Nguyên nhân của hiện trạng này là doviệc sử dụng kháng sinh trong nuôi trồng và điều trị bệnh chưa được kiểm soát hiệuquả.Tuy nhiên, để phân biệt Salmonella có khả năng gây bệnh với các
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC BÀI TIỂU LUẬN XÁC ĐỊNH VI KHUẨN SALMONELLA TRONG MẪU CÁ TƯƠI NGHI NHIỄM BẰNG CÁC KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ SINH HỌC Ngành học : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chun ngành : CƠNG NGHỆ SINH HỌC Nhóm thực : NHĨM Niên khố : 2021 – 2025 TP Thủ Đức, 10/2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC BÀI TIỂU LUẬN XÁC ĐỊNH VI KHUẨN SALMONELLA TRONG MẪU CÁ TƯƠI NGHI NHIỄM BẰNG CÁC KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn Sinh viên thực TS HUỲNH VĂN BIẾT NGUYỄN LAN ANH 21126009 Ths TRƯƠNG QUANG TOẢN NGUYỄN NHẬT HÒA 21126347 LÊ HOÀNG PHÚC 21126162 TP Thủ Đức, 10/2023 MSSV MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH SÁCH CÁC HÌNH .iii Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Nội dung thực Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan vi khuẩn Salmonella .2 2.1.1 Giới thiệu chung Salmonella 2.1.2 Phân loại vi khuẩn Salmonella 2.2 Đặc điểm Salmonella 2.2.1 Đặc điểm hình thái 2.2.2 Đặc điểm nuôi cấy 2.2.3 Đặc điểm sinh hóa 2.3 Sự phân bố Salmonella 2.3.1 Con đường lây lan 2.3.2 Tác hại vi khuẩn Salmonella Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 3.1 Đặc điểm thời gian thực 3.2 Vật liệu nghiên cứu .5 3.3 Dụng cụ thiết bị i 3.4 Bố trí thí nghiệm 3.4.1 Nội dung 1: Tiến hành định tính Salmonella mẫu cá tươi .6 3.4.2 Nội dung 2: Định danh vi khuẩn Salmonella mẫu phản ứng sinh hóa 3.4.3 Nội dung 3: Định danh đánh giá khả kháng kháng sinh SHPT 10 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 17 4.1 Kết thảo luận 17 4.1.1 Tiến hành định tính Salmonella mẫu cá tươi 17 4.1.2 Định danh vi khuẩn Salmonella mẫu phản ứng sinh hóa 18 4.1.3 Định danh đánh giá khả kháng kháng sinh SHPT 19 Chương KẾT QUẢ MONG MUỐN VÀ KIẾN NGHỊ 21 5.1 Kết mong muốn 21 5.2 Kiến nghị 21 TÀI LIỆU THAM KHẢO 22 ii DANH SÁCH CÁC HÌNH Hình 2.1 Vi khuẩn Salmonella Hình 2.2 Vi khuẩn Salmonella Hình 3.1 Hải sản tươi sống chợ .5 Hình 3.2 Khuẩn lạc Salmonella XLD Hình 3.3 Khuẩn lạc Salmonella HE .7 Hình 3.4 Thử nghiệm sinh H2S Hình 3.5 Thử nghiệm Urea (-) Hình 3.6 Thử nghiệm VP Hình 3.7 Các mồi đặc hiệu cho gen kháng kháng sinh m-PCR .14 Hình 3.8 Cơ chế tác động kháng sinh vào tế bào vi khuẩn 15 Hình 3.9 Máy Mastercycler (Eppendorf) 15 Hình 4.1 Khuẩn lạc đơn HE 16 Hình 4.2 Khuẩn lạc đơn XLD 16 Hình 4.3 Khuẩn lạc Salmonella XLD 16 Hình 4.4 Khuẩn lạc Salmonella HE 16 Hình 4.5 Thử nghiệm sinh H2S 18 Hình 4.6 Thử nghiệm Urea (-) 18 Hình 4.7 Thử nghiệm VP 18 Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề An toàn thực phẩm vấn đề mà từ lâu chúng ta đặc biệt quan tâm, xem yếu tố có ý nghĩa lớn kinh tế - xã hội, sức khỏe cộng đồng, ảnh hưởng trực tiếp đến mục tiêu phát triển bền vững quốc gia Đặc biệt tình trạng nhiễm khuẩn kháng kháng sinh sản phẩm thủy hải sản tươi sống, có vi khuẩn Salmonella Nguyên nhân trạng việc sử dụng kháng sinh nuôi trồng điều trị bệnh chưa kiểm soát hiệu Tuy nhiên, để phân biệt Salmonella có khả gây bệnh với Salmonella khác việc làm khó khăn, chưa có phương pháp hay chuẩn mực để phân biệt Salmonella có khả gây bệnh với Salmonella lành tính Do đó, quy định an tồn vệ sinh thực phẩm Việt Nam hầu giới khơng cho phép có diện chủng Salmonella có mặt thực phẩm mà khơng phân biệt chủng có độc hay khơng người 1.2 Mục tiêu nghiên cứu Định danh phát khuẩn Salmonella mẫu cá tươi nghi nhiễm kĩ thuật công nghệ sinh học 1.3 Nội dung thực Nội dung 1: Tiến hành định tính Salmonella mẫu cá tươi Nội dung 2: Định danh vi khuẩn Salmonella mẫu phản ứng sinh hóa Nội dung 3: Định danh đánh giá khả kháng kháng sinh SHPT Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan vi khuẩn Salmonella 2.1.1 Giới thiệu chung i thiệu chung u chung Salmonella Cho đến phát khoảng 500 lồi vi sinh vật khác gây bệnh thương hàn phó thương hàn cho người gia súc Salmonella gây bệnh truyền nhiễm cho động vật phó thương hàn lợn, bệnh sẩy thai cừu ngựa,… Những bệnh Salmonella gây người ta gọi bệnh truyền nhiễm nguyên phát, ngồi phát Salmonella chất tiết động vật lành Hình 2.1 Vi khuẩn Salmonella Nguồn: foodpoisonjournal.com 2.1.2 Phân loại vi khuẩn i vi khuẩn n Salmonella Giới: Bacteria Ngành: Proteobacteria Lớp: Gramma Proteobacteria Bộ: Enterobacteriales Chi: Salmonella 2.2 Đặc điểm Salmonella 2.2.1 Đặc điểm hình tháic điểm hình tháim hình thái Salmonella trực khuẩn gram âm, kích thước trung bình (0,7 - 1,5 × 2,0 - 5,0) μ m, khơng tạo bào tử, khơng có vỏ, tế bào dễ dàng nhuộm thuốc nhuộm thông thường methylene blue carbol-fuchsin, chúng phát triển tốt nhiệt độ 6oC – 42oC, thích hợp 35oC – 37oC, pH từ – thích hợp pH = 7,2 Vi khuẩn Salmonella sử dụng tiêm mao để di chuyển (ngoại trừ S pullorum S gallinarum) Hình 2.2 Vi khuẩn Salmonella Nguồn: cdc.gov 2.2.2 Đặc điểm hình tháic điểm hình tháim ni cấyy Salmonella vi khuẩn kỵ khí tùy nghi, phát triển môi trường nuôi cấy thông thường Trên môi trường thích hợp, vi khuẩn phát triển sau 24 Có thể mọc mơi trường có chất ức chế chọn lọc DCA (deoxycholate citrate agar) XLD (xylose lysine deoxycholate), mơi trường XLD chất ức chế nên thường dùng để phân lập Salmonella Khuẩn lạc đặc trưng Salmonella môi trường trịn, lồi, suốt, có tâm đen, tâm đen lớn bao trùm khuẩn lạc, môi trường xung quanh chuyển sang màu đỏ 2.2.3 Đặc điểm hình tháic điểm hình tháim sinh hóa Salmonella khơng lên men lactose, lên men đường glucose sinh Thường không lên men sucrose, salicin inositol, sử dụng citrate mơi trường Simmons Tuy nhiên khơng phải lồi Salmonella có tính chất trên: S typhi lên men đường glucose không sinh hơi, không sử dụng citrate môi trường Simmon, hầu hết chủng S paratyphi S cholerasuis không sinh H2S 2.3 Sự phân bố Salmonella Salmonella phân bố rộng rãi tự nhiên thường xuyên phân lập từ ống tiêu hóa động vật người bị nhiễm trùng Ngồi ra, chúng phân lập từ đất, khơng khí, nước sông hồ, nước biển thực phẩm 2.3.1 Con đường lây lanng lây lan Vi khuẩn Salmonella tìm thấy số nguồn thực phẩm khác như: thịt, trứng, số loại rau cá sống bao gồm cá hồi cá ngừ… Đây loại vi khuẩn gây bệnh đường tiêu hóa Vi khuẩn Salmonella ngun nhân gây bệnh tiêu chảy tồn giới Hầu hết trường hợp nhiễm khuẩn Salmonella nhẹ, bệnh đe dọa đến tính mạng Mức độ nghiêm trọng bệnh phụ thuộc vào yếu tố vật chủ kiểu huyết Salmonella 2.3.2 Tác hại vi khuẩn i vi khuẩn a vi khuẩn n Salmonella Salmonella loại vi khuẩn gây bệnh cho người cịn gọi vi khuẩn thương hàn Chúng có mặt loại thực phẩm xâm nhập vào thể người qua đường ăn uống Vi khuẩn thương hàn vào hệ tiêu hóa thể, sau bị chết giải phóng nội độc tố Vi khuẩn Salmonella chết nhiều có nhiều độc tố giải phóng cơng vào thể người nhiễm Nội độc tố vi khuẩn Salmonella gây ảnh hưởng xấu ruột, nội độc tố làm tổn thương niêm mạc ruột (kích thích ruột gây đau bụng, làm chảy máu, gây thủng ruột) Nội độc tố vi khuẩn Salmonella giải phóng vào máu đến hệ thần kinh trung ương làm tổn thương hệ thần kinh nhiễm độc toàn thân Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 3.1 Đặc điểm thời gian thực Tổng thời gian từ khâu chọn mẫu tăng sinh mẫu phân lập dòng vi khuẩn cần định danh khoảng 24 - 48 giờ, sau tiến hành phản ứng sinh hóa khoảng 12 - 24 khuếch đại PCR điện di ước tính khoảng ngày Tổng thời gian thao tác khoảng từ - ngày tùy vào loại vi khuẩn điều kiện mơi trường phịng thí nghiệm Phạm vi thực phịng thí nghiệm có đầy đủ dung cụ, tủ cấy vi sinh chuyên dụng an toàn sinh học cấp 2, dung dịch môi trường phù hợp 3.2 Vật liệu nghiên cứu Các chủng Salmonella spp phân lập từ thủy hải sản tươi sống chợ truyền thống địa bàn thành phố Hồ Chí Minh Hình 3.1 Hải sản tươi sống chợ 3.3 Dụng cụ thiết bị - Thiết bị: Nồi hấp, tủ cấy, tủ sấy,… - Dụng cụ thí nghiệm - Vật tư tiêu hao 3.4 Bố trí thí nghiệm 3.4.3 Nội dung 1: Tiến hành định tínhi dung 3: Định tínhnh danh đánh giá khản kháng kháng sinh b ằng phản ng SHPT 3.4.3.1 Ly trích DNA đểm hình thái tiến hành định tínhn hành khuến hành định tínhch đại vi khuẩn i PCR 3.4.3.1.1 Tiến hành định tínhn hành ly trích DNA Để phát diện Salmonella sản phẩm động vật, kỹ thuật vi sinh truyền thống tới ngày Bao gồm nuôi cấy nhân giống vi khuẩn – kéo dài khoảng 18 giờ, cộng với ngày để tăng sinh có chọn lọc ủ Salmonella môi trường chất lỏng bổ sung Việc gây vấn đề lớn nhà sản xuất thực phẩm việc vận chuyển hàng hóa khơng thể chờ đợi kết kiểm tra lâu đến vậy, dẫn đến chi phí tốn thu hồi sản phẩm Để trình tách chiết ly trích axit nucleic thành cơng địi hỏi ba bước quan trọng phá vỡ hiệu tế bào mơ; biến tính phức hợp nucleoprotein; khử hoạt tính nuclease Ví dụ, RNase để tách chiết RNA DNase để tách chiết DNA; tránh tạp nhiễm, ngoại nghiễm Quy trình ly trích DNA plasmid (Birnboim Doly, 1979): Vi khuẩn E.coli mang plasmid nuôi cấy môi trường LB lỏng (trypton 1%, Yeast extract 0,5%, NaCl 1%) 37 oC, tốc độ lắc 200 rpm Dịch huyền phù vi khuẩn sau 16 nuôi cấy (nuôi qua đêm) sử dụng để ly trích plasmid theo qui trình gồm bước sau: Bước 1: lấy mL dịch khuẩn cho vào tube 1,5 mL Bước 2: ly tâm dịch khuẩn tốc độ 5.000 rpm phút Bước 3: loại bỏ dịch Nhẹ nhàng úp tube lên giấy thấm để loại môi trường khỏi kết tủa Bước 4: lặp lại bước 1, 2, Bước 5: thêm 100 μL dung dịch I (được giữ lạnh), vortex kỹ.L dung dịch I (được giữ lạnh), vortex kỹ Bước 5: thêm 200 μL dung dịch I (được giữ lạnh), vortex kỹ.L dung dịch II Đảo tube để trộn hỗn hợp Không vortex bước Giữ tube đá Bước 7: thêm 150 μL dung dịch I (được giữ lạnh), vortex kỹ.L dung dịch III (được giữ lạnh) Đảo tube để trộn hỗn hợp Giữ tube đá khoảng phút Bước 8: ly tâm 10.000 rpm 10 phút Chuyển dịch sang tube (1V) Bước 9: thêm 2V isopropanol, vortex nhẹ; để yên 20 phút - 20oC 10 Bước 10: ly tâm 10.000 rpm/ phút để thu kết tủa DNA Loại dịch phía Thêm 500 μL dung dịch I (được giữ lạnh), vortex kỹ.L ethanol 70%, ly tâm 10.000 rpm/ phút Loại bỏ dịch phơi ống khơng cịn dung dịch bên ống Bước 11: thêm 30 μL dung dịch I (được giữ lạnh), vortex kỹ.L nước khử ion (không chứa Dnase) TE Vortex nhẹ bảo quản - 20oC 3.4.3.1.2 Phản n ứng sinh hóang khuyến hành định tínhch đại vi khuẩn i PCR Sau ly trích thành cơng DNA vi khuẩn nghi ngờ Salmonella, tiến hành thiết lập phản ứng khuếch đại đoạn DNA thơng qua kĩ thuật PCR để phát gen mục tiêu PCR trình tổng hợp sợi DNA dựa DNA khuôn nhờ hoạt động xúc tác enzyme DNA polymerase Gồm có thành phần chủ yếu: + DNA mẫu (template) chứa mảnh DNA cần khuếch đại + Cặp mồi (primer) đoạn DNA ngắn (dưới 50 bp) để xác định điểm bắt đầu kết thúc vùng cần khuếch đại + DNA-polymerase enzym xúc tác cho việc nhân lên DNA + Nucleotides (dNTP) nguyên liệu cho DNA-polymerase tổng hợp DNA + Dung dịch đệm, cung cấp môi trường hóa học cho DNA-polymerase Phản ứng PCR thực chu kỳ nhiệt gồm bước: Bước 1: khởi đầu: đun hỗn hợp 96°C vòng phút để đảm bảo sợi DNA mồi làm nóng Bước 2: biến tính (melting): DNA khn dạng sợi đôi tách thành sợi đơn Bước 3: gắn mồi (annealing): mồi gắn vào DNA khuôn vị trí có trình tự bổ sung, bắt đầu q trình tổng hợp Bước 4: kéo dài (elongation): nucleotide gắn vào chuỗi theo nguyên tắc bổ sung với DNA khuôn Bước 5: lặp lại bước - (số lần lặp lại số chu trình nhiệt, tùy thuộc vào loại phản ứng PCR) 3.4.3.1.3 Mội dung 1: Tiến hành định tínht số vấn đề cần lưu ý thực phản ứng PCR để mang lại vấyn đề cần lưu ý thực phản ứng PCR để mang lại n lưu ý thực phản ứng PCR để mang lại c hiệu chung n phản n ứng sinh hóang PCR đểm hình thái mang lại vi khuẩn i hiệu chung u quản xác hơin Thiết kế mồi cho phản ứng PCR: đáp ứng yêu cầu độ đặc hiệu mồi, nhiệt độ gắn mồi mồi xuôi mồi ngược, khả tạo primer dimer… 11 Các loại PCR: tùy vào mục đích sử dụng, đặc điểm DNA khn kích thước đoạn đích mà sử dụng loại PCR: PCR thường, RT-PCR, LONG RANGE- PCR, TOUCH DOWN PCR… Tối ưu hóa phản ứng PCR: thay đổi điều kiện phản ứng nhiệt độ gắn mồi, nồng độ thành phần phản ứng, chu kỳ nhiệt… nhằm khuếch đại tốt đoạn đích cần khuếch đại với độ đặc hiệu cao 3.4.3.1.4 Điệu chung n di phân tích kến hành định tínht quản Sau tiến hành phản ứng PCR xong (khoảng 35 chu kì) ta hàng tỉ đoạn DNA khuếch đại, để xác định xem có đoạn gen mục tiêu Salmonella hay không chúng ta cần điện di gel tiến hành phân tích kết Quy trình thực thể tóm lượt sau: 1) Chuẩn bị gel agarose: Agarose loại polysaccharide tự nhiên chiết từ tảo biển Gel agarose sử dụng điện di thường nồng độ 0.5 - 2%, tùy vào kích thước DNA cần phân tách Khi đổ gel agarose, lược cắm lên miếng gel gỡ gel đông đặc để tạo thành giếng cho phép nạp mẫu vào 2) Chạy điện di gel agarose: Miếng gel agarose đặt bồn điện di, chứa dung dịch đệm (buffer) dẫn điện ổn định pH, thường Tris-acetate-EDTA (TAE) Tris-Borate-EDTA (TBE) Mẫu DNA pha với dung dịch nạp mẫu (loading dye) nhằm giữ mẫu chìm giếng cung cấp thị màu để nhận biết điện di 3) Quan sát DNA sau điện di: Cần phải nhuộm gel để quan sát DNA “vơ hình” với mắt thường, phổ biến nhuộm hóa chất huỳnh quang, chẳng hạn Ethidium Bromide (EtBr) Tùy vào loại hóa chất nhuộm huỳnh quang sử dụng, bổ sung chúng vào agarose trước đổ gel sau chạy điện di để nhuộm Sau điện di nhuộm gel xong, thực ghi nhận hình ảnh DNA thơng qua hệ thống đọc gel (gel document system) hay gọi hệ thống chụp ảnh gel Hệ thống đọc gel gồm nguồn chiếu sáng (illumination source), lọc (filter) để 12 loại bỏ ánh sáng camera để ghi nhận hình ảnh, đơi cịn tích hợp PC trang bị hình cảm ứng 4) Kết quả: Kết điện di xuất band nằm khoảng gần 1350 bp so với thang chuẩn leader (tùy theo độ đặc hiệu mồi thiết kế) kết luận có Salmonella mẫu cần kiểm tra Nếu khơng có band xuất khoảng mà xuất band nằm cuối (dimer) kết luận khơng có Salmonella mẫu 3.4.3.1.5 Mơ q trình tách ADN vi khuẩn ng trình tách chiến hành định tínhc ADN vi khuẩn n Salmonella Typhimurium Chu trình nhiệt PCR nhân gen invA Salmonella: 94oC phút; lặp lại 35 chu kỳ: (94oC 30 giây, 55oC 40 giây, 72oC phút 20 giây); 72oC phút; kết thúc 4oC Thiết kế mồi đặt hiệu phần mềm primer plus cho gen invA Salmonella: sản phẩm PCR đặc hiệu chứa gen invA có chiều dài khoảng 1350 bp 3.4.3.2 Đánh giá mứng sinh hóac đội dung 1: Tiến hành định tính nhiễm đặc điểm kháng kháng sinh vi m đặc điểm hình tháic điểm hình tháim kháng kháng sinh vi khuẩn a vi khuẩn n Salmonella phân lập từ thủy sản tươip từ thủy sản tươi thủa vi khuẩn y sản n tươii Theo PGS.TS Nguyễn Huy Nga - nguyên Cục trưởng Cục Y tế dự phòng, Bộ Y tế, bệnh nhiễm khuẩn Salmonella (ngộ độc thực phẩm) bệnh nhiễm trùng đường tiêu hóa Bệnh ảnh hưởng đến lớp niêm mạc ruột non, xảy vi khuẩn Salmonella xâm nhập vào thể Hầu hết, trường hợp ngộ độc nhẹ tự khỏi mà khơng cần điều trị, số trường hợp nặng hơn, người bị ngộ độc cần phải cấp cứu Trong số trường hợp, tình trạng tiêu chảy nhiễm khuẩn Salmonella gây nước nghiêm trọng cần chăm sóc y tế kịp thời để tránh tử vong Các biến chứng có nguy đe dọa tính mạng phát triển tình trạng nhiễm trùng lan ruột “Các triệu chứng ngộ độc thực phẩm Salmonella thường xuất vòng 72 sau ăn uống nước bị nhiễm Salmonella Các triệu chứng điển hình giai đoạn cấp tính bao gồm: đau bụng co thắt, ớn lạnh, tiêu chảy, sốt, đau cơ, buồn nôn, nôn, dấu hiệu nước (như nước tiểu có màu sẫm, khơ miệng mệt rã 13 người) Đơi phân có máu Trẻ em bị nước nghiêm trọng ngày đe dọa đến tính mạng”, PGS Nga cảnh báo Chuyên gia cho biết, bị ngộ độc thực phẩm Salmonella gây ra, cần diệt vi khuẩn kháng sinh Những thuốc kháng sinh thường dùng chloramphenicol, ampicillin Song, cần dùng với liều lượng thích hợp để tránh biến chứng trụy tim mạch Bởi, thuốc diệt vi khuẩn làm giải phóng nhiều nội độc tố Tuy nhiên, ngày xuất chủng Salmonella đề kháng với kháng sinh Vì vậy, cần làm kháng sinh đồ để chọn kháng sinh thích hợp Các chuyên gia sức khỏe ước tính năm tồn giới, có hàng chục triệu trường hợp báo cáo Trẻ em có nhiều nguy bị nhiễm khuẩn Salmonella người lớn Người lớn tuổi người có hệ miễn dịch yếu có nhiều nguy bị nhiễm bệnh Thực tế, Salmonella gây nhiễm trùng đường ruột loại vi khuẩn thường sống ruột động vật người, thải ngồi mơi trường qua phân 3.4.3.2.1 Khẳng định ng định tínhnh Salmonella phản ng PCR Khẳng định Salmonella spp kỹ thuật PCR: gen invA (invasion) khuếch đại dựa trình tự cặp mồi đặc hiệu tương ứng trình bày hình 3.7 Thành phần hỗn hợp phản ứng PCR thực theo TCVN 8342:2010, chương trình khuếch đại máy Mastercycler (Eppendorf) sau: 95 oC/ phút (1 chu kỳ); 95oC/ 60 giây; 54oC/ 45 giây 72oC/ 60 giây (35 chu kỳ); 72oC/ 10 phút (1 chu kỳ) 3.4.3.2.2 Phươing pháp phát hiệu chung n gen kháng kháng sinh b ằng phản ng kỹ thu ập từ thủy sản tươit mPCR Các gen blaTEM, blaSHV mã hóa kháng ampicillin; gen strA, strB mã hóa kháng streptomycin; gen tetA, tetB mã hóa kháng tetracycline gen sul1, sul2 mã hóa kháng sulfamethoxazole xác định dựa việc sử dụng cặp mồi đặc hiệu tương ứng cho gen kháng kháng sinh 14 Hình 3.7 Các mồi đặc hiệu cho gen kháng kháng sinh m-PCR Hình 3.8 Cơ chế tác động kháng sinh vào tế bào vi khuẩn A Thành phần phản ứng m-PCR + AmpliTaq Gold + 0,2 mM dNTP; 1,5 mM MgCl2 + Đệm 1X + 0,5 μL dung dịch I (được giữ lạnh), vortex kỹ.L đoạn mồi (nồng độ 0,625 μL dung dịch I (được giữ lạnh), vortex kỹ.M) 15