2464 nghiên cứu bào chế viên nén chứa metformin hydroclorid 500mg phóng thích kéo dài và sitagliptin 50mg ở qui mô pilot

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ NGUYỄN HỒNG THẮM NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VIÊN NÉN CHỨA METFORMIN HYDROCHLORID 500MG PHÓNG THÍCH KÉO DÀI VÀ SITAGLIPTIN 50MG Ở QUY MƠ PILOT LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ ĐẠI HỌC Cần Thơ – 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ NGUYỄN HỒNG THẮM NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VIÊN NÉN CHỨA METFORMIN HYDROCHLORID 500MG PHĨNG THÍCH KÉO DÀI VÀ SITAGLIPTIN 50MG Ở QUY MÔ PILOT LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ ĐẠI HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC ThS NGUYỄN NGỌC NHÃ THẢO Cần Thơ – 2015 LỜI CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Thạc sĩ Nguyễn Ngọc Nhã Thảo tận tình hƣớng dẫn giúp đỡ suốt thời gian học tập, rèn luyện nghiên cứu Xin cảm ơn ln động viên, bảo để giúp tơi vƣợt qua khó khăn thời gian thực luận văn Tôi xin cảm ơn thầy, cô giáo anh chị kỹ thuật viên môn Bào Chế, Công Nghiệp Dƣợc, Dƣợc Liệu, liên mơn Hóa Phân Tích – Kiểm Nghiệm – Độc Chất, ngƣời hƣớng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho q trình tiến hành thực nghiệm Cuối tơi xin bày tỏ lịng biết vơ hạn đến gia đình, ngƣời thân bạn bè động bên cạnh, động viên, san sẻ chỗ dựa tinh thần giúp tơi vƣợt qua lúc khó khăn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đề tài nghiên cứu riêng Các khảo sát kết khóa luận trung thực chƣa đƣợc báo cáo đề tài nghiên cứu khác Cần Thơ, ngày 16 tháng 06 năm 2015 Sinh viên Nguyễn Hồng Thắm i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ vii ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 METFORMIN HYDROCHLORID 1.1.1 Đại cƣơng 1.1.2 Tính chất lý hóa 1.1.3 Tính chất dƣợc lý 1.2 SITAGLIPTIN PHOSPHAT MONOHYDRAT 1.2.1 Đại cƣơng 1.2.2 Tính chất lý hóa 1.2.3 Tính chất dƣợc lý 1.3 NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH BÀO CHẾ VIÊN NÉN Ở QUY MƠ PILOT 1.3.1 Nghiên cứu quy trình bào chế viên nén quy mô pilot 1.3.2 Kiểm sốt quy trình mặt thống kê 11 1.4 ĐÁNH GIÁ TƢƠNG ĐƢƠNG IN VITRO THƠNG QUA PHÉP THỬ ĐỘ HỊA TAN .14 1.4.1 Vai trò thử nghiệm độ hòa tan 14 1.4.2 Các yếu tố thử nghiệm độ hòa tan 15 1.4.3 Đánh giá tƣơng đƣơng in vitro thử nghiệm độ hòa tan 16 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .18 2.1 NGUYÊN LIỆU VÀ TRANG THIẾT BỊ 18 2.1.1 Ngun liệu, hóa chất dung mơi 18 2.1.2 Trang thiết bị 19 ii 2.1.3 Nơi thực 19 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .19 2.2.1 Nghiên cứu nâng cấp cỡ lô lên quy mô pilot 19 2.2.2 Kiểm nghiệm thành phẩm .27 2.2.3 Đánh giá tƣơng đƣơng in vitro .33 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 34 3.1 NGHIÊN CỨU NÂNG CẤP CỠ LÔ LÊN QUY MÔ PILOT 34 3.1.1 Xây dựng thẩm định quy trình định lƣợng bán thành phẩm 34 3.1.2 Khảo sát thơng số q trình sản xuất .38 3.1.3 Nâng cấp cỡ lô lên quy mô pilot 47 3.2 KIỂM NGHIỆM THÀNH PHẨM 50 3.3 ĐÁNH GIÁ TƢƠNG ĐƢƠNG IN VITRO 50 Chƣơng BÀN LUẬN 52 4.1 NGHIÊN CỨU NÂNG CẤP CỠ LÔ LÊN QUY MÔ PILOT 52 4.1.1 Xây dựng thẩm định quy trình định lƣợng bán thành phẩm 52 4.1.2 Khảo sát thơng số q trình sản xuất .53 4.1.3 Nâng cấp cỡ lô lên quy mô pilot 58 4.2 KIỂM NGHIỆM THÀNH PHẨM 59 4.3 ĐÁNH GIÁ TƢƠNG ĐƢƠNG IN VITRO 60 KẾT LUẬN 62 KIẾN NGHỊ .63 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Từ nguyên BĐM Bình định mức BTP Bán thành phẩm CT Cơng thức DAD Diode array detector DĐVN Dƣợc điển Việt Nam ĐTĐ Đái tháo đƣờng GHCBD Giới hạn cảnh báo dƣới GHCBT Giới hạn cảnh báo GHD Giới hạn dƣới GHT Giới hạn GTTB Giá trị trung bình HPLC High performance liquid Nghĩa Tiếng Việt Đầu dò dãy diod quang Sắc ký lỏng hiệu cao chromatography HPMC Hydroxypropylmethyl cellulose MeOH Methanol IR Infrared spectrophotometry MH Metformin hydrochlorid PTKD Phóng thích kéo dài PTHC Phóng thích hoạt chất PVP Polyvinyl pyrrolidone RP Reversed phase Pha đảo RSD Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tƣơng đối SG Sitagliptin SPM Sitagliptin phosphat monohydrat STT Số thứ tự TCCS Tiêu chuẩn sở TCDĐVN IV Tiêu chuẩn dƣợc điển Việt Nam IV Quang phổ hồng ngoại iv tt/tt Thể tích/thể tích USP United State Pharmacopoeia Dƣợc điển Mỹ UV-Vis Ultraviolet-visible Quang phổ tử ngoại khả kiến spectrophotometry VĐC Viên đối chiếu VNC Viên nghiên cứu XG Xanthan gum v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Cỡ lô tối đa cho mẻ sản xuất phục vụ thử nghiệm lâm sàng Bảng 1.2 Các quy tắc biện luận biểu đồ Shewhart R 14 Bảng 1.3 Các quy tắc biện luận biểu đồ Shewhart ̿ .14 Bảng 2.1 Danh mục nguyên liệu, hóa chất dung mơi 18 Bảng 2.2 Thông tin chất chuẩn 18 Bảng 2.3 Danh mục trang thiết bị .19 Bảng 2.4 Thành phần công thức bào chế cho lớp SG .20 Bảng 2.5 Thành phần công thức bào chế cho lớp PTKD chứa MH 20 Bảng 2.6 Nồng độ dung dịch MH chuẩn môi trƣờng nƣớc .22 Bảng 2.7 Chuẩn bị mẫu cho phép thử độ phƣơng pháp định lƣợng bột (cốm) thuốc chứa MH .23 Bảng 2.8 Nồng độ dung dịch SG chuẩn môi trƣờng nƣớc 24 Bảng 2.9 Chuẩn bị mẫu cho phép thử độ phƣơng pháp định lƣợng bột thuốc chứa SG 24 Bảng 2.10 Quy định phần trăm giải phóng MH mơi trƣờng đệm phosphat 33 Bảng 3.1 Kết độ hấp thu mẫu giả định mẫu trắng bƣớc sóng 233nm 34 Bảng 3.2 Sự tƣơng quan nồng độ độ hấp thu MH môi trƣờng nƣớc 34 Bảng 3.3 Kết khảo sát độ xác quy trình định lƣợng MH mơi trƣờng nƣớc .35 Bảng 3.4 Kết độ hấp thu mẫu giả định mẫu trắng bƣớc sóng 267nm 36 Bảng 3.5 Sự tƣơng quan nồng độ độ hấp thu SG môi trƣờng nƣớc 36 Bảng 3.6 Kết khảo sát độ xác quy trình định lƣợng SG mơi trƣờng nƣớc .37 Bảng 3.7 Kết đánh giá độ phân tán MH (%) theo thời gian trộn khô .38 Bảng 3.8 Kết đo độ ẩm cốm chứa MH sau sấy 39 Bảng 3.9 Kết đánh giá độ phân tán MH (%) theo thời gian trộn hoàn tất 39 Bảng 3.10 Kết kiểm tra tính chất cốm MH sau trộn hoàn tất .40 Bảng 3.11 Kết đánh giá độ phân tán SG (%) theo thời gian trộn .40 vi Bảng 3.12 Kết kiểm tra tính chất bột chứa SG sau trộn hoàn tất .41 Bảng 3.13 Kết độ cứng độ mài mịn lơ thăm dị 45 Bảng 3.14 Hàm lƣợng MH SG viên nghiên cứu từ lơ thăm dị .45 Bảng 3.15 Phần trăm phóng thích hoạt chất MH lơ labo lơ thăm dị 45 Bảng 3.16 Phần trăm phóng thích hoạt chất SG lơ labo lơ thăm dị 46 Bảng 3.17 Kết kiểm tra tiêu trình sản xuất lô pilot 48 Bảng 3.18 Hàm lƣợng MH SG viên nghiên cứu từ lô pilot 49 Bảng 3.19 Phần trăm phóng thích hoạt chất MH lô pilot 1, lô pilot 2, lơ thăm dị lơ labo mơi trƣờng pH 6,8 49 Bảng 3.20 Phần trăm phóng thích hoạt chất SG lơ pilot 1, lơ pilot 2, lơ thăm dị lô labo môi trƣờng pH 1,2 49 Bảng 3.21 Kết kiểm nghiệm thành phẩm sản xuất từ quy mô pilot 50 Bảng 3.22 Phần trăm PTHC MH môi trƣờng pH 1,2; pH 6,8 viên Glucophage XR 500mg viên nghiên cứu .51 Bảng 3.23 Phần trăm PTHC SG môi trƣờng pH 1,2 viên Januvia 50mg viên nghiên cứu 51 Bảng 4.1 Phần trăm PTHC SG môi trƣờng pH 1,2 viên Januvia 50mg viên nghiên cứu 61 13 Thái Thị Trúc Ly (2011), Nghiên cứu bào chế viên nén niacin 500mg PTKD, Luận văn thạc sĩ dƣợc học, Trƣờng Đại học Y Dƣợc Thành Phố Hồ Chí Minh [13] 14 Bùi Tuyết Mai (2012), Nghiên cứu bào chế viên nén metformin GPKD phối hợp với glipizid GPN, Khóa luận tốt nghiệp dƣợc sĩ đại học, Trƣờng Đại học dƣợc Hà Nội [14] 15 Võ Thùy Ngân (2008), Nghiên cứu kỹ thuật quy trình bào chế viên PTKD chứa diltiazem 90mg, Luận văn thạc sĩ dƣợc học, Trƣờng Đại học Y Dƣợc Thành Phố Hồ Chí Minh [15] 16 Lê Quang Nghiệm (2007), Sinh dược học hệ thống trị liệu mới, Nhà xuất Y học, tr 50-60 [16] 17 Lâm Huệ Quân (2009), Nghiên cứu kỹ thuật quy trình bào chế viên nén phóng thích kéo dài chứa nifedipin 30mg, Luận văn thạc sĩ dƣợc học, Trƣờng đại học y dƣợc TP HCM [17] 18 Nguyễn Văn Quý (2010), Nghiên cứu hồn thiện cơng thức thẩm định quy trình sản xuất viên nén bao phim salbutamol 4mg phóng thích kéo dài quy mô pilot, Luận văn thạc sĩ dƣợc học, Trƣờng đại học y dƣợc TP HCM [18] 19 Nguyễn Hồng Thun (2011), Đánh giá tương đương độ hịa tan in vitro viên nén trimetazidin 60mg phóng thích kéo dài xây dựng tiêu chuẩn sở cho chế phẩm, Luận văn tốt nghiệp dƣợc sĩ đại học, Trƣờng Đại học Y Dƣợc Thành Phố Hồ Chí Minh [19] 20 Nguyễn Kim Thuận (2010), Nghiên cứu kỹ thuật quy trình bào chế viên nén PTKD propranolol hydroclorid 80mg, Luận văn tốt nghiệp dƣợc sĩ đại học, Trƣờng Đại học Y Dƣợc Thành Phố Hồ Chí Minh [20] 21 Trung Tâm DI & ADR Quốc gia (2013), Bản tin cảnh giác dược số 2, tr 1415 [21] 22 Nghiêm Thị Thanh Vân (2014), Nghiên cứu bào chế viên nén chứa sitagliptin 50mg, Khóa luận tốt nghiệp dƣợc sĩ đại học, Trƣờng Đại học y dƣợc Cần Thơ [22] 23 Vƣơng Quốc Vũ (2013), Nghiên cứu bào chế viên nén metformin hydrochlorid 500 mg PTKD, Khóa luận tốt nghiệp dƣợc sĩ đại học, Trƣờng Đại học y dƣợc Cần Thơ [23] Tiếng Anh 24 Bo Ahrén (2008), “Novel combination treatment of type diabetes DPP-4 inhibition and metformin”, Vascular Health and Risk Management, 4(2), pp 383-394 [24] 25 American society of health system pharmacist (2015), AHFS drug information, Bethesda, Maryland, pp 3185-3187 [25] 26 Technical Brief (2010), “In Vitro Dissolution Testing for Solid Oral Dosage Forms”, Partical Sciences, 5, pp 1-2 [26] 27 Cynthia K Brown et al (2004), “Acceptable analytical practices for dissolution testing of poorly soluble compounds”, Technology, pp 56-65 Pharmaceutical [27] 28 Jennifer Dressman et al (2005), Pharmaceutical Dissolution Testing, Taylor & Francis, pp 15-51 [28] 29 Garry G Graham et al (2011), “Clinical pharmacokinetics of metformin”, Clinical Pharmacokinetics, 50(2), pp 81-98 [29] 30 Guthi Lavanya et al (2013), “New extractive spectrophotometric estimation of sitagliptin phosphate and its dosage”, Journal of Pharmacy and Biological Sciences, 3(4), pp 19-21 [30] 31 Merck Sharp & Dohme Corp (2010), Highlights of prescribing information of Januvia, MERCK&CO., pp 7-8 [31] 32 Basavaraj K Nanjwade (2009), Pilot Plant Design for tablets and Capsules, SRTM University, pp 2-6 [32] 33 Martin Siewrt (1995), FIP Guidelines for Dissolution Testing of Solid Oral Product, International Pharmaceutical Federation, pp 1-11 [33] 34 James Swarbrick (2007), Encyclopeida of Pharmaceutical Technology, Informa Healthcare USA, 1, pp 2-21, 3500-3510 [34] 35 Sean C Sweetman (2009), Martindale: The Complete Drug Reference, Pharmaceutical Press, pp 453-454 [35] 36 Shaw J.E et al (2010), "Global estimates of the prevalence of diabetes for 2010 and 2030", Diabetes Res Clin Pract, 87(1), pp 4-14.[36] 37 Unwin N, Alberti KG (2006), “Chronic non-communicable diseases”, Ann Trop Med Parasitol, 100(5-6), pp 455-464 [37] 38 University of the Sciences Philadelphia College of (2012), Remington Twenty-second edition, Pharmacy Pharmaceutical Press, pp 1738-1739 [38] 39 U.S Department of Health and Human Services (1997), Guidance for Industry Dissolution Testing of Immediate Release Solid Oral Dosage Forms, Center for Drug Evaluation and Research, pp 1-10 [39] 40 U.S Department of Health and Human Services (2010), The United States Pharmacopeia 35 – National Formulary 29, 711, 724, 1088, 1092 [40] 41 Sujani P.V et al (2013), “Development and Validation of Simultaneous Equation Method for the Estimation of Metformin and Sitagliptin by UV Spectroscopy”, Research and Reviews, 2(2), pp 72-75.[41] Trang web 42 The internet drug index, address: [42] http://www.rxlist.com/janumet-xr-drug.htm, [access on february 24, 2014] PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC Phụ lục Kết khảo sát độ quy trình định lƣợng bột thuốc chứa MH Phụ lục Kết khảo sát độ quy trình định lƣợng bột thuốc chứa SG Phụ lục Giá trị số (A2, d2, D3, D4) dựa cỡ mẫu Phụ lục Thẩm định quy trình định lƣợng MH phép thử độ hịa tan pH 1,2 Phụ lục Hình ảnh cốm ƣớt chứa MH sau thêm tá dƣợc dính Phụ lục Hình ảnh viên nghiên cứu Phụ lục Kết định tính thành phẩm phổ IR UV-Vis Phụ lục Kết khối lƣợng viên, khối lƣợng lớp MH khối lƣợng lớp SG khảo sát trình dập viên PL-1 PHỤ LỤC Bảng PL Kết khảo sát độ quy trình định lượng bột thuốc chứa MH Lần đo Mẫu thử Mẫu chuẩn Tỉ lệ thêm (dung dịch B) (dung dịch A) vào (%) (ml) (ml) 0,8 80 0,8 80 0,8 80 1 100 1 100 1 100 1,2 120 1,2 120 1,2 120 Tỉ lệ hồi phục trung bình Tỉ lệ tìm thấy (%) Tỉ lệ phục hồi (%) 80,40 80,85 80,61 101,16 99,88 100,77 119,48 118,47 118,86 100,50 101,06 100,76 101,16 99,88 100,77 99,57 98,72 99,05 100,16% PHỤ LỤC Bảng PL Kết khảo sát độ quy trình định lượng bột thuốc chứa SG Lần đo Mẫu thử Mẫu chuẩn Tỉ lệ thêm (dung dịch D) (dung dịch C) vào (%) (ml) (ml) 80 80 80 5 100 5 100 5 100 120 120 120 Tỉ lệ hồi phục trung bình Tỉ lệ tìm thấy (%) Tỉ lệ phục hồi (%) 81,47 81,51 81,39 101,99 101,91 101,79 121,09 121,94 121,89 101,84 101,89 101,73 101,99 101,91 101,79 101,68 101,61 101,58 101,78% PL-2 PHỤ LỤC Bảng PL Giá trị số dựa cỡ mẫu n 10 11 12 13 1,880 1,023 0,729 0,577 0,483 0,491 0,373 0,337 0,308 0,285 0,266 0,249 1,128 1,693 2,059 0,236 2,534 2,704 2,847 2,970 3,078 3,173 3,258 3,336 0 0 0,076 0,136 0,184 0,223 0,256 0,283 0,307 3,267 2,574 2,282 2,114 2,004 1,924 1,864 1,816 1,777 1,744 1,717 1,693 n 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 0,235 0,223 0,212 0,203 0,194 0,187 0,180 0,173 0,167 0,162 0,157 0,153 3,407 3,472 3,532 3,588 3,640 3,689 3,735 3,778 3,819 3,858 3,895 3,931 0,328 0,347 0,363 0,378 0,391 0,403 0,415 0, 0,434 0,443 0,451 0,459 1,672 1,653 1,637 1,622 1,608 1,597 1,585 1,575 1,566 1,557 1,548 1,541 PHỤ LỤC Thẩm định quy trình định lƣợng MH phép thử độ hòa tan pH 1,2 Phƣơng pháp nghiên cứu Tiến hành quét phổ dung dịch metformin hydrochlorid chuẩn 10µg/ml mơi trƣờng để xác định cực đại hấp thu Độ đặc hiệu Tiến hành pha dung dịch mẫu sau: mẫu giả định độ hòa tan thời điểm 10 giờ, mẫu trắng (thành phần giống nhƣ mẫu thử nhƣng khơng có chất cần định lƣợng, có SG), mẫu chuẩn chứa hoạt chất nồng độ tƣơng đƣơng mẫu thử thời điểm 10 Quét phổ dung dịch từ 200-400nm Tiến hành chồng phổ dung dịch đo độ hấp thu cực đại hấp thu Tính đặc hiệu đạt mẫu giả định có đỉnh hấp thu trùng với mẫu chuẩn tỉ lệ độ hấp thu mẫu trắng so với mẫu giả định khơng vƣợt q 2% Tính tuyến tính khoảng tuyến tính Pha giai mẫu chuẩn có nồng độ từ 0,5-15µg/ml Lấy xác thể tích mẫu chuẩn có nồng độ 100µg/ml cho vào bình định mức 50ml, bổ sung thể tích mơi trƣờng hịa tan vừa đủ PL-3 Bảng PL Nồng độ dung dịch xây dựng đường chuẩn Bình Bình Bình Bình Bình Bình 0,5 12 15 Nồng độ (µg/ml) Thể tích hút từ MH 0,25 2,5 7,5 chuẩn 100 µg/ml Các giai mẫu chuẩn đƣợc đo UV-Vis cực đại hấp thu Xử lý kết thực nghiệm toán thống kê Phƣơng trình đạt tính tuyến tính khoảng 0,515µg/ml r2 ≥ 0,995 Độ xác Chuẩn bị mẫu chuẩn khác nhƣng nồng độ Tiến hành đo UVVis cực đại hấp thu Xử lý kết thực nghiệm, xác định độ lệch chuẩn tƣơng đối Quy trình phân tích độ xác đạt giá trị thống kê độ hấp thu mẫu có RSD% ≤ 2% Độ Sử dụng phƣơng pháp thêm chuẩn đối chiếu vào mẫu thử xác định tỉ lệ hồi phục trung bình Thêm vào mẫu thử lƣợng chất chuẩn tƣơng ứng 10%, 50%, 100% lƣợng chất cần xác định có mẫu thử Tiến hành đo UV-Vis cực đại hấp thu Xử lý kết thực nghiệm Quy trình đạt độ tỉ lệ hồi phục nồng độ nằm khoảng giới hạn cho phép 95-105% Xử lý mẫu Mẫu chuẩn MH 200µg/ml : cân xác khoảng 10mg MH chuẩn, hòa tan khoảng 30ml dung dịch nƣớc acid pH 1,2 bình định mức dung tích 50ml, sau thêm dung dịch pH 1,2 vừa đủ, lắc Mẫu chuẩn MH 8µg/ml: hút ml mẫu chuẩn MH 200µg/ml cho vào bình định mức 25ml, thêm 0,35ml dung dịch Na 3PO4 0,2M bổ sung dung dịch đệm pH 6,8 vừa đủ, lắc Mẫu giả định (công thức thành phần hoàn toàn giống mẫu thử): lấy dịch hòa tan pH 1,2 thời điểm thời điểm 10 Cụ thể: PL-4 Hút 1ml dịch hòa tan thời điểm (đã đƣợc lọc qua đầu lọc 10µm) cho - vào bình định mức 25ml, thêm 0,35ml dung dịch Na3PO4 0,2M bổ sung dung dịch đệm pH 6,8 vừa đủ, lắc Hút 1ml dịch hòa tan thời điểm 10 (đã đƣợc lọc qua đầu lọc 10µm) cho - vào bình định mức 50ml, thêm 0,35ml dung dịch Na3PO4 0,2M bổ sung dung dịch đệm pH 6,8 vừa đủ, lắc Mẫu trắng: lấy dịch hòa tan viên tá dƣợc (có thành phần SG) thời điểm 10 giờ, xử lý mẫu nhƣ mẫu thử Kết Theo kết nghiên cứu đề tài trƣớc, cực đại hấp thu MH môi trƣờng pH 1,2; 4,5; 6,8 lần lƣợt 203nm, 239nm 232nm Do bƣớc sóng hấp thu cực đại MH 203nm, gần sát với 200nm nên khó khảo sát pH 1,2 Đề tài tiến hành chuyển mơi trƣờng pha lỗng dịch thử hịa tan pH 1,2 để thành mơi trƣờng có pH 6,8, sau đo độ hấp thu hoạt chất bƣớc sóng 233 Bảng PL Kết độ hấp thu mẫu giả định mẫu trắng bước sóng 233nm cho phép thử độ đặc hiệu định lượng MH phóng thích từ mơi trường pH 1,2 Độ hấp thu (Abs) 10 0,4479 0,6722 Mẫu giả định 0,0029 0,0026 Mẫu trắng Nhận xét: tỉ lệ độ hấp thu mẫu trắng mẫu thử thời điểm nhỏ 2% đỉnh hấp thu mẫu thử trùng với đỉnh hấp thu mẫu chuẩn nên quy trình đạt độ đặc hiệu Bảng PL Kết khảo sát tính tuyến tính quy trình định lượng MH phóng thích từ mơi trường pH 1,2 STT Nồng độ µg/ml 0,5 12 15 Độ hấp thu 233nm 0,079 0,1944 0,4315 0,6619 0,9799 1,2262 Phƣơng trình hồi quy: y = 0,0789x + 0,0364 Hệ số tƣơng quan R² = 0,9999 Độ hấp thu PL-5 1,4 1,2 0,8 0,6 0,4 0,2 ŷ = 0,0789x + 0,0364 r² = 0,9999 10 15 Nồng độ (µg/ml) 20 Hình PL Sự tương quan nồng độ độ hấp thu MH môi trường pH 1,2 chuyển sang pH 6,8 Sử dụng trắc nghiệm F cho thấy phƣơng trình hồi quy tƣơng thích: F = 43223,82 > F0,05 = 7,71 Sử dụng trắc nghiệm t cho thấy hệ số a = 0,0789 có ý nghĩa (t = 207,90 > t 0,05 = 2,78); hệ số b = 0,0364 có ý nghĩa (t = 10,91 > t 0,05 = 2,78) Vậy phƣơng trình hồi quy ŷ = 0,0789x + 0,0364, với r2 = 0,9999 Kết luận: quy trình phân tích có tƣơng quan tuyến tính nồng độ độ hấp thu MH khoảng nồng độ 0,5-15µg/ml Bảng PL Kết khảo sát độ xác quy trình định lượng MH phóng thích từ mơi trường pH 1,2 Mẫu Hàm lƣợng (%) Xử lý thống kê 98,15 99,79 ̅ = 99,677% 98,64 99,88 SD = 1,3423 101,03 RSD% = 1,35% < 2% 99,57 Nhận xét: hàm lƣợng mẫu có RSD% = 1,35% < 2% nên quy trình phân tích đạt yêu cầu độ xác PL-6 Bảng PL Kết khảo sát độ quy trình định lượng MH phóng thích từ mơi trường pH 1,2 Lần đo Viên giả dƣợc Mẫu chuẩn Tỉ lệ thêm Tỉ lệ tìm Tỉ lệ phục MH (mg) vào (%) thấy (%) hồi (%) 50 10% 9,30 99,13 50 10% 8,92 98,65 50 10% 9,13 98,91 250 50% 55,12 105,12 250 50% 53,37 103,37 250 50% 51,60 101,60 500 100% 102,23 101,85 500 100% 100,48 100,4 500 100% 109,43 99,53 Tỉ lệ hồi phục trung bình 100,95% Nhận xét: tỉ lệ hồi phục trung bình 100,95% nằm giới hạn cho phép 98-102% khơng có giá trị nằm ngồi khoảng cho phép 98-102% nên quy trình đạt u cầu độ PHỤ LỤC Hình PL Hình ảnh cốm ướt chứa MH sau thêm tá dược dính PL-7 PHỤ LỤC Hình PL Hình ảnh viên nghiên cứu Hình PL Hình ảnh bề mặt viên nghiên cứu PHỤ LỤC Hình PL Định tính MH phương pháp đo quang Hình PL Định tính SG phương pháp đo quang PL-8 (a) (b) Hình PL Phổ IR mẫu chuẩn MH (a) mẫu thử lớp MH (b) (a) (b) Hình PL Phổ IR mẫu thử lớp SG (a) mẫu chuẩn SG (b) PL-9 PHỤ LỤC Bảng PL Khối lượng viên khảo sát trình dập viên lơ thăm dị Lần V1 V2 V3 V4 V5 V6 V7 V8 V9 V10 1,2183 1,2164 1,2085 1,2171 1,1954 1,2091 1,2132 1,2022 1,2103 1,2119 1,2205 1,2099 1,1974 1,2039 1,2031 1,1865 1,1961 1,2210 1,2112 1,2203 1,2285 1,2233 1,2271 1,2088 1,2165 1,2183 1,2102 1,2130 1,2065 1,2100 1,2058 1,2221 1,2134 1,2206 1,2092 1,2019 1,2260 1,2030 1,2041 1,2015 1,1949 1,211 1,2014 1,2172 1,2059 1,2098 1,2067 1,2019 1,2036 1,2068 1,2089 1,1965 1,216 1,2037 1,2054 1,1961 1,2091 1,2118 1,2113 1,2017 1,2262 1,206 1,2128 1,2134 1,2236 1,2062 1,2141 1,2119 1,2014 1,2115 1,2011 1,2159 1,2271 1,2113 1,2098 1,2106 1,1914 1,2022 1,2189 1,2145 1,2011 1,2159 1,217 1,2064 1,2091 1,2106 1,1986 1,2042 1,2243 1,2094 10 1,216 1,2084 1,22 1,2085 1,2049 1,228 1,1982 1,2235 1,203 1,2168 11 1,2172 1,2094 1,1886 1,2034 1,214 1,2074 1,2125 1,2056 1,2275 1,2142 12 1,2031 1,1932 1,2121 1,2035 1,1923 1,2267 1,2122 1,2028 1,2145 1,202 13 1,2076 1,2078 1,2135 1,2067 1,1934 1,1963 1,1972 1,1999 1,2111 1,2005 14 1,1923 1,2172 1,2031 1,2167 1,1952 1,2085 1,1992 1,2018 1,2045 1,2176 15 1,2147 1,2074 1,1978 1,1976 1,1923 1,1921 1,2051 1,2173 1,2157 1,2075 16 1,1956 1,2046 1,2067 1,1949 1,1953 1,2014 1,2017 1,2118 1,2068 1,2055 17 1,2234 1,2113 1,2207 1,2003 1,2056 1,2139 1,2245 1,2023 1,2222 1,212 18 1,2135 1,2156 1,2161 1,2103 1,2117 1,2249 1,2132 1,2041 1,2186 1,215 19 1,20021 1,2004 1,2245 1,2139 1,2041 1,2142 1,2036 1,2382 1,2051 1,2032 20 1,2122 1,2223 1,2145 1,2134 1,1969 1,2172 1,2192 1,2198 1,2195 1,20166 PL-10 Bảng PL 10 Khối lượng lớp MH khảo sát trình dập viên lơ thăm dị Lần 10 0,9591 0,952 0,9603 0,957 0,9538 0,9579 0,959 0,9578 0,9593 0,959 0,9635 0,9517 0,954 0,9473 0,9555 0,955 0,9364 0,9469 0,9591 0,9604 0,9638 0,9598 0,965 0,9618 0,9608 0,9601 0,948 0,9523 0,9604 0,9601 0,9579 0,9578 0,9531 0,9594 0,96 0,9563 0,9601 0,959 0,952 0,9429 0,9504 0,9569 0,9575 0,9521 0,9504 0,952 0,957 0,9584 0,9517 0,957 0,9565 0,9523 0,9554 0,9592 0,956 0,9517 0,9473 0,9597 0,9316 0,9543 0,9587 0,959 0,9622 0,9455 0,9589 0,9566 0,959 0,9429 0,9578 0,9605 0,9558 0,9564 0,9653 0,9528 0,9523 0,9578 0,9504 0,957 0,9599 0,9571 0,9562 0,9677 0,9591 0,9596 0,959 0,9569 0,9495 0,9473 0,9623 0,9582 10 0,9604 0,9629 0,9607 0,9421 0,9594 0,9623 0,9521 0,9668 0,9592 0,9611 11 0,9525 0,9592 0,9501 0,9536 0,9538 0,9632 0,9547 0,9597 0,9712 0,9551 12 0,951 0,9491 0,956 0,9497 0,9498 0,9463 0,9515 0,9521 0,9458 0,9543 13 0,9621 0,9518 0,9507 0,9495 0,962 0,9548 0,9537 0,96 0,9507 0,9502 14 0,9397 0,9498 0,9655 0,9632 0,9598 0,9458 0,9547 0,9458 0,9651 0,9524 15 0,9556 0,9637 0,9632 0,9502 0,9618 0,9546 0,9561 0,9505 0,9553 0,9734 16 0,9662 0,9531 0,9391 0,9628 0,939 0,9544 0,9667 0,9523 0,9624 0,9545 17 0,9396 0,95 0,9627 0,9513 0,9606 0,9501 0,9438 0,9558 0,9667 0,9633 18 0,9654 0,9517 0,9658 0,9618 0,9547 0,9534 0,9539 0,9658 0,9495 0,9597 19 0,9652 0,9548 0,9508 0,9632 0,9544 0,9557 0,9518 0,9612 0,9651 0,9547 20 0,9537 0,9608 0,9595 0,9531 0,9471 0,9639 0,9408 0,961 0,9428 0,9507 Bảng PL 11 Khối lượng lớp SG khảo sát q trình dập viên lơ thăm dò Lần 10 0,2592 0,2644 0,2482 0,2601 0,2416 0,2512 0,2542 0,2444 0,251 0,2529 0,257 0,2582 0,2434 0,2566 0,2476 0,2315 0,2597 0,2741 0,25215 0,25993 0,2647 0,2635 0,2621 0,247 0,2557 0,2582 0,2622 0,2607 0,2461 0,2499 0,2479 0,2643 0,2603 0,2612 0,2492 0,2456 0,2659 0,244 0,2521 0,2586 0,2445 0,2541 0,2439 0,2651 0,2555 0,2578 0,2497 0,2435 0,2519 0,2498 0,2524 0,2442 0,2606 0,2445 0,2494 0,2444 0,2618 0,2521 0,2797 0,2474 0,2675 0,247 0,2506 0,2679 0,2647 0,2496 0,2551 0,269 0,2436 0,251 0,2453 0,2595 0,2618 0,2585 0,2575 0,2528 0,241 0,2452 0,259 0,2574 0,2449 0,2482 0,2579 0,2468 0,2501 0,2537 0,2491 0,2569 0,262 0,2512 10 0,2556 0,2455 0,2593 0,2664 0,2455 0,2657 0,2461 0,2567 0,2438 0,2557 11 0,2647 0,2502 0,2385 0,2498 0,2602 0,2442 0,2578 0,2459 0,2563 0,2591 12 0,2521 0,2441 0,2561 0,2538 0,2425 0,2804 0,2607 0,2507 0,2687 0,2477 13 0,2455 0,256 0,2628 0,2572 0,2314 0,2415 0,2435 0,2399 0,2604 0,2503 14 0,2526 0,2674 0,2376 0,2535 0,2354 0,2627 0,2445 0,256 0,2394 0,2652 15 0,2591 0,2437 0,2346 0,2474 0,2305 0,2375 0,249 0,2668 0,2604 0,2341 16 0,2294 0,2515 0,2676 0,2321 0,2563 0,257 0,255 0,2595 0,2444 0,251 17 0,2638 0,2613 0,258 0,249 0,245 0,2638 0,2607 0,24653 0,2555 0,2487 18 0,2481 0,2639 0,2503 0,2485 0,257 0,2715 0,2593 0,2383 0,2691 0,2553 19 0,23501 0,2456 0,2737 0,2507 0,2497 0,2585 0,2518 0,277 0,24 0,2485 20 0,2585 0,2615 0,255 0,2603 0,2498 0,2533 0,2684 0,2588 0,2667 0,25096 PL-11