Báo cáo thiết bị công nghệ và kỹ thuật công nghệ sinh học 2.1

ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINHKHOA KHOA HỌC SINH HỌCPHÁT HIỆN NHANH SALMONELLA SPP., SALMONELLA ENTERICA HIỆN DIỆN TRONG THỰC PHẨM BẰNG KỸ THUẬT PCR ĐA MỒI Môn: Thiết bị và kỹ th

ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC

PHÁT HIỆN NHANH SALMONELLA SPP.,

SALMONELLA ENTERICA HIỆN DIỆN TRONG

THỰC PHẨM BẰNG KỸ THUẬT PCR ĐA MỒI

Môn: Thiết bị và kỹ thuật CNSH

Thủ Đức, ngày 24 tháng 10, 2023 GVHD: TS HUỲNH VĂN BIẾT

I GIỚI THIỆU SALMONELLA

Salmonella enterica thuộc họ Enterobacteriaceae

(vi khuẩn đường ruột) là thực khuẩn Gram âm, hình que, kích thước trung bình 3,0 x 0,5 um, có nhiều lông xung quanh thân

• Giống: Salmonella lignieres 1900 • Loài : S enterica và S bongori

4

II VẬT LIỆU

VÀ PHƯƠNG PHÁP

5

VẬT LIỆU Gồm 260 mẫu: thịt heo, thịt gà, lòng trắng, đỏ trứng gà, vỏ trứng gà,

nem chua, chả lụa, ba khía, da heo, sò huyết.

trưng cho Salmonella

cấy sang BHI và TSA ủ qua đêm

Cấy 0,1ml dịch tăng sinh vào môi trường chọn lọc

RV, ủ ở 42oC 24 giờ

Thử nghiệm sinh hóa : KIA/TSI , Urea, Indol, VP Phân lập khuẩn lạc đơn

trên 2 môi trường XLD và HE

• Chuẩn bị mẫu và tăng sinh

6

Thiết kế các đoạn mồi PCR từ vi khuẩn Salmonella

7

• H2O nuclease - free water

Cặp mồi invA và cặp mồi spvC

11

ĐIỆN DI 2di trên gel agarose và được chụp lại bằng Biorad UV35 lượng bản sao DNA được khuếch đại bằng PCR được đem đi điện

12

III KẾT QUẢ DỰ KIẾN

❖ Kết quả PCR được tiến hành thử trên web Primer- BLAST

Kết quả PCR gen spvC được tiến hành trên Primer-BLAST

III KẾT QUẢ DỰ

KIẾN❖ Kết quả PCR được tiến hành thử trên web Primer- BLAST

Kết quả PCR gen invA được tiến hành trên Primer-BLAST

14

❖ Kết quả khuếch đại gen mục tiêu bằng phản ứng PCR dự kiến

Kết quả PCR dự kiên với cặp mồi invA

Mồi invA có tính chuyên biệt cao đối với dòng vi

khuẩn Salmonella spp.

III KẾT QUẢ DỰ KIẾN

15

III KẾT QUẢ DỰ KIẾN

Cặp mồi invA chỉ đánh giá sơ bộ có kết quả dương tính với

Salmonella chứ không cho biết

sự hiện diện của các dòng vi

khuẩn khác như S enteritica.

Mồi spvC thì kết quả lại âm

tính với Salmonella.

Kết quả PCR dự kiến với 2 cặp mồi invA và spvC

17

Tài liệu tham khảo

Mai, T T X., Yến, T T H., Bé, N V., & Phương, V T T 2011 Phát hiện nhanh SALMONELLA SPP., SALMONELLA ENTERICA hiện

diện trong thực phẩm bằng kỹ thuật PCR đa mồi (MULTIPLEX PCR) Tạp chí Khoa học Đại học cần Thơ.

Shoba CS, Banhart HM, Lee MD and Dreesen DW 1996 Virulence determinants inVA and spvC in Salmonella isolated from poultry

products wastewater and Human sources.

Swamy, S C., Barnhart, H M., Lee, M D., & Dreesen, D W 1996 Virulence determinants invA and spvC in salmonellae isolated from

poultry products, wastewater, and human sources. Applied and environmental microbiology, 62(10), 3768–3771

Sahu, B., Singh, S D., Behera, B K., Panda, S K., Das, A., & Parida, P K 2019 Rapid detection of Salmonella contamination in seafoods

using multiplex PCR. Brazilian journal of microbiology : [publication of the Brazilian Society for Microbiology], 50(3), 807–816.

Wang, M., Zhang, Y., Tian, F., Liu, X., Du, S., & Ren, G 2021 Overview of Rapid Detection Methods for Salmonella in Foods: Progress

and Challenges. Foods (Basel, Switzerland), 10(10), 2402.

Kurtz, J R., Goggins, J A., & McLachlan, J B 2017 Salmonella infection: Interplay between the bacteria and host immune

system. Immunology letters, 190, 42–50.

14

THANK YOU