Xây dựng quy trình nhân giống in vitro cây dâm dương hoắc epimedium grandiflorum

BAN QUẢN LÝ KHU NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP.HCM TRUNG TÂM ƯƠM TẠO DOANH NGHIỆP NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO NGHIỆM THU NHIỆM VỤ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY DÂM DƯƠNG HOẮC (Epimedium grandiflorum) THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 12/2019 BAN QUẢN LÝ KHU NƠNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP.HCM TRUNG TÂM ƯƠM TẠO DOANH NGHIỆP NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO NGHIỆM THU NHIỆM VỤ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY DÂM DƯƠNG HOẮC (Epimedium grandiflorum) CƠ QUAN CHỦ TRÌ CHỦ NHIỆM (Ký tên/đóng dấu xác nhận) (Ký ghi rõ họ tên) Phan Thị Hồng Thủy THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 12/2019 MỤC LỤC Trang Danh sách bảng iv Danh sách hình vi TÓM TẮT vii THÔNG TIN CHUNG .viii PHẦN MỞ ĐẦU CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan Dâm dương hoắc 1.2 Tác dụng Dâm dương hoắc 1.3 Hiện trạng cơng trình nghiên cứu liên quan 1.3.1 Những nghiên cứu dược tính Dâm dương hoắc chi 1.3.2 Những nghiên cứu nuôi cấy mô Dâm dương hoắc 1.3.2.1 Nghiên cứu nuôi cấy mô chi 1.3.2.2 Nghiên cứu nuôi cấy mô Dâm dương hoắc 11 CHƯƠNG II: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Nội dung nghiên cứu 14 2.2 Địa điểm thời gian thực 14 2.3 Vật liệu, thiết bị 14 2.4 Phương pháp nghiên cứu 16 2.4.1 Thí nghiệm 1:Khảo sát thời gian khử trùng mẫu 16 2.4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA GA3 đến khả tạo chồi từ đoạn thân củ Dâm dương hoắc 19 2.4.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng mơi trường khoáng đến tăng trưởng chồi Dâm dương hoắc 21 2.4.4 Phương pháp đo đếm tiêu theo dõi 22 i 2.5 Phương pháp phân tích số liệu 22 CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23 3.1 Ảnh hưởng thời gian khử trùng thủy ngân clorua 0,1% đến tỷ lệ nhiễm tỷ lệ sống mẫu Dâm dương hoắc 23 3.1.1 Ảnh hưởng thời gian khử trùng thủy ngân clorua 0,1% mẫu thân Dâm dương hoắc 23 3.1.2 Ảnh hưởng thời gian khử trùng thủy ngân clorua 0,1% mẫu củ Dâm dương hoắc 26 3.2 Ảnh hưởng BA GA3 đến tái sinh chồi Dâm dương hoắc 28 3.2.1 Ảnh hưởng BA GA3 đến bật chồi Dâm dương hoắc từ mẫu thân 28 3.2.2 Ảnh hưởng BA GA3 đến nảy chồi Dâm dương hoắc từ mẫu củ 29 3.2.2.1 Ảnh hưởng BA GA3 đến mẫu củ sau 15 ngày nuôi cấy 29 a Tỷ lệ nảy chồi từ mẫu củ Dâm dương hoắc 29 b Số chồi phát sinh từ củ Dâm dương hoắc 32 3.2.2.2 Ảnh hưởng BA GA3 đến mẫu củ sau 30 ngày nuôi cấy 33 a Tỷ lệ nảy chồi từ mẫu củ Dâm dương hoắc 33 b Số chồi phát sinh từ củ Dâm dương hoắc 36 3.2.2.3 Ảnh hưởng BA GA3 đến mẫu củ sau 45 ngày nuôi cấy 37 a Tỷ lệ nảy chồi từ mẫu củ Dâm dương hoắc 37 b Số chồi phát sinh từ củ Dâm dương hoắc 39 3.3 Ảnh hưởng mơi trường khống đến phát triển chồi Dâm dương hoắc in vitro 40 3.3.1 Ảnh hưởng mơi trường khống đến gia tăng chiều dài chồi Dâm dương hoắc 40 3.3.2 Ảnh hưởng mơi trường khống đến số lá/ chồi Dâm dương hoắc 42 3.3.3 Ảnh hưởng môi trường khoáng đến số chồi/mẫu ban đầu 44 3.4 Sản phẩm nhiệm vụ 44 CHƯƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 46 ii 4.1 Kết luận 46 4.2 Kiến nghị 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 PHỤ LỤC 49 iii DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1: Bố trí thí nghiệm khảo sát thời gian khử trùng kép mẫu Dâm dương hoắc thủy ngân clorua 0,1% thân Dâm dương hoắc 18 Bảng 2.2: Bố trí thí nghiệm khảo sát thời gian khử trùng mẫu củ Dâm dương hoắc thủy ngân clorua 0,1% 18 Bảng 2.3: Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng BA GA3 đến khả tạo chồi Dâm dương hoắc từ mẫu thân củ Dâm dương hoắc 20 Bảng 3.1 Ảnh hưởng thời gian khử trùng mẫu đến tỷ lệ nhiễm tỷ lệ sống mẫu thân Dâm dương hoắc 24 Bảng 3.2 Ảnh hưởng thời gian khử trùng mẫu đến tỷ lệ nhiễm tỷ lệ sống mẫu củ Dâm dương hoắc 26 Bảng 3.3 Ảnh hưởng BA GA3 đến tỷ lệ nảy chồi củ Dâm dương hoắc sau 15 ngày nuôi cấy 30 Bảng 3.4 Ảnh hưởng BA GA3 đến phát sinh số chồi củ Dâm dương hoắc sau 15 ngày nuôi cấy 32 Bảng 3.5 Ảnh hưởng BA GA3 đến tỷ lệ nảy chồi củ Dâm dương hoắc sau 30 ngày nuôi cấy 33 Bảng 3.6 Ảnh hưởng BA GA3 đến phát sinh số chồi củ Dâm dương hoắc sau 30 ngày nuôi cấy 36 Bảng 3.7 Ảnh hưởng BA GA3 đến đến tỷ lệ nảy chồi củ Dâm dương hoắc sau 45 ngày nuôi cấy 38 Bảng 3.8 Ảnh hưởng BA GA3 đến phát sinh số chồi củ Dâm dương hoắc sau 45 ngày nuôi cấy 39 Bảng 3.9 Ảnh hưởng mơi trường khống đến gia tăng chiều dài chồi Dâm dương hoắc 41 iv Bảng 3.10 Ảnh hưởng mơi trường khống đến số lá/ chồi chồi Dâm dương hoắc 43 v DANH SÁCH CÁC HÌNH Trang Hình 1.1 Cây Dâm dương hoắc, hình vẽ cây, lá, hoa củ Dâm dương hoắc Hình 2.1 Nguồn mẫu Dâm dương hoắc 16 Hình 2.2 Các bước khử trùng mẫu Dâm dương hoắc 17 Hình 2.3: Đoạn thân củ Dâm dương hoắc khử trùng loại nhiễm 19 Hình 2.4: Chồi Dâm dương hoắc từ thí nghiệm 21 Hình 2.5: Bố trí thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống 22 Hình 3.1 Mẫu thân Dâm dương hoắc môi trường MS 28 Hình 3.2 Vơ mẫu tạo nguồn mẫu ban đầu từ Củ Dâm dương hoắc 25 Hình 3.3 Sự phát sinh chồi củ Dâm dương hoắc sau 15 ngày nuôi cấy nghiệm thức thí nghiệm 28 Hình 3.4: Chồi Dâm dương hoắc phát sinh từ củ mẫu ban đầu nuôi cấy sau 30 ngày 31 Hình 3.5 Chồi Dâm dương hoắc phát triển mơi trường thí nghiệm sau 45 ngày nuôi cấy 35 Hình 3.6: Biểu đồ tỷ lệ nảy chồi củ Dâm dương hoắc 35 Hình 3.7: Biểu đồ số chồi phát sinh mẫu ban đầu củ Dâm dương hoắc 36 Hình 3.8: Sự phát triển chồi Dâm dương hoắc ba môi trường khống thí nghiệm sau 20 ngày ni cấy 38 Hình 3.9: Sự phát triển chồi Dâm dương hoắc ba mơi trường khống thí nghiệm sau 45 ngày ni cấy 41 Hình 3.10: Biểu đồ gia tăng chiều dài chồi Dâm dương hoắc 42 Hình 3.10: Chồi Dâm dương hoắc phát triển mơi trường thí nghiệm sau 45 ngày nuôi cấy 46 Hình 3.11: Biểu đồ gia tăng số chồi dâm dương hoắc 47 Hình 3.11: Bình chồi Dâm dương hoắc 48 vi DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT BAP N – – Benzyladenine HSN Hệ số nhân IAA Indol acetic acid IBA – Indolebutyric acid MS Murashige and Skoog NAA α – Naphthaleneacetic acid TDZ Thidiazuron 2,4D 2,4-Dichlorophenoxyacetic Kin Kinetin GA3 Axit gibberellic vii TÓM TẮT Nghiên cứu “Xây dựng quy trình nhân giống in vitro Dâm dương hoắc (Epimedium grandiflorum)” thực vòng hai năm Trung tâm Ươm tạo Doanh nghiệp Công nghệ cao (2019 – 2020) Năm thứ xây dựng quy trình nhân giống từ giai đoạn vơ mẫu đến tạo chồi, năm thứ hai thực tiếp quy trình từ giai đoạn nhân chồi đến giai đoạn in vitro trồng vườn ươm Mục tiêu nhằm xây dựng hồn chỉnh quy trình vi nhân giống để tạo sản phẩm giống đạt tiêu chuẩn đưa vườn ươm Trong phạm vi báo cáo này, nghiên cứu thực giai đoạn đầu từ bước vô mẫu tới tạo chồi in vitro Dâm dương hoắc Kết nghiên cứu tóm tắt sau: Đoạn thân Dâm dương hoắc khử trùng thủy ngân clorua 0,1% thời gian phút lần phút lần cho tỷ lệ nhiễm thấp tỷ lệ mẫu sống cao, nhiên đoạn thân Dâm dương hoắc không cho dấu hiệu cảm ứng tạo chồi môi trường MS bổ sung thêm BA GA3 Củ Dâm dương hoắc khử trùng dung dịch thủy ngân clorua 0,1% thời gian 12 phút cho tỷ lệ nhiễm thấp 33,3% tỷ lệ sống cao 50% Củ Dâm dương hoắc nuôi cấy mơi trường MS có bổ sung thêm BA GA3, mơi trường có nồng độ mg/L BA mg/L GA3 cho tỷ lệ nảy chồi cao 100% số chồi phát sinh từ củ cao 3,3 chồi/mẫu sau 45 ngày nuôi cấy, nghiệm thức thí nghiệm Các mơi trường khống khác không ảnh hưởng nhiều đến phát triển chồi Dâm dương hoắc điều kiện thời gian nuôi cấy viii K D G D*G Source K D G D*G Alpha 605.95716 302.97858 2.56 0.0904 21810.14497 5452.53624 46.10