(Luận văn) khảo sát tính kháng thuốc của vi khuẩn lao phân lập từ bệnh nhân lao điều trị bằng isoniazid và đánh giá ảnh hưởng của gen nat2 của bệnh nhân lao đến tính kháng thuốc isoniazid

lu an va n t to ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI ng hi TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN ep w nl oa d lu an Nguyễn Thị Thu Hà va ul nf oi lm nh at z KHẢO SÁT TÍNH KHÁNG THUỐC CỦA VI KHUẨN LAO z @ PHÂN LẬP TỪ BỆNH NHÂN LAO ĐIỀU TRỊ BẰNG ISONIAZID VÀ gm ĐÁNH GIÁ ẢNH HƯỞNG CỦA GEN NAT2 CỦA BỆNH NHÂN LAO om l.c ĐẾN TÍNH KHÁNG THUỐC ISONIAZID an Lu n va ac th Hà Nội, 2018 si LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC lu an va n t to ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI ng hi TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN ep w nl oa d lu an Nguyễn Thị Thu Hà va ul nf oi lm nh at z KHẢO SÁT TÍNH KHÁNG THUỐC CỦA VI KHUẨN LAO z @ PHÂN LẬP TỪ BỆNH NHÂN LAO ĐIỀU TRỊ BẰNG ISONIAZID VÀ gm ĐÁNH GIÁ ẢNH HƯỞNG CỦA GEN NAT2 CỦA BỆNH NHÂN LAO om l.c ĐẾN TÍNH KHÁNG THUỐC ISONIAZID 8420101.07 an Mã số: Lu Chuyên ngành: Vi sinh vật học n va ac th NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS Vũ Thị Thơm TS Phạm Thế Hải Hà Nội, 2018 si LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC lu an va n t to LỜI CAM ĐOAN ng hi ep Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu Luận văn trung thực chưa công bố w nl cơng trình khác oa d Tơi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực Luận văn lu an cảm ơn thơng tin trích dẫn Luận văn rõ nguồn gốc va ul nf Học viên oi lm nh at z z Nguyễn Thị Thu Hà om l.c gm @ an Lu n va ac th si lu an va n t to LỜI CẢM ƠN ng hi ep Trong trình học tập làm luận văn tốt nghiệp, nhận quan tâm giúp đỡ Thầy Cô, nhà trường, quan, gia đình bạn bè w nl Trước hết, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Vũ Thị Thơm, oa d TS Phạm Thế Hải người Thầy tận tình hướng dẫn khoa học, tạo điều lu an kiện thuận lợi giúp đỡ tơi suốt q trình thực luận văn va Tôi xin cảm ơn PGS.TS Lê Thị Luyến - chủ nhiệm đề tài, ThS Lê Anh Tuấn ul nf - nghiên cứu sinh đề tài Nghị định thư hợp tác nghiên cứu Đại học Quốc gia lm Hà Nội Đại học Liverpool - Vương quốc Anh (Mã số HNQT/SPĐP/01.06), tạo oi nh điều kiện để tơi tham gia nghiên cứu, hồn thành luận văn at Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy cô, nhà khoa học hội z z đồng chấm đề cương luận văn tốt nghiệp đóng góp ý kiến quý báu cho @ gm luận văn l.c Tôi xin gửi lời biết ơn tới Ban Giám Hiệu, phòng Đào tạo sau đại học, om Thầy Cô Bộ môn Vi sinh - Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Lu Hà Nội cho kiến thức quý báu, tạo điều kiện thuận lợi để học an tập, nghiên cứu trường va Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến: n ac th Các cán Bộ môn Y Dược học sở, Ban lãnh đạo Khoa Y Dược - Đại điều kiện tốt cho trình hồn thành luận văn Sự biết ơn gia đình bạn bè ln sát cánh động viên khích lệ tơi Cuối tơi xin gửi lời tri ân tới bệnh nhân tham gia vào nhóm nghiên cứu, đóng góp bệnh nhân giúp tơi có thành cơng Hà Nội, ngày tháng Nguyễn Thị Thu Hà năm si học Quốc gia Hà Nội; bác sĩ nhân viên Bệnh viện Phổi Trung ương tạo lu an va n t to MỤC LỤC ng hi ep LỜI CAM ĐOAN w LỜI CẢM ƠN nl oa ĐẶT VẤN ĐỀ d lu CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN an va 1.1 Giới thiệu vi khuẩn lao ul nf 1.1.1 Hình thể, cấu trúc lm oi 1.1.2 Khả gây bệnh nh 1.1.3 Nuôi cấy vi khuẩn lao at z 1.2 Thuốc điều trị lao lao kháng thuốc z gm @ 1.2.1 Thuốc điều trị lao phân loại lao kháng thuốc .6 l.c 1.2.2 Tính kháng thuốc vi khuẩn lao om 1.2.3 Tình hình nghiên cứu ngồi nước tính kháng thuốc an Lu vi khuẩn lao 1.3 Isoniazid điều trị lao 10 va n 1.3.1 Dược lý chuyển hóa Isoniazid .10 ac th 1.3.2 Gen liên quan đến chuyển hóa Isoniazid bệnh nhân lao 12 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Vật liệu nghiên cứu 16 2.1.1 Dụng cụ, trang thiết bị .16 2.1.2 Hóa chất, môi trường .16 2.2 Đối tượng nghiên cứu 17 2.2.1 Tiêu chuẩn lựa chọn đối tượng nghiên cứu .17 2.2.2 Tiêu chuẩn loại trừ 17 si 1.4 Đặc điểm gen NAT2 đa hình gen NAT2 13 lu an va n t to 2.3 Phương pháp nghiên cứu 17 ng hi 2.3.1 Cỡ mẫu 17 ep 2.3.2 Thu thập mẫu bệnh phẩm 18 w nl 2.3.3 Quy trình ni cấy đờm môi trường lỏng BACTEC MGIT 18 oa d 2.3.4 Phương pháp kháng sinh đồ cho thuốc chống lao hàng 20 lu an 2.3.5 Phân tích kiểu gen NAT2 để xác định kiểu hình acetyl hóa isoniazid 26 va ul nf 2.3.6 Phương pháp xử lý số liệu .27 lm 2.3.7 Đạo đức nghiên cứu y học .28 oi CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 29 nh at 3.1 Tính kháng thuốc vi khuẩn lao thuốc kháng lao hàng 29 z z 3.1.1 Đặc điểm chung quần thể bệnh nhân nghiên cứu .29 @ gm 3.1.2 Tình hình kháng thuốc chống lao hàng bệnh nhân lao phổi .32 l.c 3.2 Tỷ lệ phân bố kiểu gen NAT2 người bệnh lao mối ảnh hưởng om đến tính kháng thuốc Isoniazid 40 Lu 3.2.1 Kết tối ưu quy trình phân tích NAT2 .40 an n va 3.2.2 Tỷ lệ phân bố kiểu gen NAT2 người bệnh lao 42 ac th 3.2.3 Mối liên quan đa hình kiểu gen NAT2 tình hình kháng INH 47 KIẾN NGHỊ .51 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC si KẾT LUẬN 50 lu an va n t to DANH MỤC BẢNG BIỂU ng hi ep Bảng 2.1: Nhận định kết nuôi cấy MGIT 19 Bảng 2.2: Nồng độ thuốc ngưỡng kháng thuốc kháng lao hàng w nl môi trường đặc 22 oa d Bảng 2.3: Hướng dẫn pha dung dịch thuốc (1) 23 lu an Bảng 2.4: Đánh giá kết vi khuẩn mọc dựa vào khuẩn lạc 25 va Bảng 2.5: Đánh giá tính kháng thuốc vi khuẩn lao 25 ul nf Bảng 2.6: Thành phần tối ưu cho phản ứng nhân dòng gen NAT2 27 lm Bảng 3.1: Thông tin chung quần thể nghiên cứu 29 oi nh Bảng 3.2: Thời gian nuôi cấy đơn vị sinh trưởng vi khuẩn lao .32 at Bảng 3.3: Tỷ lệ kháng thuốc nhóm lao lao tái trị 34 z z Bảng 3.4: Kết kháng sinh đồ với thuốc chống lao hàng .36 @ gm Bảng 3.5: Tần số phân bố allen NAT2 nhóm lao lao tái trị 43 l.c Bảng 3.6: Tần số phân bố kiểu gen NAT2 nhóm lao lao tái trị 44 om Bảng 3.7: Mối liên quan kiểu hình chuyển hóa với thể lao 45 Lu Bảng 3.8: Tần số kiểu hình acetyl hóa NAT2 vùng giới .46 an Bảng 3.9: Mối liên quan kiểu hình chuyển hóa với tính kháng INH 48 n va ac th si lu an va n t to DANH MỤC HÌNH ng hi ep Hình 1.1: M tuberculosis nhuộm Ziehl - Neelsen, vật kính dầu 100x .3 Hình 1.2: Hình ảnh M.tuberculosis nuôi cấy môi trường đặc [23], [59] .5 w nl Hình 1.3: Cơ chế kháng thuốc vi khuẩn lao oa d Hình 1.4: Chuyển hóa Isoniazid gan [39] 11 lu an Hình 1.5: Vị trí gen NAT2 NST số 14 va Hình 2.1: Sơ đồ thu mẫu luân chuyển mẫu bệnh viện 18 ul nf Hình 2.2: Hệ thống BACTEC MGIT 960 19 lm Hình 2.3: Kháng sinh đồ PZA 21 oi nh Hình 2.4: Chuẩn bị huyền dịch làm kháng sinh đồ đặc 24 at Hình 3.1: Biểu đồ dinh dưỡng theo BMI hai nhóm bệnh nhân 31 z z Hình 3.2: Một số hình ảnh kết kháng sinh đồ môi trường đặc 33 @ gm Hình 3.3: Biểu đồ tỷ lệ số thuốc kháng loại .34 l.c Hình 3.4: Kết DNA tổng số tách chiết điện di gel agarose 1,2% .41 om Hình 3.5: Kết nhân dịng gen NAT2 số mẫu theo điều kiện tối ưu 41 an Lu Hình 3.6: Kết đọc kiểu gen NAT2 42 n va ac th si lu an va n t to DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ng hi Vi khuẩn kháng cồn kháng axit (Acid Fast Bacilli) ep AFB BMI w Ethambutol nl EMB Chỉ số khối thể (Body Mass Index) INH oa LJ Lowenstein-Jensen MTB Vi khuẩn lao (Mycobacterium tuberculosis) MDR-TB Lao đa kháng thuốc (Multi Drug Resistant Tuberculosis) MDR/RR-TB Lao đa kháng Lao kháng Rifampicin d Isoniazid lu an va ul nf oi lm nh (Multi Drug Resistant - Rifampicin Resistant - Tuberculosis) at Mycobacteria Growth Indicator Tube NAT2 N-Acetyltransferase RMP Rifampicin PZA Pyrazinamid SM Streptomycin SNP Đa hình đơn nucleotit (Single Nucleotide polymorphisms) XDR-TB Lao siêu kháng thuốc z MGIT z om l.c gm @ an Lu n va (Extensively Drug Resistant-Tuberculosis) Tổ chức Y tế giới (World Health Organization) ac th WHO si lu an Luận văn Thạc sĩ khoa học Nguyễn Thị Thu Hà va n t to ng ĐẶT VẤN ĐỀ hi ep Bệnh lao bệnh truyền nhiễm có tính lây nhiễm cao, diễn biến lâm sàng phức tạp thời gian điều trị kéo dài Theo thống kê WHO (2018), với nỗ w nl lực khơng ngừng tồn giới, từ năm 2000 đến 2018 ước tính có khoảng 53 oa d triệu người phát điều trị lao giúp giảm tỷ lệ tử vong lao xuống lu 37% Mặc dù tập trung kiểm soát, bệnh lao 10 nguyên an va nhân tử vong hàng đầu nguyên nhân tử vong số bệnh truyền nhiễm (trên ul nf HIV) Việt Nam điểm nóng bệnh lao, đứng thứ 14 lm số 30 nước có gánh nặng cao lao (WHO, 2018) Năm 2017, tổng số trường hợp oi nh mắc lao báo cáo Việt Nam 105.733 bệnh nhân số có khoảng 80% at bệnh nhân lao phổi mắc tái nhiễm Mặc dù toàn giới, tỷ lệ mắc lao z z giảm khoảng 2% năm đến bệnh lao vấn đề thách @ gm thức phát triển lan rộng lao kháng thuốc Bệnh nhân mang lao kháng l.c thuốc thường có thời gian điều trị kéo dài, tốn Ở Việt Nam theo ước tính trung om bình chi phí cho bệnh nhân lao đa kháng thuốc khoảng gần 400 USD cao Lu nhiều so với chi phí 150 USD cho bệnh nhân lao thông thường Theo thống kê an WHO, toàn cầu 3,5% trường hợp lao 18% trường hợp lao n va tái trị có kháng Rifampicin đa kháng Rifampicin Isoniazid (MDR/RR-TB) ac th Ở Việt Nam số ước tính tương ứng 4,1% 17% Tuy nhiên thuốc với Rifampicin (WHO, 2018) Trong thuốc chống lao hàng một, Rifampicin Isoniazid hai thuốc quan trọng phác đồ điều trị lao cịn có Streptomycin, Ethambutol, Pyrazinamid Trong năm gần đây, tình hình kháng thuốc với loại thuốc quan tâm, báo cáo Việc tập trung vào hai thuốc quan trọng Rifampicin Isoniazid bỏ qua biến động đáng ý tình hình kháng thuốc ba thuốc Theo hướng dẫn WHO Bộ Y tế, Isoniazid dùng hầu hết đối tượng bệnh nhân lao theo tuổi, giới, phác đồ điều trị bệnh nhân lao mới, lao tái trị kể điều trị dự phòng lao Isoniazid chuyển hóa Khoa Sinh học Khố 2016-2018 si số ước tính có khoảng 32%-67% thực đánh giá tính kháng lu an Luận văn Thạc sĩ khoa học Nguyễn Thị Thu Hà va n t to ng chậm (>70%), 30% có tỷ lệ kiểu hình chuyển hóa nhanh Ở nhóm lao mới, hi có phân bố đồng kiểu hình acetyl hóa NAT2, nhóm lao tái ep trị, tỷ lệ kiểu hình acetyl hóa nhanh thấp hẳn hai nhóm cịn lại (16%) tương w tự phân bố người châu Á nói chung thấp so với quần thể khu vực nl oa Bắc Á (40%) Đánh giá lâm sàng nghiên cứu Ma rốc (2014) 163 d lu người dân, Guaoua cộng kiểu phổ biến gen NAT2 quần an va thể người Ma rốc mã hóa kiểu hình acetyl hóa chậm (72,39%) có nguy ul nf cao sử dụng thuốc điều trị lao [33] Nền tảng di truyền cho lm thông tin nên đưa vào việc xác định liều tối thiểu INH cần oi thiết để điều trị bệnh nhân lao Ma rốc, để giảm tác dụng phụ[33] Một vài nghiên nh at cứu khảo sát tính đa dạng kiểu gen NAT2 quần thể dân tộc khác z cho thấy kiểu gen NAT2 thay đổi đáng kể trình chuyển đổi z gm @ từ lối sống thợ săn/du mục sang lối sống nông nghiệp/chăn nuôi, dẫn đến thay đổi chế độ ăn uống thay đổi chuyển hóa với loại xenobiotics khác om l.c [22], [31] Ví dụ, kiểu hình acetyl hóa chậm thường gặp dân tộc Tajik tần suất cao kiểu hình acetyl hóa nhanh trung gian quan sát thấy Lu an quần thể người thợ săn Tây Nam Phi ( Kung San, Bakola Pygmy, quần thể va Biaka Pygmy) [37] Tương tự Ấn Độ kiểu hình acetyl hóa chậm (dựa kiểu n gen) chiếm tỷ lệ cao acetyl hóa nhanh vùng mà chế độ ăn chay chiếm ac th ưu [51] Điều làm rõ nghiên cứu cộng đồng thường xảy Nam Ấn Độ Hàn Quốc nhiều quần thể khác NAT2*5 chứa SNP T341C (I114T) gặp Hàn Quốc châu Âu, Bắc Mỹ, Ấn Độ Châu Phi [66] 3.2.3 Mối liên quan đa hình kiểu gen NAT2 tình hình kháng INH Có thể thấy, nhóm lao phổi tái trị, tỷ lệ kiểu hình acetyl hóa nhanh giảm mức đáng kể so sới nhóm lao phổi Điều đặt giả thuyết liệu kiểu hình acetyl hóa nhanh có phải yếu tố gia tăng thành công điều trị lao? Xét tỷ lệ phân bố kiểu hình acetyl hóa quần thể bệnh nhân lao Khoa Sinh học 47 Khoá 2016-2018 si khác cho thấy điểm khác biệt, ví dụ NAT2*7 có SNP G857A (K268R) lu an Luận văn Thạc sĩ khoa học Nguyễn Thị Thu Hà va n t to ng hai nhóm kháng nhạy INH nghiên cứu chúng tơi khơng thấy có hi khác biệt có ý nghĩa thống kê Kết trình bày bảng 3.9 ep Bảng 3.9: Mối liên quan kiểu hình chuyển hóa với tính kháng INH w nhóm lao lao tái trị nl oa Kiểu hình Thể lao d Lao Lao tái trị an (n=69) (n=56) va NAT2 lu acetyl hóa ul nf Nhạy INH Kháng INH Nhạy INH Kháng INH 23 (39,7%) (18,2%) lm (15,6%) Trung bình 16 (27,6%) (63,6%) 15 (46,9%) 10 (41,7%) Chậm 19 (32,8%) (18,2%) 12 (37,5%) 10 (41,7%) nh (16,7%) at χ2=0,153; p=0,936 z χ2=5,427; p=0,089 z Xác suất oi Nhanh gm @ l.c Ở nhóm vi khuẩn kháng Isoniazid, kiểu hình acetyl hố trung bình chiếm cao (48,6%) thấp nhóm kiểu hình acetyl hóa nhanh (17,1%) Kiểu hình om acetyl hóa nhóm vi kháng nhạy Isoniazid có phân bố đồng ba kiểu Lu an hình Trong nhóm vi khuẩn kháng Isoniazid phân tập trung cao n va nhóm có kiểu hình acetyl hố trung bình (48,6%) thấp nhóm có kiểu ac th hình acetyl hóa chậm Trong nhóm lao mới, kiểu hình acetyl hóa nhanh có tỷ lệ nhạy INH (39,7%) cao nhiều so với nhóm kháng INH (18,2%); kiểu hình acetyl (27,6%) Trong nhóm lao gần khơng có khác biệt đáng kể kiểu hình acetyl hóa tỷ lệ kháng/nhạy INH Như nói tính kháng INH khơng có mối liên quan rõ ràng với tần số phân bố kiểu hình acety hóa có xu hướng gia tăng tính kháng INH nhóm kiểu hình acetyl hóa trung bình giảm tính kháng nhóm kiểu hình acetyl hóa nhanh với bệnh nhân mắc lao phổi Nghiên cứu 144 bệnh nhân lao Sotsuka cộng (2011) cho thấy kiểu hình chuyển hóa có liên quan tới nồng độ thuốc INH huyết bệnh nhân Trong nghiên cứu Sotsuka (2011), nồng độ INH trung bình sau Khoa Sinh học 48 Khố 2016-2018 si hóa trung bình có tỷ lệ kháng INH (63,6%) cao so với nhóm nhạy INH lu an Luận văn Thạc sĩ khoa học Nguyễn Thị Thu Hà va n t to ng uống thuốc cao nhóm bệnh nhân kiểu hình acetyl hố chậm; nồng độ hi INH nhóm bệnh nhân chuyển hóa nhanh trung bình thấp 50% 32% ep so với nhóm bệnh nhân chuyển hóa chậm Tỷ lệ AcINH/INH (chỉ thị cơng suất w acetyl hóa) 2,21 ± 0,95 nhóm acetyl hóa nhanh cao ba nhóm Tỷ nl oa lệ nhiễm độc gan cao bệnh nhân với kiểu hình acetyl hóa chậm thấp d lu người có kiểu hình acetyl hố nhanh [65] Nghiên cứu 129 bệnh nhân lao an va Nhật Bản (2008) cho thấy kiểu hình acetyl hóa nhanh chiếm 46,5%, acetyl hóa ul nf chậm 9,3%, acetyl hóa trung gian 44,2% Đồng thời nghiên cứu cho thấy oi lm có khác biệt rõ rệt nồng độ INH thời điểm nhóm bệnh nhân có kiểu hình acetyl hóa nhanh, acetyl hóa chậm trung bình [42] Các nghiên cứu nh at khác cho thấy có mối liên quan tương tự Kết nằm liệu z tổng thể đề tài cấp nhà nước, chúng tơi có đánh giá mối tương quan z gm @ nồng độ thuốc với kiểu hình chuyển hóa INH NAT2 Tuy nhiên, khuôn l.c khổ luận văn này dừng lại báo cáo bước đầu khảo sát mối tương quan kiểu hình acetyl hóa NAT2 với liệu nhạy kháng Isoniazid vi khuẩn om lao chưa thấy mối liên hệ rõ rệt (p=0,089) Lu an Tóm lại, kết luận văn đánh giá tính kháng thuốc va chống lao hàng vi khuẩn lao phân lập nuôi cấy từ mẫu đờm bệnh n nhân chẩn đoán lao phổi Đồng thời, luận văn đánh giá tần số phân ac th bố kiểu gen NAT2 quần thể bệnh nhân lao lao tái trị Bên cạnh đó, luận Khoa Sinh học 49 Khoá 2016-2018 si văn xác định mối tương quan với tỷ lệ kháng INH vi khuẩn lao lu an Luận văn Thạc sĩ khoa học Nguyễn Thị Thu Hà va n t to ng KẾT LUẬN hi ep Từ kết thu q trình nghiên cứu chúng tơi đến kết luận sau: w nl oa Tính kháng thuốc vi khuẩn lao với thuốc chống lao hàng d bệnh nhân lao phổi: lu an + Tỷ lệ kháng thuốc chung thuốc chống lao hàng tương va ul nf đối cao 39,2% Tỷ lệ kháng Streptomycin Isoniazid chiếm tỷ lệ cao đặc biệt oi lm nhóm lao phổi tái trị Lao đa kháng xuất bệnh nhân lao phổi lao phổi tái trị nh at + Xuất chủng vi khuẩn kháng toàn thuốc chống lao hàng với tỷ z z lệ 2,4% @ gm Đa hình di truyền gen NAT2 mối liên quan tới tính kháng Isoniazid vi l.c khuẩn lao bệnh nhân lao phổi om 2.1 Đa hình di truyền gen NAT2: có đa hình di truyền gen NAT2 Lu quần thể nghiên cứu an va + Có khác biệt tần số alen nhóm bệnh nhân lao phổi n tái trị lao phổi mới, tần số alen (NAT*5, *6, *7) nhóm lao phổi tái trị ac th cao so với nhóm lao phổi si 2.2 Mối liên quan tới tính kháng Isoniazid + Ở bệnh nhân lao phổi mắc vi khuẩn lao nhạy INH có phân bố đồng ba loại kiểu hình acetyl hố Ở nhóm bệnh nhân lao phổi mắc vi khuẩn lao kháng Isoniazid, kiểu hình acetyl hố trung bình chiếm cao (48,6%) thấp nhóm kiểu hình acetyl hóa nhanh (17,1%) + Khơng có mối liên quan rõ ràng tần số tính kháng INH tần số phân bố kiểu hình acetyl hóa Kiểu hình acetyl hóa khơng phải yếu tố nguy cho việc mắc lao vi khuẩn kháng INH Khoa Sinh học 50 Khoá 2016-2018 lu an Luận văn Thạc sĩ khoa học Nguyễn Thị Thu Hà va n t to ng KIẾN NGHỊ hi ep Vi khuẩn lao phân lập bệnh nhân có tiền sử điều trị thuốc chống lao có tính kháng thuốc cao việc xác định tính kháng thuốc cho bệnh nhân w nl lao tái trị cần thiết oa d Những kết nghiên cứu gen NAT2 bước đệm quan lu để tiến hành đánh giá dược động học Isoniazid bệnh nhân lao nhằm đưa an va phác đồ điều trị hợp lý cho cá nhân, giảm tải tất vấn đề điều trị lao ul nf để hướng tới mục tiêu toán bệnh lao vào sau năm 2030 oi lm nh at z z om l.c gm @ an Lu n va ac th si Khoa Sinh học 51 Khoá 2016-2018 lu an va n t to TÀI LIỆU THAM KHẢO ng hi TIẾNG VIỆT ep Nguyễn Văn Chính (2016), Thực trạng phát - chẩn đoán - điều trị w quản lý bệnh nhân lao đa kháng thuốc thuộc chương trình chống lao Hà Nội nl oa giai đoạn 2011-2014, Luận văn Thạc sỹ, Đại học Y tế Công Cộng, Hà Nội d Viện dinh dưỡng (2006), Kết điều tra thừa cân - béo phì số yếu lu an va tố liên quan người Việt Nam 25-64 tuổi, truy cập ngày 27/5-2017, trang ul nf web http://viendinhduong.vn/vi/dinh-duong-nguoi-lon/ket-qua-dieu-tra-thua- tuoi.html nh Bộ Y tế - Chương trình Chống lao Quốc gia (2007), Kết nghiên cứu tỷ lệ at oi lm can -beo-phi-va-mot-so-yeu-to-lien-quan-o-nguoi-viet-nam-25 64- z nhiễm lao mắc lao Việt Nam, Đinh Ngọc Sỹ, chủ biên z Hoàng Hà (2009), Nghiên cứu số đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng, sinh gm @ học vi khuẩn bệnh nhân lao phổi điều trị lại, Luận án Tiến sỹ Y học, om l.c Đại học Y Hà Nội, Hà Nội Nguyễn Thu Hà (2012), Nghiên cứu lâm sàng, cận lâm sàng, đột biến gen Lu Nguyễn Thu Hà, Trần Văn Sáng Đinh Ngọc Sỹ (2011), "Lâm sàng, cận n ac th va học, Đại học Y Hà Nội, Hà Nội an rpoB, katG inhA vi khuẩn lao phổi tái phát, Luận án Tiến sỹ Y lâm sàng tính kháng thuốc vi khuẩn lao bệnh nhân lao phổi tái Lê Thị Kim Hoa (2009), Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng lao phổi có vi khuẩn kháng đa thuốc, Luận văn chuyên khoa II, Đại học Y Hà Nội, Hà Nội Lê Ngọc Hưng (2008), "Nghiên cứu kháng thuốc lao phổi tái phát", Tạp chí Dược học 1, tr 18-20 Chu Thị Mão Hoàng Hà (2007), "Đặc điểm lâm sàng, Xquang tính chất vi khuẩn kháng thuốc bệnh nhân lao phổi AFB(+) Thái Nguyên", Tạp chí Thơng tin Y Dược, tr 153-158 si phát", JFran Viet Pneu 2(3), tr 63-67 lu an va n t to 10 Nguyễn Viết Nhung (2016), Cẩm nang hướng dẫn sử dụng thuốc điều trị ng hi lao, Nhà xuất Thanh Niên, Hà Nội ep Trường Đại học Y Hà Nội-Bộ môn Lao Bệnh phổi (2014), Bệnh học Lao, 11 w Trần Văn Sáng Lê Ngọc Hưng, ed, Nhà Xuất Y học Hà Nội, nl Nguyễn Tuyết Phong (2008), Đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng tình hình oa 12 d lu chẩn đoán lao phổi bệnh viện lao phổi Hà Giang, Luận văn Thạc sỹ, Học an ul nf 13 va viện Quân Y, Hà Nội Hoàng Thị Phượng (2009), Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng, lm tính kháng thuốc vi khuẩn bệnh nhân lao phổi kết hợp bệnh đái oi nh tháo đường, Luận văn Tiến sĩ Y học, Đại học Y Hà Nội, Hà Nội at Đinh Ngọc Sỹ (2011), "Chiến lược quản lý bệnh lao đa kháng thuốc Việt z 14 z Nam", Tạp chí khoa học Hội Phổi Pháp - Việt 2(3), tr 40-42 gm @ 15 Bộ Y tế (2009), Vi khuẩn Y học, Lê Văn Phủng, ed, Nhà xuất Giáo dục om l.c 16 Việt Nam Hà Nội Bộ Y tế (2014), Báo cáo tổng kết hoạt động chương trình chống lao 2013 Lu n Bộ Y tế (2015), Hướng dẫn chuẩn đoán, điều trị dự phòng bệnh lao, Cục Quản lý Khám chữa bệnh, chủ biên, Hà Nội Bộ Y tế (2018), Hướng dẫn chẩn đốn, điều trị dự phịng bệnh lao, Cục Quản lý Khám chữa bệnh, chủ biên, Hà Nội 19 Nguyễn Thị Thu Thái (2017), Nghiên cứu đặc điểm phân tử gen rpoB, katG vi khuẩn lao kháng đa thuốc, Luận án Tiến Sỹ Y học, Học viện Quân Y 20 Mai Văn Tuấn (2016), Sự đột biến kháng Rifampicin Isoniazid Mycobacterium Tuberculosis phân lập bệnh viện Trung ương Huế, Luận án Tiến sỹ Y học, Đại học Y dược thành phố Hồ Chí Minh si 18 ac th 17 va biên an phương hướng hoạt động năm 2014, Chương trình chống lao Quốc Gia, chủ lu an va n t to TIẾNG ANH ng Kruuner A cộng (2002), "Use of molecular techniques to hi 21 ep distinguish between treatment failure and exogenous reinfection with w Mycobacterium tuberculosis", Clin Infect Dis 35(2), tr 146-55 Toure A cộng (2016), "Prevention of isoniazid toxicity by NAT2 nl oa 22 d genotyping in Senegalese tuberculosis patients", Toxicology reports 3(826- an va 23 lu 831) Tverdal A (1986), "Body mass index and incidence of tuberculosis", Eur J ul nf Respir Dis 69(5), tr 355-62 lm David B cộng (2016), "Serial image analysis of Mycobacterium oi 24 nh tuberculosis colony growth reveals a persistent subpopulation in sputum at during treatment of pulmonary TB", Tuberculosis (Edinb) 98, tr 110-115 z Chen C cộng (2001), "N-Acetyltransferase polymorphisms, z 25 @ l.c Horton K C cộng (2016), "Sex Differences in Tuberculosis om 26 risk", Carcinogenesi 22(12), tr 1993-1999 gm cigarette smoking and alcohol consumption, and oral squamous cell cancer Lu Burden and Notifications in Low- and Middle-Income Countries: A an Systematic Review and Meta-analysis", PLoS Med 13(9), tr e1002119 Pheiffer C cộng (2008), "Time to detection of Mycobacterium n va 27 Int J Tuberc Lung Dis 12(7), tr 792-8 ac th tuberculosis in BACTEC systems as a viable alternative to colony counting", si 28 Tu D, Zhang L Su J (2000), "Resistance and efficacy of treatment in relapse pulmonary tuberculosis", Zhonghua Jie He He Hu Xi Za Zhi 23(11), tr 666-8 29 Hein DW cộng (2000), "Molecular genetics and epidemiology of the NAT1 and NAT2 acetylation polymorphisms", Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 9(1), tr 29-42 30 Podgorna E cộng (2015), "Variation in NAT2 acetylation phenotypes is associated with differences in food-producing subsistence modes and ecoregions in Africa", BMC Evolutionary Biology 15, tr 263 lu an va n t to 31 Luca F cộng (2008), "Multiple advantageous amino acid variants ng hi in the NAT2 gene in human populations", PLoS One 3(9), tr 3136 ep 32 Windmill K F cộng (2000), "Localization of N-acetyltransferases w NAT1 and NAT2 in human tissues", Toxicol Sci 54(1), tr 19-29 Soukaina G cộng (2014), "Distribution of allelic and genotypic nl oa 33 d frequencies of NAT2 and CYP2E1 variants in Moroccan population", BMC an va 34 lu Genet 15, tr 156 Gupta V H cộng (2013), "Association of GST null genotypes with ul nf anti-tuberculosis drug induced hepatotoxicity in Western Indian population", Pham Thu Hang cộng (2011), Pyrazinamide resistance of nh 35 oi lm Ann Hepatol 12(6), tr 959-65 at Mycobacterium tuberculosis in Viet Nam in 2011, National Lung Hospital, z @ Cho HJ cộng (2007), "Genetic polymorphisms of NAT2 and gm 36 z Viet Nam l.c CYP2E1 associated with anti tuberculosis drug-induced hepatotoxicity in Mortensen HM cộng (2011), "Characterization of genetic variation an 37 Lu tr 551-556 om Korean patients with pulmonary tuberculosis", Tuberculosis (Edinb) 87(6), va and natural selection at the arylamine N-acetyltransferase genes in global n 38 ac th human populations", Pharmacogenomics 12(11), tr 1545-1558 K G P Hoek cộng (2009), "Resistance to pyrazinamide and si ethambutol compromises MDR/XDR-TB treatment", South African Medical Journal 99(11) 39 Kim S J cộng (2018), "Association of body mass index with incident tuberculosis in Korea", PLoS One 13(4), tr e0195104 40 Klein D J cộng (2016), "PharmGKB summary: isoniazid pathway, pharmacokinetics", Pharmacogenet Genomics 26(9), tr 436-44 41 Cegielski JP, Arab L Cornoni-Huntley J (2012), "Nutritional risk factors for tuberculosis among adults in the United States, 1971-1992", Am J Epidemiol 176(5), tr 409-22 lu an va n t to 42 Fukino K cộng (2008), "Effects of N-acetyltransferase (NAT2), ng hi CYP2E1 and Glutathione-S-transferase (GST) genotypes on the serum ep concentrations of isoniazid and metabolites in tuberculosis Patients", The w Journal of Toxicological Sciences 33(22), tr 187-195 nl Van Doorn Hr D.H.P Kremer K, Vandenbroucke-Grauls Cm, Borgdorff oa 43 d lu Mw, Van Soolingen D (2006), "Public health impact of Isoniazid-resistant an va Mycobacterium tuberculosis strains with mutation at amino-acid position oi 44 lm Infect 12, tr 769-775 ul nf 315 of katG:a decade of experience in The Netherlands", Clin Microbiol Stanley L (2008), "Update on the pharmacogenetics of NATs: structural nh at considerations", Pharmacogenomics 9(11), tr 1673-1693 z Teixeira R L cộng (2011), "Genetic polymorphisms of NAT2, z 45 @ gm CYP2E1 and GST enzymes and the occurrence of antituberculosis drug- Dinh Doan Long cộng (2011), "Variability in the frequency of an Lu 46 om tr 716-24 l.c induced hepatitis in Brazilian TB patients", Mem Inst Oswaldo Cruz 106(6), Single nucleotide polymorphisms of N-acetyl transferase (NAT2) gene in n Majumder M cộng (2007), "Polymorphisms at XPD and XRCC1 ac th 47 va Vietnamese", VNU Journal of Science 27, tr 245-250 NAT2 slow acetylators", International Journal of Cancer 120(10), tr 21482156 48 Moller M Hoal E G (2010), "Current findings, challenges and novel approaches in human genetic susceptibility to tuberculosis", Tuberculosis (Edinb) 90(2), tr 71-83 49 Mphahlele M cộng (2008), "Pyrazinamide resistance among South African multidrug resistant Mycobacterium tuberculosis isolates", J Clin Microbiol 46(10), tr 3459-3464 si DNA repair loci and increased risk of oral leukoplakia and cancer among lu an va n t to 50 Ohno M cộng (2000), "Slow N-acetyltransferase genotype ng hi affects the incidence of isoniazid and rifampicin induced hepatotoxicity", Int ep J Tuberc Lung Dis 4(3), tr 256-261 Khan N, Pande V Das A (2013), "NAT2 sequence polymorphisms and w 51 nl oa acetylation profiles in Indians ", Pharmacogenomics 14(3), tr 289-303 d N.V.Nhung cộng (2015), "The fouth national anti-tuberculosis lu 52 an va drug resistance survey in Viet Nam", Int.J.Tubere.Lung Dis 19(6), tr 670- World Health Organization (2004), Anti-tuberculosis drug resistance in the oi lm 53 ul nf 675 nh world 1999-2002, The WHO/IUATLD Global Project on Anti-tuberculosis - at Drug Resistance Surveillance, chủ biên, Third Global Report, Geneva z Wang P cộng (2016), "Isoniazid metabolism and hepatotoxicity", z 54 @ American Society of Health - System Pharmacists (2018), AHFS Drug information 2018, AHFS Ensembl Project (1999), truy cập ngày-2018, trang web an Lu 56 om l.c 55 gm Acta Pharm Sin B 6(5), tr 384-392 http://asia.ensembl.org/Homo_sapiens/Variation/Population?db=core;r=8:18 n ac th 57 va 399844-18400844;v=rs1801280;vdb=variation;vf=1243314 Wang Py cộng (2012), "NAT2 polymorphisms and susceptibility Lung Dis 16(5), tr 589-595 58 Johnson R cộng (2006), "Ethambutol resistance testing by mutation detection", Int J Tuberc Lung Dis 10(1), tr 68-73 59 Mitchell J R cộng (1976), "Isoniazid liver injury: clinical spectrum, pathology, and probable pathogenesis", Ann Intern Med 84(2), tr 181-92 60 Agarwal S, Edward J B Daniel C (2010), "M.Tuberculosis on Lowenstein Jensen", Biology Image Library si to anti-tuberculosis drug-induced liver injury: meta-analysis", Int J Tuberc lu an va n t to 61 Huang Y S cộng (2003), "Cytochrome P450 2E1 genotype and ng hi the susceptibility to antituberculosis drug-induced hepatitis", Hepatology ep 37(4), tr 924-30 Morita S cộng (1999), "Genetic polymorphisms of drug- w 62 nl oa metabolizing enzymes and susceptibility to head-and-neck squamous-cell d carcinoma", Int J Cancer 80(5), tr 685-688 lu Wattanapokayakit S cộng (2016), "NAT2 slow acetylator an 63 va ul nf associated with anti-tuberculosis drug induced liver injury in Thai patients", Jagielski T cộng (2016), "Methodological and Clinical Aspects of oi 64 lm Int J Tuberc Lung Dis 20(10), tr 1364-1369 nh the Molecular Epidemiology of Mycobacterium tuberculosis and Other at z Mycobacteria", Clin Microbiol Rev 29(2), tr 239-90 z Sotsuka T cộng (2011), "Association of isoniazid-metabolizing gm @ 65 enzyme genotypes and isoniazid-induced hepatotoxicity in tuberculosis om l.c 66 patients", In Vivo 25(5), tr 803-812 Hein D W (2006), "N-acetyltransferase genetic polymorphism: effects of Lu carcinogen and haplotype on urinary bladder cancer risk", Oncogene 25(11), n WHO (2018), Global Tuberculossi report va 67 an tr 1649-1658 ac th si lu an va n DANH SÁCH BỆNH NHÂN THAM GIA NGHIÊN CỨU Thời gian từ 3/2017 - 6/2018 t to ng Mã nghiên cứu ep nl oa d lu Giới tính Bệnh viện 22 23 48 49 41 60 59 21 58 58 33 60 25 22 34 28 16 24 41 36 62 46 69 71 32 64 26 28 49 63 53 40 61 51 70 53 35 60 30 45 57 Nữ Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nữ Nam Nam Nam Nam Nữ Nữ Nữ Nữ Nữ Nam Nữ Nữ Nữ Nữ Nữ Nam Nữ Nữ Nữ Nam Nữ Nam Nam Nữ Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội an Tuổi va ul nf oi lm nh at z z om l.c gm @ an Lu n va ac th si HM01 HM02 HM03 HM04 HM05 HM06 HM07 HM09 HM11 HM13 HM14 HM16 HM17 HM18 HM19 HM21 HM22 HM23 HM24 HM26 HM27 HM28 HM29 HM30 HM31 HM32 HM33 HM34 HM35 HM36 HM39 HM40 HT01 HT02 HT03 HT04 HT05 HT06 HT07 HT08 HT09 w 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 hi STT lu an va n t to ng hi ep nl oa d lu an ul nf lm nh at z z Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện Phổi Hà Nội Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương om l.c gm @ an Lu n va ac th si Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nữ Nam Nam Nam Nam Nữ Nam Nam Nam Nam Nữ Nữ Nam Nam Nam Nam Nam Nữ Nam Nữ Nam Nam Nam Nam Nam Nam oi 45 45 54 53 40 45 31 48 40 52 48 55 43 46 56 58 43 40 42 49 28 63 60 49 57 32 55 58 57 54 33 30 47 33 45 29 64 28 39 22 24 24 46 20 45 39 va HT10 HT11 HT12 HT13 HT14 HT15 HT16 HT17 HT19 HT20 HT21 HT22 HT24 HT25 HT26 HT27 HT28 HT29 HT30 HT31 HT32 HT33 HT34 HT35 HT36 KM01 KM02 KM03 KM05 KM06 KM08 KM09 KM10 KM11 KM12 KM13 KM14 KM15 KM16 KM17 KM18 KM19 KM22 KM23 KM24 KM25 w 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 lu an va n t to ng hi ep nl oa d lu an ul nf lm nh at Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện 74 Trung ương Bệnh viện Phổi Trung ương Bệnh viện Phổi Trung ương Bệnh viện Phổi Trung ương Bệnh viện Phổi Trung ương Bệnh viện Phổi Trung ương Bệnh viện Phổi Trung ương Bệnh viện Phổi Trung ương Bệnh viện Phổi Trung ương Bệnh viện Phổi Trung ương Bệnh viện Phổi Trung ương Bệnh viện Phổi Trung ương Bệnh viện Phổi Trung ương Bệnh viện Phổi Trung ương Bệnh viện Phổi Trung ương Bệnh viện Phổi Trung ương z z om l.c gm @ an Lu n va ac th si Nam Nam Nữ Nam Nam Nam Nam Nam Nữ Nam Nam Nữ Nam Nam Nam Nam Nữ Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nam Nữ Nam Nữ Nam Nam Nam Nam Nữ Nam Nam Nữ Nữ Nam Nam oi 44 48 24 42 35 21 46 46 82 46 46 71 39 24 80 41 70 61 44 47 45 56 57 59 16 38 55 40 36 38 36 26 69 23 35 27 76 43 va KM26 KM27 KM29 KM30 KM31 KM32 KM34 KT01 KT02 KT03 KT06 KT07 KT08 KT09 KT10 KT11 KT12 KT13 KT14 KT15 KT16 KT18 KT20 WM01 WM02 WM03 WM04 WM05 WM06 WM07 WM08 WM09 WM10 WT01 WT02 WT03 WT04 WT05 w 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125