Nghiên cứu xây dựng qui trình nhân giống in vitro cây hố bẫy sarracenia leucophylla

BAN QUẢN LÝ KHU NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP HCM TRUNG TÂM NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO NGHIỆM THU NHIỆM VỤ KHOA HỌC - CƠNG NGHỆ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUI TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY HỐ BẪY (Sarracenia leucophylla) Ths Nguyễn Thị Điệp Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 01/2021 BAN QUẢN LÝ KHU NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP HCM TRUNG TÂM NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO NGHIỆM THU NHIỆM VỤ KHOA HỌC - CƠNG NGHỆ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUI TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY HỐ BẪY (Sarracenia leucophylla) CHỦ NHIỆM NHIỆM VỤ Ths Nguyễn Thị Điệp CƠ QUAN QUẢN LÝ CƠ QUAN CHỦ TRÌ Thành phớ Hờ Chí Minh, tháng 01/2021 TÓM TẮT Cây Hố bẫy loại cảnh mới, ưa chuộng thị trường nước Giống chủ yếu nhập với giá thành cao, chất lượng giống khơng đều, q trình nhân giống nước quy mô nhỏ hiệu Xây dựng quy trình nhân giống in vitro giúp rút ngắn thời gian nuôi trồng, tăng khả sống, thích nghi tốt với vườn ươm, từ tăng hiệu kinh tế Nghiên cứu sử dụng Hố bẫy (Sarracenia leucophylla) khỏe mạnh, năm tuổi có chiều cao 20-30 cm, có khoảng 5-6 làm vật liệu ban đầu để nhân giống in vitro Hố bẫy Mẫu khử trùng 10 phút Javel 25% có bổ sung - giọt Tween 20 phút HgCl2 0,1% có bổ sung - giọt Tween 20, cho tỷ lệ mẫu đạt 81,6% tỷ lệ mẫu cảm ứng phát sinh chồi đạt 92,59% Ở giai đoạn nhân nhanh chồi, mơi trường thích hợp mơi trường MS bổ sung 0,2 mg/L NAA, 1,0 mg/L BA, 30 g/L đường saccharose, g/L agar Môi trường cho tỷ lệ mẫu cảm ứng tạo chồi đạt 93,33%, số lượng chồi mẫu đạt cao 14,22 chồi/mẫu, chồi to, xanh tươi, vươn thẳng Mơi trường thích hợp cho tăng trưởng chồi môi trường WV5 bổ sung 30 g/L đường saccharose, g/L agar, 3000 lux, chồi phát triển đạt chiều cao 6,43 cm, vươn thẳng, nhiều (17,56 lá/chồi), xanh tươi, nắp mở, khối lượng tươi đạt 0,89 g/chồi Môi trường WV5 bổ sung 1,0 mg/L IBA mơi trường thích hợp để cảm ứng tạo rễ sớm (95,56% chồi cảm ứng tạo rễ sau 30 ngày), số lượng rễ đạt 13,44 rễ/cây, rễ dài, phân nhánh, bám môi trường thạch Cây Hố bẫy in vitro trồng vườn ươm phát triển khỏe, xòe, tỷ lệ sống 95%, chiều cao trung bình 5,62 cm/cây, số lượng đạt 17,2 lá/cây P.KHĐT-QT1-BM04 i MỤC LỤC TÓM TẮT .i MỤC LỤC ii DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT iv DANH SÁCH BẢNG v DANH SÁCH HÌNH vi DANH SÁCH BIỂU ĐỒ vii THÔNG TIN ĐỀ TÀI MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan chi Sarracenia 1.2 Tầm quan trọng nhân tố ánh sáng vi nhân giống 1.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến tăng trưởng in vitro thực vật 1.4 Các nghiên cứu nhân giống nước chi Sarracenia 11 CHƯƠNG NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 14 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 14 2.2 Vật liệu thiết bị 14 2.3 Nội dung nghiên cứu 14 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 3.1 Ảnh hưởng thời gian khử trùng mẫu lên khử trùng mẫu Hố bẫy 22 3.2 Ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với NAA lên nhân nhanh chồi Hố bẫy in vitro 23 P.KHĐT-QT1-BM04 ii 3.3 Ảnh hưởng mơi trường khống lên tăng trưởng chồi Hố bẫy in vitro 27 3.4 Ảnh hưởng cường độ ánh sáng lên tăng trưởng Hố bẫy in vitro 29 3.5 Ảnh hưởng NAA IBA lên tạo rễ chồi Hố bẫy in vitro 33 Kết tỷ lệ sống tăng trưởng Hố bẫy in vitro giai đoạn vườn ươm sau tháng trồng 37 3.6 Sản phẩm nhiệm vụ nghiên cứu 38 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 42 4.1 Kết luận 42 4.2 Kiến nghị 42 Tài liệu tham khảo 43 Phụ lục 1: Xử lý số liệu 46 Phụ lục 2: Thành phần môi trường 63 P.KHĐT-QT1-BM04 iii DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Thuật ngữ tiếng Việt BA Benzyl adenine B5 Gamborg, 1968 IBA Indole-3-butyric acid Knu Knudson C Orchid, 1946 MS Murashige & Skoog, 1962 NAA Naphthalene Acetic Acid PP Polypropylene SH Schenk & Hildebrandt, 1972 WV5 Westvaco, 1996 WPM Lloyd & McCown, 1980 P.KHĐT-QT1-BM04 iv DANH SÁCH BẢNG Bảng Tựa bảng Trang Bảng 2.1 Thời gian khử trùng mẫu 15 Bảng 2.2 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với NAA lên nhân nhanh chồi Hố bẫy in vitro 17 Bảng 2.3 Khảo sát ảnh hưởng môi trường khoáng lên tăng trưởng chồi Hố bẫy in vitro 18 Bảng 2.4 Khảo sát ảnh hưởng cường độ ánh sáng lên tăng trưởng chồi Hố bẫy in vitro 19 Bảng 2.5 Khảo sát ảnh hưởng NAA IBA lên rễ chồi Hố bẫy 20 Bảng 3.1 Ảnh hưởng thời gian khử trùng mẫu lên khử trùng mẫu 22 Bảng 3.2 Ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với NAA lên nhân nhanh chồi Hố bẫy in vitro sau 60 ngày nuôi 24 Bảng 3.3 Ảnh hưởng môi trường khoáng lên tăng trưởng chồi Hố bẫy in vitro sau 60 ngày nuôi cấy 27 Bảng 3.4 Ảnh hưởng cường độ ánh sáng lên tăng trưởng chồi Hố bẫy in vitro sau 60 ngày nuôi cấy 30 Bảng 3.5 Hàm lượng chlorophyll chồi Hố bẫy in vitro sau 60 ngày nuôi cấy 31 Bảng 3.6 Ảnh hưởng NAA IBA lên rễ Hố bẫy in vitro sau 60 ngày nuôi cấy 35 Bảng 4.7 Chỉ tiêu tăng trưởng Hố bẫy giai đoạn vườn ươm 63 P.KHĐT-QT1-BM04 v DANH SÁCH HÌNH Hình Tựa hình Trang Hình 1 Cây Hố bẫy Hình 2.1 Cây giống Hố bẫy 14 Hình 3.1 Chồi Hố bẫy in vitro sau 30 ngày khử trùng 23 Hình 3.2 Ảnh hưởng BA NAA lên tái sinh chồi in vitro Hố bẫy sau 60 ngày nuôi cấy (thang đo mm) 26 Hình 3.3 Ảnh hưởng mơi trường khống lên tăng trưởng chồi Hố bẫy in vitro sau 60 ngày nuôi cấy (thang đo 1cm) 29 Hình 3.4 Ảnh hưởng cường độ ánh sáng lên tăng trưởng chồi Hố bẫy in vitro sau 60 ngày nuôi cấy (thang đo cm) 33 Hình 3.5 Ảnh hưởng NAA IBA lên rễ Hố bẫy in vitro sau 60 ngày nuôi cấy 36 Hình 3.6 Cây Hố bẫy giai đoạn vườn ươm sau tháng trồng 37 Hình 3.7 Quy trình nhân giống in vitro Hố bẫy 39 Hình 3.8 Bình chồi in vitro Hố bẫy 41 Hình 3.9 Cây Hố bẫy hậu ni cấy mơ sau tháng trồng ngồi vườn ươm 41 P.KHĐT-QT1-BM04 vi DANH SÁCH BIỂU ĐỒ Biểu đồ Tên biểu đồ Trang Biểu đồ 0.1 Hàm lượng chlorophyll chồi Hố bẫy in vitro………………………30 P.KHĐT-QT1-BM04 vii ANOVA Table Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1,11275 0,22255 702,53 0,0000 Within groups 0,00380139 12 0,000316782 Total (Corr.) 1,11655 17 Multiple Range Tests Method: 95,0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups SH 0,1169 X B5 0,137556 X WPM 0,174978 ÐC 0,335411 X Knu 0,335578 X WV5 0,844378 X X Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng cường độ ánh sáng lên tăng trưởng Hố bẫy Chiều cao chồi Summary Statistics Count Average Standard Coeff of deviation variation Minimum Maximum Range Stnd skewness lux1000 8,88889 0,3849 4,33013% 8,66667 9,33333 0,666667 1,22474 lux2000 16,0 0,666667 4,16667% 15,3333 16,6667 1,33333 0,0 lux3000 17,5556 0,19245 1,09623% 17,3333 17,6667 0,333333 -1,22474 lux4000 13,7778 0,83887 6,08858% 13,0 14,6667 1,66667 0,41407 Total 12 14,0556 3,45193 24,5592% 8,66667 17,6667 9,0 -0,98518 ANOVA Table Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 128,407 42,8025 128,41 0,0000 Within groups 2,66667 0,333333 Total (Corr.) 131,074 11 Multiple Range Tests Method: 95,0 percent LSD Count Mean lux1000 8,88889 lux4000 13,7778 lux2000 16,0 lux3000 17,5556 Homogeneous Groups X X X X Số lá/chồi Summary Statistics Count Average Standard Coeff of deviation variation Minimum Maximum Range Stnd skewness lux1000 8,88889 0,3849 4,33013% 8,66667 9,33333 0,666667 1,22474 lux2000 17,7778 0,19245 1,08253% 17,6667 18,0 0,333333 1,22474 lux3000 21,6667 1,20185 5,547% 20,6667 23,0 2,33333 0,814636 lux4000 13,7778 0,83887 6,08858% 13,0 14,6667 1,66667 0,41407 Total 12 15,5278 4,99385 32,1608% 8,66667 23,0 14,3333 -0,15315 ANOVA Table Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 269,657 89,8858 154,09 0,0000 Within groups 4,66667 0,583333 Total (Corr.) 274,324 11 Multiple Range Tests Method: 95,0 percent LSD Count Mean lux1000 8,88889 lux4000 13,7778 lux2000 17,7778 lux3000 21,6667 Homogeneous Groups X X X X Trọng lượng tươi Summary Statistics Count Average Standard Coeff of deviation variation Minimum Maximum Range Stnd skewness lux1000 0,569978 0,0107797 1,89125% 0,561 0,581933 0,0209333 0,811916 lux2000 0,765167 0,0192977 2,52203% 0,743033 0,778467 0,0354333 -1,15134 lux3000 0,893911 0,052495 5,87251% 0,8447 0,949167 0,104467 0,361526 lux4000 0,667489 0,00798369 1,19608% 0,658333 0,673 0,0146667 -1,14985 Total 12 0,724136 0,127585 17,619% 0,561 0,949167 0,388167 0,457847 ANOVA Table Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0,172442 0,0574808 69,50 0,0000 Within groups 0,00661613 0,000827016 Total (Corr.) 0,179058 11 Multiple Range Tests Method: 95,0 percent LSD Count Mean lux1000 0,569978 lux4000 0,667489 lux2000 0,765167 lux3000 0,893911 Homogeneous Groups X X X X Chlorophyll a b Chlorophyll a Summary Statistics Count Average Standard Coeff of deviation variation Minimum Maximum Range Stnd skewness lux1000 1,53396 0,105277 6,86307% 1,41306 1,60536 0,192304 -1,16541 lux2000 1,93924 0,107979 5,56811% 1,84218 2,05554 0,213368 0,549205 lux3000 2,84721 0,648047 22,7607% 2,42696 3,59353 1,16657 1,19571 lux4000 2,17521 0,0990359 4,55293% 2,11635 2,28955 0,173201 1,22314 Total 12 2,12391 0,574366 27,0429% 1,41306 3,59353 2,18048 2,10193 ANOVA Table Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 2,72383 0,907942 8,03 0,0085 Within groups 0,905031 0,113129 Total (Corr.) 3,62886 11 Multiple Range Tests Method: 95,0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups lux1000 1,53396 X lux2000 1,93924 XX lux4000 2,17521 X lux3000 2,84721 X Chlorophyll b Summary Statistics Count Average Standard Coeff of deviation variation Minimum Maximum Range Stnd skewness lux1000 0,874487 0,150198 17,1756% 0,701115 0,965207 0,264092 -1,22077 lux2000 1,11034 0,171248 15,423% 1,0106 1,30808 0,297484 1,2246 lux3000 1,33053 0,163926 12,3203% 1,18628 1,50879 0,322517 0,631678 lux4000 1,13142 0,132152 11,6801% 0,979393 1,21881 0,239414 -1,18408 Total 12 1,1117 0,214495 19,2944% 0,701115 1,50879 0,807678 -0,0254885 ANOVA Table Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0,313645 0,104548 4,35 0,0429 Within groups 0,192442 0,0240553 Total (Corr.) 0,506087 11 Multiple Range Tests Method: 95,0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups lux1000 0,874487 X lux2000 1,11034 XX lux4000 1,13142 XX lux3000 1,33053 X Chlorophyll a/b Summary Statistics Count Average Standard Coeff of deviation variation Minimum Maximum Range Stnd skewness lux1000 1,77775 0,206667 11,6252% 1,64055 2,01544 0,374897 1,18142 lux2000 1,77383 0,285874 16,1162% 1,46779 2,03399 0,566201 -0,497456 lux3000 2,12629 0,254917 11,9888% 1,8719 2,38173 0,50983 0,0129692 lux4000 1,93833 0,214976 11,0908% 1,73641 2,16433 0,427921 0,352157 Total 12 1,90405 0,256142 13,4525% 1,46779 2,38173 0,913938 0,208362 ANOVA Table Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0,250432 0,0834774 1,42 0,3074 Within groups 0,471265 0,0589081 Total (Corr.) 0,721697 11 Multiple Range Tests Method: 95,0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups lux2000 1,77383 X lux1000 1,77775 X lux4000 1,93833 X lux3000 2,12629 X Chlorophyll a+b Summary Statistics Count Average Standard Coeff of deviation variation Minimum Maximum Range Stnd skewness lux1000 2,41371 0,255633 10,5909% 2,11863 2,56816 0,449521 -1,22071 lux2000 3,05624 0,187897 6,14798% 2,8607 3,23543 0,374725 -0,274866 lux3000 4,18643 0,802188 19,1616% 3,71514 5,11267 1,39753 1,22417 lux4000 3,31369 0,195352 5,89531% 3,10555 3,49307 0,387515 -0,458351 Total 12 3,24252 0,763822 23,5564% 2,11863 5,11267 2,99404 1,61492 ANOVA Table Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 4,85301 1,61767 8,27 0,0078 Within groups 1,56464 0,19558 Total (Corr.) 6,41766 11 Multiple Range Tests Method: 95,0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups lux1000 2,41371 X lux2000 3,05624 XX lux4000 3,31369 X lux3000 4,18643 X Thí nghiệm 5: Ảnh hưởng NAA IBA lên rễ chồi Hố bẫy in vitro Ngày rễ Summary Statistics Count Average Standard Coeff of deviation variation Minimum Maximum Range Stnd skewness NT1 32,0 2,64575 8,26797% 30,0 35,0 5,0 1,03086 NT2 31,0 3,0 9,67742% 28,0 34,0 6,0 0,0 NT3 35,6667 0,57735 1,61874% 35,0 36,0 1,0 -1,22474 NT4 36,3333 1,1547 3,17807% 35,0 37,0 2,0 -1,22474 NT5 25,0 1,0 4,0% 24,0 26,0 2,0 0,0 NT6 24,3333 0,57735 2,37267% 24,0 25,0 1,0 1,22474 NT7 16,6667 0,57735 3,4641% 16,0 17,0 1,0 -1,22474 Total 21 28,7143 6,8567 23,879% 16,0 37,0 21,0 -0,922886 ANOVA Table Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 901,619 150,27 54,41 0,0000 Within groups 38,6667 14 2,7619 Total (Corr.) 940,286 20 Multiple Range Tests Method: 95,0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups NT7 16,6667 NT6 24,3333 X NT5 25,0 X NT2 31,0 X NT1 32,0 X NT3 35,6667 X NT4 36,3333 X X Stnd kurtosis -0,815525 Tỷ lệ tạo chồi sau 30 ngày Summary Statistics Count Average Standard Coeff of deviation variation Minimum Maximum Range Stnd skewness NT1 26,6667 0,0 0,0% 26,6667 26,6667 0,0 NT2 26,6667 6,66667 25,0% 20,0 33,3333 13,3333 NT3 26,6667 0,0 0,0% 26,6667 26,6667 0,0 NT4 35,5556 3,849 10,8253% 33,3333 40,0 6,66667 1,22474 NT5 64,4444 10,1835 15,802% 53,3333 73,3333 20,0 -0,6613 NT6 84,4444 3,849 4,55803% 80,0 86,6667 6,66667 -1,22474 NT7 95,5556 3,849 4,02803% 93,3333 100,0 6,66667 1,22474 Total 21 51,4286 28,5301 55,4753% 20,0 100,0 80,0 1,02423 ANOVA Table Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 15894,2 2649,03 96,28 0,0000 Within groups 385,185 14 27,5132 Total (Corr.) 16279,4 20 Multiple Range Tests Method: 95,0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups NT2 26,6667 X NT3 26,6667 X NT1 26,6667 X NT4 35,5556 X NT5 64,4444 NT6 84,4444 NT7 95,5556 X X X -1,59099E-9 Số rễ/mẫu Summary Statistics Count Average Standard Coeff of deviation variation Minimum Maximum Range Stnd skewness NT1 2,0 0,57735 28,8675% 1,66667 2,66667 1,0 1,22474 NT2 4,22222 0,509175 12,0594% 3,66667 4,66667 1,0 -0,6613 NT3 6,22222 0,509175 8,18317% 5,66667 6,66667 1,0 -0,6613 NT4 7,33333 0,333333 4,54545% 7,0 7,66667 0,666667 3,18199E-9 NT5 8,0 0,666667 8,33333% 7,33333 8,66667 1,33333 0,0 NT6 11,5556 0,19245 1,66543% 11,3333 11,6667 0,333333 -1,22474 NT7 13,4444 0,3849 2,86289% 13,0 13,6667 0,666667 -1,22474 Total 21 7,53968 3,78957 50,2617% 1,66667 13,6667 12,0 0,331923 ANOVA Table Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 284,032 47,3386 208,07 0,0000 Within groups 3,18519 14 0,227513 Total (Corr.) 287,217 20 Multiple Range Tests Method: 95,0 percent LSD Count Mean Homogeneous Groups NT1 2,0 NT2 4,22222 NT3 6,22222 NT4 7,33333 X NT5 8,0 X NT6 11,5556 NT7 13,4444 X X X X X Kết tỷ lệ sống tăng trưởng Hố bẫy giai đoạn vườn ươm sau tháng trồng Bảng 4.1 Chỉ tiêu tăng trưởng Hố bẫy giai đoạn vườn ươm sau tháng trồng Chiều cao Chiều dài Số chồi phát Mẫu Số Số rễ (cm) rễ (cm) sinh 17 5,7 15 17,1 14 5,1 14 18,5 21 6,3 18 16,8 18 17 19,7 16 15 18,6 Trung bình 17,2 5,62 15,8 18,14 1,4 Phụ lục 2: Thành phần môi trường Môi trường MS vitamins Murashige T and Skoog F., Physiol Plant, 15, 473 (1962) Thành phần vi lượng mg/L µM CoCl2.6H2O 0.025 0.11 CuSO4.5H2O 0.025 0.10 FeNaEDTA (Na2EDTA FeSO4.7H2O) 36.70 100.00 H3BO3 6.20 100.27 KI 0.83 5.00 MnSO4.H2O 16.90 100.00 Na2MoO4.2H2O 0.25 1.03 ZnSO4.7H2O 8.60 29.91 Đa lượng mg/L mM CaCl2 332.02 2.99 KH2PO4 170.00 1.25 KNO3 1900.00 18.79 MgSO4 180.54 1.50 NH4NO3 1650.00 20.61 Vitamins mg/L µM Glycine 2.00 26.64 myo-Inositol 100.00 554.94 Nicotinic acid 0.50 4.06 Pyridoxine HCl 0.50 2.43 Thiamine HCl 0.10 Môi trường Knu Morel, G.M., Cymb Soc News, 20, (1965) Vi lượng mg/L 0.30 µM FeSO4.7H2O 25.00 89.92 MnSO4.H2O 5.68 33.61 Đa lượng mg/L mM Ca(NO3)2 241.30 1.43 KCl 250.00 3.35 KH2PO4 250.00 1.84 MgSO4 122.15 1.02 NH4NO3 500.00 6.25 (NH4)2SO4 500.00 3.78 Môi trường Woody Plant medium WPM Lloyd G and McCown Commercially-feasible micropropagation of mountain laurel, Kalmia latifolia, by use of shoot-tip culture B., Int Plant Prop Soc Proc 30, 421 (1980) Vi lượng mg/L µM CuSO4.5H2O 0.25 1.00 FeNaEDTA 36.70 100.00 H3BO3 6.20 100.27 MnSO4.H2O 22.30 131.94 Na2MoO4.2H2O 0.25 1.03 ZnSO4.7H2O 8.60 29.91 Đa lượng mg/L mM CaCl2 72.50 0.65 Ca(NO3)2 4H2O 471.26 2.35 KH2PO4 170.00 1.25 Đa lượng mg/L mM K2SO4 990.00 5.68 MgSO4 180.54 1.50 NH4NO3 400.00 5.00 Vitamins mg/L µM Glycine 2.00 26.64 myo-Inositol 100.00 554.94 Nicotinic acid 0.50 4.06 Pyridoxine HCl 0.50 2.43 Thiamine HCl 1.00 2.96 Môi trường Gamborg (B5) Vi lượng mg/L µM CoCl2.6H2O 0.025 0.11 CuSO4.5H2O 0.025 0.10 FeNaEDTA 36.70 100.00 H3BO3 3.00 48.52 KI 0.75 4.52 MnSO4.H2O 10.00 59.16 Na2MoO4.2H2O 0.25 1.03 ZnSO4.7H2O 2.00 6.96 Đa lượng mg/L mM CaCl2 113.23 1.02 KNO3 2500.00 24.73 MgSO4 121.56 1.01 NaH2PO4 130.44 1.09 (NH4)2SO4 134.00 1.01 Vitamins mg/L µM myo-Inositol 100.00 554.94 Nicotinic acid 1.00 8.12 Pyridoxine HCl 1.00 4.86 Vitamins mg/L µM Thiamine HCl 10.00 29.65 Mơi trường Westvaco WV5 Coke J.E, Basal nutrient medium for in vitro cultures of loblolly pine., United States Patent 5,534,433 July 9, 1996 Vi lượng mg/L µM CoCl2.6H2O 0.025 0.11 CuSO4.5H2O 0.25 1.00 FeNaEDTA 36.71 100.00 H3BO3 31.00 501.37 KI 0.83 5.00 MnSO4.H2O 15.16 89.69 Na2MoO4.2H2O 0.25 1.03 ZnSO4.7H2O 8.60 29.91 Đa lượng mg/L mM CaCl 452.88 4.08 KCl 718.67 9.64 KH2PO4 270.00 1.98 KNO3 1084.06 10.72 MgSO4 903.79 7.51 NH4NO3 700.00 8.74 Vitamins mg/L µM myo-Inositol 1000.00 5549.39 Thiamine HCl 0.40 1.19 Môi trường Shenk & Hildebrandt Basal salt medium (SH) Micro Elements mg/L CoCl2.6H2O 0.1 CuSO4.5H2O 0.2 FeNaEDTA 19.8 H3BO3 KI MnSO4.H2O 10 Na2MoO4.2H2O 0.1 ZnSO4.7H2O Macro Elements mg/L CaCl2 151 KNO3 2500 MgSO4 195.05 (NH4)H2PO4 300 Vitamins mg/L myo-Inositol 1000 Nicotinic acid Pyridoxine HCl 0.5 Thiamine HCl