1. Trang chủ
  2. » Giáo án - Bài giảng

Báo cáo thiết bị và kỹ thuật cnsh nhóm 8

14 2 0

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Tiêu đề Thiết Bị Và Kỹ Thuật Cnsh Nhóm 8
Trường học Trường Đại Học Nông Lâm Tp.Hcm
Chuyên ngành Khoa Khoa Học Sinh Học
Thể loại báo cáo
Năm xuất bản 2023
Thành phố Tp.Hcm
Định dạng
Số trang 14
Dung lượng 8,52 MB

Nội dung

Trang 1 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCMKHOA KHOA HỌC SINH HỌCKỸ THUẬT ĐIỆN DI TRÊN GEL Trang 2 I.. Giới thiệu chungĐiện di là gì ?1Nguyên lí điện di 24 Kỹ thuật điện diCác loại má

Trang 1

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC

KỸ THUẬT ĐIỆN DI TRÊN GEL

Môn học: THIẾT BỊ VÀ KỸ THUẬT CNSH Nhóm: 08

Trang 2

I Giới thiệu chung

Điện di là gì ?

1

Nguyên lí điện di

2

4

Kỹ thuật điện di

Các loại máy dùng trong điện di

3

Trang 3

1.Điện di là gì ?

- Đây là phương pháp để phân tích các phân tử protein, DNA,

RNA hoặc polysaccharide thông qua một số cách thức điện di

khác nhau tùy thuộc vào loại và kích thước của phân tử

2 Nguyên lí điện di

- Điện di hoạt động dựa trên nguyên lý các phân tử sinh học tồn

tại dưới dạng các hạt mang điện, sở hữu các nhóm chức có thể

ion hóa

- Khi chịu tác động của điện trường, các phần tử sinh học bị ion

hóa sẽ di chuyển với tốc độ khác nhau, tùy thuộc vào khối

lượng và điện tích của mỗi hạt trong dung dịch

Trang 4

3 Các loại máy dùng trong điện di

1 Máy điện di đứng

2 Máy điện di ngang

3 Máy chụp ảnh

gel

Trang 5

4 Các loại điện di

4.Điện di miễn dịch

(Immunoelectrop horesis)

5.Điện di ái lực (Affinity

Electrophoresis)

3.Điện di mao quản (Capillary Electrophoresi

s – CE)

1.Điện di trên gel

– Gel

Electrophoresis

2.Điện di gel trường xung Electrophoresis (PFGE)

Trang 6

II Phân tích kỹ thuật điện di trên gel

2 Định nghĩa Gel 1.Giới thiệu phương pháp

4.Qui trình thực hiện 3.Vật liệu

5 Kết quả

Trang 7

- Kỹ thuật điện di là phương pháp phân tách DNA

với kích thước khác nhau, sau đó phân tích , định

tính và định lượng DNA

1.Giới thiệu kỹ thuật

2 Định nghĩa Gel

Gel: trạng thái trung gian giữa hai pha rắn và lỏng

- Các vật liệu dùng làm gel: Starch, Agarose,

Acrylamide

- Gel agarose (polymer polygalactose) được sử dụng

khá phổ biến, đặc biệt là trong ứng dụng với những đa

phân tử như acid nucleic, lipoprotein v.v

Trang 8

3.Vật liệu

Thiết bị điện di gel Agarose

Agarose

Chất nhuộm GelRed

Dung dịch đệm điện di (TAE hoặc TBE)

Loading dye

Trang 9

4.Qui trình thực hiện

Bước 1: Chuẩn bị gel

VD: Phân tích mẫu DNA tổng số thực vật và

DNA plasmid vi khuẩn

- Pha 50mL agarose 1% cần 0,5(g) agarose.

- Thêm lượng agarose thích hợp vào bình chứa

- Cho dung dịch gel vào lò vi sóng và đun sôi cho đến

khi các hạt agarose tan hoàn toàn Ngưng microwave

sau 30 giây và lắc đều sẽ làm agarose tan nhanh hơn

- Làm nguội agarose xuống khoảng 60oC trước khi đổ

gel vào khay có mang lược gel.

Trang 10

Khi gel đã nguội và đặc lại khay gel được đặt vào bồn

điện di và ngập trong dung dịch đệm điện di TAE.

Sau đó, tháo lược gel ra và tạo ra các “giếng” rỗng đ

ể bơm mẫu điện di vào Và mẫu được bơm vào giếng

bởi micropipette.

4.Qui trình thực hiện

Bước 2: Chuẩn bị bồn điện di

Trang 11

Bước 3: Chuẩn bị mẫu

4.Qui trình thực hiện

- Mẫu DNA tinh sạch được ly trích từ cây xà lách

không lẫn các tạp chất khác.

- Mẫu DNA plasmid tinh sạch được ly trích từ

huyền phù tế bào vi khuẩn không lẫn các tạp chất

khác

- Lượng mẫu sử dụng phụ thuộc vào dạng lược

sử dụng (độ dày và chiều dài) và độ dày của gel

Trang 12

Sau khi trộn xong, nạp DNA mẫu và DNA

chuẩn vào các giếng, đậy nắp bồn điện d

i cẩn thận, không chạm vào mẫu

4 Qui trình thực hiện

Bước 4: Bơm mẫu

Hình 4.1: Bơm hỗn hợp

vừa trộn vào giếng

Trang 13

- Sau khi bơm mẫu vào giếng, điều chỉnh hiệu điện

thế ở 100V và điện di trong khoảng 30 phút Chụp

hình ảnh gel dưới ánh sáng UV để xem kết quả.

- Số 1 là DNA tổng số, ta thấy được một vạch sáng

rõ chứng tỏ quá trình làm đã hạn chế được việc

đứt gãy DNA.

- Số 2 là DNA plasmid, ta thấy vạch mờ chứng tỏ

mẫu làm vẫn còn E.coli trong dung dịch.

Bước 5: Điện di

4 Qui trình thực hiện

Hình 4.3: Hình ảnh kết quả

Trang 14

Thanks for

watching

Ngày đăng: 31/01/2024, 00:13

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN

w