BAN QUẢN LÝ KHU NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP.HCM TRUNG TÂM ƯƠM TẠO DOANH NGHIỆP NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO NGHIỆM THU (GIAI ĐOẠN 1) NHIỆM VỤ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ 2017 XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY CỐT KHÍ CỦ (Polygocum cuspidatum Sieb et Zucc.) THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 12/2017 BAN QUẢN LÝ KHU NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP.HCM TRUNG TÂM ƯƠM TẠO DOANH NGHIỆP NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO NGHIỆM THU (GIAI ĐOẠN 1) NHIỆM VỤ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ 2017 XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY CỐT KHÍ CỦ (Polygocum cuspidatum Sieb et Zucc.) CƠ QUAN CHỦ TRÌ CHỦ NHIỆM (Ký tên/đóng dấu xác nhận) (Ký ghi rõ họ tên) Nguyễn Cửu Thành Nhân THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 12/2017 DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật BAP lên khả tái sinh chồi từ chồi ngủ đoạn thân Cốt khí củ 15 Bảng 2.2 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật BAP lên khả tái sinh chồi từ mẫu non Cốt khí củ 16 Bảng 2.3 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật Kinetin lên khả tái sinh chồi từ chồi ngủ đoạn thân Cốt khí củ 17 Bảng 2.4 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật Kinetin lên khả tái sinh chồi từ mẫu non Cốt khí củ 18 Bảng 2.5 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật BAP kết hợp với NAA lên khả nhân chồi Cốt khí củ 19 Bảng 2.6 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật BAP kết hợp với IBA lên khả nhân chồi Cốt khí củ 20 Bảng 2.7 Ảnh hưởng mơi trường khống MS biến đổi lên khả nhân chồi Cốt khí củ 22 Bảng 2.8 Ảnh hưởng nồng độ đường sucrose lên khả nhân chồi Cốt khí củ 23 Bảng 2.9 Ảnh hưởng thời gian ngập chìm lên khả nhân chồi Cốt khí củ 24 Bảng 2.10 Ảnh hưởng số lần ngập chìm lên khả nhân chồi Cốt khí củ 25 Bảng 2.11 Ảnh hưởng số lần ngập chìm lên khả nhân chồi Cốt khí củ 26 Bảng 2.12 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật IBA lên khả rễ tạo hồn chình Cốt khí củ 27 Bảng 3.1 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật BAP lên khả tái sinh chồi từ chồi ngủ đoạn thân Cốt khí củ ii 18 Bảng 3.2 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật BAP lên khả tái sinh chồi từ mẫu non Cốt khí củ 21 Bảng 3.3 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật Kinetin lên khả tái sinh chồi từ chồi ngủ đoạn thân Cốt khí củ 23 Bảng 3.4 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật Kinetin lên khả tái sinh chồi từ mẫu non Cốt khí củ 25 Bảng 3.5 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật BAP kết hợp với NAA lên khả nhân chồi Cốt khí củ 27 Bảng 3.6 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật BAP kết hợp với IBA lên khả nhân chồi Cốt khí củ ii 31 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình Các phận Cốt khí củ (Lá, hoa củ) Hình 3.1 Ảnh hưởng chất điều hịa sinh trưởng thực vật BAP lên khả tái sinh chồi từ chồi ngủ đoạn thân Cốt khí củ 32 Hình 3.2 Ảnh hưởng chất điều hịa sinh trưởng thực vật BAP lên khả tái sinh chồi từ mẫu non Cốt khí củ 33 Hình 3.3 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật Kinetin lên khả tái sinh chồi từ chồi ngủ đoạn thân Cốt khí củ 36 Hình 3.4 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật Kinetin lên khả tái sinh chồi từ mẫu non Cốt khí củ 37 Hình 3.5 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật BAP kết hợp với NAA lên khả nhân chồi Cốt khí củ 40 Hình 3.6 44 i MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH i DANH MỤC BẢNG ii THƠNG TIN CHUNG 1 Tên nhiệm vụ Nội dung Sản phẩm PHẦN MỞ ĐẦU Tính cấp thiết Mục tiêu Giới hạn nghiên cứu CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu Cốt khí củ 1.2 Tổng quan tình hình nghiên cứu 11 CHƯƠNG II NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Nội dung nghiên cứu 14 Nội dung 1: Ảnh hưởng số chất điều hòa sinh trưởng thực vật (BAP, Kinetin) lên khả tái sinh chồi từ chồi ngủ non Cốt khí củ 14 Nội dung 2: Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật BAP kết hợp với NAA IBA lên khả nhân chồi Cốt khí củ 14 Nội dung 3: Ảnh hưởng mơi trường khống MS biến đổi, nồng độ đường sucrose lên khả nhân chồi Cốt khí củ 14 Nội dung 4: Ảnh hưởng chế độ nuôi cấy (Thời gian ngập chìm, số lần ngập chìm thể tích mơi trường ni cấy) lên khả nhân chồi Cốt khí củ hệ thống ni cấy ngập chìm tạm thời 14 Nội dung 5: Ảnh hưởng nồng độ chất điều hòa sinh trưởng thực vật IBA lên khả tạo hoàn chỉnh Cốt khí củ mơi trường bán rắn 14 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 15 2.3 Vật liệu nghiên cứu 15 2.4 Phương pháp nghiên cứu 16 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 3.1 Ảnh hưởng số chất điều hòa sinh trưởng thực vật (BAP, Kinetin) lên khả tái sinh chồi từ chồi ngủ non Cốt khí củ 30 3.1.1 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật BAP đến khả tái sinh chồi từ chồi ngủ đoạn thân Cốt khí củ 30 3.1.2 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật BAP đến khả tái sinh chồi từ mẫu non Cốt khí củ 33 3.1.3 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật Kinetin đến khả tái sinh chồi từ chồi ngủ đoạn thân Cốt khí củ 23 3.1.4 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật Kinetin đến khả tái sinh chồi từ mẫu non Cốt khí củ 37 3.2 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật BAP kết hợp với NAA IBA lên khả nhân chồi Cốt khí củ 38 3.2.1 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật BAP kết hợp với NAA đến khả nhân chồi Cốt khí củ 38 Thí nghiệm 2.2: Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật BAP kết hợp với IBA đến khả nhân chồi Cốt khí củ 41 Sản phẩm nhiệm vụ 45 Chi phí sản xuất 45 CHƯƠNG IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 46 4.1 Kết luận 46 4.2 Kiến nghị 46 PHỤ LỤC I 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO 49 PHỤ LỤC II 52 THÔNG TIN CHUNG Tên nhiệm vụ: Xây dựng quy trình nhân giống in vitro Cốt khí củ (Polygonum cuspidatum Sieb et Zucc.) (Giai đoạn 1: Xác định môi trường hệ số nhân chồi Cốt khí củ; Giai đoạn 2: Ứng dụng hệ thống ni cấy ngập chìm tạm thời để nhân nhanh chồi tạo hồn chỉnh mơi trường bán rắn) Chủ nhiệm nhiệm vụ Họ tên: Nguyễn Cửu Thành Nhân Năm sinh: 19/01/1983 Nam/Nữ: Nam Học vị: Thạc sĩ Chuyên ngành: Sinh lý Thực vật Năm đạt học vị: 2010 Chức vụ (nếu có): Phó Trưởng phịng Hỗ trợ Công nghệ Tế bào Thực vật Tên quan công tác: Trung tâm Ươm tạo Doanh nghiệp Nông nghiệp Công nghệ cao TPHCM Địa quan: Ấp 1, xã Phạm Văn Cội, huyện Củ Chi, TP HCM Điện thoại quan: 08 62646103 Fax: 08 62646104 Địa nhà riêng: 12/25/9 Đông Hưng Thuận 31, Phường Tân Hưng Thuận, Quận 12, TPHCM Điện thoại nhà riêng: ĐTDĐ: 0989.639.007 E-mail: nhannguyenttut@gmail.com Cơ quan chủ trì: Trung tâm Ươm tạo Doanh nghiệp Nông nghiệp Công nghệ cao Thời gian thực hiện: năm (Từ tháng 3/2017 đến tháng 12/2018) Kính phí duyệt: năm 2017 122,000,000 đ Nội dung Giai đoạn 1: năm 2017 Nội dung 1: Ảnh hưởng số chất điều hòa sinh trưởng thực vật (BAP, Kinetin) đến khả tái sinh chồi từ chồi ngủ mẫu non Cốt khí củ Thí nghiệm 1.1: Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật BAP đến khả tái sinh chồi từ chồi ngủ đoạn thân Cốt khí củ Thí nghiệm 1.2: Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật BAP đến khả tái sinh chồi từ mẫu non Cốt khí củ Thí nghiệm 1.3: Ảnh hưởng chất điều hịa sinh trưởng thực vật Kinetin đến khả tái sinh chồi từ chồi ngủ đoạn thân Cốt khí củ Thí nghiệm 1.4: Ảnh hưởng chất điều hịa sinh trưởng thực vật Kinetin đến khả tái sinh chồi từ mẫu non Cốt khí củ Nội dung 2: Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật BAP kết hợp với NAA IBA đến khả nhân chồi Cốt khí củ Thí nghiệm 2.1: Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật BAP kết hợp với NAA đến khả nhân chồi Cốt khí củ Thí nghiệm 2.2: Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật BAP kết hợp với IBA đến khả nhân chồi Cốt khí củ Giai đoạn 2: năm 2018 Nội dung 3: Ảnh hưởng mơi trường khống MS biến đổi, nồng độ đường sucrose đến khả nhân chồi Cốt khí củ Thí nghiệm 3.1: Ảnh hưởng mơi trường khoáng biến đổi đến khả nhân chồi Cốt khí củ Thí nghiệm 3.2: Ảnh hưởng nồng độ đường sucrose đến khả nhân chồi Cốt khí củ Nội dung 4: Ảnh hưởng chế độ ni cấy (Thời gian ngập chìm, số lần ngập chìm thể tích) đến khả nhân chồi Cốt khí củ hệ thống ni cấy ngập chìm tạm thời Thí nghiệm 4.1: Ảnh hưởng thời gian ngập chìm đến khả nhân chồi Cốt khí củ Thí nghiệm 4.2: Ảnh hưởng số lần ngập chìm đến khả nhân chồi Cốt khí củ Thí nghiệm 4.3: Ảnh hưởng thể tích mơi trường ni cấy đến khả nhân chồi Cốt khí củ Nội dung 5: Ảnh hưởng nồng độ IBA đến khả tạo hồn chỉnh Cốt khí củ mơi trường bán rắn Thí nghiệm 5.1: Ảnh hưởng nồng độ IBA đến khả tạo hồn chỉnh Cốt khí củ mơi trường bán rắn Sản phẩm Giai đoạn 1: thực năm 2017 - Báo cáo khoa học: Báo cáo trình bày khoa học, số liệu phân tích phần mềm xử lý thống kê hội đồng thơng qua - 50 bình chồi Cốt khí củ với tiêu chuẩn: Mỗi bình có khoảng 10 chồi, chiều cao chồi trung bình cm, có 4-5 lá, chồi khỏe mạnh, không bị dị dạng Giai đoạn 2: thực năm 2018 - Báo cáo khoa học: Báo cáo trình bày khoa học, số liệu phân tích phần mềm xử lý thống kê hội đồng thông qua - Quy trình nhân giống Cốt khí củ - 500 Cốt khí củ in vitro có tiêu chuẩn: chiều cao 4-5 cm, có 5-6 lá, có 3-4 rễ, khỏe mạnh, phát triển tốt BẢNG TIẾN ĐỘ THỰC HIỆN NHIỆM VỤ STT Tiến độ Nội dung Người Thời gian thực thực Giai đoạn (2017) Nội dung 1: Ảnh hưởng số chất điều hòa sinh trưởng thực vật (BAP, Kinetin) đến khả tái sinh chồi từ chồi ngủ Cốt khí củ Thí nghiệm 1.1: Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật BAP đến khả tái sinh chồi từ chồi ngủ Hoàn Nguyễn thành Cửu Thành 100% Nhân 03/2017 – 06/2017 PHỤ LỤC I Từ kết nhiệm vụ, nhóm tác giả đề xuất quy trình vi nhân giống Cốt khí củ (Giai đoạn 1) từ vật liệu ban đầu Cốt khí củ từ vườn ươm: Bước 1: Chuẩn bị mẫu Cốt khí củ từ vườn ươm Chọn có hình thái khỏe mạnh, khơng bị sâu bệnh để làm nguồn mẫu ban đầu để vào mẫu Bước 2: Nuôi cấy tái sinh chồi trực tiếp từ chồi ngủ Cốt khí củ mơi trường ni cấy bán rắn Mơi trường ni cấy: mơi trường khống MS + 3,0 mg/l BAP + 30 g/l đường sucrose + 8,5 g/l agar, pH = 5,8 Bước 3: Những chồi tái sinh khỏe mạnh môi trường tái sinh chồi cấy chuyền sang môi trường nhân chồi để nhân nhanh số lượng chồi Cốt khí củ Mơi trường ni cấy: mơi trường khống MS + 3,0 mg/l BAP + 0,5 mg/l IBA + 30 g/l đường sucrose + 8,5 g/l agar, pH = 5,8 Môi trường nhân chồi với hệ số nhân lần, chồi hình thành có hình thái khỏe mạnh, khơng có dị dạng 47 SƠ ĐỒ CÁC BƯỚC THỰC HIỆN NHÂN CHỒI CÂY CỐT KHÍ CỦ (GIAI ĐOẠN 1) Cây Cốt khí củ từ vườn ươm B1 Tái sinh chồi từ chồi ngủ Cốt khí củ B2 Nhân chồi Cốt khí củ Bình chồi Cốt khí củ GIAI ĐOẠN 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu nước [1] Cao Y, Zhang M, Yu H, Li G, Du Y, Xiao L Effects of meteorological factors and mineral elements on the content of resveratrol in Polygonum cuspidatum rootstalk.:Ying Yong Sheng Tai Xue Bao 2004; 15(7):1143-7 (ISSN: 1001-9332) [2] Chang JS; Liu HW; Wang KC; Chen MC; Chiang LC; Hua YC; Lin CC Ethanol extract of Polygonum cuspidatum inhibits hepatitis B virus in a stable HBV-producing cell line Antiviral Res 2005; 66(1):29-34 (ISSN: 0166-3542) [3] Chu X, Sun A, Liu R Preparative isolation and purification of five compounds from the Chinese medicinal herb Polygonum cuspidatum Sieb et Zucc by high-speed counter-current chromatography Jounal Chromatogr A 2005; 1097(1-2):33-9 (ISSN: 0021-9673) [4] Donggeng Wang Tissue distribution and excretion of resveratrol in rat after oral administration of Polygonum cuspidatum extract (PCE) Science direct, phytomedicine 2008; (10)15: 859–866 [5] Du Q, Fu H, Zhan R, Yao Y, Li X Study on tissue culture of Polygonum multiflorum Zhong Yao Cai 1998 Mar; 21(3):109-10 [6] Hegde VR; Pu H; Patel M; Black T; Soriano A; Zhao W; Gullo VP; Chan TM Two new bacterial DNA primase inhibitors from the plant Polygonum cuspidatum Bioorg Med Chem Lett 2004; 14(9):2275-7 (ISSN: 0960894X) [7] Jolanta Slawinska1,2 • Stella K Kantartzi1 • Ralph L Obendorf2* In Vitro Organogenesis of Fagopyrum esculentum Moench (Polygonaceae) as a Method to Study Seed Set in Buckwheat The European Journal of Plant Science and Biotechnology ©2009 Global Science Books 49 [8] Lin Ruo Zhou Induction of callus from Polygonum cuspidatum leaves and determination of resveratrol Medicinal Plant 2011 Vol.2 No.11 pp.35-36, 47 ref.8 [9] Sabreena Rashid*, Zahoor A Kaloo, Seema Singh, Iram Bashir Callus induction and shoot regeneration from rhizome explants of Rheum webbianum Royle- a threatened medicinal plant growing in Kashmir Himalaya Journal of Scientific and Innovative Research 2014; 3(5): 515518 [10] Wang Qin et al In vitro propagation of Polygonum cuspidatum Sieb Et Zucc Journal of Anhui Agricultural Sciences 2012-04 [11] Yi Aiqin, Tong F, Song Q, Ding J, Li G,Huang Z The tissue culture technology of Polygonum cuspidatum sieb et zucc Hunan Forestry Science & Technology, 2007-01 [12] Yu SH, Zha JP, Zhan WH, Zhang DQ Contents comparison of resveratrol and polydatin in the wild Polygonum cuspidatum plant and its tissue cultures Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 2006; 31(8):637-41 (ISSN: 10015302) [13] Yusuke O, Kouki H and Tadaki H Seasonal change in the balance between capacities of RuBP carboxylation and RuBP regeneration affects CO2 response of photosynthesis in Polygonum cuspidatum Journal of Experimental Botany 2005; 56(412):755-63 (ISSN: 0022-0957) [14] Zhan L, Zhao X, Huang Z, Liu Z Study on Tissue Culture of Polygonum Cuspidatum Sieb Et Zucc Journal of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, 2010-07 [15] Zhang C, Zhang X, Zhang Y, Xu Q, Xiao H, Liang X Analysis of estrogenic compounds in Polygonum cuspidatum by bioassay and high performance liquid chromatography Jounal Ethnopharmacol 2006; 105(12):223-8 (ISSN: 0378-8741) 50 [16] Zhao L, Fei W, Liang-Jun C, Hai-Rong X, Yuan-Yuan L, Fan L, Wei H, Hong X and Zhan-Qiu Y In vitro and in vivo studies of the inhibitory effects of emodin isolated from Polygonum cuspidatum on Coxsakievirus B4 Molecules 2013, 18, 11842-11858 Tài liệu internet Trung tâm dược liệu Búp xanh, Củ Cốt khí 92/A2 Đường Gị Ơ Mơi, Khu Phố Phú Thuận Quận Hồ Chí Minh Ngày truy cập: 15/10/2016 Công ty TNHH Tuệ Linh, Cốt khí củ Tịa nhà 29T1, Hồng Đạo Thúy, Hà Nội Ngày truy cập: 15/10/2016 51 PHỤ LỤC II Phân tích thống kê SAS thí nghiệm 1.1 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values K 1234 T BAP1 BAP2 BAP3 BAP4 Number of Observations Read 16 Number of Observations Used 16 The ANOVA Procedure Dependent Variable: Y Sum ofSource F Value Error Corrected Total 0 Mean Square Coeff Var 0.000000 K R-Square DF 15 Source Squares Pr > F Model DF Anova SS Root MSE Y Mean 100.0000 Mean Square F Value Pr > F T The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for Y NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t 2.26216 Least Significant Difference Means with the same letter are not significantly different t Grouping Mean N T 52 A 100.0 BAP1 A 100.0 BAP2 A 100.0 BAP3 A 100.0 BAP4 Phân tích thống kê SAS thí nghiệm 1.2 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values K 1234 T BAP5 BAP6 BAP7 BAP8 Number of Observations Read 16 Number of Observations Used 16 The ANOVA Procedure Dependent Variable: Y Sum of Source DF Model Squares Error 0 Corrected Total 0.000000 Pr > F Coeff Var DF F Value 15 R-Square Source Mean Square Root MSE Anova SS Y Mean Mean Square K 0 T 0 F Value Pr > F The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for Y NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t 2.26216 Least Significant Difference 53 Means with the same letter are not significantly different t Grouping Mean N T A BAP5 A BAP6 A BAP7 A BAP8 Phân tích thống kê SAS thí nghiệm 1.3 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values K 1234 T KI1 KI2 KI3 KI4 Number of Observations Read 16 Number of Observations Used 16 The ANOVA Procedure Dependent Variable: Y Sum of Source DF Squares Model 7659.427800 1276.571300 Error 22.916700 2.546300 Corrected Total 15 Mean Square F Value 501.34 Coeff Var Root MSE 0.997017 1.968983 1.595713 Anova SS Mean Square DF F K 7.644450 T 7651.783350 2.548150 Y Mean 81.04250 F Value Pr > F 1.00 2550.594450 0.4360 1001.69 F 0.000000 Source Mean Square F Value Mean Square 0 Y Mean F Value Pr > F The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for Y NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t 2.26216 Least Significant Difference Means with the same letter are not significantly different t Grouping Mean N A KI5 A KI6 T 55 A KI7 A KI8 Phân tích thống kê SAS thí nghiệm 2.1 The GLM Procedure Class Level Information Class Levels Values A 1234 B 123 Number of Observations Read 48 Number of Observations Used 48 The GLM Procedure Dependent Variable: TL Sum of Source DF Squares Model 11 69.4305563 Error 36 277.7222250 Corrected Total 47 Mean Square F Value 6.3118688 Coeff Var 0.200000 0.0000 DF 0.6227 7.7145063 347.1527813 R-Square Source 0.82 Pr > F Root MSE 2.777500 Type III SS TL Mean 0.694375 Mean Square F Value Pr > F A 28.28652292 9.42884097 1.22 0.3157 B 15.42901250 7.71450625 1.00 0.3779 A*B 25.71502083 4.28583681 0.56 0.7624 The GLM Procedure Duncan's Multiple Range Test for TL NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square Number of Means Critical Range 36 7.714506 2.300 2.418 2.494 Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping Mean N 56 A A 1.852 12 A 0.926 12 A 0.000 12 A 0.000 12 The GLM Procedure Duncan's Multiple Range Test for TL NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 7.714506 Number of Means Critical Range 36 1.992 2.094 Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping Mean N A 1.3888 16 A 0.6944 16 A 0.0000 16 B The GLM Procedure Class Level Information Class Levels Values A 1234 B 123 AB 12 11 34 21 14 32 24 12 22 33 13 Number of Observations Read 48 Number of Observations Used 48 The GLM Procedure Dependent Variable: TL Sum of Source DF Squares Model 11 69.4305563 Error 36 277.7222250 Mean Square F Value 6.3118688 7.7145063 57 0.82 Pr > F 0.6227 Corrected Total 47 347.1527813 R-Square Coeff Var 0.200000 0.0000 Source DF Root MSE 2.777500 Type III SS TL Mean 0.694375 Mean Square F Value A 0.00000000 B 0.00000000 AB 25.71502083 4.28583681 0.56 Pr > F 0.7624 The GLM Procedure Duncan's Multiple Range Test for TL NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square Number of Means 36 7.714506 10 11 12 Critical Range 3.983 4.187 4.321 4.416 4.489 4.546 4.593 4.631 4.664 4.691 4.714 Means with the same letter are not significantly different Duncan Grouping Mean N A 0.000 4 A 0.000 4 A 0.000 A 0.000 1 A 0.000 A 0.000 2 A 0.000 A 0.000 A 0.000 3 A 0.000 A 0.000 4 A 0.000 Phân tích thống kê SAS thí nghiệm 2.2 TỶ LỆ NHÂN CHỒI (%) 58 AB The GLM Procedure Class Level Information Class Levels Values A 1234 B 123 Number of Observations Read 48 Number of Observations Used 48 The GLM Procedure Dependent Variable: TL Sum of Source DF Squares Model 11 48969.41667 Error 36 38.50000 Corrected Total 47 Mean Square F Value 4451.76515 Root MSE 0.999214 5.225126 1.034139 Type III SS 15721.75000 5240.58333 B 20353.04167 10176.52083 TL Mean 19.79167 Mean Square A A*B F 12894.62500 F Value Pr > F 4900.29 9515.71 2149.10417 2009.55