Trang 1 PHƯƠNG PHÁP REAL TIME – PCR SỬ DỤNG ĐẦU DÒ TAQMANMôn: Thiết bị và kĩ thuật công nghệ sinh học GV : TS.Huỳnh Văn Biết Nhóm: 3TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINHKHOA KHOA
TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC PHƯƠNG PHÁP REAL TIME – PCR SỬ DỤNG ĐẦU DỊ TAQMAN Mơn: Thiết bị kĩ thuật công nghệ sinh học GV : TS.Huỳnh Văn Biết Nhóm: 01/30/2024 Thủ Đức, ngày 23 tháng 10 năm 2023 Thành viên nhóm Huỳnh Thị Diệu • Mssv: 21126032 Nguyễn Ngọc Kim Ngân • Mssv: 21126112 Nguyễn Dương Phương Yến • Mssv: 21126593 01/30/2024 Định nghĩa Real-time PCR Nguyên lý hoạt động Taqman Thiết bị Rotor Gene Q 01/30/2024 Ứng dụng Real-time PCR việc xác định HBV Định nghĩa Realtime PCR Kỹ thuật Realtime PCR kỹ thuật dùng để kiểm soát diễn biến phản ứng PCR theo thời gian thực dựa phát huỳnh quang tạo phân tử báo cáo Hình Các giai đoạn Real-time PCR 01/30/2024 https:// thietbibinhp hu.com/ realtime-pcrla-gi/ Nguyên lý hoạt động DNA MẪU PRIMER (F+R) TAQMA N THÀNH PHẦN dNTP BUFFER Nguyên Tắc Mẫu dò nằm gần primer Chiều dài ~18-22 nu Ở đầu 5’ khơng có G Hàm lượng GC 30-80% Base C >G > mồi 8-10 DNA POLYMERAS E 01/30/2024 Nguyên lý hoạt động Hình Nguyên lý kỹ thuật Real-time 01/30/2024 PCR Giai đoạn biến tính 94C Giai đoạn bắt cặp 50-C Giai đoạn kéo dài 𝟕𝟐𝐨 𝐂 Taqman oligonucleotide dài 18 đến 22 nu, đánh dấu chất phát quang đầu 5’ chất ngắt tín hiệu đầu 3’ Kh ni ệm Taqman Taqman Ng ho uy ạt ên đ ộ lý ng Hình Nguyên lý hoạt động đầu dò 01/30/2024 Taqman https:// genesmart.vn /ky-thuatrealtime-pcrsu-dung-mau-7 THIẾT BỊ ROTOR GENE Q Hình Cấu tạo đằng trước Hình Thiết bị để phân tích kết qPCR https://biomedia.vn/review/mayrealtime-pcr-5-kenh-mau-rotorgene-hang-qiagen-duc.html o t u n ấ C bê i o g n Cấ bê u t tro n ạo ng Hình Cấu tạo đằng sau Hình Cấu tạo bên 01/30/2024 Ứng dụng Real-time PCR việc xác định HBV Virus viêm gan B (Hepatitis B Virus – HBV) tác nhân gây viêm gan siêu vi người Các chẩn đốn lâm sàng, sinh hóa thường khơng đặc hiệu, không cho kết định lượng việc xác định hàm lượng virus bệnh nhân cần thiết để theo dõi đánh giá hiệu điều trị Kỹ thuật real- time PCR áp dụng vào chẩn đốn cho phép định lượng xác DNA HBV máu bệnh nhân 01/30/2024 Ứng dụng Real-time PCR việc xác định HBV Các bước thực • Mẫu máu toàn phần ly tâm phân đoạn để thu lấy huyết • DNA gene phần tử virus HBV có huyết • Vùng gene nhân chọn phải có tính bảo tồn cao để đảm bảo nhân diễn đồng genotype khác HBV • Sử dụng cặp mồi mẫu dò Taqman bắt cặp vùng dài 118 bp gene S gene HBV • Việc định lượng trình tự mục tiêu cho vào phản ứng thực giai đoạn pha mũ trình nhân Số lượng trình tự mục tiêu ban đầu cao tín hiệu huỳnh quang thu sớm vượt cao tín hiệu huỳnh quang 01/30/2024 10 Cảm ơn thầy bạn ý lắng nghe 01/30/2024 11