chuyên đề các kĩ thuật định danh vi khuẩn gây bệnh hiện đại

Một số điểm nổi bật của máy MICROFLEX LT Tốc độ và hiệu suất Giải quyết nhiều mẫu cùng lúc: tối đa 96 mẫu chưa đến 1 tiếng Chính xác Công nghệ khối phổ mang lại sự chính xác bởi sự đặc

Chuyên đề

Các kĩ thuật định danh vi khuẩn gây bệnh hiện đại

GVHD: ThS Trương Quang Vinh

ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH

KHOA ĐIỀU DƯỠNG – KỸ THUẬT Y HỌC

BỘ MÔN XÉT NGHIỆM

Lớp: CNXN20 – Nhóm 7

5 Nguyễn Ngọc Mai Anh - 611208746

6 Nguyễn Thái Tài - 611208873

7 Nguyễn Minh Thư - 611208884

Ưu – nhược điểm

Phương pháp cổ điển

01

Bệnh viện Hùng Vương

Bệnh việnNhiệt đới

Bộ trắc nghiệm sinh hóa

vi khuẩn đường ruột

Thử nghiệm Catalase

Thử nghiệm Oxidase

Thử nghiệm Coagulase

Thử nghiệm Catalase

Thử nghiệm Coagulase

➢ Phânbiệt S.aureus và SCN

➢ Kỹ thuật trên kính: Nhỏ 1 giọt NaCl 0,9%làm chứng âm và 1 giọt Coagulase lênlame sạch Dùng khuyên cấy lấy khúmkhuẩn tán đều vào nước muối, dùngkhuyên khác tánđều vào Coagulase

o S.aureus cho phản ứng dương tính:xuất hiện kết cụm

o SCN cho phản ứng âm tính:không kết cụm

Phân biệt Staphylococci và Strepcocci

o Sủi bọt → Staphylococci

o Không sủi bọt → Streptococci

Thử nghiệm Optochin Thử nghiệm Oxidase

Xác định vi khuẩn sinh enzyme cytochromeoxidase, phân biệt Enterobacteriaceae vànhóm Pseudomonas

Đặt mảnh giấy lọc lên trên lame sạch, nhỏ

1 giọt oxidase lên giấy lọc Dùng khuyêncấy chạm vào khúm khuẩn nghi ngờ phếtvào chỗ đã nhỏ thuốc Đọc kết quả trong

30 giây

❑ Nhóm Pseudomonas cho phản ứngdương tính: xuất hiện màu tím than

❑ Enterobacteriaceae cho phản ứng âmtính: khôngđổi màu

Phân biệt phế cầu và chuỗi cầu tiêu huyết α

Cấy mẫu trên BA, đặt 1 đĩa Optochin vào

giữa đường cấy thứ nhất và thứ hai và ủ

35oC/18 – 24h/5 – 10% CO2

❑ S.pneumoniae cho kết quả Optochin

dương: đường kính vòng vô khuẩn

≥15mm

❑ Chuỗi cầu tiêu huyết α cho kết quả

Optochin âm: đường kính vòng vô khuẩn

≤10 mm

o KIA: Khảo sát khả năng lên men

lactose, glucose, sinh khí và H2S

o IM: Khảo sát khả năng sinh indol và

o Methyl Red (MR): Phân biệt các loại

vi khuẩn lên men đường glucose

thành sản phẩm cuối cùng hay thành

sản phẩm trung gian

Bộ trắc nghiệm sinh hoá vi khuẩn đường ruột

Phương pháp hiện đại

02

Nguyên lý hoạt động

➢ MALDI (Matrix Assisted Laser

Desorption Ionization):

o Công nghệ ion hóa mềm được

dùng trong đo quang phổ kế

o Phân tích các phân tử sinh học

(DNA, protein, peptide, đường…)

và các phân tử hữu cơ lớn

➢ TOF (Time Of Flight – Thời gian bay):

o Phân tử sinh học bị ion hóa mang

điện tích, khối lượng khác nhau →

di chuyển trong lực điện trường

thời gian từ lúc bay cho đến lúc

chạm đầu dò của mỗi ion sẽ được

ghi nhận và vẽ thành một biểu đồ

MÁY ĐỊNH DANH NHANH VI KHUẨN MICROFLEX LT

Nguyên lý hoạt động

→ Định danh bằng kỹ thuật khối phổ

MALDI-TOF xácđịnh dấu ấn protein duy

nhất của mỗi vi sinh vật.

✓ Thời gian định danh: 96 mẫu trong

khoảng 50 phút tính từ thời điểm đưa

mẫu vào máy

✓ Chỉ cần duy nhất 1 khuẩn lạc thuần

Quy trình

▪ Mẫu bệnh phẩm được nuôi cấy vào các môi

trường thích hợp sau 18 – 24h, nếu có vi sinh

vật mọc thì tiến hành định danh MALDI-TOF

▪ Lựa chọn khúm khuẩn cần định danh Dùng

tăm tre lấy 1 ít vi sinh vật từ khúm khuẩn

thuần cho lên giếng của đĩa MALDI Target rồi

để khô ở nhiệt độ phòng

▪ Cho 1µL acid formic lên các giếng và để khô ở

nhiệt độ phòng, sau đó cho dung dịch HCCA

Matrix tương tự

▪ Khởi động và nhập tên bệnh nhân, mã số lên

hệ thống

MÁY ĐỊNH DANH NHANH VI KHUẨN MICROFLEX LT

▪ Đưa đĩa MALDI Target vào máy

để thực hiện định danh

▪ Phiên giải kết quả

Một số điểm nổi bật của máy MICROFLEX LT

Tốc độ và hiệu suất Giải quyết nhiều mẫu cùng lúc: tối đa

96 mẫu chưa đến 1 tiếng Chính xác

Công nghệ khối phổ mang lại sự chính xác bởi sự đặc trưng của từng dấu ấn protein

Đa dạng mẫu Công nghệ khối phổ giúp định danh

nhiều loại vi khuẩn các nhau

Tự động hoá và tiện ích Có thể tích hợp với phần mềm quản lý

dữ liệu và mở rộng chức năng Chi phí Đầu tư, vận hành và bảo trì cao

Nguyên lý hoạt động Nguyên lý XN

➢ Định danh vi sinh vật: nhận biếttính chất vi sinh vật qua thay đổi

màu sắc của giếng môi trường có

sẵn trong thẻ

➢ Kháng sinh đồ: Dựa trên giá trị

MIC(nồng độ ức chế tối thiểu)

➢ Thực hiện theo nguyên lý suy giảm

cường độ sáng, hệ thống quang học

sử dụng ánh sáng nhìn thấy để theo dõi

trực tiếp sự phát triển của vi sinh vật

thông qua việc đo cường độ ánh sáng bị

chặn lại khi ánh sáng đi qua giếng

MÁY ĐỊNH DANH VÀ KHÁNG SINH ĐỒ TỰ ĐỘNG VITEK 2 Compact

✓ Công suất 15/30/60 mẫu

✓ Tự động báo cáo kết quả khi

XN hoàntất

Quy trình

1 QC các chủng vi sinh vật (Gram âm, Gram

dương, trực khuẩn)

2 Khởi động hệ thống máy Vitek 2 Compact

3 Chuẩn bị huyền dịch vi khuẩn:

o Chuẩn bị ống nghiệm chứa 3 mL

nước muối sinh lý vô trùng

o Pha huyền dịch với khúm khuẩn

Điều chỉnh độ đục của huyền dịchtheo bảng bên dưới

4 Đưa khay cassette vào buồng hút mẫu,

đóng cửa buồng hút, nhấn nút hoạt động

để máy tự hút mẫu vào thẻ XN

MÁY ĐỊNH DANH VÀ KHÁNG SINH ĐỒ TỰ ĐỘNG VITEK 2 Compact

Độ đục McF 0.5 – 0.63 0.5 – 0.63 1.8 – 2.2 2.7 – 3.3 2.7 – 3.3

6 Chờ đến khi đèn của buồng vận hành nháybáo hiệu đã tải hết thẻ vào trong máy thì mởcửa và lấy khay cassette ra.

7 Nhập thông tin BN, mã bệnh phẩm, tên nhân viên thực hiện XN…

8 Máy tự hoàn tất XN và kết quả sẽ được tựđộng in ra Sau khi hoàn tất, máy sẽ tự độngđưa thẻ vào thùng rác trong máy)

Một số điểm nổi bật của máy Vitek 2 Compact

Tiêu chí Vitek 2 Compact

Tốc độ và hiệu suất Nhanh chóng, tự động hoá quy trình phân tích

Chính xác Kết quả chính xác và đáng tin cậy

Đa dạng mẫu Có khả năng xử lý nhiều loại mẫu khác nhau

Tự động hoá và tiện ích Hoạt động hoàn toàn tự động, giảm thiểu sai sót

Chi phí Đầu tư ban đầu và chi phí vận hành cao hơn

Khả năng mở rộng Có thể tích hợp với phần mềm quản lý dữ liệu

và mở rộng chức năng

Thời gian ra kết quả

ID/AST 5-8 giờ

Nguyên lý hoạt động Nguyên lý XN

o Thiết bị có thể thực hiện tối đa 50 XN địnhdanh và hóa của vi khuẩn thông qua sựthayđổi thử nghiệm độ nhạy kháng sinh

o Phoenix ID panel giúp định danh vi khuẩn

dựa trên nguyên tắc đo màu và đo huỳnh

quang để nhận biết các tính chất sinh màucủa các giếng môi trường có sẵn trong thẻ

➢ Hệ thống có thể phát hiện và định danh 160loài vi khuẩn thuộc Gram (-), 140 loài vikhuẩn Gram (+), 32 loài thuộc Strep và 62loại nấm khác nhau

o Dựa vào sự kết hợp của chất chỉ

thị oxy hóa - khử với đo độ đục

để phát hiện sự tăng sinh vi khuẩn

Thông số kĩ thuật

MÁY ĐỊNH DANH VÀ KHÁNG SINH ĐỒ

TỰ ĐỘNG BD Phoenix M50

❑ Côngsuất máy: ≥ 50 test/lần chạy

❑ Kết nối với hệ thống phần mềm LIS kiểm soát thông tin

❑ Máy cókhả năng định danh và làm kháng sinh đồ đồng thời và độc lập

❑ Panelchạy máy linh hoạt:

• Panelđịnh danh: Phoenix ID

• Panel thực hiện kháng sinh đồ:

Quy trình

1 Chọn khúm khuẩn đã được phân lập, đem đi nhuộm

Gramđể lựa chọn panel phù hợp

2 Chuẩn bị huyền dịch định danh ID – broth

3 Độ đục đạt chuẩn:

✓ 0,5 – 0,6 McF: VK Gram (-), Gram (+), Strep

✓ 0,2 – 0,3 McF: VK Gram (-), Gram (+)

✓ 2,0 – 2,4 McF: Nấm

4 Đưa panel đã chuẩn bị vào hệ thống

5 Cấy lại 1 giọt nhỏ huyền dịch đã pha lên thạch

Columbia Agar Base để kiểm tra khúm mọc có đồng

nhất với kết quả của máy chạy (BV Hùng Vương)

MÁY ĐỊNH DANH VÀ KHÁNG SINH ĐỒ

TỰ ĐỘNG BD Phoenix M50

Một số điểm nổi bật của máy BD Phoenix M50

Tiêu chí BD Phoenix M50 Tốc độ và hiệu suất Nhanh chóng, tự động hoá quy trình phân tích

Chính xác Kết quả chính xác và đáng tin cậy

Đa dạng mẫu Có khả năng xử lý nhiều loại mẫu khác nhau

Tự động hoá và tiện ích Hoạt động hoàn toàn tự động, giảm thiểu sai sót Chi phí Đầu tư ban đầu và chi phí vận hành hợp lý

Khả năng mở rộng Có thể xếp chồng để tiết kiệm không gian phòng

thí nghiệm

Ưu – nhược điểm

03

✓ Thời gian trả kết quả nhanh và độ chính xác

cao nhờ vào việc tự động hóa quy trình phântích trong 1 hệ thống khép kín

✓ Định danh được nhiều loại vi khuẩn hơn so

với phương pháp cổ điển (máy Vitek 2Compact định danh trên 552 loài vi khuẩn)

✓ Thực hiện định danh cùng lúc với số lượng mẫu lớn:

o Máy Microflex: 90 mẫu

o Máy Vitek 2 Compact: 15/30/60mẫu

o Máy BD Phoenix M50: 50mẫu

✓ Kết quả được lưu tự động, thuận lợi cho việc

kiểm tra khi có sai sót

✓ Quy trìnhthực hiện đơn giản và dễ sử dụng.

Ưu điểm

Nhược điểm

Kết luận

❑ Chi phí dầu tư ban đầu và vận hành cao.

❑ Có thể có giới hạn về số lượng giếng kháng

sinh trên các bảng kiểm tra và bảng kết hợp

ID/AST → Không thể loại bỏ hoàn toàn

phương pháp cổ điển.

❑ Yêu cầu kĩ thuật cao về vận hành máy.

Các phương pháp định danh vi khuẩn hiện đại so với các phương pháp cổ điển đã:

❖ G iảm khối lượng công việc.

❖ T iết kiệm hóa chất và môi trường.

❖ Rút ngắn thời gian trả kết quả.

❖ Kết quả có độ chính xác cao và đáng tin cậytrongviệc xác định các loại vi khuẩn gây bệnh

Tài liệu tham khảo

1 Phạm Thái Bình (2023), Kỹ thuật định danh, Bài giảng Vi Sinh xét nghiệm 20,

XMh4/edit.

https://docs.google.com/document/d/12ouEGPYBqe220EmpHJLum2hmaJ-yb1ljcB0tIF-2 Nguyễn Thị Mỹ Châu (2017), Năng lực xét nghiệm vi sinh và thực trạng kháng kháng sinh tại một số bệnh viện đa khoa tuyến tỉnh năm 2012 – 2015, Luận án tiến sĩ y học, Trường Đại Học Y Hà Nội,

https://sdh.hmu.edu.vn/images/ngcuusinh/NGUYEN%20THI%20MY%20CHAU-LA.pdf

3 CAFAM COMPANY Chi tiết máy định danh vi khuẩn và kháng sinh đồ tự động Vitek 2 Compact, http://cafambio.com/san-pham/may-dinh-danh-vi-khuan-khang-sinh-do-tu- dong-vitek-2-compact-161.html

4 CÔNG TY TNHH MTV THƯƠNG MẠI CÔNG NGHỆ TÂN KIỀU Chi tiết máy định danh

vi khuẩn và kháng sinh đồ tự động Vitek 2 Compact, va-khang-sinh-do-tu-dong-vitek-2-compact-625.html

https://tankieu.vn/may-dinh-danh-5 Văn phòng đại diện Becton Dickinson Asia Limited Tại Thành Phố Hồ Chí Minh (2021) Văn bản công bố tiêu chuẩn áp dụng của trang thiết bị y tế thuộc loại A Hệ thống dịch

vụ công trực tuyến quản lý trang thiết bị y tế

https://dmec.moh.gov.vn/xem-ho-so?p_p_id=xemhoso_WAR_oepdvcportlet_INSTANCE

6 Tài liệu mô tả tóm tắt kỹ thuật trang thiết bị y tế Hệ thống dịch vụ công trực tuyến quản

lý trang thiết bị y tế,

https://dmec.moh.gov.vn/documents/10182/7542865/upload_00091549_152548398016 2.pdf?version=1.0&fileId=7543077.

CREDITS: This presentation template was created by Slidesgo, and includes icons by Flaticon, and infographics & images by Freepik

Does anyone have any questions?

Thank you

for listening!

Please keep this slide for attribution