Đang tải... (xem toàn văn)
Trang 1 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCMKHOA KHOA HỌC SINH HỌCKỸ THUẬT ĐIỆN DI TRÊN GEL Trang 2 I.. Giới thiệu chungĐiện di là gì ?1Nguyên lí điện di 24 Kỹ thuật điện diCác loại má
TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM KHOA KHOA HỌC SINH HỌC KỸ THUẬT ĐIỆN DI TRÊN GEL Môn học: THIẾT BỊ VÀ KỸ THUẬT CNSH Nhóm: 08 TP.HCM, ngày 25 tháng 10 năm 2023 K ỹ t h u ậ t đ i ệ n d i Điện di ? I Giới thiệu chung Nguyên lí điện di Các loại máy dùng điện di Các loại điện di 1.Điện di ? - Đây phương pháp để phân tích phân tử protein, DNA, RNA polysaccharide thông qua số cách thức điện di khác tùy thuộc vào loại kích thước phân tử Nguyên lí điện di - Điện di hoạt động dựa nguyên lý phân tử sinh học tồn dạng hạt mang điện, sở hữu nhóm chức ion hóa - Khi chịu tác động điện trường, phần tử sinh học bị ion hóa di chuyển với tốc độ khác nhau, tùy thuộc vào khối lượng điện tích hạt dung dịch 3 Các loại máy dùng điện di Máy điện di đứng Máy chụp ảnh gel Máy điện di ngang 4 Các loại điện di 3.Điện di mao 1.Điện di gel 5.Điện di ái lực quản (Capillary – Gel (Affinity Electrophoresi Electrophoresis Electrophoresis) s – CE) 2.Điện di gel 4.Điện di miễn trường xung dịch Electrophoresis (Immunoelectrop (PFGE) horesis) II Phân tích kỹ thuật điện di gel 1.Giới thiệu phương pháp Định nghĩa Gel 3.Vật liệu 4.Qui trình thực Kết 1.Giới thiệu kỹ thuật - Kỹ thuật điện di phương pháp phân tách DNA với kích thước khác nhau, sau phân tích , định tính định lượng DNA Định nghĩa Gel Gel: trạng thái trung gian hai pha rắn lỏng - Các vật liệu dùng làm gel: Starch, Agarose, Acrylamide - Gel agarose (polymer polygalactose) sử dụng phổ biến, đặc biệt ứng dụng với đa phân tử acid nucleic, lipoprotein v.v 3.Vật liệu Thiết bị điện di gel Agarose Dung dịch đệm điện di (TAE TBE) Agarose Loading dye Chất nhuộm GelRed 4.Qui trình thực VD: Phân tích mẫu DNA tổng số thực vật DNA plasmid vi khuẩn Bước 1: Chuẩn bị gel - Pha 50mL agarose 1% cần 0,5(g) agarose - Thêm lượng agarose thích hợp vào bình chứa - Cho dung dịch gel vào lị vi sóng đun sơi hạt agarose tan hoàn toàn Ngưng microwave sau 30 giây lắc làm agarose tan nhanh - Làm nguội agarose xuống khoảng 60oC trước đổ gel vào khay có mang lược gel 4.Qui trình thực Bước 2: Chuẩn bị bồn điện di Khi gel nguội đặc lại khay gel đặt vào bồn điện di ngập dung dịch đệm điện di TAE Sau đó, tháo lược gel tạo “giếng” rỗng đ ể bơm mẫu điện di vào Và mẫu bơm vào giếng micropipette 10 4.Qui trình thực Bước 3: Chuẩn bị mẫu - Mẫu DNA tinh ly trích từ xà lách không lẫn tạp chất khác - Mẫu DNA plasmid tinh ly trích từ huyền phù tế bào vi khuẩn không lẫn tạp chất khác - Lượng mẫu sử dụng phụ thuộc vào dạng lược sử dụng (độ dày chiều dài) độ dày gel 11 Qui trình thực Bước 4: Bơm mẫu Hình 4.1: Bơm hỗn hợp vừa trộn vào giếng Sau trộn xong, nạp DNA mẫu DNA chuẩn vào giếng, đậy nắp bồn điện d i cẩn thận, khơng chạm vào mẫu Hình 4.2 : Sau bơm mẫu vào giếng 12 Qui trình thực Bước 5: Điện di - Sau bơm mẫu vào giếng, điều chỉnh hiệu điện 100V điện di khoảng 30 phút Chụp hình ảnh gel ánh sáng UV để xem kết - Số DNA tổng số, ta thấy vạch sáng rõ chứng tỏ trình làm hạn chế việc đứt gãy DNA - Số DNA plasmid, ta thấy vạch mờ chứng tỏ mẫu làm E.coli dung dịch Hình 4.3: Hình ảnh kết quả 13 Thanks for watching 14