bước đầu nghiên cứu thành phần polysaccharide trong lá mãng cầu xiêm (annona muricata) trồng tại huyện tân đông phú, tỉnh tiền giang

ĐẠI HỌC HUẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC KHOA HÓA HỌC  Khóa luận Tốt nghiệp Cử nhân Khoa học BÆÅÏC ÂÁÖU NGHIÃN CÆÏU THAÌNH PHÁÖN POLYSACCHARIDE TRONG LAÏ MAÎNG CÁÖU XIÃM (ANNONA MURICATA) TRÄÖNG TAÛI HUYÃÛN TÁN ÂÄNG PHUÏ, TÈNH TIÃÖN GIANG Nguyễn Công Đức Khóa 2010- 2014 Huế, 6/2014 ĐẠI HỌC HUẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC KHOA HÓA HỌC  Khóa luận Tốt nghiệp Cử nhân Khoa học BÆÅÏC ÂÁÖU NGHIÃN CÆÏU THAÌNH PHÁÖN POLYSACCHARIDE TRONG LAÏ MAÎNG CÁÖU XIÃM (ANNONA MURICATA) TRÄÖNG TAÛI HUYÃÛN TÁN ÂÄNG PHUÏ, TÈNH TIÃÖN GIANG Chuyên ngành: Hóa Hữu cơ Sinh viên thực hiện: Nguyễn Công Đức Giáo viên hướng dẫn: PGS.TS. Trần Thị Văn Thi Huế, 6/2014 Lời Cảm Ơn Những lời đầu tiên trong bài khóa luận này, tôi xin được bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến giáo viên hướng dẫn khoa học của tôi, cô PGS.TS. Trần Thị Văn Thi đã tận tình hướng dẫn, chỉ bảo và những giúp đỡ của cô về cả vật chất lẫn tinh thần để tôi có thể hoàn thành tốt khóa luận tốt nghiệp. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến thầy Ths. Lê Trung Hiếu đã tận tình chỉ bảo, giúp tôi nâng cao tay nghề cũng như rèn luyện những kĩ năng cần thiết trong cuộc sống, giúp tôi ngày một hoàn thiện và trưởng thành hơn, đỡ bỡ ngỡ trước khi bước chặng đường khó khăn phía trước. Tôi cũng xin gởi lời cảm ơn đến anh Nguyễn Ngọc Hưng (CH K20), bạn Lý A Phồn (Hóa K34) và các em Hóa K35 đã đồng hành cùng tôi trong suốt khoảng thời gian làm thực nghiệm vừa qua. Xin chân thành cảm ơn các thầy cô trong khoa Hóa, bộ môn Hóa Hữu cơ, phòng thí nghiệm Hóa học Ứng dụng đã tận tình giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi để tôi hoàn thành khóa luận. Tôi cũng xin chân thành cảm ơn đến tập thể Lớp Hóa K34 đã giúp đỡ tôi trong suốt thời gian làm khóa luận. i Cuối cùng xin được cảm ơn gia đình, thầy cô và bạn bè đã đồng hành cùng tôi trong suốt quãng đời sinh viên. Huế, ngày 05 tháng 06 năm 2014 Nguyễn Công Đức ii TÓM TẮT Trong khoá luận này, chúng tôi đã tiến hành tách chiết, định lượng polysaccharide trong lá mãng cầu xiêm (Annona muricata). Mẫu polysaccharide sau 5 lần loại protein tự do có hàm lượng PS là 20,43% và protein là 28,47%, như vậy có thể có sự tồn tại của heteropolysaccharide dưới dạng liên kết với protein. Đã tiến hành phân đoạn và thu được 2 phân đoạn heteropolysaccharide là: PS-5a và PS-5b. Trong đó PS-5a có hàm lượng PS chiếm đến 60,92% và có lực kháng oxi hóa tổng cộng cao hơn cả polysaccharide tách chiết từ linh chi Phú Lương Thừa Thiên Huế. Bước đầu nghiên cứu cấu trúc polysaccharide của phân đoạn PS-5a và cho thấy có bộ khung chính là arabinogalactan. Từ khoá: Annona muricata, kháng oxy hoá, polysaccharide, cấu trúc PS, arabinogalactan. iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ TỪ NGỮ VIẾT TẮT STT Từ viết tắt Thuật ngữ 1 EtOH C 2 H 5 OH 2 GC-MS Gas Chromatography–Mass Spectrometry (Sắc ký khí ghép khối phổ) 3 MCX Mãng cầu xiêm 4 MeOH CH 3 OH 5 MS Monosaccharide 6 PS Polysaccharide 7 TFA Trifluoroacetic acid iv MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN I TÓM TẮT III DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ TỪ NGỮ VIẾT TẮT IV MỤC LỤC V DANH MỤC CÁC BẢNG VIII DANH MỤC CÁC HÌNH X MỞ ĐẦU 1 CHƯƠNG 1 2 TỔNG QUAN 2 1.1. Tổng quan về lá mãng cầu xiêm 2    !"#$%&'( )*+,- ./(0123 1.2. Tổng quan về polysaccharide và cấu trúc của polysaccharide trong lá MCX 4 !45 #(62  ',7) /(0123 #(62  ',7) *8'9 #(62  ',7. 1.3. Phương pháp phân đoạn polysaccharide thô bằng amonium sulfate 6 1.4. Các phương pháp xác định cấu trúc polysaccharide lá MCX 6 ):;1"#<=> ):?$###4@(0A 1.5. Tổng quan về gốc tự do và chất kháng oxy hóa 7 .BC,(A .*8D(6E F CHƯƠNG 2 12 ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1. Đối tượng nghiên cứu 12 v G6 /E 8HI%J",-- 2.2. Nội dung nghiên cứu 12 2.3. Phương pháp nghiên cứu 12 :?$##HJ, "KLM :?$##DB?NJOP MD+ :?$##J1EN#8) ):?$##I'QRS"#?$##ISRS> .:?$##J?NA >:?$###;(0:=R.HTF F:?$##0(,M8 ((2  ',7"#;1%U*R<=JV"# ((2  ',7T W:4@(0XY T:?$##D&(2(01D(6E 4OZ!( [\(, * # 6]A :?$##KL2B CHƯƠNG 3 24 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 3.1. Độ ẩm của mẫu lá 24 3.2. Định tính các nhóm hợp chất hữu cơ trong cao nước 24 3.3. Thành phần PS và protein trong PS thô 27 /"?N:=A /"?N#'(7'(:=+W 3.4. Khảo sát quá trình loại protein tự do và thành phần của mẫu sau khi loại protein tự do 31 )/"?N:=2 D(0#'(7C,( )/"?N#'(7'(M2 D(0#'(7C,( 3.5. Phân đoạn của PS-5 và thành phần của các phân đoạn thu được 33 .:;(0:=^:=R.%U (2_ 7) ./"?N:="#'(7'(M:=R. ":=R.%) 3.6. Lực kháng oxi hóa tổng cộng của các mẫu PS-5a và PS-5b 35 3.7. Nghiên cứu cấu trúc polysaccharide trong PS-5 36 A:4@(0XY :=R.> A!"#((2  ',7 #(62  ',7E'(:=R. A A`JJ'aDI6(2,7'(:=R. A KẾT LUẬN 40 KIẾN NGHỊ 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 vi [...]... sống Xuất phát từ những yếu tố đó, chúng tôi chọn đề tài: Bước đầu nghiên cứu thành phần polysaccharide trong lá mãng cầu xiêm (Annona muricata) trồng tại huyện Tân Đông Phú, tỉnh Tiền Giang 1 Chương 1 TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan về lá mãng cầu xiêm 1.1.1 Giới thiệu về lá mãng cầu xiêm [31] Mãng cầu xiêm (danh pháp khoa học: Annona muricata) thuộc Loài A muricata, Chi Annona, Họ Annonaceae, Bộ Magnoliales,... Phú, tỉnh Tiền Giang 12 - Bộ phận sử dụng: lá - Tiêu chuẩn lựa chọn: lá già, tươi, chưa vàng và có mùi thơm 2.3.1.2 Định danh Mẫu lá được lấy ngẫu nhiên trên các cây trồng thuộc dự án: Mãng cầu xiêm cây trồng xóa nghèo ở huyện cù lao tỉnh Tiền Giang do chính phủ Mỹ tài trợ và được dự án định danh thuộc loài Annona muricata Hình 2.1 Lá cây mãng cầu xiêm Annona muricata 2.3.1.3 Xử lý mẫu Mẫu lá sau... dụng [31] - Mãng cầu xiêm được dùng làm thực phẩm tại nhiều nơi trên thế giới - Mãng cầu xiêm (lá, rễ và hạt) được dùng làm thuốc tại rất nhiều nơi trên thế giới, nhất là tại những quốc gia Nam Mỹ: + Tại Peru: lá mãng cầu xiêm được dùng làm thuốc trị cảm, xổ mũi, hạt nghiền nát làm thuốc trừ sâu bọ, trong vùng Amazon, vỏ cây và lá dùng trị tiểu đường, giảm đau, chống co giật + Tại Guyana: lá và vỏ cây,... đó, vitamin C sẽ đóng vai trò là chất tiền oxy hóa xúc tác phản ứng Fenton tạo các gốc tự do O2•-, HO• và H2O2 [32] 11 Chương 2 ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu 2.1.1 Nguyên liệu Đối tượng nghiên cứu của khóa luận là lá của cây mãng cầu xiêm thuộc loài Annona muricata, chi Annona được thu mua tại huyện Tân Đông Phú, tỉnh Tiền Giang 2.1.2 Hóa chất, thiết bị và dụng... dung nghiên cứu 1 Tách chiết, định tính và định lượng polysaccaride tan trong nước của lá mãng cầu xiêm 2 Phân đoạn và xác định thành phần các hợp chất trong mẫu PS 3 Đánh giá khả năng kháng oxy hóa của các phân đoạn PS 3 Nghiên cứu cấu trúc PS phân lập được 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp thu hái, định danh và xử lý mẫu 2.3.1.1 Lấy mẫu - Mẫu được lấy vào tháng 7/2012 tại huyện Tân Đông Phú,. .. của lá mãng cầu xiêm [4], nhưng chưa đề cập đến cấu trúc của thành phần polysaccharide Vì vậy, việc nghiên cứu cấu trúc của polysaccharide trong lá mãng cầu xiêm là một vấn đề không chỉ có ý nghĩa quan trọng về mặt khoa học mà còn đáp ứng nhu cầu cấp thiết hướng tới ứng dụng các hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học vào đời sống Xuất phát từ những yếu tố đó, chúng tôi chọn đề tài: Bước đầu nghiên. .. có những nốt phù thành những múi nhỏ nhọn hay cong, chứa nhiều hạt màu đen 2 1.1.3 Thành phần cơ bản trong lá mãng cầu xiêm Trong lá mãng cầu xiêm có nhiều thành phần quan trong: - Nhóm hợp chất kháng oxy hóa: + Polyphenol [4] + Flavonol [4] - Nhóm hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học quan trọng: + Alkaloid [4], [17], [18] + Acetogenin [24], [31] + Tinh dầu [16] + Steroid [4] + Polysaccharide [4]... được trồng nhiều tại tỉnh Tiền Giang 1.1.2 Đặc điểm của mãng cầu xiêm [31] Mãng cầu xiêm thuộc loại tiểu mộc, cao 6- 8 m, là loại cây rất dễ trồng, có thể phát triển được ở cả vùng nước ngọt lẫn nước lợ và cho quả sau 3 năm Mãng cầu xiêm cho trái rộ nhất vào mùa mưa kéo dài đến tết âm lịch (từ tháng 9 đến tháng 2 năm sau) Về hình dạng cây có các đặc điểm sau: - Vỏ thân có nhiều lỗ nhỏ màu nâu - Lá hình... gần đây là mãng cầu xiêm Annona muricata Mãng cầu xiêm được biết đến từ lâu đời với vai trò làm thực phẩm và là thành phần trong một số bài thuốc dân gian có khả năng chữa bệnh cảm, xổ mũi, tiêu chảy, tim,… Hóa dược hiện đại cũng cho thấy lá mãng cầu xiêm có khả năng kháng nấm, kháng khuẩn, ức chế tế bào ung thư, kháng oxi hóa,… Hoạt chất tạo nên hoạt tính sinh học kỳ diệu của cây mãng cầu xiêm là polyphenol,... CHIẾT PS TRONG MẪU LÁ MÃNG CẦU XIÊM .16 HÌNH 2.3 SƠ ĐỒ TINH CHẾ POLYSACCHARIDE TRONG LÁ MÃNG CẦU XIÊM 16 HÌNH 2.4 SƠ ĐỒ PHÂN ĐOẠN CÁC LOẠI POLYSACCHARIDE TRONG CAO POLYSACCHARIDE .18 HÌNH 2.5 QUY TRÌNH XỬ LÝ MẪU ĐỂ PHÂN TÍCH GC – MS 19 HÌNH 2.6 QUY TRÌNH XỬ LÝ MẪU PHÂN TÍCH GC-MS ĐỂ XÁC ĐỊNH LIÊN KẾT GLYCOSIDE 21 HÌNH 3.1 CÁC THÍ NGHIỆM ĐỊNH TÍNH CÁC NHÓM HỢP CHẤT HỮU CƠ TRONG . tài: Bước đầu nghiên cứu thành phần polysaccharide trong lá mãng cầu xiêm (Annona muricata) trồng tại huyện Tân Đông Phú, tỉnh Tiền Giang . 1 Chương 1 TỔNG QUAN 1.1. Tổng quan về lá mãng cầu xiêm 1.1.1 ngoài có những nốt phù thành những múi nhỏ nhọn hay cong, chứa nhiều hạt màu đen. 2 1.1.3. Thành phần cơ bản trong lá mãng cầu xiêm Trong lá mãng cầu xiêm có nhiều thành phần quan trong: - Nhóm hợp. MÃNG CẦU XIÊM ANNONA MURICATA 13 HÌNH 2.2. SƠ ĐỒ CHIẾT PS TRONG MẪU LÁ MÃNG CẦU XIÊM 16 HÌNH 2.3. SƠ ĐỒ TINH CHẾ POLYSACCHARIDE TRONG LÁ MÃNG CẦU XIÊM 16 HÌNH 2.4. SƠ ĐỒ PHÂN ĐOẠN CÁC LOẠI POLYSACCHARIDE