MÙN CƯA
Trước khi khảo sát khả năng lan tơ trên môi trường mùn cưa, chúng tôi tiến hành cấy nhân giống trên môi trường cọng mì bổ sung cám gạo trước với mục đích tạo ra được số lượng giống lớn, và đồng thời huấn luyện nấm thích nghi dần với môi trường trước khi đưa ra mùn cưa.
Sau 13 ngày cấy giống trên môi trường cọng mì tơ nấm đã lan đầy bịch, thích hợp cho việc cấy ra môi trường mùn cưa.
Hình 3.18: Tơ nấm lan đầy bịch cọng mì
Sau khi tơ nấm đã phát triển đầy bịch tiến hành cấy khảo sát ra môi trường mùn cưa. Chúng tôi sử dụng môi trường mạt cưa theo tỉ lệ phối trộn chất dinh dưỡng khác nhau 4%, 7%, 12% để khảo sát xem môi trường nào thích hợp cho tơ nấm phát triển tốt nhất. Từ đó đưa ra quy trình trồng thử nghiệm loài nấm này khi đã phân lập và cấy chuyền. Số liệu khảo sát xem Bảng 3.6, Phụ lục 3.
Trên môi trường giá thể mùn cưa 7% chỉ sau 3 ngày cấy thì nấm bắt đầu bung tơ. Những ngày đầu bung tơ, tơ nấm mảnh sang ngày thứ 9 tơ nấm bện lại chặt hơn và chiều dài sợi tơ đạt 2.97cm. Tơ nấm lan đến đâu bện chặt lại tại đó. Khi tơ nấm bện chặt lại, kết cấu tơ chặt chẽ thì cũng xuất hiện các hạt nhỏ màu đen đồng thời có hiện tượng tiết dịch vàng trong bịch mùn cưa. Sau 37 ngày cấy nấm, bịch phôi mới phát triển hoàn chỉnh. Thời gian tối ưu cho tơ nấm phát triển là ngày thứ 17.
Còn trên giá thể mùn cưa 12% sau 8 ngày nuôi cấy nấm mới bắt đầu bung tơ. Tơ nấm lúc đầu cũng mỏng, sau đó sợi nấm kết chặt lại. Tới ngày thứ 9, tơ nấm lan được 1.53 cm. Thời gian bung tơ Leucocoprinus cepaestipes trên môi trường 12%
chậm hơn nhiều so với môi trường 7 %. Vì thành phần dinh dưỡng của môi trường cao nên khi tơ lan đến đâu sẽ bện chặt lại tại đó. Khi kết cấu tơ nấm chăt lại sẽ thấy các hạt màu đen rõ hơn và có tiết dịch vàng trong bịch phôi. Mặc dù thời gian bung tơ dài, những ngày đầu hệ sợi phát triển chậm hơn nhiều so với tơ trên môi trường 7% nhưng tới ngày thứ 28 tơ nấm phát triển mạnh, lan nhanh hơn so với hệ sợi trên môi trường 7%. Và sau 33 ngày cấy nấm, tơ phát triển đầy bịch phôi. Thời gian tơ phát triển tốt nhất là ngày thứ 28.
Đồng thời với việc khảo sát sự phát triển của tơ nấm trên giá thể mùn cưa giàu dinh dưỡng 7%, 12%, chúng tôi còn tiến hành thử nghiệm trên môi trường mùn cưa 4% để xem xét khả năng phát triển của hệ sợi trên môi trường nghèo dinh dưỡng hơn. Kết quả cho thấy, trên môi trường nghèo dinh dưỡng nhưng hệ sợi phát triển nhanh hơn, chỉ sau 3 ngày cấy, nấm đã bắt đầu bung tơ và sau 26 ngày nuôi cấy tơ nấm lan đầy bịch phôi. Thời gian phát triển tơ nấm ngắn hơn nhiều so với môi trường 7%, 12%. Tuy nhiên, trên môi trường mùn cưa này tơ nấm mỏng, không bện chặt như trên 2 môi trường còn lại. Do thành phần dinh dưỡng nghèo nên tơ phát triển theo chiều dọc bịch sau đó các sợi nấm mới tiến hành bện lại với nhau, điều đó làm cho tơ phát triển nhanh đầy bịch phôi.
Hình 3.20: Bịch phôi đầy tơ
Sau khi đã tiến hành khảo sát tơ nấm trên môi trường mùn cưa, chúng tôi chuyển bịch phôi ra nhà nuôi chăm sóc ở điều kiện thích hợp: nhiệt độ 27-320C, độ ẩm 90-95%, tưới phun sương hàng ngày. Khi chuyển bịch phôi ra nhà nuôi chăm sóc, sau 2 tuần chăm sóc thì nấm ra quả thể trên bịch phôi 4%. Từ lúc nhú quả thể tới khi thu hái chỉ cần 2 ngày.
Sau khi đã tiến hành khảo sát giữ giống, nhân giống và quá trình chăm sóc tơ nấm, chăm sóc bịch phôi chúng tôi đã đưa ra qui trình nuôi trồng khảo nghiệm:
Thuyết minh quy trình
Giống nấm sau khi phân lập thành công, tiến hành cấy chuyền giống, nhân giống trong sản xuất. Môi trường thích hợp cho việc nhân giống cấp 1 là môi trường thạch dinh dưỡng, chỉ sau 8 ngày cấy giống ta có thể tiến hành nhân giống. Tạo giống cấp 2 trên môi trường hạt thóc bổ sung 10% cám gạo giúp tơ nấm thích nghi dần với môi trường. Thời gian nhân giống nhanh, chỉ sau 12 ngày cấy giống có thể
ủ nhiệt độ 28-320C, thời gian 26- 27 ngày, ánh sáng khuếch tán nhẹ, độ ẩm 80-85%
Nuôi nhiệt độ 27-320C thời gian 14 ngày, ánh sáng khuếch tán nhẹ, độ ẩm 90-95%
Giá thể mùn cưa dinh dưỡng 4%
Giá thể vô trùng
Giá thể đã cấy giống
Bịch phôi
Hình thành quả thể
Bổ sung dinh dưỡng Hấp khử trùng
Cấy giống
Sản phẩm Thu hái
tiếp tục nuôi cấy ở môi trường giá thể tiếp theo. Để nấm thích nghi với môi trường nghèo dinh dưỡng và đồng thời tạo meo giống với số lượng lớn, ta tiến hành cấy giống trên môi trường cọng mì, sau 13 ngày tơ nấm phát triển đầy bịch, thích hợp cho việc cấy vào bịch phôi. Chúng tôi sử dụng giá thể mùn cưa có bổ sung 4% dinh dưỡng, với thành phần như sau:
Thành phần Tỷ lệ Mùn cưa 95% Cám gạo 2.8% Cám ngô 1.2% DAP 0.3% Bột đá 0.7%
Sau khi cấy giống vào bịch phôi tiến hành ủ tơ điều kiện nhiệt độ 28-320C, ánh sáng khuếch tán nhẹ, độ ẩm 80 - 85%, sau 27 ngày tơ nấm lan đầy bịch. Tiến hành đem bịch phôi ra nhà nuôi, đảm bảo điều kiện nhiệt độ 27- 320C, độ ẩm 90 - 95% , tưới đón nấm theo phun sương. Sau 14 ngày nấm ra quả thể, chỉ sau 2 ngày có thể tiến hành thu hái.
3.5 KẾT QUẢ THỬ ĐỘC TRÊN CHUỘT
Chúng tôi tiến hành thử độc sơ cấp trên chuột, kết quả:
- Khi cho chuột ăn nấm với liều lượng 60g/1kg so với nhóm chuột cho ăn thức ăn tổng hợp với cùng một liều lượng trong một giờ, kết quả chuột vẫn khỏe mạnh, không có dấu hiệu khả nghi.
- Khi cho chuột ăn với liều lượng 160 g nấm trên 1 kg chuột so với nhóm chuột thí nghiệm ăn thức ăn tổng hợp với cùng liều lượng trong nhiều ngày liền. Quan sát thấy chuột vẫn khỏe mạnh, không chết, không có dấu hiệu bất thường.
Sau khi ăn nấm với liều lượng như trên, chuột vẫn ăn uống, hoạt động và bài tiết bình thường. Không thấy có biểu hiện ngộ độc ở chuột và không có chuột nào chết trong vòng 72 giờ và 7 ngày sau khi ăn nấm. Do đó chưa xác định được độc tính cấp và chưa tính được LD50 của nấm Leucocoprinus cepaestipes trên chuột nhắt trắng theo đường miệng.