Chọn lọc nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống in vitro 5 loài lan có giá trị bảo tồn và triển vọng thương mại trong số 45 loài tiếp nhận từ ucraina

ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ     VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VN VIỆN SINH HỌC NHIỆT ĐỚI      BÁO CÁO NGHIỆM THU CHỌN LỌC, NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUI TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO LỒI LAN CĨ GIÁ TRỊ BẢO TỒN VÀ TRIỂN VỌNG THƯƠNG MẠI TRONG SỐ 45 LOÀI TIẾP NHẬN TỪ UCRAINA CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI: MAI TRƯỜNG HOÀNG NGHĨA SƠN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 06/ 2017 ỦY BAN NHÂN DÂN TP.HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BÁO CÁO NGHIỆM THU (Đã chỉnh sửa theo góp ý Hội đồng nghiệm thu) CHỌN LỌC, NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUI TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO LỒI LAN CĨ GIÁ TRỊ BẢO TỒN VÀ TRIỂN VỌNG THƯƠNG MẠI TRONG SỐ 45 LOÀI TIẾP NHẬN TỪ UCRAINA CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI (Ký tên) MAI TRƯỜNG HOÀNG NGHĨA SƠN CƠ QUAN QUẢN LÝ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) CƠ QUAN CHỦ TRÌ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 06/ 2017 TÓM TẮT NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Đề tài “Chọn lọc, nghiên cứu xây dựng qui trình nhân giống in vitro lồi lan có giá trị bảo tồn triển vọng thƣơng mại số 45 loài tiếp nhận từ Ucraina” đƣợc tiến hành từ tháng 11 năm 2014 đến tháng 05 năm 2017 Phòng Thí nghiệm Trọng điềm phía Nam Cơng nghệ Tế bào Thực vật, Viện Sinh học Nhiệt đới nhằm Bảo tồn ngoại vi phát triển loài lan quý Việt Nam nhằm góp phần tái tạo nguồn gen lan rừng Việt Nam tự nhiên triển vọng thƣơng mại hoá Giai đoạn 1, đề tài thực xây dựng qui trình nhân giống in vitro hồn chỉnh lồi lan rừng có giá trị bảo tồn theo Nghị định 32/2006/NĐ-CP Sách đỏ Việt Nam, 2007 Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl.; Dendrobium nobile Lindl.; Dendrobium daoense Gagnep.; Dendrobium aphyllum (Roxb.) C Fischer Dendrobium moschatum (Buch.-Ham.) Sw Mẫu đoạn thân, kích thƣớc 1,5-2cm, loài lan đƣợc khử trùng tạo nguồn mẫu in vitro phƣơng pháp khử trùng với clorua thuỷ ngân nồng độ 0,1% phút Mẫu đƣợc nuôi mơi trƣờng MS khơng chất điều hồ sinh trƣờng 60 ngày tỉ lệ mẫu tạo chồi A roxburghii đạt 66%; D nobile 80%; D daoense 66%; D aphyllum 60% D moschatum 73,33% Ở giai đoạn nhân nhanh chồi thời gian 90 ngày, mẫu cấy loài lan cho thấy khả tạo chồi cao mơi trƣờng MS có bổ sung BAP, BAP/NAA TDZ Mẫu cấy A roxburghii đạt tỉ lệ tạo chồi cao 94,44% với số chồi trung bình 4,13/mẫu môi trƣờng MS bổ sung 1,5 mg/L BAP; 0,2 mg/L NAA Mẫu cấy D nobile đạt tỉ lệ 56,56%, số chồi trung bình 1,22/mẫu mơi trƣờng MS có 2,5 mg/L BAP D aphyllum đạt 88,89%, số chồi trung bình 2,23 chồi/mẫu MS bổ sung 0,6 mg/L TDZ D daoense đạt 77,78% với 1,44 chồi/mẫu MS bổ sung 1,2 mg/L TDZ D moschatum đạt 61,11% với 1,50 chồi/mẫu MS bổ sung 1,0 mg/L TDZ (p≤0,01) i Ở giai đoạn phát triển chiều cao chồi in vitro 60 ngày, chồi A roxburghii D daoense tăng trƣởng tốt mơi trƣờng khống MS½ chồi D.nobile, D moschatum, D.aphyllum môi trƣờng MS (P≤0,01) Ở giai đoạn tạo rễ in vitro thời gian 60 ngày, mẫu cấy A roxburghii, D daoense tạo rễ tốt mơi trƣờng MS½ bổ sung 0,5 mg/L NAA D nobile, D moschatum môi trƣờng MS bổ sung 0,5 mg/L NAA D Aphyllum môi trƣờng MS bổ sung 0,7 mg/L NAA (P≤0,01) Giai đoạn 2, qua khảo sát ảnh hƣởng loại giá thể nhƣ dớn sợi, dớn mềm, bột dừa xơ dừa miếng lên sinh trƣởng lan 180 ngày sau trồng điều kiện nhà ƣơm, đề tài xác định đƣợc giá thể dớn mềm (rêu Spaghnum) tốt sinh trƣởng, phát triển loài lan (Anoectochilus roxburghii, D nobile, D aphyllum, D daoense D moschatum) Tỉ lệ sống loài A roxburghii đạt 71,66% với chiều cao TB 6,12cm 2,35 phát triển mới/cây; loài D nobile đạt 75,00 % chiều cao TB 3,96cm với số 0,64 lá/cây; loài D aphyllum đạt 92,50% chiều cao TB 5,04cm với 2,19 mới/cây; loài D daoense đạt 75,00% chiều cao TB 5,24cm với 1,96 mới/cây loài D moschatum đạt 91,67% chiều cao TB 5,76cm với 2,11 mới/cây Từ kết trên, nhóm nghiên cứu chuyển giao sản phẩm từ đề tài với 1.050 lan tháng tuổi giai đoạn nhà ƣơm lồi lan nói cho Vƣờn Quốc gia Bidoup-Núi bà, Lâm đồng tổ chức thực khoá tập huấn “Kỹ thuật vi nhân giống lan rừng Việt Nam Kỹ thuật hậu cấy mơ” từ ngày 14/1112/12/2016 Phịng Thí nghiệm Trọng điểm Quốc gia CNTB Thực vật, Viện Sinh học Nhiệt đới cho nghiên cứu viên thuộc Vƣờn Quốc gia Qua tham gia tập huấn, nghiên cứu viên có khả nghiên cứu độc lập vi nhân giống lan rừng, vận hành quản lý phịng thí nghiệm nhƣ vƣờn ƣơm có điều kiện Vƣờn Quốc gia ii MỤC LỤC Trang Tóm tắt đề tài i Mục lục iii Danh sách chữ viết tắt ix Danh sách bảng x Danh sách hình xii PHẦN MỞ ĐẦU Tên đề tài/dự án Chủ nhiệm đề tài/dự án Cơ quan chủ trì Thời gian thực Kinh phí duyệt Kinh phí cấp Mục tiêu Nội dung Sản phẩm đề tài/dự án 1 CHƯƠNG I: TỒNG QUAN 1.1 Các nghiên cứu nƣớc lan rừng Việt Nam 1.1.1 Hƣớng phân loại thực vật 1.1.2 Hƣớng nuôi cấy mô, tế bào 1.2 Các nghiên cứu nƣớc lan rừng Việt Nam 1.2.1 Hƣớng phân loại thực vật 1.2.2 Hƣớng ni cấy mơ, tế bào 11 1.3 Tính cấp thiết 12 CHƯƠNG II: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP 25 2.1 Nội dung 1: Xây dựng qui trình nhân giống in vitro hoàn 2.1.1 chỉnh lồi lan rừng chọn lọc 25 Thí nghiệm 1: Ảnh hƣởng thời gian khử trùng 26 iii clorua thủy ngân lên khả sống tạo chồi mẫu đoạn thân mang chồi ngủ 2.1.2 Thí nghiệm 2: Nghiên cứu ảnh hƣởng chất điều hoà 27 sinh trƣởng BAP BAP/NAA lên khả nhân chồi lồi Anoectochilus roxburghii điều kiện ni cấy tĩnh 2.1.3 Thí nghiệm 3: Nghiên cứu ảnh hƣởng chất điều hoà 27 sinh trƣởng BAP BAP/NAA lên khả nhân chồi lồi Dendrobium nobile 2.1.4 Thí nghiệm 4: Nghiên cứu ảnh hƣởng chất điều hoà 28 sinh trƣởng TDZ lên khả nhân chồi loài Dendrobium daoense 2.1.5 Thí nghiệm 5: Nghiên cứu ảnh hƣởng chất điều hoà 29 sinh trƣởng TDZ lên khả nhân chồi lồi Dendrobium aphyllum 2.1.6 Thí nghiệm 6: Nghiên cứu ảnh hƣởng chất điều hoà 29 sinh trƣởng TDZ lên khả nhân chồi loài Dendrobium moschatum 2.1.7 Thí nghiệm 7: Nghiên cứu ảnh hƣởng mơi trƣờng 30 khoáng lên khả phát triển chiều cao chồi lồi lan chọn lọc 2.1.8 Thí nghiệm 8: Nghiên cứu ảnh hƣởng NAA lên khả 30 tạo rễ in vitro loài lan chọn lọc 2.2 Nội dung 2: Phƣơng pháp xác định giá thể trồng lên khả 31 sinh trƣởng lan nhà ƣơm nilon Tp HCM 2.2.1 Lan Anoectochilus roxburghii 32 2.2.2 Lan Dendrobium nobile 33 2.2.3 Lan Dendrobium aphyllum 33 iv 2.2.4 Lan Dendrobium daoense 34 2.2.5 Lan Dendrobium moschatum 34 2.3 Chuyển giao sản phẩm tập huấn kỹ thuật vi nhân giống 34 lan rừng Việt Nam kỹ thuật hậu cấy mô cho cán thuộc Vƣờn Quốc gia Bidoup-Núi Bà 2.4 Xử lý thống kê 34 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 3.1 Nội dung 1: Xây dựng qui trình nhân giống in vitro hồn 35 chỉnh lồi lan rừng chọn lọc 3.1.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hƣởng thời gian khử trùng 35 clorua thủy ngân lên khả sống tạo chồi mẫu đoạn thân mang chồi ngủ 3.1.2 Thí nghiệm 2: Nghiên cứu ảnh hƣởng BAP 37 BAP/NAA lên khả nhân chồi lồi Anoectochilus roxburghii 3.1.2.1 Thí nghiệm 2a: Ảnh hƣởng BAP lên khả nhân 37 chồi A roxburghii 3.1 2.2 Thí nghiệm 2b: Ảnh hƣởng BAP/NAA lên khả 39 nhân chồi A roxburghii 3.1.3 Thí nghiệm 3: Nghiên cứu ảnh hƣởng BAP 41 BAP/NAA lên khả nhân chồi lồi Dendrobium nobile 3.1.3.1 Thí nghiệm 3a: Ảnh hƣởng BAP lên khả nhân 41 chồi Dendrobium nobile 3.1.3.2 Thí nghiệm 3b: Ảnh hƣởng BAP/NAA lên khả 43 nhân chồi Dendrobium nobile 3.1.4 Thí nghiệm 4: Nghiên cứu ảnh hƣởng TDZ lên khả nhân chồi lồi Dendrobium daoense v 45 3.1.5 Thí nghiệm 5: Nghiên cứu ảnh hƣởng TDZ lên khả 47 nhân chồi lồi Dendrobium aphyllum 3.1.6 Thí nghiệm 6: Nghiên cứu ảnh hƣởng TDZ lên khả 50 nhân chồi lồi Dendrobium moschatum 3.1.7 Thí nghiệm 7: Nghiên cứu ảnh hƣởng mơi trƣờng 52 khống lên khả tăng trƣởng chiều cao chồi loài lan chọn lọc 3.1.7.1 Thí nghiệm 7a: Nghiên cứu ảnh hƣởng mơi trƣờng 52 khống MS, MS½, KD VW lên khả tăng trƣởng chiều cao chồi Anoectochillus roxburghii 3.1.7.2 Thí nghiệm 7b: Nghiên cứu ảnh hƣởng mơi trƣờng 54 khống MS, MS½, KD VW lên khả tăng trƣởng chiều cao chồi D nobile 3.1.7.3 Thí nghiệm 7c: Nghiên cứu ảnh hƣởng mơi trƣờng 55 khống MS, MS½, KD VW lên khả tăng trƣởng chiều cao chồi D moschatum 3.1.7.4 Thí nghiệm 7d: Nghiên cứu ảnh hƣởng mơi trƣờng 57 khống MS, MS½, KD VW lên khả tăng trƣởng chiều cao chồi D aphyllum 3.1.7.5 Thí nghiệm 7e: Nghiên cứu ảnh hƣởng mơi trƣờng 58 khống MS, MS½, KD VW lên khả phát triển chiều cao chồi D daoense 3.1.8 Thí nghiệm 8: Nghiên cứu ảnh hƣởng NAA lên khả 60 tạo rễ in vitro lồi lan chọn lọc 3.1.8.1 Thí nghiệm 8a: Nghiên cứu ảnh hƣởng NAA lên khả 60 tạo rễ in vitro lồi A roxburghii 3.1.8.2 Thí nghiệm 8b: Nghiên cứu ảnh hƣởng NAA lên khả 62 tạo rễ in vitro loài D nobile 3.1.8.3 Thí nghiệm 8c: Nghiên cứu ảnh hƣởng NAA lên khả vi 64 tạo rễ in vitro loài D moschatum Thí nghiệm 8d: Nghiên cứu ảnh hƣởng NAA lên khả 66 tạo rễ in vitro lồi D aphyllum 3.1.8.4 Thí nghiệm 8e: Nghiên cứu ảnh hƣởng NAA lên khả 68 tạo rễ in vitro loài D daoense 3.2 Nội dung 2: Phƣơng pháp xác định giá thể trồng lên khả sinh trƣởng lan nhà ƣơm nilon Tp 3.2.1 HCM 70 Thí nghiệm 9: Xác định giá thể trồng lên khả sinh 71 trƣởng lan Anoectochilus roxburghii 3.2.2 Thí nghiệm 10: Xác định giá thể trồng lên khả sinh 75 trƣởng lan Dendrobium nobile 3.2.3 Thí nghiệm 11: Xác định giá thể trồng lên khả sinh 78 trƣởng lan Dendrobium aphyllum 3.2.4 Thí nghiệm 12: Xác định giá thể trồng lên khả sinh trƣởng lan Dendrobium daoense 3.2.5 Thí nghiệm 13: Xác định giá thể trồng lên khả sinh trƣởng lan Dendrobium moschatum 3.2.6 81 84 Qui trình trồng chăm sóc lan Anoectochilus roxburghii; Dendrobium nobile; Dendrobium daoense; Dendrobium aphyllum Dendrobium moschatum điều kiện nhà ƣơm nilon 3.3 87 Nội dung 3: Chuyển giao sản phẩm tập huấn kỹ thuật vi nhân giống lan rừng Việt Nam kỹ thuật hậu cấy mô cho cán thuộc Vƣờn Quốc gia Bidoup-Núi Bà 3.3.1 88 Tập huấn kỹ thuật vi nhân giống lan rừng Việt Nam kỹ thuật hậu cấy mô cho cán thuộc Vƣờn Quốc gia 3.3.2 Bidoup-Núi Bà 89 Chuyển giao sản phẩm 92 vii CHƯƠNG IV KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 93 4.1 KẾT LUẬN 93 4.2 ĐỀ NGHỊ 94 PHỤ LỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO 95 PHỤ LỤC QUI TRÌNH NHÂN GIỐNG HỒN CHỈNH 100 IN VITRO LỒI LAN PHỤ LỤC QUI TRÌNH TRỒNG VÀ CHĂM SĨC LỒI LAN TRONG ĐIỀU KIỆN NHÀ ƢƠM NILON 115 PHỤ LỤC MÔI TRƢỜNG NUÔI CẤY 130 viii từ 30.000-50.000 lux, thơng thống gió quạt hút với lưu lượng gió từ 20.000-40.000 m3/h Sơ đồ qui trình Huấn luyện thích nghi lan chai nhà ƣơm Các chai nuôi cấy chứa (có rễ phát triển) lồi lan A roxburghii tập thích nghi điều kiện nhà ươm nilon 15 ngày Giai đoạn xử lý hậu cấy mô trồng chậu + Lấy khỏi chai, rửa agar, ngâm dung dịch Physan 20 0,5ml/l có bổ sung ml/l Liquinox Start Vitamin B1 10 phút đặt vào rỗ để qua đêm điều kiện nhà ươm nilon + Bó lan dớn mềm cho giá thể phải giử chặt gốc lan trồng vào chậu có kích thước 6x8cm (đã chèn mút xốp đáy chậu) Giai đoạn chăm sóc tháng tuổi nhà ƣơm nilon + Trong 30 ngày sau trồng: phun chế phẩm B1 ml/l, tuần/lần, từ ngày thứ 31: bón phân Growmore 20-20-20 0,5g/l + B1 định kỳ tuần/lần + Phun Physan 20 0,5ml/l định kỳ tuần/lần thuốc trừ sâu sinh học Emamectin Benzoate tháng/1 lần Tưới phun sương ướt bề mặt giá thể vào buổi sáng - 117 - QUI TRÌNH 2: TRỒNG VÀ CHĂM SÓC LAN DENDROBIUM NOBILE TRONG ĐIỀU KIỆN NHÀ ƢƠM NILON Nguyên vật liệu - Cây có rễ phát triển chai nước biển 500mL loài lan Dendrobium nobile - Dớn mềm (rêu Sphagnum) - Chế phẩm kích thích rễ Liquinox Start Vitamin B1 (Thái Lan) - Thuốc trừ nấm, khuẩn Physan 20 dạng lỏng (Mỹ) - Phân vô Growmore 20-20-20 dạng hạt (nhập từ Mỹ) - Thuốc trừ sâu sinh học Emamectin Benzoate (Cơng ty CP thuốc BVTV Sài gịn) Dụng cụ - Thiết bị - Que cấy inox - Kềm cắt lan - Chậu nhựa 6x8cm - Thau nhựa - Rỗ nhựa - Mút xốp - Vòi tưới phun sương - Bình xịt phân 10L (nhựa Bình Minh) - Bình xịt thuốc trừ sâu inox 18L Phƣơng pháp nuôi trồng chăm sóc 3.1 Huấn luyện thích nghi lan chai nhà ƣơm Các chai nuôi cấy chứa loài lan Dendrobium nobile đưa khỏi phòng sáng đặt nhà ươm nilon 15 ngày để lan chai thích nghi dần với điều kiện 3.2 - Xử lý lan trồng chậu Xử lý lan con: lấy khỏi chai que cấy, rửa agar nước máy ngâm dung dịch Physan 20 nồng độ 0,5ml/l có bổ sung - 118 - ml/l chế phẩm kích thích rễ dạng lỏng Liquinox Start Vitamin B1 10 phút Lấy lan đặt vào rỗ để qua đêm điều kiện nhà ươm nilon - Chuẩn bị chậu giá thể: cho mút xốp vào 1/3 tính từ đáy chậu 6x8cm, giá thể dớn mềm ngâm nước máy vắt xả lần - Cách trồng: tiến hành bó lan dớn mềm cho giá thể phải giử chặt gốc lan trồng vào chậu có kích thước 6x8cm (đã chèn mút xốp đáy chậu) 3.3 Chăm sóc tới giai đoạn tháng tuổi - Trong 30 ngày sau trồng chậu: phun chế phẩm Liquinox Start Vitamin B1 (dạng lỏng, nhập từ Thái Lan) với nồng độ ml/l, tuần/lần - Từ ngày thứ 31: bón phân Growmore 20-20-20 (dạng hạt, nhập từ Mỹ) pha nước máy với nồng độ 0,5g/l có bổ sung chế phẩm B1 định kỳ tuần/lần - Chế độ bảo vệ thực vật: phun thuốc trừ nấm khuẩn Physan 20 0,5ml/l định kỳ tuần/lần thuốc trừ sâu sinh học Emamectin Benzoate tháng/1 lần - Chế độ tưới nước: tưới phun sương ướt bề mặt giá thể buổi sáng tưới bổ sung bề mặt giá thể bị khô - Đặc điểm sinh trưởng: thích nghi tốt giá thể tỉ lệ sống đạt 75,00%, sinh trưởng chậm với chiều cao từ 4-5cm Giả hành mẹ bắt đầu rụng từ gốc từ 90-180 ngày sau trồng, đẻ chồi chồi phát triển mạnh Điều kiện ni trồng Nhà ươm nilon có hệ thống làm mát nước phục vụ cho ni trồng lồi lan có nhiệt độ dao động từ 25-300C, ẩm độ từ 80-85%, độ che sáng 50% lưới nilon, cường độ ánh sáng tự nhiên ngày dao động từ 30.000-50.000 lux, thơng thống gió quạt hút với lưu lượng gió từ 20.000-40.000 m3/h - 119 - Sơ đồ qui trình Huấn luyện thích nghi lan chai nhà ƣơm Các chai nuôi cấy chứa (có rễ phát triển) lồi lan D nobile tập thích nghi điều kiện nhà ươm nilon 15 ngày Giai đoạn xử lý hậu cấy mô trồng chậu + Lấy khỏi chai, rửa agar, ngâm dung dịch Physan 20 0,5ml/l có bổ sung ml/l Liquinox Start Vitamin B1 10 phút đặt vào rỗ để qua đêm điều kiện nhà ươm nilon + Bó lan dớn mềm cho giá thể phải giử chặt gốc lan trồng vào chậu có kích thước 6x8cm (đã chèn mút xốp đáy chậu) Giai đoạn chăm sóc tháng tuổi nhà ƣơm nilon + Trong 30 ngày sau trồng: phun chế phẩm B1 ml/l, tuần/lần, từ ngày thứ 31: bón phân Growmore 20-20-20 0,5g/l + B1 định kỳ tuần/lần + Phun Physan 20 0,5ml/l định kỳ tuần/lần thuốc trừ sâu sinh học Emamectin Benzoate tháng/1 lần Tưới phun sương ướt bề mặt giá thể vào buổi sáng - 120 - QUI TRÌNH 3: TRỒNG VÀ CHĂM SÓC LAN DENDROBIUM APHYLLUM TRONG ĐIỀU KIỆN NHÀ ƢƠM NILON Nguyên vật liệu - Cây có rễ phát triển chai nước biển 500mL loài lan Dendrobium aphyllum - Dớn mềm (rêu Sphagnum) - Chế phẩm kích thích rễ Liquinox Start Vitamin B1 (Thái Lan) - Thuốc trừ nấm, khuẩn Physan 20 dạng lỏng (Mỹ) - Phân vô Growmore 20-20-20 dạng hạt (nhập từ Mỹ) - Thuốc trừ sâu sinh học Emamectin Benzoate (Cơng ty CP thuốc BVTV Sài gịn) Dụng cụ - Thiết bị - Que cấy inox - Kềm cắt lan - Chậu nhựa 6x8cm - Thau nhựa - Rỗ nhựa - Mút xốp - Vòi tưới phun sương - Bình xịt phân 10L (nhựa Bình Minh) - Bình xịt thuốc trừ sâu inox 18L Phƣơng pháp ni trồng chăm sóc 3.1 Huấn luyện thích nghi lan chai nhà ƣơm Các chai ni cấy chứa lồi lan Dendrobium aphyllum đưa khỏi phòng sáng đặt nhà ươm nilon 15 ngày để lan chai thích nghi dần với điều kiện 3.2 - Xử lý lan trồng chậu Xử lý lan con: lấy khỏi chai que cấy, rửa agar nước máy ngâm dung dịch Physan 20 nồng độ 0,5ml/l có bổ sung - 121 - ml/l chế phẩm kích thích rễ dạng lỏng Liquinox Start Vitamin B1 10 phút Lấy lan đặt vào rỗ để qua đêm điều kiện nhà ươm nilon - Chuẩn bị chậu giá thể: cho mút xốp vào 1/3 tính từ đáy chậu 6x8cm, giá thể dớn mềm ngâm nước máy vắt xả lần - Cách trồng: tiến hành bó lan dớn mềm cho giá thể phải giử chặt gốc lan trồng vào chậu có kích thước 6x8cm (đã chèn mút xốp đáy chậu) 3.3 Chăm sóc tới giai đoạn tháng tuổi - Trong 30 ngày sau trồng chậu: phun chế phẩm Liquinox Start Vitamin B1 (dạng lỏng, nhập từ Thái Lan) với nồng độ ml/l, tuần/lần - Từ ngày thứ 31: bón phân Growmore 20-20-20 (dạng hạt, nhập từ Mỹ) pha nước máy với nồng độ 0,5g/l có bổ sung chế phẩm B1 định kỳ tuần/lần - Chế độ bảo vệ thực vật: phun thuốc trừ nấm khuẩn Physan 20 0,5ml/l định kỳ tuần/lần thuốc trừ sâu sinh học Emamectin Benzoate tháng/1 lần - Chế độ tưới nước: tưới phun sương ướt bề mặt giá thể buổi sáng tưới bổ sung bề mặt giá thể bị khơ - Đặc điểm sinh trưởng: thích nghi tốt với tỉ lệ sống đạt 92,50%, sinh trưởng mạnh từ thời điểm 90-180 ngày, đạt chiều cao từ 4,5-6,5cm phát triển 2-3 Cây khơng rụng lá, số có khả đẻ chồi Điều kiện ni trồng Nhà ươm nilon có hệ thống làm mát nước phục vụ cho ni trồng lồi lan có nhiệt độ dao động từ 25-300C, ẩm độ từ 80-85%, độ che sáng 50% lưới nilon, cường độ ánh sáng tự nhiên ngày dao động từ 30.000-50.000 lux, thơng thống gió quạt hút với lưu lượng gió từ 20.000-40.000 m3/h - 122 - Sơ đồ qui trình Huấn luyện thích nghi lan chai nhà ƣơm Các chai ni cấy chứa (có rễ phát triển) lồi lan D aphyllum tập thích nghi điều kiện nhà ươm nilon 15 ngày Giai đoạn xử lý hậu cấy mô trồng chậu + Lấy khỏi chai, rửa agar, ngâm dung dịch Physan 20 0,5ml/l có bổ sung ml/l Liquinox Start Vitamin B1 10 phút đặt vào rỗ để qua đêm điều kiện nhà ươm nilon + Bó lan dớn mềm cho giá thể phải giử chặt gốc lan trồng vào chậu có kích thước 6x8cm (đã chèn mút xốp đáy chậu) Giai đoạn chăm sóc tháng tuổi nhà ƣơm nilon + Trong 30 ngày sau trồng: phun chế phẩm B1 ml/l, tuần/lần, từ ngày thứ 31: bón phân Growmore 20-20-20 0,5g/l + B1 định kỳ tuần/lần + Phun Physan 20 0,5ml/l định kỳ tuần/lần thuốc trừ sâu sinh học Emamectin Benzoate tháng/1 lần Tưới phun sương ướt bề mặt giá thể vào buổi sáng - 123 - QUI TRÌNH 4: TRỒNG VÀ CHĂM SĨC LAN DENDROBIUM DAOENSE TRONG ĐIỀU KIỆN NHÀ ƢƠM NILON Nguyên vật liệu - Cây có rễ phát triển chai nước biển 500mL loài lan Dendrobium daoense - Dớn mềm (rêu Sphagnum) - Chế phẩm kích thích rễ Liquinox Start Vitamin B1 (Thái Lan) - Thuốc trừ nấm, khuẩn Physan 20 dạng lỏng (Mỹ) - Phân vô Growmore 20-20-20 dạng hạt (nhập từ Mỹ) - Thuốc trừ sâu sinh học Emamectin Benzoate (Công ty CP thuốc BVTV Sài gòn) Dụng cụ - Thiết bị - Que cấy inox - Kềm cắt lan - Chậu nhựa 6x8cm - Thau nhựa - Rỗ nhựa - Mút xốp - Vịi tưới phun sương - Bình xịt phân 10L (nhựa Bình Minh) - Bình xịt thuốc trừ sâu inox 18L Phƣơng pháp ni trồng chăm sóc 3.1 Huấn luyện thích nghi lan chai nhà ƣơm Các chai ni cấy chứa lồi lan Dendrobium daoense đưa khỏi phòng sáng đặt nhà ươm nilon 15 ngày để lan chai thích nghi dần với điều kiện 3.2 - Xử lý lan trồng chậu Xử lý lan con: lấy khỏi chai que cấy, rửa agar nước máy ngâm dung dịch Physan 20 nồng độ 0,5ml/l có bổ sung - 124 - ml/l chế phẩm kích thích rễ dạng lỏng Liquinox Start Vitamin B1 10 phút Lấy lan đặt vào rỗ để qua đêm điều kiện nhà ươm nilon - Chuẩn bị chậu giá thể: cho mút xốp vào 1/3 tính từ đáy chậu (6x8cm), giá thể dớn mềm ngâm nước máy vắt xả lần - Cách trồng: tiến hành bó lan dớn mềm cho giá thể phải giử chặt gốc lan trồng vào chậu có kích thước 6x8cm (đã chèn mút xốp đáy chậu) 3.3 Chăm sóc tới giai đoạn tháng tuổi - Trong 30 ngày sau trồng chậu: phun chế phẩm Liquinox Start Vitamin B1 (dạng lỏng, nhập từ Thái Lan) với nồng độ ml/l, tuần/lần - Từ ngày thứ 31: bón phân Growmore 20-20-20 (dạng hạt, nhập từ Mỹ) pha nước máy với nồng độ 0,5g/l có bổ sung chế phẩm B1 định kỳ tuần/lần - Chế độ bảo vệ thực vật: phun thuốc trừ nấm khuẩn Physan 20 0,5ml/l định kỳ tuần/lần thuốc trừ sâu sinh học Emamectin Benzoate tháng/1 lần - Chế độ tưới nước: tưới phun sương ướt bề mặt giá thể buổi sáng tưới bổ sung bề mặt giá thể bị khô - Đặc điểm sinh trưởng: thích nghi tốt với tỉ lệ sống đạt 75,00%, Cây sinh trưởng mạnh từ 90-180 ngày sau trồng, thân to, chiều cao từ 4,5-6cm phát triển 1-3 Cây đẻ chồi rụng gốc Điều kiện nuôi trồng Nhà ươm nilon có hệ thống làm mát nước phục vụ cho ni trồng lồi lan có nhiệt độ dao động từ 25-300C, ẩm độ từ 80-85%, độ che sáng 50% lưới nilon, cường độ ánh sáng tự nhiên ngày dao động từ 30.000-50.000 lux, thơng thống gió quạt hút với lưu lượng gió từ 20.000-40.000 m3/h - 125 - Sơ đồ qui trình Huấn luyện thích nghi lan chai nhà ƣơm Các chai ni cấy chứa (có rễ phát triển) lồi lan D daoense tập thích nghi điều kiện nhà ươm nilon 15 ngày Giai đoạn xử lý hậu cấy mô trồng chậu + Lấy khỏi chai, rửa agar, ngâm dung dịch Physan 20 0,5ml/l có bổ sung ml/l Liquinox Start Vitamin B1 10 phút đặt vào rỗ để qua đêm điều kiện nhà ươm nilon + Bó lan dớn mềm cho giá thể phải giử chặt gốc lan trồng vào chậu có kích thước 6x8cm (đã chèn mút xốp đáy chậu) Giai đoạn chăm sóc tháng tuổi nhà ƣơm nilon + Trong 30 ngày sau trồng: phun chế phẩm B1 ml/l, tuần/lần, từ ngày thứ 31: bón phân Growmore 20-20-20 0,5g/l + B1 định kỳ tuần/lần + Phun Physan 20 0,5ml/l định kỳ tuần/lần thuốc trừ sâu sinh học Emamectin Benzoate tháng/1 lần Tưới phun sương ướt bề mặt giá thể vào buổi sáng - 126 - QUI TRÌNH 5: TRỒNG VÀ CHĂM SĨC LAN DENDROBIUM MOSCHATUM TRONG ĐIỀU KIỆN NHÀ ƢƠM NILON Nguyên vật liệu - Cây có rễ phát triển chai nước biển 500mL loài lan Dendrobium moschatum - Dớn mềm (rêu Sphagnum) - Chế phẩm kích thích rễ Liquinox Start Vitamin B1 (Thái Lan) - Thuốc trừ nấm, khuẩn Physan 20 dạng lỏng (Mỹ) - Phân vô Growmore 20-20-20 dạng hạt (nhập từ Mỹ) - Thuốc trừ sâu sinh học Emamectin Benzoate (Công ty CP thuốc BVTV Sài gòn) Dụng cụ - Thiết bị - Que cấy inox - Kềm cắt lan - Chậu nhựa 6x8cm - Thau nhựa - Rỗ nhựa - Mút xốp - Vịi tưới phun sương - Bình xịt phân 10L (nhựa Bình Minh) - Bình xịt thuốc trừ sâu inox 18L Phƣơng pháp ni trồng chăm sóc 3.1 Huấn luyện thích nghi lan chai nhà ƣơm Các chai nuôi cấy chứa lồi lan Dendrobium moschatum đưa khỏi phịng sáng đặt nhà ươm nilon 15 ngày để lan chai thích nghi dần với điều kiện 3.2 - Xử lý lan trồng chậu Xử lý lan con: lấy khỏi chai que cấy, rửa agar nước máy ngâm dung dịch Physan 20 nồng độ 0,5ml/l có bổ sung - 127 - ml/l chế phẩm kích thích rễ dạng lỏng Liquinox Start Vitamin B1 10 phút Lấy lan đặt vào rỗ để qua đêm điều kiện nhà ươm nilon - Chuẩn bị chậu giá thể: cho mút xốp vào 1/3 tính từ đáy chậu (6x8cm), giá thể dớn mềm ngâm nước máy vắt xả lần - Cách trồng: tiến hành bó lan dớn mềm cho giá thể phải giử chặt gốc lan trồng vào chậu có kích thước 6x8cm (đã chèn mút xốp đáy chậu) 3.3 Chăm sóc tới giai đoạn tháng tuổi - Trong 30 ngày sau trồng chậu: phun chế phẩm Liquinox Start Vitamin B1 (dạng lỏng, nhập từ Thái Lan) với nồng độ ml/l, tuần/lần - Từ ngày thứ 31: bón phân Growmore 20-20-20 (dạng hạt, nhập từ Mỹ) pha nước máy với nồng độ 0,5g/l có bổ sung chế phẩm B1 định kỳ tuần/lần - Chế độ bảo vệ thực vật: phun thuốc trừ nấm khuẩn Physan 20 0,5ml/l định kỳ tuần/lần thuốc trừ sâu sinh học Emamectin Benzoate tháng/1 lần - Chế độ tưới nước: tưới phun sương ướt bề mặt giá thể buổi sáng tưới bổ sung bề mặt giá thể bị khô - Đặc điểm sinh trưởng: thích nghi tốt với giá thể, tỉ lệ sống đạt 91,67% Cây sinh trưởng mạnh từ 90-180 ngày sau trồng, thân cứng, chiều cao từ 4-6,5cm phát triển 2-3 Cây không bị rụng Điều kiện nuôi trồng Nhà ươm nilon có hệ thống làm mát nước phục vụ cho ni trồng lồi lan có nhiệt độ dao động từ 25-300C, ẩm độ từ 80-85%, độ che sáng 50% lưới nilon, cường độ ánh sáng tự nhiên ngày dao động từ 30.000-50.000 lux, thông thống gió quạt hút với lưu lượng gió từ 20.000-40.000 m3/h - 128 - Sơ đồ qui trình Huấn luyện thích nghi lan chai nhà ƣơm Các chai ni cấy chứa (có rễ phát triển) loài lan D moschatum tập thích nghi điều kiện nhà ươm nilon 15 ngày Giai đoạn xử lý hậu cấy mô trồng chậu + Lấy khỏi chai, rửa agar, ngâm dung dịch Physan 20 0,5ml/l có bổ sung ml/l Liquinox Start Vitamin B1 10 phút đặt vào rỗ để qua đêm điều kiện nhà ươm nilon + Bó lan dớn mềm cho giá thể phải giử chặt gốc lan trồng vào chậu có kích thước 6x8cm (đã chèn mút xốp đáy chậu) Giai đoạn chăm sóc tháng tuổi nhà ƣơm nilon + Trong 30 ngày sau trồng: phun chế phẩm B1 ml/l, tuần/lần, từ ngày thứ 31: bón phân Growmore 20-20-20 0,5g/l + B1 định kỳ tuần/lần + Phun Physan 20 0,5ml/l định kỳ tuần/lần thuốc trừ sâu sinh học Emamectin Benzoate tháng/1 lần Tưới phun sương ướt bề mặt giá thể vào buổi sáng - 129 - PHỤC LỤC MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY MƠ Thành phần mơi trường khống Murashige Skoog (1962) Khoáng đa lượng mg/l NH4NO3 KNO3 CaCl2 MgSO4 KH2PO4 1650 1900 332,02 180,54 170 Khoáng vi lượng mg/l KI H3BO3 MnSO4.H2O ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O FeNaEDTA 0,83 6,2 16,90 8,6 0,25 0,025 0,025 36,70 Vitamin chất hữu khác myo-Inositol 100 Nicotinic acid 0,5 Pyridoxine HCl 0,5 Thiamine HCl 0,1 Glycine 2,0 Thành phần môi trường khoáng Vacin & Went (1949) Khoáng đa lượng mg/l (NH4)2SO4 KNO3 Ca3(PO4)2 MgSO4 KH2PO4 Khoáng vi lượng 500 525 200 122 250 mg/l Fe2(C4H4O6)3 MnSO4.H2O 23,13 5,68 - 130 - Thành phần mơi trường khống Knudson C cải tiến (Morel G.M., 1965) Khoáng đa lượng mg/l Ca(NO3)2 (NH4)2SO4 KCl MgSO4 KH2PO4 NH4NO3 241,30 500 250 122,15 250 500 Khoáng vi lượng mg/l Fe SO4 7H2O Mn SO4 4H2O 25 5,68 - 131 -