bước đầu nghiên cứu loài nấm dùi trống leucocoprinus cepaestipes

i LỜI CẢM ƠN Đề hoàn thành tốt đề tài này ngoài sự cố gắng của bản thân, tôi còn nhận được sự giúp đỡ tận tình của nhiều người. Đầu tiên, tôi xin chân thành cảm ơn anh Phạm Ngọc Dương, cử nhân công nghệ sinh học làm việc tại vườn quốc gia Cát Tiên - Đồng Nai đã tận tình hướng dẫn, cung cấp tài liệu và chị Nguyễn Thị Anh hướng dẫn kỹ thuật thực hành trong thời gian thực tập tại đây. Anh chị đã tạo điều kiện giúp đỡ tôi trong thời gian hoàn thành đề tài. Xin chân thành cảm ơn viện công nghệ sinh học và môi trường, trường Đại Học Nha Trang đã tạo điều kiện tốt cho tôi thực hiện đề tài này. Xin chân thành cảm thầy cô trong bộ môn công nghệ sinh học trường đại học Nha Trang đã giúp đỡ tôi thực hiện tốt đề tài này. Xin cảm ơn chú Trần Văn Thành, tổng giám đốc vườn quốc gia Nam Cát Tiên cùng với anh chị trong vườn đã tạo cho tôi cơ sở để nghiên cứu tốt đề tài này. Xin gửi lời cảm ơn đến bố mẹ và các bạn, những người luôn bên cạnh ủng hộ, giúp đỡ, động viên tôi vượt qua mọi khó khăn để tôi có được ngày hôm nay. Đồng Nai, ngày 29 tháng 6 năm 2012 Sinh viên thực tập Đoàn Vũ Trang Đài ii MỤC LỤC LỜI MỞ ĐẦU vii CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU TÀI LIỆU 1 1.1 Tổng quan các loài nấm thực phẩm hiện nay 1 1.2 Tài nguyên nấm Việt Nam và sự cần thiết phát triển các loài nấm thực phẩm mới 5 1.3 Tổng quan về chi Leucocoprinus Pat 8 1.3.1 Các đặc diểm chi Leucocoprinus 8 1.3.2 Khóa phân loại một số loài trong chi Leucocoprinus 10 1.3.2.1 Leucocoprinus cepaestipes ( Sow.: Fr.) 12 1.3.2.2 Leucocoprinus cretaceus( Bull.: Fr) 15 1.3.2.3 Leucocoprinus birnbaumii (Corda) 17 1.3.2.4 Leucocoprinus ianthinus ( Cooke Ø Sacc.) 19 1.3.2.5 Leucocoprinus brebissonli 21 1.3.2.6 Leucocoprinus cygneus (J. Lange) 22 1.3.2.7 Leucocoprinus straminellus (Bagl.) 23 1.3.2.8 Leucocoprinus heinemanniii 25 1.4 Giá trị các loài trong chi Leucocoprinus 26 CHƯƠNG II: NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 28 2.2 NGUYÊN VẬT LIỆU 28 2.2.1 Vật liệu 28 2.2.2 Thiết bị và dụng cụ 28 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 2.3.1 Khảo sát sự sinh trưởng và phát triển tơ nấm trên môi trường thạch 29 2.3.2 Khảo sát sự phát triển của hệ sợi nấm trên môi trường hạt 30 2.3.3 Khảo sát sự phát triển của tơ nấm trên môi trường mùn cưa 31 2.3.4 Thí nghiệm tiến hành thử độc sơ cấp 33 CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 iii 3.1 KẾT QUẢ PHÂN TÍCH VÀ HÌNH THÁI GIẢI PHẪU 34 3.2 KẾT QUẢ KHẢO SÁT TỐC ĐỘ LAN TƠ NẤM TRÊN MÔI TRƯỜNG THẠCH36 3.2.1 Tốc độ lan tơ của sợi nấm trên môi trường 1 37 3.2.2 Tốc độ lan tơ của sợi nấm trên môi trường 2 39 3.2.3 Tốc độ lan tơ của sợi nấm trên môi trường 3 40 3.2.4 So sánh tốc độ lan tơ của nấm Leucocoprinus cepaestipes trên 3 môi trường41 3.3 KHẢO SÁT TỐC ĐỘ PHÁT TRIỂN HỆ SỢI TRÊN MÔI TRƯỜNG HẠT 42 3.4 KHẢO SÁT TỐC ĐỘ PHÁT TRIỂN HỆ SỢI NẤM TRÊN GIÁ THỂ MÙN CƯA44 3.5 KẾT QUẢ THỬ ĐỘC TRÊN CHUỘT 49 3.6 KẾT QUẢ PHÂN TÍCH THÀNH DINH DƯỠNG 50 CHƯƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 52 KẾT LUẬN 52 ĐỀ XUẤT Ý KIẾN: 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 54 PHỤ LỤC 55 PHỤ LỤC 55 iv DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Thành phần giá trị dinh dưỡng có trong nấm 2 Bảng 1.2: Tóm tắt các đặc điểm các loại nấm trồng phổ biến hiện nay 4 Bảng 2.1: Thành phần môi trường 1 29 Bảng 2.2: Thành phần môi trường 2 29 Bảng 2.3: Thành phần môi trường 3 30 Bảng 2.4: Thành phần môi trường mùn cưa dinh dưỡng 4% 32 Bảng 2.5: Thành phần môi trường mùn cưa dinh dưỡng 7% 32 Bảng 2.6: Thành phần môi trường mùn cưa dinh dưỡng 12% 32 Bảng 3.7: Bảng thành phần dinh dưỡng của nấm Leucocoprinus cepaestipes 50 Bảng 3.8: So sánh thành phần dinh dưỡng của nấm Leucocoprinus cepaestipes với một số loại nấm thực phẩm phổ biến hiện nay. 50 v DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 3.2: Hình thái phiến nấm 35 Hình 3.3: Hình thái bào tử 35 Hình 3.4: Hình thái đảm bào tử 35 Hình 3.5: Giống nấm sau 8 ngày phân lập 37 Hình 3.6: Đĩa thạch sau 4 ngày nuôi cấy 37 Hình 3.7: Đĩa thạch sau 12 ngày nuôi cấy 37 Hình 3.8: Tốc độ phát triển của tơ nấm trên môi trường 1 38 Hình 3.9: Đĩa thạch sau 4 ngày nuôi 39 Hình 3.10: Đĩa thạch sau 12 ngày nuôi 39 Hình 3.11: Tốc độ lan tơ trên môi trường 2 39 Hình 3.12: Tơ nấm sau 4 ngày nuôi cấy 40 Hình 3.13: Tơ nấm sau 12 ngày nuôi cấy 40 Hình 3.14: Sự phát triển tơ nấm trên môi trường 3 41 Hình 3.15: So sánh tốc độ phát triển tơ nấm trên 3 môi trường 42 Hình 3.16: Tơ nấm khi lan đầy bình thóc 43 Hình 3.17: Sự phát triển của tơ nấm trên môi trường hạt thóc 43 Hình 3.18: Tơ nấm lan đầy bịch cọng mì 45 Hình 3.19: Tốc độ lan tơ trên giá thể mùn cưa. 45 Hình 3.20: Bịch phôi đầy tơ 47 Hình 3.21: Các giai đoạn hình thành quả thể nấm Leucocoprinus cepaestipes. 47 vi KÍ HIỆU CÁC CỤM TỪ VIẾT TẮT L - number of lamellae: số lượng phiến nấm. l - number of lamellulae between two lamellae: số lượng phiến phụ. Q - quotient of length and width or breadth: tỉ lệ chiều dài và chiều rộng. Qav - average quotient: tỉ lệ trung bình. Var. - variety: sự đa dạng. Et al. - et alli: cộng sự. vii LỜI MỞ ĐẦU Nấm là loại thực phẩm bổ dưỡng được sử dụng từ xa xưa. Bên cạnh những loài nấm có giá trị cao còn có các loại nấm độc gây chết người. Ngày nay, vẫn có nhiều loại nấm chưa được biết đến và nghiên cứu, nấm dùi trống Leucocoprinus cepaestipes là một trong những loài nấm ấy. Chi Leucocoprinus đã đươc nghi nhận có ở miền Bắc và Trung Việt Nam với khoảng 7 loài (Trịnh Tam Kiệt, 1998). Tuy nhiên các miêu tả chuẩn và mẫu vật chuẩn còn nhiều khiếm khuyết, mới chỉ có ghi nhận trong danh lục mà hầu như chưa có các các tài liệu mô tả về hình thái, hiển vi của các loài nấm này ở Việt Nam. Nhiều loài trong chi Leucocoprinus được xác định là không có độc tố, có thể sử dụng làm thực phẩm và dược liệu có tác dụng kháng các tế bào ung thư do trong đó có một hoạt chất sinh học gọi là birnbaumin A and B được phát hiện có trong loài Leucocoprinus birnbaumii (Corda) Singer. Đây là một nghiên cứu đã được công bố. Birnbaumin A (R=H) and B (R=OH). Đề tài này nghiên cứu loài nấm leucocoprinus cepaestipes (sow.: fr.) Pat. phát hiện ở Vườn quốc gia Cát Tiên, đây là một loài nấm mới bổ sung cho khu hệ nấm lớn Việt Nam. Mục đích đề tài nhằm bổ sung các giữ liệu cần thiết về đặc điểm phân loại, giá trị, độc tính đồng thời tiến hành nghiên cứu nuôi trồng thử nghiệm loài nấm này trên các giá thể tổng hợp, góp phần tạo ra các chủng nấm ăn mới có giá trị cho Việt Nam. 1 CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan các loài nấm thực phẩm hiện nay Từ xa xưa nấm đã được truyền tụng như một món ăn quý, là thức ăn của vua chúa. Ngày nay giá trị của loại sản phẩm này càng tăng lên nhờ những chứng minh của khoa học về dinh dưỡng và khả năng trị bệnh của chúng. Ngoài ra do nuôi trồng chủ động, nấm cũng trở thành thức ăn phổ biến rộng rãi. Hiện nay, đã ghi nhận khoảng trên 1 triệu loài nấm trong đó có hơn 80 loài nấm ăn ngon và được nghiên cứu nuôi trồng. Đặc biệt, có những loài có giá trị thương mại rất cao, như nấm nữ hoàng (Dictyophara duplicata). Loài nấm được trồng nhiều nhất trên thế giới là nấm mỡ Agaricus bisporus và A. bitorquis với hơn 70 nước nuôi trồng. So với các loại nông sản khác thì giá của một số loại nấm thông dụng như: nấm rơm, bào ngư, nấm mèo, nấm đông cô… không thua kém, nếu không muốn nói là hơn hẳn nhiều loại rau trái.[1] Hầu hết những loài nấm được nuôi trồng và sử dụng rộng rãi hiện nay ngoài đặc điểm ăn ngon, còn chứa nhiều chất đường, nhất là các nguyên tố khoáng và vitamin. 2 Bảng 1.1: Thành phần giá trị dinh dưỡng có trong nấm ( trích Sổ tay hướng dẫn trồng nấm, Lê Duy Thắng - Trần Văn Minh, nhà xuất bản nông nghiệp TP Hồ Chí Minh). [3] LOẠI NẤM Thành phần (/100g nấm khô) Nấm rơm Nấm mèo Nấm bào ngư Nấm đông cô Nấm mỡ Nước 90.10 87.10 90.80 91.80 88.70 Protein thô 21.2 7.7 30.4 13.4 23.9 Carbonhydrat(g) 58.6 87.6 57.6 78.0 60.1 Béo (g) 40.1 0.8 2.2 4.9 8.0 Xơ (g) 44.1 14.0 9.8 7.3 8.0 Tro (g) 40.1 3.9 9.8 3.7 8.0 Canxi (mg) 71.0 239 33 98 71.0 Phospho (mg) 677 256 1348 476 912 Sắt (mg) 47.1 64.5 15.2 8.5 8.8 Natri (g) 374 72 837 61 106 Kali (g) 345.5 984 3793 0 2850 Vitamin B1 (mg) 4.2 0.2 4.8 7.8 8.9 Vitamin B2 (mg) 3.3 0.6 4.7 4.9 3.7 Vitamin PP (mg) 91.9 4.7 108.7 54.9 42.5 Vitamin C (mg) 20.2 0 0 0 26.5 Năng lượng (kcal) 369 347 345 392 381 Mặc dù nhiều thành phần khác nhau nhưng nói chung nấm cung cấp nhiều dinh dưỡng cho cơ thể, mà không gây hậu quả bất lợi như đạm của động vật hay đường hoặc bột của thực vật. Ngoài ra, nấm còn chứa những hoạt chất sinh học có thể giúp phòng ngừa và diều trị bệnh như: acid folic, retine, leutinan… Nấm còn chứa muối natri tốt cho những người bị bệnh viêm thận hoặc suy tim có biến chứng phù. Nhiều công trình nghiên cứu về y học xem nấm như là một loại thuốc có khả 3 năng phòng chống bệnh ung thư. Có thể nói nấm là loài thực phẩm tốt cho con người. [3] Nấm được sản xuất nhiều ở các nước công nghiệp do áp dụng kỹ thuật tiên tiến, năng suất được nâng cao. Thí dụ như nấm mỡ, với cách trồng công nghiệp và bằng dàn kệ thì 1m 2 đất có thể thu 60 kg nấm tươi cho 1 vụ. Đối với châu Âu, trồng nấm trở thành ngành công nghiệp, các khâu trong quá trình nuôi trồng đều được cơ khí hóa hoặc tự động hóa. Vì vậy, người ta có thể tính gần như chính xác lời lỗ, cũng như hiệu quả của việc nuôi trồng nấm. Ở châu Á, Nhật là nước đi đầu trong việc đưa máy móc vào qui trình trồng nấm. Nhiều nhà máy với những dây chuyền gần như tự động hóa và sản lượng nấm có thể lên tới hàng chục ngàn tấn năm. Phần lớn các nước châu Á còn lại và nhất là các nước Đông Nam Á trồng nấm mang tính thủ công, lệ thuộc nhiều vào thời tiết nên tỉ lệ rủi ro cao. [1] Nước ta là một nước nông nghiệp, có nhiều điều kiện phát triển cho nghề trồng nấm. Điều kiện cơ bản quyết định khả năng nuôi trồng nấm ở nước ta là cơ chất, nhiệt độ, độ ẩm, giống, công nghệ nuôi trồng. Về cơ chất, Việt Nam là một nước nông nghiệp nhiệt đới, vì vậy cơ chất giàu chất xơ (cellulose) dùng để nuôi trồng nấm rất phong phú như rơm rạ, cỏ khô, thân ngô, dây lạc, lõi ngô, mùn cưa, gỗ vụn, gỗ cành, bông phế thải, khô dầu… Về giống và công nghệ, các nhà khoa học đã có trong tay một số lượng khá phong phú các giống nấm và công nghệ nuôi trồng thông qua quá trình tự nghiên cứu hoặc trao đổi quốc tế. Lực lượng lao động dồi dào và giá công lao động rẻ, tính trung bình một lao động nông nghiệp mới chỉ dùng đến 30 - 40% quỹ thời gian, chưa kể đến lao việc lao động phụ đều có thể tham gia trồng nấm được. Ngoài ra, điều kiện tự nhiên ở nước ta rất thích hợp cho nấm phát triển. Cả hai nhóm nấm: ưa nhiệt độ cao và ưa nhiệt độ thấp đều trồng được ở Việt Nam. Tùy vào từng địa phương và nguyên liệu có sẵn mà chọn loại nấm trồng thích hợp. Khí hậu miền Nam nước ta thích hợp trồng nấm rơm quanh năm (Volvariella volvacea), nhiều loài nấm sò hay còn gọi là nấm bào ngư (Pleurotus spp), mộc nhĩ hay còn gọi nấm mèo ( Auricularia spp.). Riêng vùng núi cao (Đà Lạt…) có thể trồng một số loài nấm ưa lạnh như các vùng núi miền Bắc [...]... T LI U VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 2.1 I TƯ NG NGHIÊN C U - cepaestipes i tư ng nghiên c u c a tài này là loài n m dùi tr ng Leucocoprinus ư c phát hi n t i vư n qu c gia Cát Tiên - Gi ng n m Leucocoprinus cepaestipes ư c l y t phòng thí nghi m n m Cát Tiên - Các m u v t c a n m Leucocoprinus cepaestipes ư c l y t phòng thí nghi m n m Cát Tiên và sưu t p t t nhiên s d ng cho các nghiên c u hình thái 2.2... loài Leucocoprinus cepaestipes có th th y: loài này ư c Patouillard mô t u tiên vào năm 1935 ng th i ư c các tác gi Dennis (1952), Horak (1968), Pegl (1977), Chiusa (1998), Pegl (1986, 1997) mô t trong các công trình nghiên c u c a mình Cadusso & Lanozi mô t loài này v i tên Lepiota cepaestipes Nhìn chung, ph n l n tác gi d ng danh pháp Leucocoprinus cepaestipes u công nh n và th ng nh t s miêu t loài. .. tính s loài n m có th có trên lãnh th Vi t Nam g p 6 l n s loài th c v t b c cao ( Hawksworth 1991, 2001) thì s loài có th lên t i 72000 loài i u ó có nghĩa là hơn 90% s loài n m có th có c a Vi t Nam còn chưa ư c nh loài và nêu tên trong danh l c Trong danh l c th c v t Vi t Nam ph n n m (2001), s lư ng loài n m ch có kho ng 2250 loài, trong ó các loài n m Nang (Ascomycota) còn r t ít so v i các loài. .. Pháp, c), thư ng là vùng nhi t t,trong ư c ghi nh n i 1.4 Giá tr các loài trong chi Leucocoprinus [7] Hi n nay trên th gi i chưa có nhi u nghiên c u v giá tr c a các loài trong chi n m này Ch có m t nghiên c u v loài Leucocoprinus birnbaumii, m t loài n m thư ng m c trong ch u hoa, mũ n m có màu vàng, không gây h i cho cây Các nhà nghiên c u ã ti n hành phân l p s c t vàng này và th t áng ng c nhiên,... tr dinh dư ng c a n m, c tính và ng th i ti n hành nghiên c u nuôi tr ng th nghi m n m Leucocoprinus cepaestipes 1.2 Tài nguyên n m Vi t Nam và s c n thi t phát tri n các loài n m th c ph m m i [4] Vi t Nam là m t trong nh ng qu c gia có a d ng sinh h c cao trên th gi i v i kho ng 12000 loài th c v t b c cao và 3000 loài ư c mô t , trong ó có nh ng loài văn a d ng, khí h u nhi t nên s ăn c h u C u trúc... in N Amer Fl cũng ã x p Leucocoprinus vào nhóm (section) Lepiota striatae Năm 1990 và năm 1996 Candusso & Lanzoni có 2 công trình công b trên các t p chí qu c t , trong ó mô t các loài Leucocoprinus trong chi Lepiota Tuy nhiên, hi n nay quan ni m c a PAT v chi Leucocoprinus v n còn ư c th a nh n r ng rãi, và là danh pháp chu n mô t các loài trong chi này Như h th ng chi ư c nghiên c u dư i ây, ây là... b t, bào t hình g n hình c u hình elip m r ng, phát tri n n nhà kính L.straminellus var albus (see notes under 7 L.straminellus) 1.3.2.1 Leucocoprinus cepaestipes ( Sow.: Fr.) Tên khoa h c: Leucocoprinus cepaestipes ( Sow.: Fr.) Thu c h : Agaricaceae Leucocoprinus cepaestipes sensu Dennis in Kew Bull 7-462: 488 1932; sensu Horak Syn Gen Agar: 346-348 1968; sensu Pegl Pret Agaric Fl East Africa: 318... kh c ph c tình tr ng t t h u so v i vi c nghiên c u th c v t b c cao và ng v t có xương s ng, b o t n ngu n gen n m l n và phát huy nh ng giá tr tài nguyên quý, chúng ta c n m t cách y u tư thích áng hơn nh m y m nh vi c nghiên c u khu h n m l n Vi t Nam trong th i gian t i 8 1.3 T ng quan v chi Leucocoprinus Pat N m dùi tr ng có tên khoa h c là Leucocoprinus cepaestipes V trí phân lo i n m này: Gi... (tham kh o Pegler, Agaric Fl Sri Lanka 323-324 1986 for an extensive list, under L cepaestipes) Pegler (e.g Agaric Fl Sri Lanka: 323-324 1986), và nhi u tác gi ngư i Anh khác ã s d ng tên L cepaestipes (Sow.:Fr) Pat cho loài n m tr ng này Tuy nhiên, hi n t i thì tên Leucocoprinus cepaestipes thư ng ư c s d ng cho m t loài n m có v y nh màu nâu ( e.g Candusso& Lanzoni, Lepiota: 472-474 1990) theo gi... hoang dã và có quanh i Leucocoprinus heinemanniii Tên khoa h c: Leucocoprinus heinemanni Leucocoprinus heinemanni Migl in Micol Ital 16(2): 8 1987 là tên s d ng hi n t i Loài n m này ư c mô t d a trên bài vi t ã công b c a Migl et al in Riv Micol 32: 13 1989; Migl & Zecchin in Belg J Bot 131: 172.(‘1998’) 1999 Khi nhìn b ng m t thư ng, ta có th th y Leucocoprinus heinemanni gi ng loài Leucoagaricus melanotrichus . biết đến và nghiên cứu, nấm dùi trống Leucocoprinus cepaestipes là một trong những loài nấm ấy. Chi Leucocoprinus đã đươc nghi nhận có ở miền Bắc và Trung Việt Nam với khoảng 7 loài (Trịnh. hiện có trong loài Leucocoprinus birnbaumii (Corda) Singer. Đây là một nghiên cứu đã được công bố. Birnbaumin A (R=H) and B (R=OH). Đề tài này nghiên cứu loài nấm leucocoprinus cepaestipes. giá trị kinh tế. Nấm dùi trống là loại nấm mới phát hiện ở Việt Nam, thuộc chi Leucocoprinus chưa được nghiên cứu trong nước nhưng đã có một vài nghiên cứu ở nước ngoài. Nhiều loài trong chi