Báo cáo tiểu luận chiều t4

Trang 1 PHƯƠNG PHÁP REAL TIME – PCR SỬ DỤNG ĐẦU DÒ TAQMANMôn: Thiết bị và kĩ thuật công nghệ sinh học GV : TS.Huỳnh Văn Biết Nhóm: 3TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINHKHOA KHOA

PHƯƠNG PHÁP REAL TIME – PCR

SỬ DỤNG ĐẦU DÒ TAQMAN

Môn: Thiết bị và kĩ thuật công nghệ sinh học

GV : TS.Huỳnh Văn Biết Nhóm: 3

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC

Thành viên nhóm

• Mssv: 21126032

Huỳnh Thị Diệu

• Mssv: 21126112

Nguyễn Ngọc Kim Ngân

• Mssv: 21126593

Nguyễn Dương Phương Yến

01/30/2024 3

1 Định nghĩa Real-time PCR

2 Nguyên lý hoạt động

3 Taqman

4 Thiết bị Rotor Gene Q

5 Ứng dụng Real-time PCR trong việc xác định HBV

1 Định nghĩa Realtime PCR

Kỹ thuật Realtime PCR là

một kỹ thuật được dùng để

kiểm soát diễn biến của

một phản ứng PCR theo

thời gian thực dựa trên sự

phát hiện huỳnh quang tạo

ra bởi một phân tử báo cáo

Hình 1 Các giai đoạn của Real-time

PCR

https://

thietbibinhp hu.com/

realtime-pcr-la-gi/

2 Nguyên lý hoạt động

THÀNH PHẦN

DNA MẪU

PRIMER (F+R)

dNTP

DNA POLYMERAS

E BUFFER

TAQMA

N

Mẫu dò nằm gần primer

Chiều dài

~18-22

nu

Ở đầu 5’ không có

G

Hàm lượng GC 30-80%

Base C

>G > mồi 8-10

Nguyên Tắc

2 Nguyên lý hoạt động

50-C

𝟕𝟐𝐨 𝐂

94C

Giai đoạn biến tính

Giai đoạn bắt cặp

Giai đoạn kéo dài

Hình 2 Nguyên lý của kỹ thuật Real-time

01/30/2024 7

Taqman

Taqman là oligonucleotide dài 18 đến 22 nu, được đánh dấu chất phát quang ở đầu 5’ và chất ngắt tín hiệu ở đầu 3’.

Kh ái

ni ệm

Ng uyê

n lý

hoạ t đ

ộn g

3 Taqman

Hình 3 Nguyên lý hoạt

động của đầu dò

Taqman

https://

genesmart.vn

/ky-thuat- realtime-pcr- su-dung-mau-do-taqman

4 THIẾT BỊ ROTOR GENE Q

Cấ u t

ạo

bê n

ng oà

i

Cấu

tạo

bên tro ng

Hình 4 Thiết bị để phân tích kết

quả qPCR

https://biomedia.vn/review/may-

realtime-pcr-5-kenh-mau-rotor-gene-hang-qiagen-duc.html

Hình 5 Cấu tạo đằng trước

Hình 6 Cấu tạo đằng sau

5 Ứng dụng Real-time PCR trong việc xác định HBV

Virus viêm gan B (Hepatitis B Virus – HBV) là một trong những tác nhân chính gây viêm gan siêu vi ở người

Các chẩn đoán lâm sàng, sinh hóa thường không đặc hiệu, không cho kết quả định lượng trong khi việc xác định hàm lượng virus ở bệnh nhân là cần thiết để theo dõi và đánh giá hiệu quả điều trị Kỹ thuật real- time PCR áp dụng vào chẩn đoán cho phép định lượng chính xác DNA HBV trong máu bệnh nhân

5 Ứng dụng Real-time PCR trong việc xác định HBV

• Mẫu máu toàn phần được ly tâm phân đoạn để thu lấy huyết thanh

• DNA bộ gene của các phần tử virus HBV có trong huyết thanh

• Vùng gene nhân bản được chọn phải có tính bảo tồn cao để đảm bảo sự nhân bản diễn ra đồng đều giữa các genotype khác nhau của HBV

• Sử dụng một cặp mồi và mẫu dò Taqman bắt cặp trên một vùng dài 118 bp của gene S trong bộ gene HBV

• Việc định lượng trình tự mục tiêu cho vào phản ứng được thực hiện tại giai đoạn pha mũ của quá trình nhân bản Số lượng trình tự mục tiêu ban đầu càng cao thì tín hiệu huỳnh quang thu được càng sớm vượt cao hơn tín hiệu huỳnh quang

Các bước thực hiện

Cảm ơn thầy

và các bạn đã chú ý lắng nghe