đặng ngọc tuấn anh nghiên cứu tác dụng của dược liệu ích mẫu leonurus japonicus houtt trong chảy máu âm đạo trên mô hình chuột thực nghiệm

Triển khai và đánh giá tác dụng của cao chiết từ Ích mẫu trong chảy máu âm đạo ở chuột trên mô hình kinh nguyệt như ở người trên chuột nhắt trắng .... Kết quả đánh giá tác dụng của các c

BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

- -

ĐẶNG NGỌC TUẤN ANH

NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA

DƯỢC LIỆU ÍCH MẪU

(LEONURUS JAPONICUS HOUTT.)

TRONG CHẢY MÁU ÂM ĐẠO TRÊN MÔ HÌNH CHUỘT THỰC NGHIỆM

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

HÀ NỘI – 2024

BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

- -

ĐẶNG NGỌC TUẤN ANH Mã sinh viên: 1901010

NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA

DƯỢC LIỆU ÍCH MẪU

(LEONURUS JAPONICUS HOUTT.)

TRONG CHẢY MÁU ÂM ĐẠO TRÊN MÔ HÌNH CHUỘT THỰC NGHIỆM

Người hướng dẫn:

1 TS Chử Thị Thanh Huyền 2 ThS Đinh Thị Minh

Nơi thực hiện:

1 Viện Dược liệu

HÀ NỘI – 2024

LỜI CẢM ƠN

Đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến các thầy giáo cô giáo đã dạy dỗ, truyền đạt cho em kiến thức quý báu trong suốt 5 năm học tập tại trường

Tiếp đến, em xin được bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến ThS Đinh Thị Minh,

làm việc tại khoa Dược lý – Sinh hóa, Viện Dược liệu Cô là người đã trực tiếp hướng dẫn, tận tình truyền đạt, chỉ bảo cho em những kiến thức, kinh nghiệm quý báu và tạo mọi điều kiện giúp đỡ em trong suốt quãng thời gian em thực hiện khóa luận Sự định hướng và tâm huyết của cô là động lực lớn lao để em hoàn thành khóa luận tốt nghiệp của mình Một lần nữa, em xin chân thành cảm ơn cô!

Tiếp đến, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến TS Chử Thị Thanh Huyền, khoa

Dược liệu – Dược học cổ truyền, Trường Đại học Dược Hà Nội Cô đã cho em cơ hội nghiên cứu khoa học trong một môi trường chuyên nghiệp, luôn giúp đỡ, quan tâm sát sao và cho em những lời khuyên quý báu trong quá trình thực hiện khóa luận của mình Em xin chân thành cảm ơn cô!

Em cũng xin được gửi lời cảm ơn chân thành đến anh Lều Khánh Duy cùng

các cô và các anh chị tại khoa Dược lý – Sinh hóa, Viện Dược liệu đã giúp đỡ, hướng dẫn kỹ thuật và tạo điều kiện tốt nhất cho em trong suốt thời gian em tham gia nghiên cứu thực nghiệm tại khoa

Em xin cảm ơn các bạn bè của mình đã luôn đồng hành cùng em trong suốt những năm tháng học tập tại trường Xin cảm ơn các bạn cùng thực hiện khóa luận tại khoa Dược lý – Sinh hóa, Viện Dược liệu đã luôn gắn bó, động viên, giúp đỡ, sẻ chia cùng nhau suốt quãng đường vừa qua

Cuối cùng, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến bố mẹ và tất cả những người thân trong gia đình em, những người đã luôn yêu thương, ủng hộ để em có được ngày hôm nay

Do thời gian làm thực nghiệm cũng như kiến thức của bản thân còn hạn chế, nên khóa luận không tránh khỏi thiếu sót Em rất mong nhận được sự góp ý của các thầy cô, bạn bè để khóa luận được hoàn thiện hơn Em xin chân thành cảm ơn!

Hà Nội, ngày 03 tháng 06 năm 2024

Sinh viên

Đặng Ngọc Tuấn Anh

MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 2

1.1 Tổng quan về bệnh lý rong kinh 2

1.1.1 Sinh lý học chu kỳ kinh nguyệt 2

1.1.2 Sơ lược về chảy máu âm đạo 3

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14

2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 14

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 14

2.1.2 Động vật nghiên cứu 14

2.1.3 Dụng cụ, hóa chất nghiên cứu 14

2.2 Phương pháp nghiên cứu 15

2.2.1 Phương pháp cắt ống dẫn tinh trên chuột nhắt trắng 16

2.2.2 Tạo hiệu ứng Whitten 16

2.2.3 Triển khai và đánh giá tác dụng của cao chiết từ Ích mẫu trong chảy máu âm đạo ở chuột trên mô hình kinh nguyệt như ở người trên chuột nhắt trắng 17

2.2.3.1 Triển khai mô hình kinh nguyệt như ở người trên chuột nhắt trắng 17

2.2.3.2 Đánh giá mức độ bong lớp niêm mạc tử cung thông qua số lượng tế bào sừng 17

2.2.3.3 Định lượng progesterone huyết thanh chuột bằng kỹ thuật ELISA 18

2.2.3.4 Giải phẫu mô học tử cung chuột 18

2.2.4 Đánh giá kết quả 19

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 20

3.1 Kết quả đánh giá tác dụng của các cao chiết từ Ích mẫu đến mức độ bong của niêm mạc tử cung thông qua số lượng tế bào sừng của chuột chảy máu âm đạo 20 3.2 Kết quả đánh giá tác dụng của các cao chiết Ích mẫu lên nồng độ progesterone trong huyết thanh của chuột chảy máu âm đạo 21 3.3 Kết quả đánh giá tác dụng của các cao chiết từ Ích mẫu lên trọng lượng tử cung- buồng trứng của chuột chảy máu âm đạo 22 3.4 Kết quả đánh giá tác dụng của các cao chiết từ Ích mẫu lên mô học tử cung trên mô hình chuột chảy máu âm đạo 22

CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 25 4.1 Về việc lựa chọn mô hình gây kinh nguyệt như ở người trên chuột nhắt trắng để nghiên cứu tác dụng Ích mẫu theo hướng progesterone trong chảy máu âm đạo trên mô hình chuột thực nghiệm 25 4.2 Về việc lựa chọn cao chiết dược liệu nghiên cứu 26 4.3 Về các kết quả nghiên cứu 28

4.3.1 Đánh giá tác dụng của các cao chiết từ Ích mẫu đến mức độ bong của niêm mạc tử cung thông qua số lượng tế bào sừng của chuột chảy máu âm đạo 28 4.3.2 Đánh giá tác dụng của các cao chiết từ Ích mẫu lên nồng độ progesterone trong huyết thanh của chuột chảy máu âm đạo 28 4.3.3 Đánh giá tác dụng của các cao chiết từ Ích mẫu lên trọng lượng tử cung - buồng trứng của chuột chảy máu âm đạo 29 4.3.4 Đánh giá tác dụng của các cao chiết từ Ích mẫu lên mô học tử cung trên mô hình chuột chảy máu âm đạo 30 4.3.5 Kết quả việc triển khai mô hình chảy máu âm đạo trên chuột nhắt trắng ứng dụng vào điều trị rong kinh ở người 30

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Viết đầy đủ theo Tiếng Anh Viết đầy đủ theo Tiếng Việt

Chảy máu tử cung bất thường do

rối loạn đông máu

Endometrial disorders

Chảy máu tử cung bất thường do

rối loạn chức năng nội mạc tử cung

nguyệt

factor

Yếu tố tăng trưởng nội mô mạch

máu

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 2.1 Hóa chất sử dụng trong nghiên cứu 15 Bảng 2.2 Dụng cụ và thiết bị trong nghiên cứu 15

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ

Hình 1.1 Một số hình ảnh cây Ích mẫu (Leonurus japonicus Houtt.) 10

Hình 1.2 Cấu trúc hóa học của Leonurine 11

Hình 1.3 Cấu trúc hóa học của Stachydrine 11

Hình 2.1 Sơ đồ thiết kế thí nghiệm 16

Hình 3.1 Tác dụng cải thiện tổn thương lớp niêm mạc tử cung của các cao chiết từ Ích mẫu trên mô hình chảy máu âm đạo ở chuột 20

Hình 3.2 Tác dụng của các cao chiết từ Ích mẫu trên nồng độ progesterone ngày 12 trong huyết tương của chuột chảy máu âm đạo 21

Hình 3.3 Tác dụng của các cao chiết từ Ích mẫu đến trọng lượng tử cung - buồng trứng ngày 12 trên chuột chảy máu âm đạo 22

Hình 3.4 Tác dụng của các cao chiết từ Ích mẫu trên mô học tử cung chuột chảy máu âm đạo 23

ĐẶT VẤN ĐỀ

Rong kinh hay chảy máu kinh nguyệt nặng (HMB) là vấn đề thường gặp ở phụ nữ trong độ tuổi sinh sản [56] Theo thống kê, rong kinh ảnh hưởng đến 30% phụ nữ trong độ tuổi sinh sản [25] HMB tác động đáng kể và tiêu cực đến chất lượng cuộc sống về thể chất và xã hội của bệnh nhân Nó có thể khiến bệnh nhân có nguy cơ bị thiếu máu, mệt mỏi và trầm cảm Bệnh nhân bị chảy máu kinh nguyệt nhiều có tỷ lệ nhập viện, đến phòng cấp cứu và thăm khám ngoại trú cao hơn [35] Sự cần thiết để tìm ra phương pháp điều trị hiệu quả và an toàn bắt nguồn từ những tác động tiêu cực của chúng đối với chất lượng cuộc sống, sức khỏe sinh sản và sức khỏe lâu dài của người bệnh [56] Các phương pháp điều trị hiện tại đối với HMB bao gồm dùng thuốc tránh thai kết hợp, progestogen, thuốc chống viêm không steroid (NSAID), acid tranexamic và hệ thống giải phóng levonorgestrel trong tử cung (LNG - IUS) [16] Phương pháp điều trị bằng phẫu thuật được khuyến nghị khi điều trị nội khoa thất bại, thiếu máu nặng hoặc bệnh lý tử cung đi kèm khác [14] Tuy nhiên, xét đến những tác dụng không mong muốn của y học hiện đại, ngày càng có nhiều phụ nữ mong muốn dựa vào phương pháp điều trị bằng thảo dược dựa trên y học cổ truyền [37] Trong những năm gần đây, các ứng dụng lâm sàng của thuốc thảo dược truyền thống trong điều trị HMB đã thu hút sự quan tâm ngày càng tăng do hiệu quả mạnh mẽ và ít tác dụng phụ hơn [64]

Ích mẫu (Leonurus japonicus Houtt.) được dùng làm thuốc chữa bệnh từ lâu

đời, nhất là đối với phụ nữ sau sinh, chữa rong kinh, rong huyết, tử cung co bóp không tốt, rối loạn kinh nguyệt, đau bụng kinh, chảy máu âm đạo [6] Do tác dụng và hiệu quả tốt của cây Ích mẫu đối với các bệnh của phụ nữ, các nhà nghiên cứu đã bắt đầu quan tâm nhiều đến cây này và tiến hành nghiên cứu sâu hơn về các thành phần hóa học và tác dụng dược lý của nó Một số nghiên cứu trên thực nghiệm đã chứng minh được Ích mẫu thường được sử dụng để điều trị rối loạn xuất huyết tử cung [23] Cao chiết ethanol 70% và cao chiết nước từ Ích mẫu đã được chứng minh có tác dụng kiểu estrogen [5] Tuy nhiên chưa có công trình nghiên cứu theo hướng tác dụng progesterone trên mô hình chuột chảy máu âm đạo, ứng dụng trong điều trị rong kinh

Do đó, chúng tôi thực hiện đề tài này với mục tiêu sau: Đánh giá tác dụng của

cao chiết ethanol 70% và cao chiết nước từ Ích mẫu (Leonurus japonicus Houtt.)

trên mô hình chuột chảy máu âm đạo thông qua các chỉ số: Số lượng tế bào sừng, nồng độ progesterone, trọng lượng tử cung - buồng trứng và mô bệnh học tử cung

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan về bệnh lý rong kinh

1.1.1 Sinh lý học chu kỳ kinh nguyệt ❖ Giai đoạn 1: Giai đoạn tăng sinh hoặc nang trứng

Giai đoạn này xảy ra từ ngày đầu tiên đến ngày 14 của chu kỳ kinh nguyệt (thời gian trung bình là 28 ngày) [63] Cuối chu kỳ trước, progesterone và estrogen giảm đột ngột tạo ra cơ chế điều hoà ngược âm tính, tuyến yên tăng bài tiết FSH và LH dưới sự chỉ huy của GnRH Nồng độ hai hormon này lúc đầu chỉ hơi tăng sau đó tăng dần trong đó FSH tăng trước và LH tăng sau đó vài ngày [4] Dưới tác dụng của FSH và LH, đặc biệt là FSH, ở buồng trứng có từ 6-12 nang nguyên thủy trưởng thành thành nang Graafian Các nang xung quanh bắt đầu thoái hóa, đó là lúc nang Graafian trở

thành nang trưởng thành và bắt đầu quá trình rụng trứng [63] Rụng trứng: Sự rụng

trứng luôn xảy ra trước kỳ kinh 14 ngày Vì vậy, với chu kỳ trung bình 28 ngày, sự rụng trứng xảy ra vào ngày thứ 14 Vào cuối giai đoạn tăng sinh, nồng độ estrogen ở mức cao do nang trứng trưởng thành và tăng sản xuất hormone Chỉ trong thời gian này, estrogen tăng cao đã feedback ngược dương tính cho việc tăng sản xuất FSH và LH Kết quả là nang trưởng thành bị vỡ và tế bào trứng được giải phóng Nồng độ estrogen giảm vào cuối quá trình rụng trứng trong khi đó mức bài tiết progesterone lại

bắt đầu tăng dần [4]

Biến đổi ở niêm mạc tử cung: Sau hành kinh, niêm mạc tử cung chỉ còn lại một

lớp mỏng của mô đệm và sót lại một ít tế bào biểu mô nằm tại đáy các tuyến Dưới tác dụng của estrogen, các tế bào mô đệm và tế bào biểu mô tăng sinh nhanh chóng Niêm mạc dày dần, các tuyến dài, mạch máu phát triển Ngoài ra, giai đoạn này còn tạo môi trường thuận lợi cho tinh trùng xâm nhập bằng việc tạo các kênh trong cổ tử cung do các tuyến của cổ tử cung bài tiết một lớp dịch nhày kéo thành sợi dọc theo tử cung [4]

❖ Giai đoạn 2: Giai đoạn bài tiết hoặc hoàng thể

Giai đoạn này luôn diễn ra từ ngày 14 đến ngày 28 của chu kỳ [63] Sau khi phóng noãn, tuyến yên vẫn tiếp tục bài tiết FSH và LH Dưới tác dụng của LH, một ít tế bào hạt còn lại ở vỏ nang trứng vỡ được biến đổi nhanh chóng thành hoàng thể Hoàng thể là một cấu trúc được hình thành trong buồng trứng tại vị trí nang trưởng thành vỡ ra để sản xuất progesterone [4]

Biến đổi của niêm mạc tử cung: Trong giai đoạn này estrogen vẫn tiếp tục làm

tăng sinh lớp niêm mạc tử cung nhưng tác dụng này yếu hơn nhiều so với progesterone Dưới tác dụng của progesterone, niêm mạc tử cung dày nhanh và bài tiết dịch Các tuyến càng dài ra, cong queo, chứa đầy các chất tiết Các mạch máu phát triển, trở nên xoắn lại và cung cấp máu cho niêm mạc tử cung tăng lên Nội mạc tử cung chuẩn bị bằng cách tăng nguồn cung cấp mạch máu và kích thích tiết nhiều chất

nhầy hơn để thích ứng với việc làm tổ của một tế bào mới hình thành phôi Nếu việc thụ thai diễn ra, progesterone tiếp tục được tiết ra, duy trì nội mạc tử cung ở trạng thái thuận lợi cho việc làm tổ Nếu trứng không được thụ tinh làm tổ thì thể vàng sẽ thoái biến, sự giải phóng progesterone từ thể vàng ngừng đột ngột Sự suy giảm progesterone kích thích sự bắt đầu của chu kỳ kinh nguyệt [4]

Hiện tượng kinh nguyệt: Kinh nguyệt được gây ra do sự giảm đột ngột nồng độ

hai hormon sinh dục nữ, đặc biệt là progesterone Khi đó, niêm mạc tử cung thoái hóa và bài tiết prostaglandin gây co thắt động mạch nuôi dưỡng lớp niêm mạc gây thiếu máu và do thiếu tác dụng kích thích của hormon nên niêm mạc chức năng bị hoại tử, mạch máu tổn thương và niêm mạc chức năng bị bong ra [4] Nhờ tác dụng co cơ tử cung của prostaglandin mà bị đẩy ra ngoài qua âm đạo là khối mô bong ra cùng với dịch máu gây hiện tượng kinh nguyệt (Được tính từ ngày 0 đến ngày 5 của chu kỳ kinh nguyệt tiếp theo) Máu kinh nguyệt chứa prostaglandin, mảnh vụn mô và lượng tiêu sợi huyết tương đối lớn từ mô nội mạc tử cung Quá trình tiêu sợi huyết sẽ làm tan cục máu đông để máu kinh thường không chứa cục máu đông trừ khi lượng máu chảy nhiều [63]

1.1.2 Sơ lược về chảy máu âm đạo

Chảy máu âm đạo được sử dụng để mô tả bất kỳ hiện tượng chảy máu bất thường nào không liên quan đến kinh nguyệt, bao gồm [34]:

➢ Bất kỳ hiện tượng chảy máu nào xảy ra ngoài chu kỳ kinh nguyệt bình thường ở những người đang có kinh nguyệt;

➢ Chảy máu kinh nguyệt nặng (HMB) hoặc kéo dài bất thường; ➢ Chảy máu trong quá trình mang thai;

➢ Chảy máu ở người sau mãn kinh hoặc trẻ em trước tuổi dậy thì Chảy máu âm đạo là do chảy máu ở đâu đó trong đường sinh dục, bao gồm âm hộ, âm đạo, cổ tử cung, thân tử cung và phần phụ Nguyên nhân bao gồm chảy máu thứ phát do các bệnh lý phụ khoa (tại tử cung hoặc ngoài tử cung), sản khoa và toàn thân Ở thanh thiếu niên và người lớn, chảy máu âm đạo thường do chảy máu tử cung bất thường (AUB) [34] Chảy máu kinh nguyệt nặng (HMB) là triệu chứng phổ biến nhất của AUB gây giảm chất lượng cuộc sống của phụ nữ về thể chất, xã hội, tình cảm và vật chất [70]

1.1.3 Bệnh lý rong kinh

1.1.3.1 Sơ lược về rong kinh

Chảy máu kinh nguyệt nặng (HMB) là thuật ngữ hiện được sử dụng thay cho rong kinh [56] Rong kinh được định nghĩa là tình trạng chảy máu tử cung kéo dài (>7 ngày) hoặc quá nhiều (>80ml/ngày) đều đặn Nguyên nhân phổ biến là rối loạn trục HPG hoặc do rối loạn đông máu, giảm tiểu cầu hoặc rối loạn chức năng tiểu cầu [29]

Rong kinh là nguyên nhân gây phổ biến gây thiếu máu và giảm chất lượng cuộc sống ở phụ nữ Khi chu kỳ kinh nguyệt bất thường có thể phản ánh bệnh lý, vấn đề do điều trị hoặc căng thẳng do vùng dưới đồi gây ra [15]

Rong kinh là tình trạng bệnh lý ảnh hưởng đến phụ nữ trong độ tuổi sinh sản trên toàn cầu Mặc dù các loại thuốc như progesterone và estradiol valerate phần lớn mang lại lợi ích cho bệnh nhân mắc bệnh rong kinh nhưng chúng có liên quan đến các tác dụng phụ bất lợi như buồn nôn, nôn, tăng cân và rối loạn chức năng gan thận Do đó, cần có các chiến lược dùng thuốc mới và an toàn để điều trị rong kinh [64] Tất cả các nước thành viên ở Đông Nam Á, với sự hỗ trợ của WHO đang và đã tăng cường việc sử dụng y học cổ truyền vào việc chăm sóc sức khỏe để điều trị các tình trạng sức khỏe của phụ nữ như bệnh lý rong kinh [23]

1.1.3.2 Dịch tễ học

Theo thống kê, rong kinh ảnh hưởng đến 30% phụ nữ trong độ tuổi sinh sản 1/5 phụ nữ ở Anh và 1/3 phụ nữ ở Hoa Kỳ bị cắt tử cung trước tuổi 60 và rong kinh là vấn đề chính xuất hiện ở ít nhất 50% đến 70% trên những phụ nữ này [25] Chảy máu kinh nguyệt nhiều là một trong những vấn đề phụ khoa phổ biến nhất, chiếm 18–30% số lần khám phụ khoa và dẫn đến 17,8 ca phẫu thuật trên 10.000 phụ nữ trong độ tuổi sinh sản ở Hoa Kỳ [62] Ở các nước đang phát triển, xuất huyết tử cung bất thường ảnh hưởng tới 5-15% phụ nữ ở độ tuổi sinh sản và có tỷ lệ cao hơn ở phụ nữ ở nhóm tuổi lớn hơn Chảy máu quá mức có thể làm trầm trọng thêm tình trạng thiếu máu và một số trường hợp có thể đe dọa tính mạng nếu không được điều trị [33] Chi phí trực tiếp hàng năm ước tính liên quan đến HMB là 1 tỷ đô la trong khi chi phí gián tiếp có thể lên tới 12 tỷ đô la do ảnh hưởng đến công việc và chất lượng cuộc sống của người phụ nữ [62]

Ở Việt Nam, theo thống kê của Bộ Y tế, hiện nay có đến 90% phụ nữ Việt mắc các bệnh liên quan đến phụ khoa Đáng nói, số ca mắc bệnh phụ khoa mỗi năm tăng 15% - 27% Theo nghiên cứu mô tả hồi cứu được tiến hành dựa trên 108 hồ sơ bệnh án của các bệnh nhân rong kinh rong huyết cơ năng, có độ tuổi từ 10 đến 24 tuổi tại Bệnh viện Phụ Sản Trung Ương trong năm 2019 và 2020, độ tuổi vị thành niên chiếm tỉ lệ cao nhất 86,1%, bệnh nhân có lượng hemoglobin dưới 80 g/l chiếm tỉ lệ cao nhất 63,9%, niêm mạc tử cung dưới 5mm: 100% bệnh nhân có thời gian rong kinh 16-30 ngày [7]

1.1.3.3 Nguyên nhân

HMB là biểu hiện lâm sàng phổ biến nhất của AUB Thuật ngữ này lần đầu tiên được sử dụng trong Guidelines của New Zealand về HMB Nó được xác định rõ ràng trong bối cảnh lâm sàng trên cơ sở khiếu nại của bệnh nhân trong Guidelines của Hoa Kỳ [30]

FIGO (International Federation of Gynecology and Obstetrics – Liên đoàn sản phụ khoa quốc tế) đã tạo ra hệ thống phân loại PALM-COEIN để xác định nguyên nhân gây chảy máu tử cung bất thường (AUB) Nhóm PALM của phân loại bao gồm các nguyên nhân cấu trúc của AUB: Polyp, Adenomyosis (Lạc nội mạc tử cung), Leiomyoma (U xơ tử cung) và Malignancy (Bệnh ác tính và tăng sản) Nhóm COEIN bao gồm các nguyên nhân phi cấu trúc: Coagulopathy (Rối loạn đông máu), Ovulatory disorders (Rối loạn rụng trứng), and Endometrial disorders (Rối loạn chức năng nội mạc tử cung), Iatrogenic causes (Nguyên nhân do điều trị như DCTC; hóa trị liệu; thuốc chống đông máu) và Not classified (Không được phân loại) [56]

Nguyên nhân của HMB có thể bao gồm AUB do polyp (AUB-P), do adenomyosis (AUB-A), do u xơ tử cung (AUB-L), cũng như các nguyên nhân phi cấu trúc như rối loạn rụng trứng (AUB-O); rối loạn đông máu (AUB-C), rối loạn chức năng nội mạc tử cung (AUB-E) Căn nguyên có thể do trong quá trình mang thai như chửa ngoài tử cung, sẩy thai Do rối loạn chảy máu bao gồm bệnh Von Willebrand, bệnh máu khó đông, rối loạn chức năng tiểu cầu, thiếu hụt yếu tố VIII và IX Suy giáp cũng có thể liên quan đến HMB [56]

Hoặc nguyên nhân có thể phân loại như sau [52]: - Nội tiết: Chảy máu không rụng trứng; Hội chứng buồng chứng đa nang;

Bệnh lý tuyến giáp; - Rối loạn chảy máu: Bệnh Von Willebrand; Rối loạn chức năng tiểu cầu;

Giảm tiểu cầu; Thiếu yếu tố đông máu; - Nhiễm trùng: Bệnh lây truyền qua đường tình dục; Viêm cổ tử cung;

Viêm nội mạc tử cung; - Thai kỳ: Phá thai; Chửa ngoài tử cung; Bệnh nguyên bào nuôi thai kỳ;

Chảy máu sau sinh; - Thuốc: Thuốc chống đông máu; Đặt dụng cụ tử cung; Thuốc tránh thai

Depot Medroxyprogesterone; - Tử cung: Ung thư cơ trơn; Polyp; Lạc nội mạc tử cung; Bệnh lý ác tính; - Khác: Tổn thương; Dị vật lạ; U nang buồng trứng xuất huyết

1.1.3.4 Cơ chế bệnh sinh rong kinh liên quan tới giảm nồng độ progesterone

Rối loạn rụng trứng là nguyên nhân phổ biến trong nhóm nguyên nhân phi cấu trúc gây nên rong kinh [54] Khi không rụng trứng, thể vàng không hình thành dẫn đến nồng độ progesterone giảm thấp, điều này khiến cho nội mạc tử cung không ổn định Estrogen tăng cao do không bị progesterone cản trở khiến nội mạc tử cung tăng sinh và dày lên Chúng phát triển quá mức vượt quá lượng máu cung cấp cho nó và thoái

cung không đều, không hoàn toàn và chảy máu trong thời gian dài [40]

Việc giảm progesterone được chứng minh ảnh hưởng tới các yếu tố liên quan

chính tiềm năng trong việc bắt đầu biểu hiện phục hồi nội mạc tử cung [48]

HMB có thể là kết quả của bệnh lý tử cung, rối loạn hệ thống hoặc do điều trị Tuy nhiên khoảng 50% trường hợp HMB xảy ra là do bệnh lý Trong những trường hợp đó, HMB là hậu quả của sự rối loạn cơ chế nội mạc tử cung cục bộ dẫn đến tăng lưu lượng và/hoặc chảy máu kéo dài Chảy máu kinh kéo dài (>7 ngày) có thể do viêm quá mức khi có kinh hoặc bị trì hoãn tái tạo các mạch và mô nội mạc tử cung Tăng chảy máu trong kỳ kinh nguyệt do suy giảm co mạch của các tiểu động mạch xoắn ốc

nội mạc tử cung [48]

Tăng viêm: Cytokine TNF gây viêm trong dịch kinh nguyệt ở phụ nữ mắc HMB tăng so với nhóm đối chứng bình thường cho thấy viêm quá mức góp phần làm nặng tình trạng rong kinh Sự gia tăng đáng kể biểu hiện mRNA COX-2 ở giai đoạn

nó dẫn đến tăng sản xuất cAMP trong nội mạc tử cung ở bệnh nhân rong kinh Những phát hiện này cho thấy việc sản xuất prostaglandin quá mức và tình trạng viêm quá

mức dẫn đến tổn thương mô tăng lên và kéo dài vào thời điểm hành kinh [48]

Giảm co mạch: Vì bán kính mạch máu là yếu tố chính quyết định sức cản dòng chảy, nên việc giảm co thắt mạch máu nội mạc tử cung tại thời điểm hành kinh sẽ góp

nội mạc tử cung được biết có tác dụng co mạch Phụ nữ bị HMB được chứng minh là

co thắt tiểu động mạch xoắn ốc Ngoài ra phụ nữ mắc HMB giảm biệu hiện của nội mạc tử cung với ET-1 và tăng biểu hiện của enzym chuyển hóa nó neutral

endopeptidase [48]

Trì hoãn tái tạo: Giảm co mạch không chỉ làm tăng lượng kinh nguyệt mà còn hạn chế hoặc ngăn ngừa tình trạng thiếu oxy ở vùng phía trên nội mạc tử cung của phụ nữ mắc HMB Dẫn đến trì hoãn sự khởi đầu của quá trình phục hồi nội mạc tử cung do giảm kích hoạt do thiếu oxy của các mạch máu, các yếu tố sửa chữa như VEGF VEGF thúc đẩy quá trình di chuyển và biệt hóa tế bào cơ trơn mạch máu và góp phần

vào sự khởi đầu quá trình đông máu [48] 1.1.3.5 Điều trị

➢ Không dùng thuốc:

- Phụ nữ mắc HMB nên tập thể dục thường xuyên, chế độ ăn uống lành mạnh và duy

trì chỉ số BMI khỏe mạnh [49]

- Phẫu thuật điều trị rong kinh cần thiết khi có bệnh lý vùng chậu như polyp, u xơ, lạc

nội mạc tử cung, bệnh lý viêm vùng chậu mãn tính Phẫu thuật được chỉ định khi bệnh

nhân không đáp ứng với điều trị bằng thuốc Các lựa chọn phẫu thuật bao gồm cắt bỏ

tử cung hoặc cắt bỏ nội mạc tử cung [55]

➢ Dùng thuốc:

- Theo “Hướng dẫn chẩn đoán và điều trị các bệnh sản phụ khoa” (Ban hành kèm theo Quyết định số 315/QĐ-BYT ngày 29/01/2015) thì nguyên tắc điều trị rong kinh, rong huyết: Điều trị nguyên nhân (nếu có), làm ngừng tình trạng ra máu từ niêm mạc tử cung, tái lập chu kỳ kinh bình thường (nếu người phụ nữ nằm trong độ tuổi sinh đẻ) và điều trị hỗ trợ, nâng cao thể trạng Hướng dẫn điều trị đầu tay theo Bộ Y tế là: Bước đầu tiên là loại trừ những nguyên nhân ác tính, các bệnh về máu nhất là ở những người con gái trong lần thấy kinh đầu tiên đã bị rong kinh, sau đó mới đặt vấn đề điều trị cầm máu Nạo bằng hormone: progesterone có thể phối hợp estrogen [3] Điều này gây ra sự gia tăng nồng độ hormone trong cơ thể một cách không tự nhiên trong thời gian dài, từ đó có thể gây ra các tác dụng phụ bất lợi: đột quỵ, cục máu đông ở phổi hoặc chân (huyết khối tắc mạch), ung thư vú [47] Quản lý nội tiết tố được coi là phương pháp điều trị nội khoa đầu tiên cho bệnh nhân AUB cấp tính mà không biết hoặc nghi ngờ

có rối loạn chảy máu [9]:

• CHC (thuốc nội tiết tránh thai kết hợp) chứa estrogen và progestin sử dụng phác đồ điều trị duy trì FDA phê duyệt sự kết hợp của estradiol valerate và dienogest [56]

• Liệu pháp progesterone tuần hoàn cho 14 ngày, dùng dưới dạng norethindrone acetate hoặc medroxyprogesterone acetate đường uống làm giảm lượng máu kinh nguyệt chỉ ở 2% đến 30% phụ nữ Tuy nhiên, khi dùng liệu trình dài hạn (trong 21 ngày, bắt đầu từ ngày thứ 5 sau khi khởi phát kinh nguyệt), chúng làm giảm mất máu kinh nguyệt ở 63% đến 78% phụ nữ [56]

• Hệ thống giải phóng levonorgestrel trong tử cung (LNG-IUS) Đây được coi là hiệu quả nhất điều trị giảm lượng kinh nguyệt Đặc biệt, giảm từ 70% đến 96% mất máu đã được quan sát thấy khi sử dụng nó, và việc sử dụng nó cũng dẫn đến hoãn hoặc hủy bỏ phẫu thuật cắt bỏ nội mạc tử cung hoặc cắt bỏ tử cung [56]

- Thuốc chống tiêu sợi huyết: Acid tranexamic (thận trọng ở bệnh nhân có tiền sử thuyên tắc huyết khối) Phụ nữ bị HMB đã được chứng minh là có sự kích hoạt quá mức của hệ thống tiêu sợi huyết trong giai đoạn kinh nguyệt của chu kỳ Điều này dẫn đến sự thoái hóa nhanh chóng của cục máu đông fibrin hình thành để gây cầm máu Do đó, sự gia tăng tiêu sợi huyết dẫn đến tăng lượng máu mất trong quá trình

bong nội mạc tử cung [49]

- NSAIDs: Acid mefenamic được sử dụng phổ biến để điều trị HMB và giúp giảm lượng máu mất từ 25-50% và có thêm lợi ích giảm đau Các nghiên cứu chỉ ra rằng

những phụ nữ có lượng máu kinh nguyệt nhiều được chứng minh rằng tình trạng viêm cục bộ gia tăng có liên quan đến việc mất máu kinh nguyệt tăng lên Cytokin TNF-α tiền viêm tăng đáng kể trong dịch kinh nguyệt của phụ nữ có HMB Enzym tham gia tổng hợp prostaglandin, COX-2, cũng được tăng lên trong các mẫu nội mạc tử cung của những người có HMB, dẫn đến tăng tín hiệu prostaglandin Kết quả là tình trạng viêm quá mức ở nội mạc tử cung có thể dẫn đến tổn thương mô gia tăng và kéo dài tại thời điểm hành kinh Vì vậy, việc hạn chế sản xuất các chất trung gian gây viêm sẽ rất hữu ích trong việc điều trị cho phụ nữ mắc HMB [49]

- Sử dụng bài thuốc cổ truyền giúp điều kinh, hoạt huyết hành khí [8]: • Ích mẫu 20g; Đào nhân 8g; Ngải cứu 8g; Uất kim 8g; Nga truật 8g; Hương phụ

8g • Ích mẫu 300g; Lá sung 200g; Đinh lăng 200g; Ngải cứu 200g; Ô dược 100g;

Củ gấu 200g; Hà thủ ô 290g; Củ mài 200g; Nghệ tím 10g; Mần tưới 100g

1.2 Một số mô hình mô phỏng quá trình kinh nguyệt như ở người trên động vật Kinh nguyệt, sự bong ra của nội mạc tử cung kèm theo chảy máu, xảy ra ở một

số động vật có vú có nhau thai khi nồng độ progesterone giảm khi không có sự làm tổ của phôi Ở động vật có vú không có kinh nguyệt, sự phá vỡ mô và chảy máu không xảy ra khi nồng độ progesterone giảm Tuy nhiên, ở các loài linh trưởng bậc cao, một số loài dơi và chuột chù voi, sự thoái hóa của hoàng thể và hậu quả là lượng progesterone giảm sẽ gây ra sự phân giải protein của chất nền ngoại bào, tế bào chết và chảy máu [26]

Tử cung của loài gặm nhấm và phụ nữ có chung cấu trúc (lớp biểu mô lòng và tuyến, lớp đệm, lớp cơ nội mạc tử cung) nhưng phụ nữ có chu kỳ kinh nguyệt còn các loài chuột nhắt trong phòng thí nghiệm có chu kỳ “động dục” tương đối ngắn với bốn giai đoạn: tiền động dục, động dục, metetrus và diestrus [42] Do đó, các động vật thí nghiệm thông thường như chuột nhắt hoặc chuột cống không thể được sử dụng để nghiên cứu trực tiếp cơ chế của chu kỳ kinh nguyệt rõ ràng như xảy ra ở người [59]

Về vấn đề này, Finn và Keen (1963) và Finn và Pope (1984) đã xây dựng một mô hình chuột mô phỏng các quá trình giống kinh nguyệt [27], [28] Chuột cái trưởng thành được cắt bỏ buồng trứng, để phục hồi trong 7 ngày để làm cạn kiệt các hormone nội sinh, được thiết lập lịch trình hormone để bắt chước các hormone dao động mà phụ nữ trải qua trong chu kỳ kinh nguyệt (sử dụng estrogen và progesterone) và nội mạc tử cung được kích thích nhân tạo để mô phỏng lại quá trình kinh nguyệt [42] Phương pháp: Những con chuột bị cắt bỏ buồng trứng sau ít nhất 1 tuần sẽ được tiêm hormon theo lịch như sau: Ngày 1 và ngày 2 tiêm 100 ng E2 trong 1 ml dầu lạc mỗi ngày; ngày 3, 4, 5 không tiêm; ngày 6, 7, 8 là 10 ng E2 và 500 pg progesterone (mỗi loại hòa tan trong 5 ml dầu lạc) Sau 4-6 giờ tiêm hormon vào ngày thứ 8 thì tiêm dầu vào tử cung

[28] Sau khi tiêm dầu vào tử cung thì thấy hình thành màng rụng, phá vỡ nội mạc tử cung sau khi ngừng sử dụng progesterone và sửa chữa sau đó [59]

Một mô hình khác được M Brasted và cộng sự thiết kế vào năm 2003, những con chuột bị cắt bỏ buồng trứng sau 7 ngày được tiêm 17β-estradiol và cấy ghép progesterone trước khi tiêm dầu vào lòng tử cung Ngày 0, 1, 2 tiêm dưới da 100 ng E2 trong dầu lạc Ngày 6, 7, 8 cấy phép P dưới da vào lưng mỗi con chuột đồng thời tiêm dưới da 5 ng E2 trong dầu lạc 2 tiếng sau khi tiêm E2 vào ngày 8, tiêm 20 µl dầu mè vào lòng sừng tử cung bên phải, sừng trái làm đối chứng Bộ cấy progesterone được lấy ra 49h sau đó và các con vật bị giết chết vào giữa 0 đến 48h sau đó Sự phá vỡ mô nội mạc tử cung được bắt đầu sau 12-16 giờ và đến 24 giờ, toàn bộ vùng màng rụng nội mạc tử cung bị bong ra Qúa trình tái tạo biểu mô gần như hoàn tất sau 36 giờ và nội mạc tử cung phục hồi hoàn toàn sau 48 giờ Do đó phương pháp này bắt chước nhiều sự kiện trong chu kỳ kinh nguyệt của con người [17]

Năm 2007, X.B Xu, B He và J.D Wang làm giảm nồng độ progesterone trên chuột bằng cách sử dụng Mifepristone đã thành công trong việc mô tả quá trình giống với kinh nguyệt ở chuột Động vật được cắt bỏ buồng trứng và để hồi phục sau 2 tuần Sau đó, chúng được tiêm dưới da hormon vào ngày 1, 2, 3 với 100 ng 17β-estradiol trong dầu Arachis Vào ngày thứ 7, cấy vào lưng chuột 50 ng progesterone và tiêm dưới da 5 ng 17β-estradiol trong dầu arachis Vào ngày 8, 9 cũng tiêm dưới da 5 ng 17β-estradiol trong dầu arachis, trong khi ngày thứ 9 tiêm 20 ml dầu arachis vào lòng sừng tử cung bên trái còn sừng bên phải không tiêm để làm đối chứng Ngày 11 tiêm vào dạ dày Mifepristone (120 mg/kg) [69]

Hạn chế của các mô hình này là việc chuột bị cắt bỏ buồng trứng kết hợp với việc cung cấp hormon nhân tạo sẽ loại trừ mọi tác động tự nhiên của hormon buồng trứng, estrogen và progesterone, là những chất cần thiết để chi phối các chức năng nội mạc tử cung trong chu kỳ kinh nguyệt của con người [59] Thời gian quan sát ngắn (2-3 ngày sau khi tiêm dầu) không thuận lợi để quan sát, đánh giá tác dụng của mẫu dược liệu Để khắc phục nhược điểm này, Marion Rudolph, 2012 đã đưa ra mô hình sau: Ở những con chuột cái còn nguyên vẹn: Mức progesterone nội sinh tăng lên bằng cách gây ra hiện tượng mang thai giả Sau khi tiêm dầu vào tử cung, những con chuột hình thành lớp màng rụng ở nội mạc tử cung là điều kiện tiên quyết cho quá trình kinh nguyệt Sự sụt giảm tự nhiên của progesterone nội sinh dẫn đến sự phá vỡ tự phát mô nội mạc tử cung sau khi hình thành lớp màng rụng Những thay đổi về hình thái như sự phá vỡ và sửa chữa lớp nội mạc tử cung xảy ra song song ở cùng một sừng tử cung Quan trọng nhất, sự phá vỡ nội mạc tử cung đi kèm với chảy máu âm đạo và chảy ra khỏi mô bị bong ra tương đương với kinh nguyệt của con người Tóm lại, kinh nguyệt của con người có thể bắt chước về mặt chảy máu ra ngoài âm đạo, tái tạo mô ở các loài

không có kinh nguyệt tự nhiên như chuột cái còn nguyên vẹn không cắt buồng trứng mà không cần cung cấp hormon ngoại sinh [59]

So với mô hình đã thiết lập, Marion Rudolph, 2012 đã kéo dài thời gian của các quá trình chảy máu: những thay đổi về kích thước và hình thái tử cung xảy ra rất nhanh trong vòng vài giờ sau khi ngừng sử dụng progesterone ở chuột đã cắt bỏ buồng trứng, trong khi các quá trình này diễn ra trong vài ngày trong nghiên cứu của Marion Rudolph, 2012 Việc kéo dài thời gian này sẽ làm tăng tính khả thi của việc phân tích động học hoặc cường độ chảy máu Do đó, những con chuột bị chảy máu quá mức và kéo dài được kỳ vọng sẽ có giá trị trong việc nghiên cứu các con đường phân tử ảnh hưởng đến rối loạn kinh nguyệt như rong kinh [59]

1.3 Tổng quan về dược liệu Ích mẫu

1.3.1 Tên gọi - vị trí phân loại

Ích mẫu còn có tên gọi khác là Ích mẫu thảo, Sung úy, Chói đèn Tên khoa học

là Leonurus japonicus Houtt là loài điển hình ở Đông Á Thuộc ngành Ngọc Lan

(Magnoliophyta), lớp Ngọc Lan (Magnoliopsida), phân lớp Hoa môi (Lamidae), bộ Hoa môi (Lamiales), họ Bạc Hà (Lamiaceae), chi Leonurus [6], [71], [2]

1.3.2 Đặc điểm thực vật, phân bố

Đặc điểm thực vật

Ích mẫu là một loại cỏ sống 1-2 năm; cao 0,6m đến 1m Thân hình vuông, ít phân nhánh, toàn thân phủ lông nhỏ ngắn Lá mọc đối, lá ở thân có cuống ngắn hơn, phiến lá xẻ sâu thành 3 thùy, trên mỗi thùy có răng cưa thưa, lá trên cùng phần lớn không chia thùy và hầu như không cuống Hoa mọc vòng ở kẽ lá Tràng hoa màu hồng

hay tím hồng, xẻ thành 2 môi gần đều nhau Qủa nhỏ, 3 cạnh, vỏ màu xám nâu [6]

Phân bố

Chủ yếu mọc hoang, ven suối, ven sông nơi đất cát Cây ưa nóng và ẩm, đất thịt và đất phù sa Một số nơi đã bắt đầu trồng để làm thuốc Cây phân bố ở nhiều nước bao gồm Trung Quốc, Triều Tiên, Việt Nam, châu Phi, châu Mỹ… Ở nước ta gặp từ Lào Cai, Yên Bái, Hà Giang, Lạng Sơn, Hà Nội, Hà Nam vào tới Lâm Đồng và thành phố Hồ Chí Minh [6]

Hình 1.1 Một số hình ảnh cây Ích mẫu (Leonurus japonicus Houtt.) [6]

1.3.3 Thành phần hóa học

Hơn 280 chất chuyển hóa thứ cấp được phân lập từ cây này Tuy nhiên, chỉ một

số ít trong số chúng được báo cáo là có hoạt tính sinh học [51]

1.3.3.1 Nghiên cứu về alcaloid

Alcaloid là thành phần hóa học có hoạt tính chính, có hàm lượng tương đối cao

trong L japonicus Có 4 alcaloid được xác định và nghiên cứu: Leonuridine,

Leonurine, Leonurinine, Stachydrine Trong số các alcaloid được phân lập thì

Stachydrine là một alcaloid khung pyrrole có hàm lượng cao trong L japonicus

Stachydrine và Leonurine được nghiên cứu rộng rãi nhất [51], [61]

Cấu trúc Leonurine trong L japonicus được thể hiện thông qua hình sau:

Hình 1.2 Cấu trúc hóa học của Leonurine

Cấu trúc Stachydrine trong L japonicus được thể hiện thông qua hình sau:

Hình 1.3 Cấu trúc hóa học của Stachydrine

1.3.3.2 Nghiên cứu về terpenoid

Cho đến nay, chỉ có 4 monoterpenoid và 19 sesquiterpenoid được phân lập từ L japonicus Trong số đó, phần lớn là chất tương tự megastigmane Các phân nhóm

sesquiterpenoid khác bao gồm chamigrane, bisabolane, cuparane, chromolaevane và eudesmane Trong chi Leonurus đã phân lập hơn 90 diterpenoid Hơn một phần ba trong số này là bis-spirolabdane diterpenoids Những bis-spirolabdanes này có những điểm tương đồng về cấu trúc; sự khác biệt chính là các nhóm thế ở các nguyên tử cacbon C-3, C-6, C-7, C-8 và C-15, cũng như các cấu hình tuyệt đối khác nhau ở các nguyên tử cacbon bất đối, đặc biệt là ở C-13 Cho đến nay, 36 triterpenoid đã được

phân lập từ L japonicus [51] 1.3.3.3 Một số thành phần khác - Steroid: được xác định có mặt trong L japonicus và chiếm một lượng nhỏ (khoảng

6,7 %) bao gồm 11 stigmastanes và 8 ergostanes được chiết xuất và phân lập [51]

- Flavonoid: Leonurus japonicus rất giàu flavonoid, là một loại chất chuyển hóa thứ

cấp chính và nồng độ của chúng lớn nhất ở lá và nhỏ nhất ở rễ 5 flavonoid đã được

phân lập và mô tả đặc điểm từ L japonicus; chúng bao gồm 10 flavon, 24 flavonol và

1 isoflavon Hầu hết các flavonol là monoglycosid hoặc diglycosid được hình thành bằng cách glycosid hóa glucose (Glc), rhamnose (Rha) và galactose (Gal) [51]

- Phenylpropanoid: Phenylpropanoid có thể được chia thành ba loại: phenylpropanoid đơn giản, coumarin và lignan Các nghiên cứu hóa học trước đây đã phân lập được 7 phenylpropanoid đơn giản, 11 coumarin và 5 lignan Tất cả các phenylpropanoid đơn giản đều là acid phenylpropionic và các dẫn xuất ester hóa của chúng [51]

- Glycosid phenylethanoid: Leonuriside B là glycosid phenylethanoid đầu tiên được

phân lập từ L japonicus [51] Năm 2012, leonoside E và leonoside F, verascoside,

cistanoside E, lavandulifolioside cũng được phân lập và xác định [61]

1.3.4 Tác dụng dược lý

1.3.4.1 Tác dụng trên tử cung

Leonurine (Leo) là alcaloid chính được phân lập từ Ích mẫu Leo làm tăng nồng độ E2 và P trong huyết thanh của chuột phá thai do dùng thuốc [65] Nghiên cứu dược lý khác chỉ ra rằng Leo là alcaloid được chiết xuất từ cây Ích mẫu cho kết quả cầm máu đáng kể do ngăn chặn các mạch xoắn ốc tử cung [68] Trong Ben Cao Gang Mu (một kiệt tác nổi tiếng của y học Trung Quốc), Leo được dùng để điều trị chảy máu âm

đạo [73] Trong các thí nghiệm ex-vivo, nó đã được chứng minh là có tác dụng thúc

đẩy sự co bóp cơ trơn tử cung ở chuột cái trưởng thành bình thường Hoạt động co bóp được tăng lên phụ thuộc vào liều lượng Một thí nghiệm khác được thực hiện trên mô hình chuột mang thai bị chấm dứt thai kỳ do mifepristone và misoprostol gây ra Leo không chỉ tăng cường tần số co bóp mà còn làm tăng nồng độ estradiol trong huyết thanh ở liều 0,5, 1,5 và 4,5 mg/kg Thể tích băng huyết giảm đáng kể ở liều 4,5 mg/kg Ngoài ra, Leo đã được chứng minh là làm giảm tình trạng tăng cảm giác đau và thâm nhiễm nội mạc tử cung ở chuột mắc bệnh Adenomyosis (lạc nội mạc tử cung) gây ra bằng cách điều chỉnh giảm các biểu hiện của p-P65, COX-2 [51]

Stachydrine là một alcaloid phân lập từ Ích mẫu trong điều trị xuất huyết sau

sinh có thể làm giảm lượng chảy máu tử cung ở chuột Thí nghiệm in vitro đã chứng

minh chúng làm tăng biên độ co bóp tử cung nhưng tần số co bóp giảm ở chuột lang [51] Stachydrine có khả năng chuyển mô hình Th1/Th2/Th17/Treg ở chuột phá thai do RU486 thành Th1 và Th17, và do đó được coi là một tác nhân hiệu quả để giảm lượng chảy máu tử cung (Li và cộng sự, 2013) [43]

Ngoài ra, các flavonoid ức chế co bóp, tần số trên cơ trơn tử cung chuột [51]

1.3.4.2 Tác dụng chống viêm

Các diterpenoids từ L japonicus có đặc tính chống viêm bằng việc ức chế yếu tố tiền viêm INF-α, giảm sự biểu hiện của gen COX-2 [51]

1.3.4.3 Tác dụng trên tim mạch

Khi nghiên cứu tác dụng và cơ chế tác dụng của Leonurine trên tế bào cơ tim của chuột non ở tình trạng thiếu oxy và thiếu hụt huyết thanh Khi đó đã phát hiện Leonurine cải thiện hoạt động các tế bào cơ tim bị tổn thương do thiếu oxy, ở nồng độ

động Leonurine còn có tác dụng bảo vệ não đáng kể Nó có thể làm giảm thể tích vùng nhồi máu và cải thiện tình trạng thiếu hụt thần kinh ở chuột bị tắc động mạch não giữa, cho thấy tiềm năng điều trị trong việc ngăn ngừa đột quỵ của Leonurine [51]

Phì đại tim là dấu hiệu khởi đầu quan trọng của bệnh suy tim Khi có phì đại tim thì peptid lợi niệu tâm nhĩ và peptid lợi niệu não sẽ tăng lên để bù trừ, Stachydrine sẽ ức chế sự phì đại tế bào cơ tim của chuột non do nor-epinephrine gây ra phụ thuộc vào thời gian với hàm lượng peptid lợi niệu tâm nhĩ và peptid lợi niệu não giảm rõ rệt

làm giảm biểu hiện protein PLN và tăng cường hoạt động SERCA và sự hấp thu canxi, do đó duy trì cân bằng nội môi canxi nội bào, cải thiện chứng phì đại tế bào cơ tim do

của nó [51] 1.3.4.5 Tác dụng khác

Các diterpenoids điều hòa miễn dịch, gây độc tế bào, hoạt động điều hòa sinh trưởng thực vật và ức chế α- glucosidase [51], [66] Triterpenoid có khả năng gây độc tế bào với ung thư biểu mô dạ dày , ung thư biểu mô tế bào gan, ung thư biểu mô

tuyến vú Các glycosid bảo vệ gan từ L japonicus: Leonoside E, Cistanoside E và

Leonoside F Các chất này có hoạt tính chống lại độc tính do D – galactosamine gây ra cho tế bào gan Leonirisides A và B và acid galic cho thấy hoạt động chống oxi hóa mạnh hơn α – tocopherol và hydroxytoluen butylat hóa [51] Ngoài ra, qủa Ích mẫu dùng với tên Sung úy tứ làm thuốc thông tiểu, chữa phù thũng, thiên đầu thống

(Glaucoma) [6]

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu

❖ Ích mẫu

Phần trên mặt đất của cây Ích mẫu được thu hái tại Bắc Giang (tháng 5/2022)

và được xác định đúng tên khoa học là Leonurus japonicus Houtt bởi Trung tâm Tài

nguyên Dược liệu, Viện Dược liệu Quy trình chiết ethanol 70% và chiết nước từ phần

trên mặt đất của cây Ích mẫu được mô tả tóm tắt như sau:

Quy trình chiết cao ethanol 70 % từ Ích mẫu (ký hiệu mẫu là IME): Lá và cành khô của cây Ích mẫu được cắt thành từng đoạn 1 kg dược liệu Ích mẫu được chiết với 10 lít ethanol 70%, trong thời gian 2,5h ở nhiệt độ hồi lưu của dung môi, lọc thu lấy dịch Phần bã được chiết tiếp hai lần nữa với ethanol 70% (8 lít và 8 lít) ở nhiệt độ hồi lưu của dung môi trong khoảng thời gian tương ứng là 2h và 1,5h Dịch lọc của 3 lần chiết được gộp lại, cất thu hồi ethanol dưới áp suất giảm, sau đó cô trên bếp cách thủy và cuối cùng là sấy trong tủ sấy chân không thu được 104,14g cao, độ ẩm cao 2,81% Hiệu suất chiết cao đạt 10,41%

Quy trình chiết cao nước từ Ích mẫu (ký hiệu mẫu là IMW): 600 g dược liệu ích

khoảng thời gian tương ứng là 2h và 1,5h Dịch lọc của 3 lần chiết được gộp lại cô cạn bằng bếp cách thủy và sấy trong tủ sấy chân không thu được 76,68g cao, độ ẩm cao 2,86% Hiệu suất chiết cao đạt 12,78%

Cao dược liệu được chiết và đánh giá theo tiêu chuẩn cao chiết Ích mẫu của Dược điển Việt Nam V

Liều sử dụng trên chuột được quy đổi tương đương với liều sử dụng trên người trong dân gian đó là: Cao chiết ethanol Ích mẫu nồng độ 600 mg/kg và 800mg/kg, cao chiết nước nồng độ 800 mg/kg và 1600 mg/kg

2.1.2 Động vật nghiên cứu

Chuột nhắt trắng cả đực và cái 8-10 tuần tuổi (35-40 g), chủng Swiss albino khỏe mạnh đạt tiêu chuẩn thí nghiệm được Viện vệ sinh dịch tễ trung ương cung cấp Điều kiện phòng thí nghiệm nhiệt độ 25±1°C, độ ẩm 65±5%, chu kỳ sáng và tối là 12/12 (bật đèn từ 7:00 đến 19:00 giờ), thức ăn và nước uống được cung cấp đầy đủ

Chuột được nuôi ổn định 5 ngày trước lúc làm thí nghiệm 2.1.3 Dụng cụ, hóa chất nghiên cứu

❖ Hóa chất, thuốc thử

Bảng 2.1 Hóa chất sử dụng trong nghiên cứu STT Tên hóa chất Nguồn gốc STT Tên hóa chất Nguồn gốc

Kit định lượng progesterone

Thermo Fisher Scientific, Hoa

Kỳ

cung

Sigma-Aldrich,

2.2 Phương pháp nghiên cứu

Mô hình gây kinh nguyệt như ở người trên chuột nhắt trắng được mô phỏng theo Marion Rudolph, 2012 [59] Thiết kế thí nghiệm được tóm tắt bằng sơ đồ như sau: