Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống in vitro lan kiếm vàng phan trí cymbidium finlaysonianum

BAN QUẢN LÝ KHU NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP HCM TRUNG TÂM NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO NGHIỆM THU NHIỆM VỤ KHOA HỌC - CƠNG NGHỆ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO LAN KIẾM VÀNG PHAN TRÍ (Cymbidium finlaysonianum) ThS Nguyễn Thị Điệp Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 12/2019 BAN QUẢN LÝ KHU NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP HCM TRUNG TÂM NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO NGHIỆM THU NHIỆM VỤ KHOA HỌC - CÔNG NGHỆ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO LAN KIẾM VÀNG PHAN TRÍ (Cymbidium finlaysonianum) CHỦ NHIỆM NHIỆM VỤ Nguyễn Thị Điệp CƠ QUAN QUẢN LÝ CƠ QUAN CHỦ TRÌ Thành phớ Hờ Chí Minh, tháng 12/2019 P.KHDT-QT1-BM04 TĨM TẮT Lan Kiếm “Phan trí” thuộc dịng lan Kiếm Tiên Vũ hoa thòng bán sơn địa dài cứng, hoa vàng đột biến tiếng từ lâu Việt Nam, khỏe có sức sống tốt, trồng đạt củ to với to Cây có giá trị sưu tầm cao Cây thích hợp với khí hậu nhiệt đới Hơn thời gian giả hành lâu, thường năm giả hành Trong nghiên cứu này, nghiên cứu nhân giống in vitro lan Kiếm vàng Phan trí, vật liệu sử dụng để nhân giống chồi non lan Kiếm vàng Phan trí Mơi trường thích hợp cho tạo PLB từ chồi đỉnh lan Kiếm vàng Phan trí in vitro mơi trường MS có bổ sung BA mg/L NAA 0,5 mg/L, sucrose 30 g/L, agar g/L với tỷ lệ mẫu tạo PLB 64,44% số lượng PLB 17,2 PLB/mẫu Môi trường thích hợp cho tạo chồi từ PLB in vitro lan Kiếm vàng Phan trí mơi trường MS có bổ sung BA mg/L, nước dừa 100 mL/L, sucrose 30 g/L, agar g/L cho số chồi 10,89 chồi, chồi thu to có màu xanh nhạt có – mở Phương pháp ni cấy thích hợp để tăng hiệu tăng sinh PLB tái sinh chồi hệ thống nuôi cấy ngập chìm tạm thời RITA® với tần suất ngập phút sau giờ, với gia tăng trọng lượng PLB số chồi tái sinh tương ứng 18,7 lần 84,6 chồi Mơi trường khống thích hợp cho tăng trưởng chồi lan Kiếm vàng Phan trí in vitro mơi trường khống Hyponex® với thành phần N:P:K 20:20:20 (2 g/L) kết hợp với hàm lượng chuối sứ chín 15 g/L, nước dừa 100 ml/L, sucrose 30 g/L, agar g/L thu tăng trưởng tốt 100% chồi rễ, chiều cao 6,3 cm có 3,67 rễ Tỷ lệ sống giai đoạn vườn ươm sau tháng trồng đạt 95% BM20-QT.QLKH Trang i MỤC LỤC Trang TÓM TẮT .i MỤC LỤC ii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH SÁCH BẢNG v DANH SÁCH HÌNH vi THÔNG TIN ĐỀ TÀI .1 MỞ ĐẦU Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu lan Cymbidium .5 1.1.1 Đặc điểm thực vật học Cymbidium 1.1.2 Phân loại .6 1.2 Nuôi cấy mô phân sinh tạo PLB vơ tính 1.2.1 Nuôi cấy mô phân sinh .7 1.2.2 Tạo nguồn PLB vơ tính 1.3 Các kỹ thuật sử dụng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.3.1 Kỹ thuật nuôi cấy mô môi trường thạch .9 1.3.2 Kỹ thuật nuôi cấy môi trường lỏng 1.3.3 Hệ thống nuôi cấy ngập chìm tạm thời 10 1.3.4 Ứng dụng hệ thống nuôi cấy ngập chìm tạm thời (TIS) nhân giống in vitro………… 11 1.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến tăng trưởng in vitro thực vật 13 1.4.1 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy 13 1.4.2 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng .15 1.5 Các nghiên cứu nước chi Cymbidium 16 1.5.1 Các nghiên cứu nước 16 1.5.2 Các nghiên cứu nước 18 Chương 2: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 21 2.2 Vật liệu thiết bị 21 BM20-QT.QLKH Trang ii 2.3 Nội dung nghiên cứu 21 2.3.1 Nội dung 1: Tạo PLB từ chồi đỉnh 21 2.3.2 Nội dung 2: Tái sinh chồi từ PLB 22 2.3.2.1 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA lên tái sinh chồi từ PLB…… 22 2.3.2.2 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng phương pháp nuôi cấy lên tăng sinh PLB tái sinh chồi từ PLB 23 2.3.3 Nội dung 3: Tăng trưởng chồi 24 2.4 Phương pháp xử lý số liệu .28 3.1 Ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với NAA lên tái sinh PLB từ chồi đỉnh…… 29 3.2 Tái sinh chồi từ PLB 33 3.2.1 Ảnh hưởng nồng độ BA lên tái sinh chồi từ PLB 33 3.2.2 Ảnh hưởng kiểu nuôi cấy lên tăng sinh PLB tái sinh chồi từ PLB 35 3.3 Ảnh hưởng môi trường khoáng hàm lượng chuối lên tăng trưởng chồi lan in vitro 38 3.4 Tỷ lệ sống lan giai đoạn vườn ươm sau tháng trồng… 44 3.5 Sản phẩm nhiệm vụ nghiên cứu 45 3.5.1 Quy trình nhân giống in vitro lan Kiếm vàng Phan trí 45 3.5.2 Bình chồi in vitro 47 3.5.3 Cây lan Kiếm vàng Phan trí in vitro 48 Chương 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .49 4.1 Kết luận 49 4.2 Kiến nghị 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO 50 PHỤ LỤC BM20-QT.QLKH Trang iii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Thuật ngữ tiếng Việt ANOVA Analysis of variance BA 6-benzyladenin ctv Cộng tác viên CV Coefficient of variation Duncan Duncan’s multiple range test ĐC Đối chứng ĐHSTTV Điều hịa sinh trưởng thực vật IAA Axít indole-3-acetic IBA Axít indole-3-butyric Kinetin N-(2-furfurylamino)-1-H-purine-6amine KC Môi trường Knudson C, 1946 MS Mơi trường Murashige Skoog, 1962 NAA Axít 1-naphthalene acetic NT Nghiệm thức PLB Protocorm-like bodies RITA® Hệ thống ni cấy ngập chìm tạm thời SH Mơi trường Schenk Hilderbrant, 1972 TDZ Thidiazuron TIS Temporary immertion system Zeatin 6-(4-hydroxy-3-methyl-trans-2-butanylamino)purine 2-ip 6-γ-γdimethyl-aminopurine BM20-QT.QLKH Trang iv DANH SÁCH BẢNG Bảng Tên bảng Trang 2.1 Nồng độ BA kết hợp với NAA 22 2.2 Nồng độ BA 23 2.3 Phương pháp nuôi cấy 24 2.4 Mơi trường khống hàm lượng chuối 25 3.1 Ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với NAA lên tạo PLB từ chồi 30 đỉnh lan Kiếm vàng Phan trí in vitro sau 60 ngày nuôi cấy 3.2 Ảnh hưởng nồng độ BA lên tái sinh chồi từ PLB lan Kiếm vàng 33 Phan trí in vitro sau 60 ngày ni cấy 3.3 Ảnh hưởng phương pháp nuôi cấy lên tăng sinh PLB tái sinh 36 chồi lan Kiếm vàng Phan trí in vitro sau 60 ngày ni cấy 3.4 Sự tăng trưởng chiều cao chồi lan Kiếm vàng Phan trí in vitro 39 sau 60 ngày ni cấy 3.5 Sự tăng trưởng tỷ lệ chồi tạo rễ chồi lan Kiếm vàng Phan trí in 39 vitro sau 60 ngày nuôi cấy 3.6 Sự tăng trưởng số rễ chồi lan Kiếm vàng Phan trí in vitro sau 60 40 ngày nuôi cấy BM20-QT.QLKH Trang v DANH SÁCH HÌNH Hình Tên hình Trang 1.1 Lan Kiếm Phan trí 1.2 Hệ thống RITA® 11 2.1 Mẫu chồi non lan Kiếm vàng Phan trí 21 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 PLB tạo thành từ chồi đỉnh lan Kiếm vàng Phan trí in vitro sau 60 ngày ni cấy Chồi lan Kiếm vàng Phan trí in vitro sau 60 ngày nuôi cấy 35 Chồi lan Kiếm vàng Phan trí in vitro kiểu ni cấy sau 60 ngày nuôi cấy Chồi lan Kiếm vàng Phan trí in vitro mơi trường khống hàm lượng chuối khác sau 60 ngày nuôi cấy Cây lan Kiếm vàng Phan trí ex vitro sau tháng ni trồng ngồi vườn ươm 32 38 43 44 3.6 Quy trình nhân giống in vitro lan Kiếm vàng Phan trí 45 3.7 Bình chồi in vitro lan Kiếm vàng Phan trí 47 3.8 Cây lan Kiếm vàng Phan trí 48 BM20-QT.QLKH Trang vi THƠNG TIN ĐỀ TÀI Tên đề tài/dự án: Nghiên cứu xây dựng qui trình nhân giống in vitro lan Kiếm vàng Phan Trí (Cymbidium finlaysonianum) Chủ nhiệm đề tài/dự án: Chủ nhiệm đề tài 1:  Họ tên: Nguyễn Thị Điệp  Năm sinh: 1987  Học vị: Thạc sĩ Giới tính: Nữ Chuyên ngành: Di truyền Năm đạt học vị: 2013  Chức danh khoa học: Năm phong chức danh:  Chức vụ: Phó phịng Cơng nghệ Tế bào Thực vật  Tên quan công tác: Trung tâm Nghiên cứu Phát triển Nông nghiệp Công nghệ cao  Địa quan: Ấp 1, xã Phạm Văn Cội, huyện Củ Chi, TPHCM  Điện thoại quan: (028) 8862726 Fax: (028) 37990500  Địa nhà riêng:  Điện thoại nhà riêng: DTDĐ: 0909259807  E-mail: nguyenthidiep.bio@gmail.com Cơ quan chủ trì: - Tên quan chủ trì nội dung nghiên cứu quan chủ quản: Trung tâm Nghiên cứu Phát triển Nông nghiệp Công nghệ cao – Ban Quản lý Khu Nơng nghiệp Cơng nghệ cao Tp Hồ Chí Minh - Điện thoại: 028 38862726 - Fax: 028 37990500 - Email: nghiencuu.ahtp@tphcm.gov.vn - Website: www.chta.com.vn - Địa chỉ: Ấp 1, Xã Phạm Văn Cội, Huyện Củ Chi, Tp Hồ Chí Minh - Số tài khoản: 9527 1032617 Kho bạc Nhà nước Củ Chi Thời gian thực hiện: Từ tháng 01/2019 đến tháng 12/2019 Kinh phí duyệt: 268.852.462 đồng Mục tiêu: a Mục tiêu tổng quát Xây dựng quy trình nhân giống in vitro lan Kiếm vàng Phan trí BM20-QT.QLKH Trang TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1] Võ Văn Chi Dương Tiến Đức, Phân loại thực vật (thực vật bậc cao), Nhà xuất Đại học Trung học chuyên nghiệp, 1978 [2] Lê Văn Hồng, Giáo trình ni cấy mơ tế bào thực vật, Đại học Đà Nẵng, 2008 [3] Phan Xuân Huyên, Nguyễn Trung Ái, Nguyễn Thị Lang, Nguyễn Thị Diệu Hương, Đinh Văn Khiêm Dương Tấn Nhựt, Phục Tráng nhân nhanh giống Địa lan Cymbidium cv ni cấy đỉnh sinh trưởng, Tạp chí Sinh học, 2004, 26(t): 48-54 [4] Vũ Quốc Luận, Nguyễn Phúc Huy, Hoàng Xuân Chiến, Trịnh Thị Hương, Vũ Thị Hiền, Nguyễn Bá Nam, Đỗ Khắc Thịnh Dương Tấn Nhựt, Nghiên cứu nhân giống in vitro lan Vân Hài (Paphiopedilum Callosum), Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 2012, 10(3): 497-505 [5] Nguyễn Đức Lượng Lê Thị Thủy Tiên, Công nghệ tế bào, NXB Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh, 2006 [6] Hồng Thị Nga, Nguyễn Quang Thạch, Đỗ Đức Thịnh Hoàng Minh Tú, Xây dựng quy trình nhân nhanh giống địa lan Hồng hồng (Cymbidium Irldloldes) kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào, Tạp chí Khoa học Phát triển, 2008, Tập VI, số 4: 387394 [7] Dương Tấn Nhựt, Nguyễn Hồ Ngọc Lan, Tống Nhật Tường, Vũ Quốc Luận, Bùi Văn Thế Vinh, Phan Xuân Huyên, Ảnh hưởng hệ thống nuôi cấy lên hình thành thể trịn tương tự chồi non (protocorm-like body) nghiên cứu rút ngắn thời gian sinh trưởng hoa địa lan Cymbidium sp nuôi cấy in vitro, Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 2006, 4(3):353-362 [8] Dương Tấn Nhựt ctv, Nghiên cứu khả nhân nhanh protocorm like body hoa địa lan (Cymbidium sp.) hệ thống bioreactor tự tạo, Kỷ yếu hội nghị khoa học Công nghệ sinh học thực vật công tác nhân giống chọn tạo giống hoa, NXB nơng nghiệp, 2007 [9] Cung Hồng Phi Phượng ctv, Bước đầu ứng dụng hệ thống nuôi cấy ngập chìm tạm thời nhân giống lan Hồ điệp lai – Phalaenopsis Hybrid, Kỷ yếu hội BM20-QT.QLKH Trang 50 nghị khoa học Công nghệ sinh học thực vật công tác nhân giống chọn tạo giống hoa, NXB nông nghiệp, 2007, trang 10-15 [10] Nguyễn Ngọc Quỳnh ctv, Ứng dụng hệ thống ni cấy ngập chìm tạm thời việc nhân nhanh PLB chồi lan Dendrobium, Phalaenopsis, Viện khoa học kỹ thuật Nông nghiệp miền Nam, 2008 [11] Kha Nữ Tú Uyên, Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống in vitro địa lan Hương Cát Cát (Cymbidium Golden Elf), Trung tâm Nghiên cứu Phát triển Nông nghiệp Công nghệ cao, 2013 [12] Nguyễn Quang Thạch, Hoàng Thị Nga, Nguyễn Thị Lý Anh, Lê Thị Muội, Nghiên cứu nhân nhanh in vitro giống địa lan thương mại “miss kim”, Tạp chí Nơng nghiệp – Nơng thôn – Môi trường, 2004, Số 11: 1503-1505 [13] Đào Thanh Vân Đặng Thị Tố Nga, Giáo trình hoa lan, Nhà xuất Nông nghiệp, 2008 [14] Bùi Trang Việt, Sinh lý thực vật đại cương (phần II), Nhà xuất Đại học quốc gia Tp HCM, 2002 Tài liệu tiếng Anh [15] Alvard D., Cote F and Teisson C., Comparison of methods of liquid medium culture for banana micropropagation, Effects of temporary immersion of explants, Plant Cell Tiss Org Cult, 1993, 32: 55-60 [16] Akatari A.B., Masahiko T and Shunnji K., Fomation of protocorm – like body (PLB) and shoot development through in vito culture of outev tissure of Cymbium PLB, J Japan Soc Hort Sci, C3, 1994, (3): 663-673 [17] Chen C and Wei-Chin C., Micropropagation of Cymbidium ensifolium var Misericors through callus-derived rhizomes, In vitro cellular and developmental biology – plant, 2000, Volume 36, number 6: 517-520 [18] Escalona M., Lorenzo B., Gonzales B., Daquita M., Gonzales J.L., Desjardins Y and Borroto C., Pineapple (Ananas cosmosus L Merr) micropropagation in temporary immersion, Plant Cell Rep., 1999, 18: 743- 231 [19] Gu Z., Higaki C., Nishida M.M., Arditti J and Nyman L.P., The effects of benzyladenine, 2,4-diclorophenoxyacetic acid, and indoleacetic acis on shoot -tip culture of Cymbidium, Lindleyana, 1987, 2: 88-90 BM20-QT.QLKH Trang 51 [20] Harris R.E and Mason B., Two machines for in vitro propagation of plants in liquid media, Can J Plant Sci., 1983, 63: 311-316 [21] Joseph A., Micropropagation of orchid (volume I), Black well Publishing, 2008 [22] Jorge M.T., Esther J.N., Lucia A., In vitro propagation of Phalaenopsis (Orchidaceae) from protocorms using the temporary immersion system “RITA”, Revista Colombiana de Biotecnology, 2007, Vol 7, No 1; 25-31 [23] Morel G.M., Producing virus-free Cymbidium, Am Orchid Soc Bull, 1960, 29: 495-497 [24] Preil W Hvoslef-Eide A.K., Liquid culture systems for in vitro plant propagation, 1966, 231–242 [25] Steward F.C., Mapes M.O., Morphogenesis in aseptic all oultures of Cymbidium, BT Gaz,1971, 132: 65-70 [26] Sagawa Y and Shoji T., Clonal propagation of Cymbidiums through shoot meristem culture, Amer Orchid Soc Bull., 1966, 35:118-122 [27] Vij S.P and Pathak, Micropropagation of orchids through leaf segments, J Orchid Soc India, 1990, 4: 69-88 [28] Young P.S., Murthy H.N Yoeup P.K., Mass multiplication of protocorm- like bodides using bioreactor system and subsequent plant regeneration in Phalaenopsis, Plant cell, Tissue and organ culture, 2000, 67-72 [29] Yongin C., Xiao L and Youqi L., In vitro plant regeneration from the immature seeds of Cymbidium faberi, Plant cell, tisue and organ culture, 2005, Volume 81, Number 2: 247-251 Trang web [30] www.truonganorchid.com/san-pham/kiem-vang-rung-viet-nam-kiem-phan-tri- la-bong-sp493105.html [31] www.http//wikipedia.org [32] https://vi.wikipedia.org/wiki/Cymbidium_finlaysonianum [33] http://thienduongnganhoa.com/kiem-phan-tri-kiem-phan-tri-la-san-than-la-ratdep.html BM20-QT.QLKH Trang 52 [34] http://www.truonganorchid.com/san-pham/kiem-vang-rung-viet-nam-kiemphan-tri-la-bong-sp493105.html BM20-QT.QLKH Trang 53 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Thí nghiệm 1: ANOVA Table for tlmt plb by nt Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 14839.1 10 1483.91 157.40 0.0000 Within groups 207.407 22 9.42761 Total (Corr.) 15046.5 32 Table of Means for tlmt plb by nt with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nt Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -?C 0.0 1.77272 -2.59961 2.59961 NT1 0.0 1.77272 -2.59961 2.59961 NT10 64.4444 1.77272 61.8448 67.0441 NT2 31.1111 1.77272 28.5115 33.7107 NT3 37.7778 1.77272 35.1782 40.3774 NT4 37.7778 1.77272 35.1782 40.3774 NT5 55.5556 1.77272 52.9559 58.1552 NT6 0.0 1.77272 -2.59961 2.59961 NT7 42.2222 1.77272 39.6226 44.8218 NT8 37.7778 1.77272 35.1782 40.3774 NT9 40.0 1.77272 37.4004 42.5996 -Total 33 31.5152 Multiple Range Tests for tlmt plb by nt -Method: 95.0 percent Duncan nt Count Mean Homogeneous Groups -NT1 0.0 X ?C 0.0 X NT6 0.0 X NT2 31.1111 X NT4 37.7778 X BM20-QT.QLKH NT3 NT8 NT9 NT7 NT5 NT10 3 3 3 37.7778 37.7778 40.0 42.2222 55.5556 64.4444 X X X X X X ANOVA Table for PLB by nt Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 845.319 10 84.5319 161.89 0.0000 Within groups 11.4874 22 0.522155 Total (Corr.) 856.807 32 Table of Means for PLB by nt with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nt Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -?C 0.0 0.417195 -0.611797 0.611797 NT1 0.0 0.417195 -0.611797 NT10 17.2 0.417195 16.5882 NT2 3.26667 0.417195 2.65487 3.87846 NT3 4.82222 0.417195 4.21043 5.43402 NT4 5.04444 0.417195 4.43265 5.65624 NT5 10.6 0.417195 9.9882 NT6 0.0 0.417195 -0.611797 NT7 3.53333 0.417195 2.92154 4.14513 NT8 6.91111 0.417195 6.29931 7.52291 NT9 9.57778 0.417195 8.96598 10.1896 0.611797 17.8118 11.2118 0.611797 -Total 33 5.54141 Multiple Range Tests for PLB by nt -Method: 95.0 percent Duncan nt Count Mean Homogeneous Groups BM20-QT.QLKH -NT1 0.0 X ?C 0.0 X NT6 0.0 X NT2 3.26667 X NT7 3.53333 X NT3 4.82222 X NT4 5.04444 X NT8 6.91111 X NT9 9.57778 X NT5 10.6 X NT10 17.2 X Thí nghiệm ANOVA Table for so choi by nt Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 139.012 27.8025 84.98 0.0000 Within groups 3.92593 12 0.32716 Total (Corr.) 142.938 17 Table of Means for so choi by nt with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nt Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -NT1 3.11111 0.330232 2.60234 3.61989 NT2 5.44444 0.330232 4.93567 5.95322 NT3 6.33333 0.330232 5.82456 6.84211 NT4 10.8889 0.330232 10.3801 11.3977 NT5 5.11111 0.330232 4.60234 5.61989 NT6 2.22222 0.330232 1.71345 2.731 -Total 18 5.51852 Multiple Range Tests for so choi by nt -Method: 95.0 percent LSD nt Count Mean Homogeneous Groups -NT6 2.22222 X BM20-QT.QLKH NT1 3.11111 X NT5 5.11111 X NT2 5.44444 XX NT3 6.33333 X NT4 10.8889 X -Thí nghiệm ANOVA Table for gia tang luong tuoi by nt Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 425.64 141.88 2843.44 0.0000 Within groups 0.399178 0.0498972 Total (Corr.) 426.039 11 Table of Means for gia tang luong tuoi by nt with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nt Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -?C 5.55667 0.128967 5.34637 5.76696 TS1 3.90778 0.128967 3.69749 4.11807 TS2 5.70778 0.128967 5.49749 5.91807 TS3 18.7144 0.128967 18.5042 18.9247 -Total 12 8.47167 Multiple Range Tests for gia tang luong tuoi by nt -Method: 95.0 percent LSD nt Count Mean Homogeneous Groups -TS1 3.90778 X ?C 5.55667 X TS2 5.70778 X TS3 18.7144 X ANOVA Table for so choi by nt Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value - BM20-QT.QLKH Between groups 11159.1 3719.71 9885.07 0.0000 Within groups 3.01037 0.376296 Total (Corr.) 11162.2 11 Table of Means for so choi by nt with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nt Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -?C 20.7333 0.354164 20.1558 21.3108 TS1 7.82222 0.354164 7.24472 8.39972 TS2 14.7556 0.354164 14.1781 15.3331 TS3 84.0667 0.354164 83.4892 84.6442 -Total 12 31.8444 Multiple Range Tests for so choi by nt -Method: 95.0 percent LSD nt Count Mean Homogeneous Groups -TS1 7.82222 X TS2 14.7556 X ?C 20.7333 X TS3 84.0667 X Thí nghiệm Analysis of Variance for CCC - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:YEU TO A 21.4325 7.14416 91.39 0.0000 B:YEU TO B 14.6123 4.87076 62.31 0.0000 INTERACTIONS AB 4.55206 0.505784 6.47 0.0000 RESIDUAL 2.50148 32 0.0781713 BM20-QT.QLKH TOTAL (CORRECTED) 43.0983 47 Table of Least Squares Means for CCC with 95.0 Percent Confidence Intervals -Stnd Lower Upper Level Count Mean Error Limit Limit -GRAND MEAN 48 3.82569 YEU TO A A1 12 3.43889 0.0807111 3.27449 3.60329 A2 12 3.35278 0.0807111 3.18837 3.51718 A3 12 3.53333 0.0807111 3.36893 3.69774 A4 12 4.97778 0.0807111 4.81337 5.14218 YEU TO B B1 12 4.10833 0.0807111 3.94393 4.27274 B2 12 4.55833 0.0807111 4.39393 4.72274 B3 12 3.525 0.0807111 3.3606 3.6894 B4 12 3.11111 0.0807111 2.94671 3.27551 YEU TO A by YEU TO B A1 B1 3.51111 0.161422 3.1823 3.83992 A1 B2 3.82222 0.161422 3.49342 4.15103 A1 B3 3.32222 0.161422 2.99342 3.65103 A1 B4 3.1 0.161422 2.77119 3.42881 A2 B1 3.42222 0.161422 3.09342 3.75103 A2 B2 3.93333 0.161422 3.60453 4.26214 A2 B3 3.0 0.161422 2.67119 3.32881 A2 B4 3.05556 0.161422 2.72675 3.38436 A3 B1 3.97778 0.161422 3.64897 4.30658 A3 B2 4.17778 0.161422 3.84897 4.50658 A3 B3 3.4 0.161422 3.07119 3.72881 A3 B4 2.57778 0.161422 2.24897 2.90658 A4 B1 5.52222 0.161422 5.19342 5.85103 A4 B2 6.3 0.161422 5.97119 6.62881 A4 B3 4.37778 0.161422 4.04897 4.70658 A4 B4 3.71111 0.161422 3.3823 4.03992 Multiple Range Tests for CCC by YEU TO A -Method: 95.0 percent LSD YEU TO A Count LS Mean Homogeneous Groups -A2 12 3.35278 X A1 12 3.43889 X A3 12 3.53333 X BM20-QT.QLKH A4 12 4.97778 X Multiple Range Tests for CCC by YEU TO B -Method: 95.0 percent LSD YEU TO B Count LS Mean Homogeneous Groups -B4 12 3.11111 X B3 12 3.525 X B1 12 4.10833 X B2 12 4.55833 X Multiple Range Tests for CCC by NT -Method: 95.0 percent Duncan NT Count Mean Homogeneous Groups -A3B4 2.57778 X A2B3 3.0 XX A2B4 3.05556 XX A1B4 3.1 X A1B3 3.32222 XX A3B3 3.4 XX A2B1 3.42222 XXX A1B1 3.51111 XXXX A4B4 3.71111 XXXX A1B2 3.82222 XXXX A2B2 3.93333 XXXX A3B1 3.97778 XXX A3B2 4.17778 XX A4B3 4.37778 X A4B1 5.52222 X A4B2 6.3 X -Analysis of Variance for so re - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:YEU TO A 14.1366 4.71219 84.82 0.0000 B:YEU TO B 6.48843 2.16281 38.93 0.0000 INTERACTIONS AB 5.81713 RESIDUAL BM20-QT.QLKH 1.77778 0.646348 32 11.63 0.0555556 0.0000 -TOTAL (CORRECTED) 28.2199 47 Table of Least Squares Means for so re with 95.0 Percent Confidence Intervals -Stnd Lower Upper Level Count Mean Error Limit Limit -GRAND MEAN 48 1.71528 YEU TO A A1 12 1.44444 0.0680414 1.30585 1.58304 A2 12 1.52778 0.0680414 1.38918 1.66637 A3 12 1.25 0.0680414 1.1114 1.3886 A4 12 2.63889 0.0680414 2.50029 2.77748 YEU TO B B1 12 2.08333 0.0680414 1.94474 2.22193 B2 12 2.05556 0.0680414 1.91696 2.19415 B3 12 1.5 0.0680414 1.3614 1.6386 B4 12 1.22222 0.0680414 1.08363 1.36082 YEU TO A by YEU TO B A1 B1 1.77778 0.136083 1.50059 2.05497 A1 B2 1.44444 0.136083 1.16725 1.72164 A1 B3 1.22222 0.136083 0.94503 1.49941 A1 B4 1.33333 0.136083 1.05614 1.61053 A2 B1 1.55556 0.136083 1.27836 1.83275 A2 B2 1.77778 0.136083 1.50059 2.05497 A2 B3 1.66667 0.136083 1.38947 1.94386 A2 B4 1.11111 0.136083 0.833919 1.3883 A3 B1 1.55556 0.136083 1.27836 1.83275 A3 B2 1.33333 0.136083 1.05614 1.61053 A3 B3 1.22222 0.136083 0.94503 1.49941 A3 B4 0.888889 0.136083 0.611697 1.16608 A4 B1 3.44444 0.136083 3.16725 3.72164 A4 B2 3.66667 0.136083 3.38947 3.94386 A4 B3 1.88889 0.136083 1.6117 2.16608 A4 B4 1.55556 0.136083 1.27836 1.83275 Multiple Range Tests for so re by YEU TO A -Method: 95.0 percent LSD YEU TO A Count LS Mean Homogeneous Groups -A3 12 1.25 X A1 12 1.44444 XX A2 12 1.52778 X BM20-QT.QLKH A4 12 2.63889 X Multiple Range Tests for so re by YEU TO B -Method: 95.0 percent LSD YEU TO B Count LS Mean Homogeneous Groups -B4 12 1.22222 X B3 12 1.5 X B2 12 2.05556 X B1 12 2.08333 X Multiple Range Tests for so re by NT -Method: 95.0 percent Duncan NT Count Mean Homogeneous Groups -A3B4 0.888889 X A2B4 1.11111 XX A1B3 1.22222 XXX A3B3 1.22222 XXX A3B2 1.33333 XXX A1B4 1.33333 XXX A1B2 1.44444 XXXX A2B1 1.55556 XXXX A3B1 1.55556 XXXX A4B4 1.55556 XXXX A2B3 1.66667 XXX A2B2 1.77778 XX A1B1 1.77778 XX A4B3 1.88889 X A4B1 3.44444 X A4B2 3.66667 X -Contrast Difference Analysis of Variance for tlmtr - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio -MAIN EFFECTS A:yt A 100.0 B:yt B 33.3333 INTERACTIONS BM20-QT.QLKH 3 33.3333 11.1111 2.00 0.1338 0.67 0.5787 P-Value AB 100.0 RESIDUAL 11.1111 533.333 32 0.67 0.7322 16.6667 -TOTAL (CORRECTED) BM20-QT.QLKH 766.667 47 Phụ lục 3: Kết phân tích mẫu BM20-QT.QLKH