báo cáo tiểu luận thẩm định thử độ hòa tan của isoniazid trong viên nang kết hợp rifampicin và isoniazid

- Dung dịch đệm phosphat: Hòa tan 15,3g dikali hydro phosphat TT và 80,0g kali dihydro phosphat TT vào bình định mức 1 lít, hòa tan và pha loãng bằng nước cất vừa đủ đến định mức.- Dung

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

BỘ MÔN HÓA PHÂN TÍCH - ĐỘC CHẤT

~~~~~~~~ ~~~~~~~

BÁO CÁO TIỂU LUẬN THẨM ĐỊNH THỬ ĐỘ HÒA TAN CỦA ISONIAZID TRONG VIÊN NANG KẾT HỢP RIFAMPICIN VÀ ISONIAZID

Tổ 8 – Lớp Q1K73

HÀ NỘI - 2022

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

HÓA PHÂN TÍCH - ĐỘC CHẤT

BÁO CÁO TIỂU LUẬN

Thẩm định thử độ hòa tan của Isoniazid trong viên nang kết hợp

Rifampicin và Isoniazid

Giáo viên phụ trách: Nguyễn Thị Lâm Hồng

Nhóm sinh viên thực hiện:

1 Phạm Thị Ngọc Lan 1801362

4 Vũ Thị Thanh Thùy 1801685

MỤC LỤC

I Công thức bào chế 4

II Quy trình phân tích Isoniazid: 4

III Thẩm định phương pháp 6

1 Độ đặc hiệu 6

2 Độ ổn định hệ thống 8

3 Khoảng tuyến tính 8

4 Độ đúng 9

5 Độ chụm 10

Chuyên luận thẩm định thử độ hòa tan của Isoniazid trong viên

nang kết hợp Rifampicin và Isoniazid

I Công thức bào chế

Thành phần Khối lượng (mg)

II Quy trình phân tích thử độ hòa tan của Isoniazid

Phương pháp sắc ký lỏng

1 Điều kiện sắc ký:

- Pha động: Nước - dung dịch đệm phosphat - methanol (850:100:50)

- Cột kích thước (30 cm X 4,0 ram) được nhồi pha tĩnh c (10µm)

- Dẹtector: UV ở bước sóng 254 nm

- Tốc độ dòng: 1,5 ml/min

- Thể tích tiêm: 50 µl

2 Tiến hành:

Tiến hành sắc ký lần lượt đối với dung dịch chuẩn và dung dịch thử Tính hàm lượng isoniazid, C6H7N3O, hòa tan căn cứ vào diện tích pic thu được từ dung dịch thử, dung dịch chuẩn và hàm lượng C6H7N3O của isoniazid chuẩn Yêu cầu: Không ít hơn 80 % (Q) lượng isoniazid, C6H7N3O, so với lượng ghi trên nhãn được hòa tan trong 45 min

3 Chuẩn bị dung dịch:

- Dung dịch đệm phosphat: Hòa tan 15,3g dikali hydro phosphat (TT) và 80,0g

kali dihydro phosphat (TT) vào bình định mức 1 lít, hòa tan và pha loãng bằng nước cất vừa đủ đến định mức

- Dung dịch chuẩn gốc Isoniazid: Cân chính xác khoảng 66mg isoniazid chuẩn

cho vào bình định mức 100ml Hòa tan và pha loãng bằng dung dịch acid HCl 0,1M (TT) đến định mức, trộn đều

=> [C] isoniazid chuẩn gốc = 0,66 (mg/ml)

- Dung dịch chuẩn gốc hỗn hợp Rifampicin và Isoniazid: Cân chính xác khoảng

66mg Rifampicin chuẩn cho vào bình định mức 200ml, hòa tan trong 10ml dung dịch HCl 0,1M (TT) và trộn đều Thêm chính xác 50ml dung dịch chuẩn gốc isoniazid và thêm dung dịch acid hydrocloric 0,1 M (TT) đến định mức, trộn đều

=> [C] isoniazid/chuẩn gốc hh = 0,165 (mg/ml)

- Dung dịch chuẩn hỗn hợp: Hút chính xác 5,0 ml dung dịch chuẩn gốc hỗn hợp

và 10,0 ml dung dịch đệm phosphat vào bình định mức 50ml, thêm nước cất đến định mức, trộn đều

=> [C] isoniazid chuẩn hh = 0,0165 (mg/ml)

- Dung dịch thử: Cho từng viên nang vào cốc chứa 900ml dung dịch acid HCl

0,1M và tiến hình như quy định trong tiêu chuẩn Sau thời gian hòa tan, hút 50ml

dd môi trường hòa tan mẫu thử, lọc và bỏ dịch lọc đầu, để dịch lọc cân bằng về nhiệt độ phòng khoảng 10 min Hút chính xác 5,0ml dịch lọc và 10ml dung dịch đệm phosphat vào bình định mức 50ml, thêm nước cất đến định mức, trộn đều

=> [C] isoniazid thử = 0,0167 (mg/ml)

III Thẩm định phương pháp

1 Độ đặc hiệu

a Tiến hành:

- Mẫu trắng: 10ml đệm phosphat và bổ sung HCl 0,1M vừa đủ bình định mức

50ml

- Mẫu Placebo: Cho một viên Placebo (450mg tá dược và 100mg vỏ nang) vào

mỗi cốc hòa tan chứa 900ml dung dịch HCl 0,1M và tiến hình như quy định trong tiêu chuẩn, làm như vậy với 6 viên placebo Sau khi hòa tan, hút 50ml, lọc bỏ 20ml dịch lọc đầu Hút chính xác 5,0 ml dịch lọc và thêm 10,0 ml đệm phosphat vào bình định mức 50,0 ml, thêm HCl 0,1M vừa đủ (6 mẫu)

- Dung dịch thử: Cho từng viên nang vào cốc chứa 900ml dung dịch HCl 0,1M và

tiến hình như quy định trong tiêu chuẩn Sau thời gian hòa tan, hút 50ml dd môi trường hòa tan mẫu thử, lọc bỏ 20ml dịch lọc đầu Hút chính xác 5,0 ml dịch lọc

và thêm 10,0ml đệm phosphat vào bình định mức 50,0 ml, thêm nước cất vừa đủ

- Dung dịch chuẩn đơn Isoniazid : Cân chính xác một lượng chứa 66mg chất

chuẩn Isoniazid cho vào bình định mức 100,0ml, hòa tan trong dung dịch acid HCl 0,1M sau đó định mức vừa đủ Hút chính xác 5,0ml dung dịch trên và 10ml dung dịch đệm phosphat và thêm HCl 0,1M vào bình định mức 200,0ml, thêm nước cất vừa đủ

=> [C] isoniazid chuẩn đơn = 0,0165 (mg/ml)

- Dung dịch chuẩn hỗn hợp Rifampicin và Isoniazid: Cân chính xác khoảng 66

mg Rifampicin chuẩn cho vào bình định mức 200ml, hòa tan trong 10ml dung dịch HCl 0,1M (TT) và trộn đều Thêm chính xác 50,0 ml dung dịch chuẩn gốc isoniazid và thêm dung dịch acid hydrocloric 0,1 M (TT) đến định mức, trộn đều Hút chính xác 5,0 ml dung dịch chuẩn gốc hỗn hợp và 10,0 ml dung dịch đệm phosphat vào bình định mức 50ml, thêm nước cất đến định mức, trộn đều

=> [C] isoniazid/chuẩn hh = 0,0165 (mg/ml)

=> Tiến hành chạy sắc ký các mẫu trên, thu được SKĐ

b Kết quả - yêu cầu:

- Đối với mẫu âm tính:

● Trên SKĐ của dung dịch Placebo và mẫu trắng xác định không xuất hiện pic có t tương ứng với t của hoạt chất chínhR R

● Nếu có thì ảnh hưởng của mẫu Placebo (AH%) ≤ 1,0%

● Trong đó:

A : S pic hoạt chất chính trên sắc ký đồ của dd PlaceboP

AC: S pic hoạt chất chính trên sắc ký đồ của dd chuẩn

HL: Hàm lượng mẫu thử tương ứng với lượng có trong mẫu Placebo

- Đối với mẫu dương tính:

+ Sắc kí đồ của dung dịch thử có thời gian lưu khác nhau không có ý nghĩa thống kê với thời gian lưu của chất chuẩn trong sắc kí đồ của dung dịch chuẩn

+ Khi chồng phổ, 2 hoạt chất chính Isoniazid và Rifampicin trên sắc kí

đồ của dung dịch thử phải có phổ trùng với phổ của chất chuẩn (hệ số Match ≥ 0,998)

+ Pic của 2 hoạt chất Isoniazid và Rifampicin trong sắc kí đồ của dung dịch thử và dung dịch chuẩn phải tách hoàn toàn khỏi nhau với Rs ≥ 1,5

2 Độ ổn định hệ thống

a Tiến hành:

- Chuẩn bị dung dịch chuẩn hỗn hợp: 1 mẫu 100%

- Tiêm vào hệ thống sắc ký 6 lần lặp lại trong dịch chuẩn hỗn hợp

- Ghi lại SKĐ và thời gian lưu, diện tích pic trung bình và các thông số khác (độ phân giải, hệ số đối xứng, số đĩa lý thuyết, )

b Kết quả - yêu cầu:

- %RSD của thời gian lưu của Isoniazid và Rifampicin: ≤ 1,0%

- %RSD của diện tích pic Isoniazid và Rifampicin: ≤ 2,0%

- Độ phân giải giữa 2 pic Isoniazid và Rifampicin: Rs ≥ 1,5

3 Khoảng tuyến tính

a Tiến hành:

- Chuẩn bị dãy dung dịch chuẩn (5 nồng độ)

- Dãy nồng độ: 50%, 80%, 100%, 120%, 150%

- Chuẩn bị dãy các dung dịch chuẩn bằng cách: pha loãng dung dịch chuẩn gốc ban đầu theo các hệ số pha loãng khác nhau

- Dung dịch chuẩn gốc isoniazid: Cân chính xác một lượng chứa 66mg chất chuẩn isoniazid cho vào bình định mức 100ml, hòa tan trong 70 ml dung dịch acid HCl 0,1M sau đó định mức vừa đủ

- Pha dung dịch chuẩn từ dung dịch chuẩn hỗn hợp gốc

- Tiến hành sắc ký, mỗi dung dịch tiêm 1 lần

- Ghi lại các sắc ký đồ và xác định đáp ứng của pic

- Xây dựng đường hồi quy Y = aX + b

Y: Nồng độ chất chuẩn có trong mẫu

X: đáp ứng pic thu được trên SKĐ

b Kết quả - yêu cầu:

- Hệ số tương quan R ≥ 0,995

- % hệ số chắn tại nồng độ 100% : ≤ 5,0%

4 Độ đúng

a Tiến hành: Phương pháp chuẩn bị mẫu tự tạo

- Mẫu tự tạo nồng độ 100%: (chuẩn bị 3 mẫu)

Cân chính xác khoảng 150mg isoniazid chuẩn cho vào cốc chứa 900ml dung dịch acid HCl 0,1M đã có sẵn 450mg tá dược, 300mg rifampicin và 100mg vỏ nang tiến hình như quy định trong tiêu chuẩn Sau thời gian hòa tan, hút 50ml dd môi trường hòa tan mẫu thử, lọc Hút chính xác 5,0 ml dịch lọc và 10,0 ml dung dịch đệm phosphat vào bình định mức 50,0 ml, thêm nước cất vừa đủ

- Mẫu tự tạo nồng độ 120%: (chuẩn bị 3 mẫu)

Cân chính xác khoảng 180mg isoniazid chuẩn cho vào cốc chứa 900ml dung dịch acid HCl 0,1M đã có sẵn 450mg tá dược, 300mg rifampicin 100mg vỏ nang tiến hình như quy định trong tiêu chuẩn Sau thời gian hòa tan, hút 50ml dd môi trường hòa tan mẫu thử, lọc Hút chính xác 5,0 ml dịch lọc và 10,0 ml dung dịch đệm phosphat vào bình định mức 50,0 ml, thêm nước cất vừa đủ

- Mẫu tự tạo nồng độ 80%: (chuẩn bị 3 mẫu)

Cân chính xác khoảng 120mg isoniazid chuẩn cho vào cốc chứa 900ml dung dịch acid HCl 0,1M đã có sẵn 450mg tá dược, 300mg rifampicin và 100mg vỏ nang tiến hình như quy định trong tiêu chuẩn Sau thời gian hòa tan, hút 50ml dd môi trường hòa tan mẫu thử, lọc Hút chính xác 5,0 ml dịch lọc và 10,0 ml dung dịch đệm phosphat vào bình định mức 50,0 ml, thêm nước cất vừa đủ

- Chuẩn bị mẫu chuẩn (mẫu chuẩn C3=100%)

Cân chính xác một lượng chứa 66mg chất chuẩn Isoniazid cho vào bình định mức 100,0ml, hòa tan trong dung dịch acid HCl 0,1M sau đó định mức vừa đủ Hút chính xác 5,0ml dung dịch trên và 10ml dung dịch đệm phosphat và thêm HCl 0,1M vào bình định mức 200,0ml, thêm nước cất vừa đủ

- Lần lượt tiến hành sắc ký theo chương trình đã cài đặt cho các dung dịch mẫu tự tạo trên

b Kết quả - yêu cầu:

Độ đúng (tỉ lệ phần trăm thu hồi) (%)= x 100%

Tính độ thu hồi chung là trung bình của các lần lặp lại

Độ đúng = (100 - %thu hồi) (thông thường ≤ 5,0%)

Yêu cầu: Tỷ lệ phần hồi: 95% - 105%

RSD ≤ 5,0% ở mỗi mức nồng độ

5 Độ chụm

a Độ lặp lại

Dung dịch thử: Cân 20 viên bỏ vỏ nang, trộn đều nghiền thành bột mịn Cân

chính xác từng lượng bột viên chứa 150mg isoniazid và 100mg vỏ nang, cho vào mỗi cốc hòa tan chứa 900ml dung dịch acid HCl 0,1M Hút chính xác 5,0 ml dịch lọc và 10,0 ml dung dịch đệm phosphat vào bình định mức 50,0 ml, thêm nước cất vừa đủ (6 mẫu)

Dung dịch chuẩn: Cân chính xác một lượng chứa 66mg chất chuẩn isoniazid cho

vào bình định mức 100,0ml, hòa tan trong 70 ml dung dịch acid HCl 0,1M sau đó định mức vừa đủ Hút chính xác 5,0ml dung dịch vừa hòa tan cho vào bình định mức 200,0ml định mức bằng HCl 0,1M tới vạch

Tiến hành chạy sắc ký

Yêu cầu: % RSD kết quả định lượng ≤ 5,0%

b Độ chính xác trung gian

- Trong cùng 1 phòng thí nghiệm, tiến hành quy trình thử độ lặp lại với 2 kiểm nghiệm viên trong 2 ngày khác nhau và trên các thiết bị phân tích khác nhau

- Yêu cầu: Mỗi bộ kết quả do mỗi kiểm nghiệm viên làm ra phải đạt yêu cầu trong phần thử độ lặp lại (%RSD kết quả định lượng ≤ 5,0%) Với kết quả chung của

cả 2 kiểm nghiệm viên, đối với hoạt chất isoniazid thì %RSD kết quả định lượng

≤ 10%

c Độ tái lặp

- Là so sánh kết quả của phương pháp cần thẩm định với kết quả phân tích của một phòng thí nghiệm khác

- Độ tái lặp cần được tiến hành khi tiêu chuẩn hóa một phương pháp phân tích

- %RSD kết quả định lượng ≤ 5,0 %