Trang 1 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCMKHOA KHOA HỌC SINH HỌCKỸ THUẬT ĐIỆN DI TRÊN GEL Trang 2 I.. Giới thiệu chungĐiện di là gì ?1Nguyên lí điện di 24 Kỹ thuật điện diCác loại má
Trang 1TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM
KHOA KHOA HỌC SINH HỌC
KỸ THUẬT ĐIỆN DI TRÊN GEL
Môn học: THIẾT BỊ VÀ KỸ THUẬT CNSH Nhóm: 08
Trang 2I Giới thiệu chung
Điện di là gì ?
1
Nguyên lí điện di
2
4
Kỹ thuật điện di
Các loại máy dùng trong điện di
3
Trang 31.Điện di là gì ?
- Đây là phương pháp để phân tích các phân tử protein, DNA,
RNA hoặc polysaccharide thông qua một số cách thức điện di
khác nhau tùy thuộc vào loại và kích thước của phân tử
2 Nguyên lí điện di
- Điện di hoạt động dựa trên nguyên lý các phân tử sinh học tồn
tại dưới dạng các hạt mang điện, sở hữu các nhóm chức có thể
ion hóa
- Khi chịu tác động của điện trường, các phần tử sinh học bị ion
hóa sẽ di chuyển với tốc độ khác nhau, tùy thuộc vào khối
lượng và điện tích của mỗi hạt trong dung dịch
Trang 43 Các loại máy dùng trong điện di
1 Máy điện di đứng
2 Máy điện di ngang
3 Máy chụp ảnh
gel
Trang 54 Các loại điện di
4.Điện di miễn dịch
(Immunoelectrop horesis)
5.Điện di ái lực (Affinity
Electrophoresis)
3.Điện di mao quản (Capillary Electrophoresi
s – CE)
1.Điện di trên gel
– Gel
Electrophoresis
2.Điện di gel trường xung Electrophoresis (PFGE)
Trang 6II Phân tích kỹ thuật điện di trên gel
2 Định nghĩa Gel 1.Giới thiệu phương pháp
4.Qui trình thực hiện 3.Vật liệu
5 Kết quả
Trang 7- Kỹ thuật điện di là phương pháp phân tách DNA
với kích thước khác nhau, sau đó phân tích , định
tính và định lượng DNA
1.Giới thiệu kỹ thuật
2 Định nghĩa Gel
Gel: trạng thái trung gian giữa hai pha rắn và lỏng
- Các vật liệu dùng làm gel: Starch, Agarose,
Acrylamide
- Gel agarose (polymer polygalactose) được sử dụng
khá phổ biến, đặc biệt là trong ứng dụng với những đa
phân tử như acid nucleic, lipoprotein v.v
Trang 83.Vật liệu
Thiết bị điện di gel Agarose
Agarose
Chất nhuộm GelRed
Dung dịch đệm điện di (TAE hoặc TBE)
Loading dye
Trang 94.Qui trình thực hiện
Bước 1: Chuẩn bị gel
VD: Phân tích mẫu DNA tổng số thực vật và
DNA plasmid vi khuẩn
- Pha 50mL agarose 1% cần 0,5(g) agarose.
- Thêm lượng agarose thích hợp vào bình chứa
- Cho dung dịch gel vào lò vi sóng và đun sôi cho đến
khi các hạt agarose tan hoàn toàn Ngưng microwave
sau 30 giây và lắc đều sẽ làm agarose tan nhanh hơn
- Làm nguội agarose xuống khoảng 60oC trước khi đổ
gel vào khay có mang lược gel.
Trang 10Khi gel đã nguội và đặc lại khay gel được đặt vào bồn
điện di và ngập trong dung dịch đệm điện di TAE.
Sau đó, tháo lược gel ra và tạo ra các “giếng” rỗng đ
ể bơm mẫu điện di vào Và mẫu được bơm vào giếng
bởi micropipette.
4.Qui trình thực hiện
Bước 2: Chuẩn bị bồn điện di
Trang 11Bước 3: Chuẩn bị mẫu
4.Qui trình thực hiện
- Mẫu DNA tinh sạch được ly trích từ cây xà lách
không lẫn các tạp chất khác.
- Mẫu DNA plasmid tinh sạch được ly trích từ
huyền phù tế bào vi khuẩn không lẫn các tạp chất
khác
- Lượng mẫu sử dụng phụ thuộc vào dạng lược
sử dụng (độ dày và chiều dài) và độ dày của gel
Trang 12Sau khi trộn xong, nạp DNA mẫu và DNA
chuẩn vào các giếng, đậy nắp bồn điện d
i cẩn thận, không chạm vào mẫu
4 Qui trình thực hiện
Bước 4: Bơm mẫu
Hình 4.1: Bơm hỗn hợp
vừa trộn vào giếng
Trang 13- Sau khi bơm mẫu vào giếng, điều chỉnh hiệu điện
thế ở 100V và điện di trong khoảng 30 phút Chụp
hình ảnh gel dưới ánh sáng UV để xem kết quả.
- Số 1 là DNA tổng số, ta thấy được một vạch sáng
rõ chứng tỏ quá trình làm đã hạn chế được việc
đứt gãy DNA.
- Số 2 là DNA plasmid, ta thấy vạch mờ chứng tỏ
mẫu làm vẫn còn E.coli trong dung dịch.
Bước 5: Điện di
4 Qui trình thực hiện
Hình 4.3: Hình ảnh kết quả
Trang 14Thanks for
watching