Đồ án tốt nghiệp xây dựng quy trình nhân giống in vitro cây sùng thảo (stachys affinnis)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH H o C hi ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP h in M C ity XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY SÙNG THẢO (STACHYS AFFINIS) ity rs ve ni U Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC of Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC gy lo no ch Te Giảng viên hướng dẫn : ThS Nguyễn Hoàng Quân Sinh viên thực MSSV: 1311100026 : Nguyễn Thị Thanh Hằng Lớp: 13DSH01 TP Hồ Chí Minh, năm 2017 Đồ án tố t nghiê ̣p LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan nô ̣i dung đồ án tố t nghiê ̣p là công trình nghiên cứu thực sự của dưới sự hướng dẫn của ThS Nguyễn Hoàng Quân – cán kỹ thuật Trung tâm Công nghệ Sinh học Tp HCM Đề tài đươ ̣c tiế n hành nghiên cứu thực nghiê ̣m ta ̣i phòng Thực nghiê ̣m Cây trồng thuộc Trung tâm Công nghệ Sinh Ho ̣c Tp H HCM Các số liê ̣u và kế t quả có nghiên cứu là hoàn toàn trung thực.Tôi xin o hoàn toàn chiụ trách nhiê ̣m về lời cam đoan này C hi M Tp HCM, ngày 20 tháng 07 năm 2017 h in Sinh viên thực hiê ̣n C ity Nguyễn Thị Thanh Hằng ity rs ve ni U of gy lo no ch Te Đồ án tố t nghiê ̣p LỜI CẢM ƠN Qua thời gian làm đề tài tốt nghiệp Trung tâm, em xin gửi lời cám ơn đến Trung Tâm Cơng nghệ Sinh Thành Phố Hồ Chí Minh tạo điều kiện hỗ trợ trang thiết bị giúp em hoàn thành đề tài Em xin gửi lời cám ơn chân thành đến Ban Giám Hiệu Trường Đại Học Cơng H Nghệ Thành phố Hồ Chí Minh, đặc biệt gửi lời cám ơn đến tất thầy cô khoa o Công nghệ Sinh học – Môi trường – Thực phẩm tạo điều kiện tốt C hi dạy bảo truyền đạt nhiều kiến thức bổ ích giúp em hồn thành khóa học cùa M Em xin trân trọng gửi lời cảm ơn đến TS Hà Thị Loan – Phó Giám đốc Trung in tâm Công nghệ Sinh học TP HCM ThS Nguyễn Hồng Qn tận tình hướng h dẫn bảo kiến thức cho em suốt thời gian làm đồ án tốt nghiệp C ity Em xin cảm ơn toàn thể anh chị làm việc Trung tâm bạn sinh viên làm đề tài Trung tâm giúp đỡ em suốt trình làm đề tài U ni Con xin cám ơn ba mẹ có cơng sinh thành ni dưỡng khôn lớn ity Em xin chân thành cảm ơn rs đỡ cổ vũ tinh thần cho em ve Cám ơn anh chị em người thân gia đình bạn bè ln bên cạnh giúp of Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 20 tháng năm 2017 lo no ch Te Sinh viện thực Nguyễn Thị Thanh Hằng gy Đồ án tố t nghiê ̣p MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH i DANH MỤC BẢNG ii DANH MỤC BIỂU ĐỒ iii H o DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT iv C MỞ ĐẦU hi M Tính cấp thiết đề tài h in Ý nghĩa đề tài .1 ity C Đố i tươ ̣ng và pha ̣m vi nghiên cứu Mục đích nghiên cứu U ve ni Nội dung nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu rs ity Kết đạt of Bố cục đồ án .3 Te CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU lo no ch 1.1 Sơ lược nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.1.1 Lịch sử phát triển công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật gy 1.1.2 Các phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.1.3 Các giai đoạn quy trình nhân giống in vitro 1.1.4 Những yếu tố ảnh hưởng đến q trình ni cấy mơ thực vật .9 1.2 Giới thiệu chi Stachys .17 1.3 Giới thiệu sùng thảo (Stachys affinis) 19 1.3.1 Phân loại .19 Đồ án tố t nghiê ̣p 1.3.2 Đặc điểm sinh học công dụng 19 1.3.4 Thành phần hóa học .21 1.3.5 Giá trị dinh dưỡng 22 1.4 Một số nghiên cứu chi Stachys 23 H 1.4.1 Kháng viêm giảm đau 24 o 1.4.2 Chống oxy hóa .24 C hi 1.4.3 Chống lo âu 25 M h in 1.4.4 Kháng khuẩn .26 1.5 Các nghiên cứu nhân giống in vitro chi Stachys 27 C ity CHƯƠNG 2: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 ni U 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 29 ve 2.2 Vật liệu phương pháp 29 ity rs 2.2.1 Vật liệu nghiên cứu 29 2.2.2 Trang thiết bị, dụng cụ hóa chất 29 of Te 2.2.3 Môi trường nghiên cứu .30 lo no ch 2.2.4 Điều kiện phịng ni cấy 30 2.2.5 Phương pháp xử lý số liệu 30 gy 2.3 Nội dung nghiên cứu 30 2.4 Phương pháp nghiên cứu .31 2.4.1 Pha môi trường nuôi cấy 31 2.4.2 Các thao tác phòng cấy 32 2.4.3 Bố trí thí nghiệm 32 Đờ án tớ t nghiê ̣p 2.4.3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng BA NAA đến khả nhân chồi từ đoạn thân sùng thảo 32 2.4.3.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng IBA đến trình tạo rễ sùng thảo .33 2.4.3.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng gía thể đến sinh trưởng H sùng thảo vườn ươm 35 o C CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37 hi 3.1 Ảnh hưởng BA kết hợp NAA đến khả nhân chồi từ đoạn thân M in sùng thảo 37 h 3.2 Ảnh hưởng IBA đến trình tạo rễ sùng thảo 42 C ity 3.3 Ảnh hưởng giá thể đến sinh trưởng sùng thảo giai đoạn vườn U ươm 47 ve ni CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .52 rs 4.1 Kết luận 52 ity 4.2 Kiến nghị 52 of TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 Te Tài liệu Tiếng Việt 53 lo no ch Tài liệu Tiếng Anh 53 PHỤ LỤC gy Phu ̣ lu ̣c A: Thành phần môi trường MS Phụ lục B: Quy trình nhân giống sùng thảo (Stachys affinis) Phụ lục C: Bảng số liệu xử lí thống kệ phần mềm SAS 9.4 Đồ án tố t nghiê ̣p DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cây sùng thảo 19 Hình 1.2 Củ sùng thảo 20 Hình 3.1 Ảnh hưởng BA kết hợp NAA đến khả nhân chồi từ đoạn thân sùng thảo sau tuần nuôi cấy .39 H Hình 3.2 Ảnh hưởng IBA đến trình rễ sùng thảo sau tuần nuôi o C cấy 46 hi Hình 3.3 Ảnh hưởng giá thể đến sinh trưởng sùng thảo giai đoạn h in M vườn ươm sau tuần trồng .51 ity C ity rs ve ni U of gy lo no ch Te i Đồ án tố t nghiê ̣p DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Nồng độ thời gian sử dụng số chất khử trùng 10 Bảng 2.1 Khảo sát ảnh hưởng BA kết hợp NAA đến khả nhân chồi .33 Bảng 2.2 Khảo sát ảnh hưởng IBA đến trình tạo rễ 34 Bảng 2.3 Khảo sát ảnh hưởng giá thể đến sinh trưởng sùng thảo giai H đoạn vườn ươm 35 o C Bảng 3.1 Ảnh hưởng BA kết hợp NAA đến khả nhân chồi từ đoạn thân hi sùng thảo sau tuần nuôi cấy 38 in M Bảng 3.2 Ảnh hưởng nồng độ IBA đến trình tạo rễ sùng thảo sau tuần nuôi cấy 43 h C Bảng 3.3 Ảnh hưởng giá thể đến sinh trưởng sùng thảo giai đoạn ity vườn ươm sau tuần trồng .48 ity rs ve ni U of gy lo no ch Te ii Đồ án tố t nghiê ̣p DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Ảnh hưởng BA kết hợp NAA đến tỷ lệ tạo mẫu tạo chồi sau tuần nuôi cấy .39 Biểu đồ 3.2 Ảnh hưởng BA kết hợp NAA đến khả nhân chồi từ đoạn thân sùng thảo sau tuần nuôi cấy .39 H Biểu đồ 3.3 Ảnh hưởng IBA đến trình tạo rễ sùng thảo sau tuần o nuôi cấy .44 C hi Biểu đồ 3.4 Ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống sùng thảo giai đoạn vườn M ươm sau tuần trồng 48 in Biểu đồ 3.5 Ảnh hưởng giá thể đến sinh trưởng sùng thảo giai đoạn h vườn ươm sau tuần trồng .49 ity C ity rs ve ni U of gy lo no ch Te iii Đồ án tố t nghiê ̣p DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT H 2,4-D 2,4 - Dichlorophenoxyacetic acid 2,4,5-T Trichlorophenoxyacetic acid ABA Abscisic acid BA Benzyl Adenine o Công Nghệ Sinh Học ĐC Đối chứng GA Gibberellin C CNSH hi Phenylpropanoid Glycosides ve ni Thành phố Hồ Chí Minh ity rs TP.HCM Napthalene Acetic Acid U PhG Murashige – Skoog ity NAA 3-Indole butyric acid C MS 3-Indole acetic acid h IBA in M IAA of gy lo no ch Te iv Đồ án tố t nghiê ̣p Means with the same letter are not significantly different Mean N NTHUC A 3.1633 NT2 B 2.3067 NT1 C 1.6333 NT3 D 0.2100 DC H t Grouping o C hi in M d Chiều cao chồi h CHIEU CAO CHOI ity C THE ANOVA Procedure Class Level Information Values A0 A1 A2 A3 rs ve NTHUC Levels ni U Class 12 Number of Observations Used 12 ity Number of Observations Read of CHIEU CAO CHOI Te THE ANOVA Procedure lo no ch Dependent Variable: CHIEUCAOCHOI Source DF Sum of Squares Mean Square F Value 9.79136667 3.26378889 Error 0.23820000 0.02977500 Corrected Total 11 10.02956667 109.62 F R-Square Coeff Var Root MSE CHIEUCAOCHOI Mean 0.976250 8.465462 0.172554 2.038333 Đồ án tố t nghiê ̣p Source DF Anova SS Mean Square F Value NTHUC 9.79136667 3.26378889 109.62 Pr > F F F NTHUC 112.4428267 28.1107067 23.89 F 54.21 F F 69.09 F F Corrected Total 14 8.37353333 6.112110 NTHUC 5.126667 Anova SS Mean Square F Value 7.39166667 1.84791667 CHIEU CAO CAY The ANOVA Procedure 18.82 0.0001 Alpha 0.01 Error Degrees of Freedom 10 Error Mean Square 0.098187 Critical Value of t 3.16927 Least Significant Difference 0.8108 gy t Tests (LSD) for CHIEUCAOCAY 13 Pr > F lo no ch DF 0.313348 Te Source CHIEUCAOCAY Mean of 0.882742 Root MSE ity Coeff Var rs R-Square Đồ án tố t nghiê ̣p Means with the same letter are not significantly different t Grouping Mean A N NTHUC 6.1767 NT3 A 5.5733 NT2 C 5.0967 NT1 4.6000 NT4 4.1867 DC A B B B H C o D C C hi D in M D h Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng giá thể đến sinh trưởng sùng thảo giai ity C đoạn vườn ươm a Tỷ lệ sống U ni TY LE SONG rs ve The ANOVA Procedure Class Level Information NTHUC Values NT1 NT2 NT3 of Levels ity Class Te Number of Observations Read TY LE SONG Dependent Variable: TYLESONG Source DF Sum of Squares Mean Square F Value Model 10509.02782 5254.51391 Error 138.49907 23.08318 Corrected Total 10647.52689 14 227.63 gy The ANOVA Procedure lo no ch Number of Observations Used Pr > F F NTHUC 10509.02782 5254.51391 227.63 F 232.72 F 5398.65608 F C Model Mean Square F Value Corrected Total 57.86 Coeff Var Root MSE SOLA Mean 5.124640 0.990707 19.33222 ity rs ve 0.950707 ni U R-Square DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F NTHUC 113.5809556 56.7904778 57.86 0.0001 The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for SOLA Alpha 0.01 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.9815 Critical Value of t 3.70743 Least Significant Difference 2.999 17 gy lo no ch Te SO LA of Source Đồ án tố t nghiê ̣p Means with the same letter are not significantly different t Grouping Mean N NTHUC H A 23.5467 C2 B 19.5933 C3 C 14.8567 C1 o C d Chiều cao hi CHIEU CAO CAY in M The ANOVA Procedure Class Level Information h Levels Values NTHUC C1 C2 C3 ity C Class U Number of Observations Read ni ve Number of Observations Used 9 rs CHIEU CAO CAY ity The ANOVA Procedure Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F Model 7.94302222 3.97151111 0.0004 Error 0.65180000 0.10863333 Corrected Total 8.59482222 Coeff Var Root MSE 0.924164 4.938174 0.329596 SOLA Mean gy R-Square 36.56 lo no ch DF Te Source of Dependent Variable: CHIEUCAOCAY 6.674444 Source DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F NTHUC 7.94302222 3.97151111 36.56 0.0004 18 Đồ án tố t nghiê ̣p CHIEU CAO CAY The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for CHIEUCAOCAY H o Alpha 0.01 Error Degrees of Freedom Error Mean Square 0.108633 Critical Value of t 3.70743 Least Significant Difference 0.9977 C Mean N NTHUC A 7.8033 C2 6.7167 C3 C 5.5033 C1 h in M t Grouping C hi Means with the same letter are not significantly different B ity ity rs ve ni U of gy lo no ch Te 19 Đồ án tố t nghiê ̣p H o C hi h in M ity C ity rs ve ni U of gy lo no ch Te 20 Đồ án tố t nghiê ̣p H o C hi h in M ity C ity rs ve ni U of gy lo no ch Te 21