹ thuật chiết pha rắn 13 AMP Adenosin monophosphate Adenosin monophosphat 14 VS Vanillin – sulfuric Ethyl acetat iv DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần saponin Mướp đắng Bảng 1.2 Các loại dung tích vỏ nang cứng 11 Bảng 1.3 Các chế phẩm thị trường 13 Bảng 2.1 Các chất chuẩn sử dụng nghiên cứu 14 Bảng 2.2 Dung môi sử dụng nghiên cứu 15 Bảng 2.3 Các loại tá dược sử dụng nghiên cứu 15 Bảng 2.4 Các trang thiết bị sử dụng nghiên cứu 16 Bảng 2.5 Phương pháp kiểm nghiệm nguyên liệu 18 Bảng 2.6 Các công thức khảo sát ảnh hưởng tá dược dính 20 Bảng 2.7 Các công thức khảo sát ảnh hưởng tá dược rã 20 Bảng 2.8 Các công thức khảo sát chất diện hoạt 21 Bảng 3.1 Thể chất cao Mướp đắng kết hợp với tá dược hút 25 Bảng 3.2 Độ ẩm cao khô sau đạt yêu cầu thể chất 25 Bảng 3.3 Kết định tính nguyên liệu phản ứng hóa học 27 Bảng 3.4 Kết định lượng nguyên liệu 28 Bảng 3.5 Công thức thiết kế khảo sát ảnh hưởng tá dược dính 29 Bảng 3.6 Độ ẩm công thức khảo sát tá dược dính 30 Bảng 3.7 Góc chảy cơng thức khảo sát tá dược dính 30 Bảng 3.8 Tỷ trọng biểu kiến công thức khảo sát 30 Bảng 3.9 Thời gian rã (phút) công thức khảo sát tá dược dính 31 Bảng 3.10 Cơng thức thiết kế khảo sát ảnh hưởng tá dược rã 32 Bảng 3.11 Độ ẩm công thức khảo sát tá dược rã 32 Bảng 3.12 Góc chảy công thức khảo sát tá dược rã 32 Bảng 3.13 Tỷ trọng biểu kiến công thức khảo sát tá dược rã 33 Bảng 3.14 Thời gian rã (phút) công thức khảo sát tá dược rã 33 Bảng 3.15.Các công thức thiết kế khảo sát ảnh hưởng chất diện hoạt 34 Bảng 3.16 Độ ẩm công thức khảo sát chất diện hoạt 34 Bảng 3.17 Góc chảy công thức khảo sát chất diện hoạt 35 v Bảng 3.18 Tỷ trọng biểu kiến công thức khảo sát chất diện hoạt 35 Bảng 3.19 Thời gian rã (phút) công thức khảo sát chất diện hoạt 35 Bảng 3.20 Kết khảo sát tính tương thích hệ thống charantin chuẩn 41 Bảng 3.21 Kết khảo sát tính tương thích hệ thống mẫu thử 42 Bảng 3.22 Kết khảo sát khoảng tuyến tính 43 Bảng 3.23.Kết khảo sát độ xác phương pháp 44 Bảng 3.24 Kết khảo sát độ phương pháp 45 Bảng 3.25 Kết khảo sát tính tương thích hệ thống naringin chuẩn 50 Bảng 3.26 Kết khảo sát tính tương thích hệ thống mẫu thử 51 Bảng 3.27 Kết khảo sát khoảng tuyến tính 52 Bảng 3.28 Kết khảo sát độ xác phương pháp 53 Bảng 3.29 Kết khảo sát độ phương pháp 54 vi DANH MỤC HÌNH ẢNH, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Hình thái thực vật Khổ qua (Momordica charantia Linn.) Hình 1.2 Hình tháiquả Bưởi (Citrus grandis (L.) Osbeck) Hình 1.3 Cơng thức cấu tạo charantin Hình 1.4 Cơng thức cấu tạo naringin Hình 3.1 Định tính naringin mẫu thử thuốc thử VS 28 Hình 3.2 Định tính charantin mẫu thử thuốc thử VS 28 Hình 3.3 Sắc ký đồ phân đoạn 1, 2, 3, 4, 39 Hình 3.4 Phổ UV dung dịch chuẩn charantin 10 µg/ml 39 Hình 3.5 Sắc ký đồ mẫu chuẩn charantin 40 Hình 3.6 Sắc ký đồ mẫu thử chứa charantin 41 Hình 3.7 Sắc ký đồ mẫu chuẩn, mẫu thử, mẫu thử thêm chuẩn, mẫu trắng 42 Hình 3.8 Sắc ký đồ phân đoạn 1, 2, 48 Hình 3.9.Phổ UV dung dịch chuẩn naringin 10 ppm (190 – 400 nm) 48 Hình 3.10 Sắc ký đồ chuẩn naringin 49 Hình 3.11 Sắc ký đồ mẫu thử chứa naringin 50 Hình 3.12 Sắc ký đồ mẫu chuẩn, mẫu thử, mẫu thử thêm chuẩn, mẫu trắng 52 DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ 1.1 Quy trình bào chế viên nang cứng 12 Sơ đồ 2.1 Quy trình nghiên cứu xây dựng công thức viên nang 19 Sơ đồ 3.1 Quy trình bào chế cao khơ Mướp đắng 26 Sơ đồ 3.2 Quy trình bào chế cao khơ vỏ Bưởi 27 Sơ đồ 3.3 Quy trình bào chế viên nang chứa cao khơ Mướp đắng vỏ Bưởi 37 DANH MỤC ĐỒ THỊ Đồ thị 3.1 Đường hồi quy tuyến tính nồng độ charantin theo diện tích đỉnh 43 Đồ thị 3.2 Đường hồi quy tuyến tính nồng độ naringin theo diện tích đỉnh 52 ĐẶT VẤN ĐỀ Ngày nay, với phát triển kinh tế, khoa học, kỹ thuật, bệnh lý tim mạch cao huyết áp, xơ vữa mạch máu, bệnh rối loạn chuyển hóa đái tháo đường, rối loạn lipid máu ngày gia tăng nguyên nhân hàng đầu gây tử vong Do đó, việc tìm loại thuốc để trị bệnh xu hướng ngành dược giới Việt nam Tuy nhiên, loại thuốc có giá thành cao thường kèm theo tác dụng không mong muốn cho người sử dụng Vì vậy, vấn đề đặt cần phải nghiên cứu loại dược phẩm có tác dụng trị bệnh tốt, độc tính có giá thành phù hợp Nằm vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa, với nguồn tài nguyên đất đai màu mỡ, Việt Nam thiên nhiên ưu đãi hệ sinh thái phong phú, đa dạng, tiềm to lớn tài nguyên thuốc nói riêng dược liệu nói chung với 5000 thuốc nhiều loại động vật làm thuốc [6] Vì thế, việc nghiên cứu phát triển dược liệu cơng tác phịng trị bệnh vấn đề đáng quan tâm Mướp đắng, với hoạt chất có tác dụng sinh học cao – charantin chứng minh có cơng dụng tốt như: hạ đường huyết, ngăn ngừa ung thư, kháng vi sinh vật,… [25], [42], [46] Trong đó, tác dụng hạ đường huyết quan tâm Quả mướp đắng chứa nhiều thành phần kích thích hoạt động tiết insulin, cải thiện chức hấp thu glucose tế bào ức chế tân tạo glucose gan Bên cạnh đó, naringin – thành phần vỏ bưởi có hoạt tính sinh học cao tác dụng chống oxy hóa, làm bền thành mạch, kháng viêm, bảo vệ tế bào, kiểm soát hiệu nồng độ lipid huyết tương,… [15], [19], [35], [40] Hiện nay, thị trường dược phẩm chưa có kết hợp thành phần giàu tiềm chữa bệnh mà tồn chế phẩm đơn lẻ Do đó, với mong muốn góp phần tăng cường khả phịng điều trị bệnh, nhóm nghiên cứu thực đề tài: “ Nghiên cứu bào chế viên nang chứa cao khô Mướp đắng vỏ Bưởi” naringin: a comparative study”, Journal of Science Food Agriculture, 90, pp 1238 – 1244 20 Chen Jian – Chao, Liu Wu – Qing, Lu Lu, Qiu Ming – Hua, Zheng Yong – Tang, Yang Liu – Meng, Zhang Xian – Min, Zhou Lin, Li Zhong – Rong (2009), “Kuguacins F – S, cucurbitane triterpenoids from Momordica charantia”, Phytochemistry, 70, pp 133 – 140 21 Cho K W., Kim Y O., Andrade J E., Burgess J R., Kim Y C (2011), “Dietary naringenin increases hepatic peroxisome proliferators-activated receptor alpha protein expression and decreases plasma triglyceride and adiposity in rats”, European Journal of Nutrition, 50, pp 81 – 88 22 S Desai, P Tatke (2015), “Charantin: An important lead compound from Momordica charantia for the treatment of diabetes”, Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry, (6), pp 163 – 166 23 Fukuchi Y., Hiramitsu M., Okada M., Hayashi S., Nabeno Y., Osawa T., Naito M (2008), “Lemon polyphenols suppress diet-induced obesity by upregulation of mRNA levels of the enzymes involved in beta-oxidation in mouse white adipose tissue”, Journal Clinical Biochemistry Nutrition, 43, pp 201 – 209 24 S Gorinstein, D Huang, H Leontowicz (2006), “Determination of naringin and hesperidin in citrus friut by high-performance liquid chromatography The antioxidant potential of citrus fruit”, Acta Chomatographica, 17 25 Grover J.K., and Yadav S.P (2004), “Pharmacological actions and potential uses of Momordica charantia”, Journal of Ethnopharmacology, 93, pp 123 – 132 26 Harinantenaina L., Tanaka M., Takaoka S (2006), “Momordica charantia constituents and antidiabetic screening of the isolated major compounds” Chem Pharm Bull., 54, pp 1017 – 1021 27 Horax R., Hettiarachchy N., and Islam S (2005), “Total phenolic contents and phenolic acid constituents in varieties of Bitter Melons (Momordica charantia) and antioxidant activities of their extracts”, Journal of Food Science, 70, Nr 28 Jain M., Parmar H S (2011), “Evaluation of antioxidative and antiinflammatory potential of hesperidin and naringin on the rat air pouch model of inflammation”, Inflamm Res, 60, pp 483 – 491 29 Jung U J., Kim H J., Lee J S., Lee M K., Kim H O., Park E J., Kim H K., Jeong T S., Choi M S (2003), “Naringin supplementation lowers plasma lipids and enhances erythrocyte antioxidant enzyme activities in hypercholesterolemic subjects”, Clinical Nutrition, 22, pp 561 – 568 30 F I Kanaze, C Gabrieli, E Kokkalou, M Georgarakis, I Niopas (2003), “Simultaneous reversed-phase high-performance liquid chromatographic method for the determination of diosmin, hesperidin and naringin in different citrus fruit juices and pharmaceutical formulations”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 33, pp 243 – 249 31 Yong Kyoung Kim, Woo Tae Park (2014), “Variation of Charantin Content in Different Bitter Melon Cultivars”, Asian Journal of Chemistry, 26, pp 309 – 310 32 Mi-Hye Lee, Sik Yoon, and Jeon-Ok Moon (2004), “The flavonoid naringenin inhibits dimethylnitrosamine-induced liver damage in rats”, Biol Pharm Bull., 27, pp 72 – 76 33 Li W L., Zheng H C., Bukuru J., De Kimpe N (2004), “Natural medicines used in the traditional Chinese medical system for therapy of diabetes mellitus”, Journal of Ethnopharmacology, 92, pp – 21 34 Do Ngoc Lien, Nguyen Thi Thuy Quynh, Do Van Phuc, Vu Cong Phong, Phung Thanh Huong (2010), “Effect of pomelo (Citrus Grandis (L) Osbeck) peel extract on lipid-carbohydrate metabolic enzymes and blood lipid, glucose parameters in experimental obese and diabetic mice”, VNU Journal of Science, 26, pp 224 – 232 35 Chia-Yu Lin, Chih-Chin Ni, Mei-Chin Yin, Chong-Kuei Lii (2012), “Flavonoids protect pancreatic beta-cells from cytokines mediated apoptosis through the activation of PI3-kinase pathway”, Cytokine, 59, pp 65–71 36 Liu Chiung – Hiu, Yen Ming – Hong, Tsang Shih – Fang, Gan Kim – Hong, Hsu Hsue – Yin (2010), “Antioxidant triterpenoids from the stems of Momordica charantia”, Food Chemistry, 118, pp 751 – 756 37 Maria de Lourdes Mata Bilbao, Cristina Andre´s-Lacueva, Olga Ja´uregui, Rosa Maria Lamuela-Ravento (2007), “Determination of flavonoids in a Citrus fruit extract by LC–DAD and LC–MS”, Food Chemistry, 101, pp 1742 – 1747 38 Y Oishi, T Sakamoto, H Udagawa (2007), “Inhibition of increases in blood glucose and serum neutral fat by Momordica charantia saponin fraction”, Biosci Biotechnol Biochem, 71, pp 735 – 740 39 Pugazhenthi S., and Morthy P S (1996), “Purification of three orally active hypoglycemic compounds Kakara Ib, IIIa1, and IIIb1 from the unripe fruits of Momordica charantia Linn (Bitter Gourd)”, Indian Journal of Clinical Biochemistry, 11 (2), pp 115 – 119 40 Punithavathi V R , Anuthama R., Prince P S M (2008), “Combined treatment with naringin and vitamin C ameliorates streptozotocin-induced diabetes in male Wistar rats”, J Appl Toxicol, 28, pp 806 – 813 41 Isabel A Ribeiro, Maria H.L Ribeiro (2008), “Naringin and naringenin determination and control in grapefruit juice by a validated HPLC method”, Food control, 19, pp 432 – 438 42 Sabahat Saceed and Perween Tariq (2005), “Antibacterial activities of Menthapiperita, Pisumsavitum and Momordica charantia”, Pak J Bot., 37 (4), pp 997 – 1001 43 Shin Y W., Bok S H., Jeong T S., Bae K H., Jeoung N H., Choi M S., Lee S H., Park Y B (1999), “Hypocholesterolemic effect of naringin associated with hepatic cholesterol regulating enzyme changes in rats”, Int J Vitam Nutr Res, 69, pp 341 – 347 44 Ee Shian Tan, Aminah Abdullah, and Nur Kartinee Kassim (2015), “Extraction of steroidal glycoside from small-typed bitter gourd (Momordica charantia L.)”, Journal of Chemical and Pharmaceutical Research, (3), pp 870 – 878 45 Taylor L., (2002), “Technical data report for Bitter Melon (Momordica charantia)”, Herbal Secrets of the Rainforest, 2nd edition 46 Thorne Research (2007), “Momordica charantia (Bitter melon)”, Alternative Madicine Review, 12 (4), pp 360 – 363 47 Jesada Pitipanapong, Sutawadee Chitprasert, Motonobu Goto,Weena Jiratchariyakul, Mitsuru Sasaki, Artiwan Shotipruk (2005), “New approach for extraction of charantin from Momordica charantia with pressurized liquid extraction”, Separation and Purification Technology, 52 (3), pp 416 – 422 48 Rina Yu, Chu-Sook Kim, Byung-Se Kwon, and Teruo Kawada (2006), “Mesenteric adipose tissue-derived monocyte chemoattractant protein-1 plays a crucial role in adipose tissue macrophage migration and activation in obese mice”, Obesity, 14, pp 1353 – 1362 49 Yuan Xiaoquing, Gu Xiaohong, Tang Jian (2008), “Purification and characterization of a hypoplycemic peptide from Momordica charantia L Var abbreviate Ser.”, Food Chemistry, 111, pp 415 – 420 50 K Zygmunt, B Faubert, J MacNeil, E Tsiani (2010), “Naringenin, a citrus flavonoid, increases muscle cell glucose uptake via AMPK”, Biochem Biophys Res Commun, 398, pp 178 – 183 TÀI LIỆU WEBSITE 51 http://www.phytochemicals.info/phytochemicals/naringin.php 52 USP35-NF30/Reagents/Solutions/Buffer Solutions DANH MỤC PHỤ LỤC Phụ lục Cách pha nồng độ charantin chuẩn PL-1 Phụ lục Cách pha chế nồng độ naringin chữ PL-2 Phụ lục Chuẩn bị mẫu thử chứa charantin khảo sát độ PL-3 Phụ lục Chuẩn bị mẫu thử chứa naringin khảo sát độ PL-5 Phụ lục Phương pháp khảo sát đặc tính khối thuốc đo độ rã PL-7 Phụ lục Tiêu chuẩn chất chuẩn charantin PL-9 PL-1 PHỤ LỤC Cách pha nồng độ charantin chuẩn Cân xác 25 mg chuẩn đối chiếu charantin cho vào bình định mức 50 ml, thêm 30 ml hỗn hợp methanol – nước (9:1), đánh siêu âm 15 phút bổ sung hỗn hợp methanol – nước (9:1) đến vạch, lắc để có dung dịch 500 ppm (1) Từ dung dịch (1), tiến hành pha dung dịch có nồng độ thấp sau: lấy xác thể tích dung dịch (1) cho vào bình định mức, thêm hỗn hợp methanol – nước (9:1) vừa đủ thu dung dịch có nồng độ theo yêu cầu Các số liệu pha mẫu trình bày bảng Bảng Phương pháp pha cách dung dich chuẩn có nồng độ thấp Dung dịch Dung dịch (1) (ml) Bình định mức (ml) Nồng độ dung dịch thu (µg/ml) B 10 200 C 10 100 D 10 50 E 50 20 F 50 10 G 100 Lấy ml dung dịch E cho vào bình định mức 10 ml, thêm hỗn hợp methanol – nước (9:1) đến vạch dung dịch H có nồng độ µg/ml PL-2 PHỤ LỤC Cách pha cách nồng độ naringin chuẩn Cân xác 25 mg chuẩn đối chiếu naringin cho vào bình định mức 50 ml, thêm 30 ml methanol – H2O (6:4), đánh siêu âm 15 phút bổ sung methanol – H2O (6:4) đến vạch, lắc để có dung dịch 500 ppm (1) Từ dung dịch (1), tiến hành pha dung dịch có nồng độ thấp sau: lấy xác thể tích dung dịch (1) cho vào bình định mức, thêm methanol – H2O (6:4) vừa đủ thu dung dịch có nồng độ theo yêu cầu Các số liệu pha mẫu trình bày bảng Bảng Phương pháp pha cách dung dich chuẩn có nồng độ thấp Dung dịch Dung dịch (1) (ml) Bình định mức (ml) Nồng độ dung dịch thu (µg/ml) B 10 200 C 10 100 D 10 50 E 50 20 F 50 10 G 100 Lấy ml dung dịch E cho vào bình định mức 10 ml, thêm methanol – H2O (6:4) đến vạch dung dịch H có nồng độ µg/ml Lấy ml dung dịch F cho vào bình định mức 10 ml, thêm methanol – H2O (6:4) đến vạch dung dịch I có nồng độ µg/ml PL-3 PHỤ LỤC Chuẩn bị mẫu thử chứa charantin khảo sát độ Mẫu thử Cân 20 nang, tính khối lượng trung bình bột thuốc nang, nghiền thành bột mịn Cân lượng bột thuốc tương đương 10 mg charantin, hòa tan 30 methanol, đánh siêu âm 20 phút, lọc thu lấy dịch lọc, rửa cắn với khoảng 10 ml methanol, chuyển toàn dịch lọc vào bình định mức 50 ml, bổ sung methanol vừa đủ Lấy ml dung dịch cho vào cột SPE pha đảo Tiến hành xử lý mẫu theo quy trình xử lý mẫu mục 3.3.1.1 Mẫu thử (thêm charantin chuẩn với hàm lượng 7500 µg) Cân 20 nang, tính khối lượng trung bình bột thuốc nang, nghiền thành bột mịn Cân lượng bột thuốc tương đương 10 mg charantin, thêm xác 15 ml dung dịch chuẩn charantin có nồng độ 500 µg/ml vào mẫu bột thuốc, thêm 15 methanol, đánh siêu âm 20 phút, lọc thu lấy dịch lọc, rửa cắn với khoảng 10 ml methanol, chuyển tồn dịch lọc vào bình định mức 50 ml, bổ sung methanol vừa đủ Lấy ml dung dịch cho vào cột SPE Tiến hành xử lý mẫu theo quy trình xử lý mẫu mục 3.3.1.1 Mẫu thử (thêm charantin chuẩn với hàm lượng 10000 µg) Cân 20 nang, tính khối lượng trung bình bột thuốc nang, nghiền thành bột mịn Cân lượng bột thuốc tương đương 10 mg charantin, thêm xác 20 ml dung dịch chuẩn charantin có nồng độ 500 µg/ml vào mẫu bột thuốc, thêm 10 methanol, đánh siêu âm 20 phút, lọc thu lấy dịch lọc, rửa cắn với khoảng 10 ml methanol, chuyển toàn dịch lọc vào bình định mức 50 ml, bổ sung methanol vừa đủ Lấy ml dung dịch cho vào cột SPE Tiến hành xử lý mẫu theo quy trình xử lý mẫu mục 3.3.1.1 Mẫu thử (thêm charantin chuẩn với hàm lượng 12500 µg) Cân 20 nang, tính khối lượng trung bình bột thuốc nang, nghiền thành bột mịn Cân lượng bột thuốc tương đương 10 mg charantin, thêm xác 25 ml PL-4 dung dịch chuẩn charantin có nồng độ 500 µg/ml vào mẫu bột thuốc, thêm methanol, đánh siêu âm 20 phút, lọc thu lấy dịch lọc, rửa cắn với khoảng 10 ml methanol, chuyển tồn dịch lọc vào bình định mức 50 ml, bổ sung methanol vừa đủ Lấy ml dung dịch cho vào cột SPE Tiến hành xử lý mẫu theo quy trình xử lý mẫu mục 3.3.1.1 PL-5 PHỤ LỤC Chuẩn bị mẫu thử chứa naringin khảo sát độ Mẫu thử Cân 20 nang, tính khối lượng trung bình bột thuốc nang, nghiền thành bột mịn Cân lượng bột thuốc tương đương 10 mg naringin, hòa tan 30 ml methanol – H2O (2:8), đánh siêu âm 20 phút, lọc thu lấy dịch lọc, rửa cắn với khoảng 10 ml methanol – H2O (2:8), chuyển toàn dịch lọc vào bình định mức 50 ml, bổ sung methanol – H2O (2:8) vừa đủ Lấy ml dung dịch cho vào cột SPE pha đảo Tiến hành xử lý mẫu theo quy trình xử lý mẫu mục 3.3.2.1 Mẫu thử (thêm naringin với hàm lượng 7500 µg) Cân 20 nang, tính khối lượng trung bình bột thuốc nang, nghiền thành bột mịn Cân lượng bột thuốc tương đương 10 mg naringin, thêm xác 15 ml dung dịch chuẩn naringin có nồng độ 500 µg/ml vào mẫu bột thuốc hịa tan 15 ml methanol – H2O (2:8), đánh siêu âm 20 phút, lọc thu lấy dịch lọc, rửa cắn với khoảng 10 ml methanol – H2O (2:8), chuyển toàn dịch lọc vào bình định mức 50 ml, bổ sung methanol – H2O (2:8) vừa đủ Lấy ml dung dịch cho vào cột SPE Tiến hành xử lý mẫu theo quy trình xử lý mẫu mục 3.3.2.1 Mẫu thử (thêm naringin với hàm lương 10000 µg) Cân 20 nang, tính khối lượng trung bình bột thuốc nang, nghiền thành bột mịn Cân lượng bột thuốc tương đương 10 mg naringin, thêm xác 20 ml dung dịch chuẩn naringin có nồng độ 500 µg/ml vào mẫu bột thuốc hòa tan 10 ml methanol – H2O (2:8), đánh siêu âm 20 phút, lọc thu lấy dịch lọc, rửa cắn với khoảng 10 ml methanol – H2O (2:8), chuyển toàn dịch lọc vào bình định mức 50 ml, bổ sung methanol – H2O (2:8) vừa đủ Lấy ml dung dịch cho vào cột SPE Tiến hành xử lý mẫu theo quy trình xử lý mẫu mục 3.3.2.1 PL-6 Mẫu thử (thêm naringin với hàm lượng 12500 µg) Cân 20 nang, tính khối lượng trung bình bột thuốc nang, nghiền thành bột mịn Cân lượng bột thuốc tương đương 10 mg naringin, thêm xác 25 ml dung dịch chuẩn naringin có nồng độ 500 µg/ml vào mẫu bột thuốc hòa tan ml methanol – H2O (2:8), đánh siêu âm 20 phút, lọc thu lấy dịch lọc, rửa cắn với khoảng 10 ml methanol – H2O (2:8), chuyển tồn dịch lọc vào bình định mức 50 ml, bổ sung methanol – H2O (2:8) vừa đủ Lấy ml dung dịch cho vào cột SPE Tiến hành xử lý mẫu theo quy trình xử lý mẫu mục 3.3.2.1 PL-7 PHỤ LỤC Phương pháp khảo sát đặc tính khối thuốc đo độ rã Độ ẩm Đo độ ẩm cân sấy ẩm hồng ngoại với thông số sau: - Lượng cân: khoảng g - Nhiệt độ sấy: 105 oC - Tốc độ độ ẩm tới hạn: 0,1%/phút Xác định tỷ trọng biểu kiến trước sau gõ Dựa vào công thức: = M V Với: P: tỷ trọng biểu kiến hạt M: khối lượng hạt Vb: thể tích biểu kiến hạt Tỷ trọng biểu kiến sau gõ xác định theo USP 30 máy đo tỷ trọng biểu kiến Pharma test touch Xác định lưu tính hạt – đo góc chảy Cân 50 g bột thuốc, đổ hạt chảy liên tục để tạo thành khối chóp xác định góc nghỉ α biết: α= Trong đó: h: chiều cao khối bột r: bán kính đáy khối bột h r PL-8 Bảng Ảnh hưởng góc chảy α đến lưu tính hạt [1] Góc nghỉ α < 20o 20 – 25o 25 – 30o 30 – 40o > 40o Ảnh hưởng Rất gặp Độ trơn chảy tốt Độ trơn chảy tốt Khả trơn chảy kém, cần thêm tá dược trơn Hạt khó trơn chảy, dễ dính máy Độ rã rã Thực theo DĐVN IV, phụ lục 11.6 Môi trường để thử độ rã môi trường acid dịch vị dày, đệm pH = 1,2 Đệm pH 1,2 pha sau: cho 50 ml dung dịch KCl 0,2 M vào bình định mức 200 ml, thêm 85 ml dung dịch HCl 0,2 M, bổ sung nước cất (không chứa CO2) vừa đủ [52] PL-9 PHỤ LỤC Giấy chứng nhận phân tích charantin chuẩn PL-10