2.3.5.1. Phương phâp phenol- acid sulfuric xâc định hăm lượng PS tinh khiết [1][2] a) Nguyín tắc
Carbohydrate ở dạng polysaccharide vă oligosaccharide bị thủy phđn thănh dạng monosaccharide, dưới tâc dụng của H2SO4 đặc nóng câc monosaccharide sẽ dehydrate hóa tạo thănh dẫn xuất furancarboxaldehyde, sau đó tạo mău với phenol, có mău văng da cam.
b) Câch tiến hănh
Quâ trình phản ứng mău: 1 mL mẫu dịch nước, thím mỗi ống nghiệm 1 mL dung dịch phenol 5%, 5 mL H2SO4 đậm đặc, lắc đều câc ống nghiệm, sau đó đun câch thủy trong 2 phút. Lăm lạnh câc ống nghiệm ở nhiệt độ phòng trong 30 phút.
Độ hấp thụ của dung dịch phản ứng được đo ở bước sóng 490 nm. D-glucose được sử dụng lăm chất chuẩn.
2.3.5.2. Phương phâp Lowry để xâc định hăm lượng protein [1] a) Nguyín tắc
- Protein phản ứng với ion đồng trong môi trường kiềm tạo thănh phức.
- Acid phosphomolypdatephosphotungstic trong thuốc thử Folin– Ciocalteu sẽ bị khử thănh heteropolymolybdeum bởi tâc dụng của phức đồng-protein. Sản phẩm tạo thănh có mău xanh hấp thụ cực đại tại bước sóng 750 nm.
b) Câch tiến hănh
- Chuyển 0,5 mL dung dịch mẫu hay chất chuẩn văo câc ống nghiệm 10 mL. - Sau đó thím văo mỗi ống 0,7 mL dung dịch Lowry, đậy nắp ống nghiệm vă lắc nhẹ nhăng để hỗn hợp trong ống nghiệm được trộn đều.
- Ủ mẫu trong bóng tối ở nhiệt độ phòng trong 20 phút.
- Thím tiếp 0,1 mL thuốc thử Folin - Ciocalteu (pha loêng 2 lần) văo mỗi ống nghiệm.
- Khuấy, tiếp tục bảo quản 30 phút trong bóng tối tại nhiệt độ phòng. - Đo độ hấp thụ quang tại bước sóng 750 nm.
- Vẽ đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc của mật độ quang văo nồng độ chất chuẩn. - Đo mẫu thực. Từ đồ thị suy ra hăm lượng protein trong mẫu.