Trần sĩ hoàng nghiên cứu tác dụng tăng cường chức năng sinh dục nam của chế phẩm kp 02 trên động vật thực nghiệm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN SĨ HOÀNG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG TĂNG CƯỜNG CHỨC NĂNG SINH DỤC NAM CỦA CHẾ PHẨM KP-02 TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM HÀ NỘI 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN SĨ HOÀNG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG TĂNG CƯỜNG CHỨC NĂNG SINH DỤC NAM CỦA CHẾ PHẨM KP-02 TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH DƯỢC LÝ – DƯỢC LÂM SÀNG MÃ SỐ: 8720205 Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Đào Thị Vui HÀ NỘI 2022 LỜI CẢM ƠN Trong quá trình học tập và hoàn thành luận văn, đã nhận được sự hướng dẫn, giúp đỡ quý báu của các thầy cô, các anh chị và các bạn Lời đầu tiên, xin phép được bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Đào Thị Vui – Nguyên trưởng bộ môn Dược Lực, Trường Đại học Dược Hà Nội, người đã trực tiếp hướng dẫn, truyền dạy nhiều kiến thức mới, chỉ bảo tận tình và động viên suốt quá trình thực hiện và hoàn thành luận văn này Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến TS Nguyễn Thu Hằng – Giảng viên bộ môn Dược Lực, Trường Đại học Dược Hà Nội, người cô giáo đã trực tiếp tham gia chỉ đạo nghiên cứu, sẵn sàng giúp đỡ, tháo gỡ, giải đáp, định hướng cho suốt quá trình thực hiện luận văn Tôi cũng xin chân thành cảm ơn tập thể các thầy cô giáo cùng các anh chị kỹ thuật viên bộ môn Dược Lực, Trường Đại học Dược Hà Nội, đã tận tình hướng dẫn, giúp đỡ, hỗ trợ suốt quá trình thực hiện nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban Giám hiệu, Phòng đào tạo sau đại học, Trường Đại học Dược Hà Nội đã tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ, tận tâm dạy dỗ, truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm và kỹ suốt quá trình học tập và hoàn thành luận văn Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, anh chị em và bạn bè tôi, những người đã tin tưởng, sát cánh, đồng hành, động viên, khích lệ vượt qua những lúc khó khăn cuộc sống, công việc và học tập để giúp có thể thực hiện và hoàn thành được luận văn này Hà Nội, ngày 12 tháng 12 năm 2022 Học viên Trần Sĩ Hoàng DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt RLCD Tên viết đầy đủ Rối loạn cương dương LH Hormone hồng thể hóa (Luteinizing hormone) FSH Hormone kích nỗn bào (Follicle-stimulating hormone) GnRH DHT MPOA cGMP Hormone giải phóng gonadotropin (Gonadotropin releasing hormone) Dihydrotestosterone Vùng tiền não trung gian (Medial preoptic area) Guanosine monophosphate mạch vòng (Cyclic guanosine monophosphate) PVN Nhân não thất (Paraventricular nucleus) NO Nitric oxide ICP Áp lực thể hang (intracavernosal pressure) αMSH ED PDE5 PDE5-Is PE IELT α-Melanocyte-stimulating hormone Erectile dysfunction (Rối loạn cương dương) Phosphodiesterase Chất ức chế Phosphodiesterase (Phosphodiesterase inhibitors) Xuất tinh sớm (Premature Ejaculation) Khoảng thời gian chờ xuất tinh âm đạo (Intravaginal ejaculation latency time) PS Cảm giác tiền xuất tinh (Premonitory sensations) ML Thời gian đạt tới hành vi nhảy (ML- Mount latency) MF Số lần nhảy (MF- Mount frequency) IL IF EL Thời gian đạt tới hành vi xâm nhập (IL- Intromission latency Số lần xâm nhập (IF- Intromission frequency) Thời gian đạt đến hành vi xuất tinh (EL- Ejaculation latency) EF Số lần xuất tinh (EF- Ejaculation frequency) PEI Khoảng cách sau xuất tinh (PEI - Postejaculatory interval) IR Tỷ lệ xâm nhập (Intromission ratio) DANH MỤC BẢNG Nội dung bảng Trang Bảng 1.1 Tỷ lệ rối loạn suy giảm chức suy giảm sinh dục nam số nước Châu Á Bảng 1.2 Các nguyên nhân thường gặp tình trạng RLCD Bảng 1.3 Bốn hội chứng xuất tinh sớm (PE) đề xuất cho định nghĩa PE 17 Bảng 3.1 Ảnh hưởng mẫu thử đến hành vi tình dục 42 Bảng 3.2 Ảnh hưởng KP-02 lên hành vi xâm nhập 43 Bảng 3.3 Ảnh hưởng KP-02 lên hành vi xuất tinh 43 Bảng 3.4 Ảnh hưởng KP-02 lên khối lượng quan sinh dục phụ (túi tinh, nâng hậu môn) tinh hoàn Bảng 3.5 Ảnh hưởng KP-02 lên khối lượng quan sinh dục phụ (tuyến cowper, tuyến tiền liệt) Bảng 3.6 Ảnh hưởng mẫu thử KP-02 lên nồng độ testosteron máu 46 48 50 Bảng 4.1 So sánh liều cao thành phần chế phẩm KP-02 liều dùng cao dược liệu đơn độc nghiên cứu đánh giá tác dụng sinh dục 55 DANH MỤC HÌNH VẼ Nợi dung bảng Trang Hình 1.1 Hướng dẫn điều trị RLCD 13 Hình 1.2 Các dây thần kinh giao cảm , dây thần kinh phó giao cảm dây thần kinh soma điều khiển trình xuất tinh 15 Hình 1.3 Vịng trịn ngun nhân hậu PE 19 Hình 1.4 Một số mơ hình nghiên cứu tác dụng thuốc lên chức sinh dục nam thường dùng 22 Hình 1.5 Trình tự hành vi tình dục chuột 23 Hình 1.6 Xà Sàng tử 25 Hình 1.7 Cấu trúc phân tử Osthol 26 Hình 1.8 Cây Damiana 26 Hình 1.9 Cây Bá Bệnh 27 Hình 1.10 Cây Dâm dương hoắc 29 Hình 1.11 Đơng trùng hạ thảo 29 Hình 2.1 Chuột thực hành vi nhảy 36 Hình 2.2 Chuột đực thực hành vi xâm nhập liếm phận sinh dục sau 37 Hình 2.3 Chuột đực xuất tinh, bụng chuột đực co thắt rõ ràng 37 Hình 2.4 Quy trình tiến hành nghiên cứu tác dụng KP-02 hành vi tình dục chuột cống trắng 38 Hình 2.5 Quy trình nghiên cứu tác dụng androgen KP-02 40 Hình 3.1 Ảnh hưởng mẫu KP-02 lên hành vi tình dục 44 Hình 3.2 Ảnh hưởng mẫu thử KP-02 lên số lần xâm nhập 45 Hình 3.3 Ảnh hưởng mẫu thử KP-02 lên số lần xuất tinh 45 Hình 3.4 Ảnh hưởng KP-02 lên khối lượng túi tinh, tinh hoàn nâng hậu mơn Hình 3.5 Ảnh hưởng KP-02 lên khối lượng tuyến cowper, tuyến tiền liệt Hình 3.6 Hình ảnh quan sinh dục phụ chuột cống lô Chứng (trái) lơ Testosteron (phải) Hình 3.7 Hình ảnh quan sinh dục phụ chuột cống lô KP-02 liều (trái) lơ KP-02 liều (phải) Hình 3.8 Ảnh hưởng mẫu thử KP-02 lên nồng độ testosteron máu 47 48 49 49 50 Hình 4.1 Tương quan nồng độ testosterone tình trạng xuất tinh Mức (xuất tinh sớm nghiêm trọng) đến mức (không xuất tinh được) 60 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN TỔNG QUAN 1.1 Giải phẫu, sinh lý của sinh dục nam 1.1.1 Tinh hoàn 1.1.2 Mào tinh hoàn 1.1.3 Ống dẫn tinh 1.1.4 Túi tinh 1.1.5 Ống phóng tinh 1.1.6 Tuyến tiền liệt 1.1.7 Tuyến hành niệu đạo – tuyến cowper 1.1.8 Dương vật 1.1.9 Bìu 1.2 Một số rối loạn suy giảm chức sinh dục nam 1.2.1 Rối loạn cương dương 1.2.2 Rối loạn xuất tinh sớm 14 1.2.3 Suy sinh dục nam 20 1.3 Các mô hình nghiên cứu th́c tác dụng lên chức sinh dục nam 21 1.3.1 Mô hình nghiên cứu thuốc hoạt động tình dục 22 1.3.2 Mơ hình nghiên cứu tác dụng androgen của thuốc 24 1.4 Chế phẩm KP02 25 1.4.1 Xà sàng (Cnidium monnieri extract) 25 1.4.2 Damilib (Turnera diffusa) 26 1.4.3 Bá bệnh (Eurycoma longifolia extract) 27 1.4.4 Dâm dương hoắc (Epimedium spp) 28 1.4.5 Đông trùng hạ thảo (Cordyceps militaris) 29 PHẦN ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31 2.1 Đối tượng nghiên cứu 31 2.2 Phương tiện nghiên cứu 31 2.2.1 Động vật thí nghiệm 31 2.2.2 Hóa chất 32 2.2.3 Thiết bị nghiên cứu 32 2.3 Nội dung nghiên cứu 32 2.4 Phương pháp nghiên cứu 33 2.4.1 Đánh giá tác dụng tăng cường hành vi tình dục của của chế phẩm KP-02 chuột cống đực 33 2.4.2 Đánh giá tác dụng androgen của chế phẩm KP-02 chuột cống đực 39 PHẦN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 42 3.1 Ảnh hưởng của mẫu thử KP-02 lên hành vi tình dục 42 3.1.1 Ảnh hưởng của mẫu thử KP-02 lên tỷ lệ chuột có hành vi tình dục 42 3.1.2 Ảnh hưởng của mẫu thử KP-02 lên các hành vi tình dục 43 3.2 Kết quả đánh giá tác dụng andrgen của chế phẩm KP-02 chuột thực nghiệm 46 PHẦN 4: BÀN LUẬN 51 4.1 Bàn luận về chế phẩm KP-02 51 4.2 Bàn luận về mô hình nghiên cứu 56 4.2.1 Mơ hình test hành vi Ågmo Anders 56 4.2.2 Mơ hình đánh giá hoạt tính androgen 60 4.3 So sánh tác dụng của chế phẩm PK-02 ở hai mức liều 64 KẾT LUẬN 66 KIẾN NGHỊ 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO 68 việc so sánh khối lượng tương đối quan sinh dục phụ đã được thực hiện từ những năm 1930 được Hershberger đã mô tả mô hình này với một số thay đổi và bổ sung vào năm 1953 [71] Được đánh giá mợt mơ hình thực nghiệm khơng u cầu q nhiều thiết bị tiên tiến, có tính đặc hiệu cao giá trị, mơ hình Hershberger được dùng phổ biến để chứng minh hoạt tính androgen của th́c Theo OECD, đợng vật có thể được sử dụng mơ hình cḥt cớng cḥt nhắt Tuy nhiên, nhóm đới tượng cḥt nhắt được sử dụng cḥt cớng kích thước quan sinh dục của chuột nhắt bé hơn, trọng lượng trung bình của cḥt cớng trắng từ 170-220g cḥt nhắt chỉ từ 10-25g Khi thực hiện bước bóc tách lấy bợ phận đích, kích thước nhỏ, mốc giải phẫu không rõ ràng khiến việc giải phẫu xác trở nên khó khăn Bước cân bợ phận đích với giá trị thấp cũng sự ảnh hưởng của sai số thực hiện cũng lớn Vì vậy nghiên cứu sử dụng mơ hình này, đới tượng thí nghiệm cḥt cớng được chọn phổ biến Nghiên cứu cũng chọn đối tượng thí nghiệm cḥt cớng Theo OECD, cḥt cớng được sử dụng chuột đực non chuột non thiến Việc sử dụng cḥt non thiến giúp tăng đợ xác của nghiệm pháp, đặc biệt đối tượng nghiên cứu chất có hoạt tính androgen ́u, cần phải loại bỏ tối đa tác động đến từ androgen nội sinh chế feedback của trục vùng đồi – tuyến yên – tinh hoàn từ các quan sinh dục phụ chưa phát triển đầy đủ Vì vậy đới tượng cḥt phù hợp để sử dụng chuột cống đực non được loại bỏ tinh hồn chúng chưa hồn thiện Bên cạnh đó, việc thiến đờng loạt cũng giảm bớt sai sót tinh hồn của mỡi cá thể trưởng thành sản xuất lượng testosteron khác Từ có thể làm giảm số lượng chuột cần để dùng mô hình Theo OECD, sớ lượng tới thiểu cḥt cần dùng cho mỡi lơ mơ hình cá thể 61 Nghiên cứu sử dụng cá thể chuột không thiến Khơng thiến cḥt có thể ảnh hưởng đến việc xác định nếu chế phẩm có hoạt tính androgen ́u Tuy nhiên mục đích ći của chế phẩm được sử dụng người không bị khiếm khuyết vật lý về sinh dục với việc thành phần chế phẩm KP-02 đa dạng với nhiều chế tác động tăng cường sinh dục chưa được đánh giá cụ thể Việc thiến cḥt có thể làm một số chế tăng cường sinh dục tác động lên tinh hoàn của chế phẩm mà chưa được đánh giá Vì vậy nhóm nghiên cứu sử dụng cḥt đực khơng thiến tăng cỡ mẫu ở mỡi nhóm lên từ đến cá thể chuột mỗi nhóm so với sớ lượng tới thiểu để cân lại sai số Theo OECD, testosteron được sử dụng làm th́c chứng dương Nhóm chứng dương được tiêm da testosteron propionat với liều 0,2 0,4 mg/kg/ngày vịng 10 ngày Trong nghiên cứu chúng tơi sử dụng mức liều 0,5mg/kg lần tuần Chuột được tiêm testosteron hàng ngày giúp hoạt tính androgen lô chứng biểu hiện một cách rõ ràng nhiên cũng khiến chuột dễ dàng bị hoại tử chết Theo OECD, tất cả chuột đều bị hoại tử sau liều ći Là mợt hormone, testosteron có thời gian bán thải ngắn, nhiên, việc tiêm da testosteron dạng muối propionat giúp testosteron được hấp thu kéo dài, trì được tác dụng, khơng bị khác biệt nhiều với mức liều 0,2 mg/kg/ngày Kết quả cho thấy việc thay đổi liều testosteron vậy thể hiện rõ hoạt tính androgen cḥt cớng đực: khối lượng quan sinh dục phụ (túi tinh, nâng hậu môn, tuyến Cowper, tuyến tiền liệt) tăng có ý nghĩa thớng kê so với lơ chứng Túi tinh, nâng hậu môn, tuyến Cowper, tuyến tiền liệt, quy đầu dương vật các quan có sự thay đổi khối lượng ảnh hưởng bởi mức độ hoạt đợng của androgen Testosteron có vai trị quan trọng thúc đẩy quá trình tổng hợp protein của các quan sinh dục phụ đến 10% testosteron tác dụng của enzym 5α-Reductases chuyển hóa thành dehydrotestosteron (DHT), sau đó DHT liên kết với receptor ở màng tế bào đích ở quan sinh dục phụ, kích thích 62 hàng loạt các phản ứng tổng hợp protein tế bào đích từ tăng sinh tế bào đích dẫn đến tăng khối lượng quan Trong nghiên cứu chúng tơi đánh giá quan túi tinh, nâng hậu môn, tuyến Cowper, tuyến tiền liệt Theo hướng dẫn của OECD, khối lượng của ít hai số năm quan tăng lên có ý nghĩa thống kê so với các lô chuột không dùng thuốc thì thuốc được coi là có hoạt tính androgen [71] Cùng với đó, quy đầu dương vật bợ phận có sự thay đổi khối lượng tác dụng androgen thấp quan [71] Vì vậy việc loại quy đầu dương vật khỏi kết quả nghiên cứu không ảnh hưởng nhiều đến kết luận của nghiên cứu Mơ hình cho kết quả: chế phẩm KP-02 ở mức liều 258 mg/kg/ngày làm tăng khối lượng của quan nâng hậu môn tuyến tuyền liệt có ý nghĩa thớng kê so với lơ chứng, mức liều 515mg/kg/ngày làm tăng khối lượng của quan nâng hậu mơn có ý nghĩa thớng kê so với lô chứng Như vậy, chế phẩm KP-02 ở mức liều 515 mg/kg/ngày chưa thể hiện hoạt tính androgen, mức liều 258 mg/kg/ngày thể hiện hoạt tính androgen chuột cống đực Đối với Lô chuột được tiêm testosteron, cả bợ phận đều có sự tăng về khối lượng quan sinh dục phụ so với lô chứng Ta thấy được việc thay đổi liều lượng dùng từ 0,2-0,4mg/kg/ngày thành 0,5mg/kg tuần lần khơng làm tác hoạt tính androgen của testosteron Việc sử dụng chuột không thiến cũng khiến cho lơ cḥt chứng sản sinh lượng testosteron bình thường nhiên lô chứng dương, được tiêm testosteron lô thử KP-02 đều thể hiện rõ sự tăng hoạt tính androgen ở cḥt Đánh giá về hoạt tính androgen ở lơ testosteron lơ chế phẩm KP-02 cịn được thể hiện qua hàm lượng testosteron máu chuột Kết quả định lượng testosteron ở bảng Cho thấy lô chuột được tiêm da testosteron lô chuột sử dụng chế phẩm KP-02 liều 256mg/kg/ngày làm tăng nồng đợ testosteron lớn 250% có ý nghĩa thớng kê so với lô chứng với p