báo cáo tiểu luận nhóm 4 thứ 3ca 1

PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN THỰC PHẨM CÓ NGUỒN GỐC TỪ NGÔ BIẾN ĐỔI GENDanh sách nhóm 4 Nguyễn Hoài Bảo Ngọc BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠOTRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINHKHOA KHOA HỌC SIN

PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN THỰC PHẨM

CÓ NGUỒN GỐC TỪ NGÔ BIẾN ĐỔI GEN

Danh sách nhóm 4 Nguyễn Hoài Bảo Ngọc

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC BÁO CÁO

Chương 3

Chương 2

Kết quả

Chương 1

NỘI DUNG

Mở đầu

Vật liệu và phương pháp nghiên cứu

1.1 Đặt vấn đề

2.1 Vật Liệu 2.2 Hóa chất 2.3 Phương pháp nghiên cứu

3.1 Kết quả mong muốn

Chương 1 Mở đầu

1.1 Đặt vấn đề

Mục đích của việc xác

định thực phẩm có nguồn gốc từ ngô biến

đổi gen?

Chương 2 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu

2.1 Vật Liệu o Thực phẩm có chứa ngô

o Cối và chày nhỏ

o Cân phân tích

o Máy ly tâm

o Máy PCR

o Bộ cung cấp nguồn điện (power source)

o Bồn điện di (gel box)

o Khay gel (casting tray), lược gel (combs)

Ly trích

• Dung dịch đồng nhất

mẫu

• Hỗn hợp (PCI, v:v:v)

25:24:1.

• Chloroform.

• Ethanol 99°.

Phản ứng

PCR

• Master Mix.

• Primer F.

• Primer R.

• H2O.

• DNA.

Chương 2 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu

2.2 Hóa chất

Mutation

Điện di

• Dung dịch đệm điện

di (TAE).

• Agarose.

• GelRed.

Bước 1

Bước 2

Bước 3

Bước 4

Bước 5

Nghiền mẫu ( bằng cối và chày) sao đó lấy mẫu đã nghiền tiếp tục nghiền trong tube 1,5 mL

có chứa 400 μL dịch đồng nhất mẫu

Bổ sung vào tube 500 μL PCI và lắc nhẹ 1 phút, li tâm với vận tốc 10.000 rpm trong 5 phút, sau đó hút dịch nổi cho vào ống tube mới

Bổ sung 400 μL Chloroform vào, lắc nhẹ 3 phút, li tâm 10.000 rpm/5 phút, hút dịch nổi chuyển qua tube mới

Thêm 600 μL Ethanol 99°, lắc nhẹ 2 phút Ủ ở -20°C trong 30 phút Sau đó li tâm 12.000 rpm/5 phút, bỏ dịch nổi, thu phần tủa Phơi tube ở nhiệt độ phòng

Thêm vào kết tủa DNA 30 μL nước khử ion hấp khử trùng (không chứa DNase) hoặc 30 μL

TE 0,5X, vortex nhẹ và bảo quản ở 4°C hoặc -20°C

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3.1 Ly trích DNA

Gene Bt Cry 1A(b) (delta-endotoxin):

  Cry1Ab (5′-ACCATCAACAGCCGCTACAACGACC-3′);  

 Cry1As (5′-TGGGGAACAGGCTCACGATGTCCAG-3′); 

Gene invertase ngô ( Ivr ):

 Ivr1A (5′-CCGCTGTATCACAAGGGCTGGTACC-3′);

 Ivr1B (5′-GGAGCCCGTGTAGAGCATGACGATC-3′).

2.3 Phương pháp nghiên

cứu

2.3.2 Phản ứng PCR

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3.2 Phản ứng PCR

Bước Nhiệt độ (ºC) Thời gian Số chu kì

40

Chu kỳ nhiệt cho phản ứng PCR:

• Cho 0,5g agarose vào 50 ml dung dịc TAE ( nồng độ 2%).

• Cho 0,5g agarose vào 50 ml dung dịch TAE ( nồng độ 2%).

• Đun sôi hỗn hợp trong khoảng 1,5 phút trong lò Viba

• Để nguội ở nhiệt độ phòng

• Đổ gel vào bể điện di (đặt lược tạo giếng trước khi đổ gel)

• Để nguội cho gel cứng hoàn toàn, cẩn thận rút lược ra khỏi gel, cho dung dịch TAE 0,5X vào bể điện di sao cho ngập gel khoảng 1 đến 1,5cm

• Trộn 5µl sản phẩm PCR với 2µl loading dye 6X và cho hỗn hợp vào các giếng của gel Vận hành máy điện di trong 30 phút

• Nhuộm gel và đọc kết quả

• Thuốc nhuộm GelRed có thể được trộn trực tiếp với mẫu DNA trước khi điện di hay

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3.3 Điện di

Chương 4 Kết quả

4.1 Kết quả mong

muốn

226 bp

184 bp

CREDITS: This presentation template was created by

Slidesgo, including icons by Flaticon, and infographics &

images by Freepik

Thanks!