Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống in vitro lan brassavola nodosa

BAN QUẢN LÝ KHU NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP HCM TRUNG TÂM NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO NGHIỆM THU NHIỆM VỤ KHOA HỌC - CƠNG NGHỆ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO LAN Brassavola nodosa ThS Nguyễn Thị Điệp Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 12/2019 BAN QUẢN LÝ KHU NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP HCM TRUNG TÂM NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO NGHIỆM THU NHIỆM VỤ KHOA HỌC - CƠNG NGHỆ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO LAN Brassavola nodosa CHỦ NHIỆM NHIỆM VỤ Nguyễn Thị Điệp CƠ QUAN QUẢN LÝ CƠ QUAN CHỦ TRÌ Thành phớ Hờ Chí Minh, tháng 12/2019 TĨM TẮT Brassavola nodosa loài hoa lan rừng, xếp vào hạng Đệ hương với 22 điểm Ngọc điểm (Rhynchostylys gigantean) có 14 điểm Với đa dạng màu sắc, hình dáng hương thơm lồi lan Brassavola nói chung lan Brassavola nodosa nói riêng quan tâm để phát triển diện tích trồng, đặc biệt chúng nguồn gen quý phục vụ công tác lai, chọn tạo giống hoa lan mới.Trong nghiên cứu này, nghiên cứu nhân giống in vitro lan Brassavola nodosa thực với vật liệu sử dụng để nhân giống chồi non lan Brassavola nodosa Mơi trường thích hợp cho tạo chồi in vitro từ chồi đỉnh lan Brassavola nodosa môi trường MS bổ sung BA 1,5 mg/L NAA 0,25 mg/L, sucrose 30 g/L, agar g/L, cho tỷ lệ mẫu tạo chồi 97,78 %, số chồi phát sinh 16,89 chồi, chồi thu có kích thước nhỏ, đồng đều, có PLB tạo thành Mơi trường thích hợp cho nhân nhanh chồi lan Brassavola nodosa môi trường MS bổ sung kinetin mg/L, 100 ml/L nước dừa, sucrose 30 g/L, agar g/L, với số tăng trưởng đạt 6,96 lần, chồi thu to có màu xanh tươi Tần suất ngập chìm thời gian ngập chìm thích hợp cho nhân nhanh chồi lan Brassavola nodosa in vitro hệ thống nuôi cấy ngập chìm tạm thời RITA® lần/ngày thời gian ngập phút Mơi trường khống thích hợp cho tăng trưởng chồi lan Brassavola nodosa in vitro mơi trường Knudson C (1946) có bổ sung hàm lượng chuối sứ chín 40 g/L, sucrose 30 g/L, agar g/L, tăng trưởng tốt 100% chồi rễ Tỷ lệ sống giai đoạn vườn ươm sau tháng trồng đạt 100% BM20-QT.QLKH Trang i MỤC LỤC Trang TRANG BÌA TÓM TẮT .i MỤC LỤC ii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH SÁCH BẢNG v DANH SÁCH HÌNH vi THÔNG TIN ĐỀ TÀI .1 MỞ ĐẦU Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu hoa lan Brassavola nodosa 1.1.1 Phân loại .4 1.1.2 Sơ lược lan Brassavola nodosa .4 1.2 Vai trò số chất điều hòa sinh trưởng thực vật nhân giống 1.2.1 Chất điều hòa sinh trưởng thực vật auxin 1.2.2 Chất điều hòa sinh trưởng thực vật cytokinins 1.3 Nuôi cấy mô phân sinh .6 1.4 Hệ thống ni cấy ngập chìm tạm thời [Temporary immertion system 1.5 Các nghiên cứu nước 12 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 17 2.1.1 Thời gian: 17 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu: 17 2.2 Vật liệu thiết bị 17 2.3 Nội dung nghiên cứu 17 2.3.1 Nội dung 1: Tạo chồi in vitro lan Brassavola nodosa .17 2.3.2 Nội dung 2: Nhân nhanh chồi lan Brassavola nodosa 19 2.3.2.1 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng số cytokinin riêng lẻ 19 2.3.2.2 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng thời gian ngập chìm .20 2.3.3 Nội dung 3: Tăng trưởng chồi lan Brassavola nodosa in vitro .21 2.3.3.1 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống lên .21 BM20-QT.QLKH Trang ii 2.3.3.2 Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng dịch chiết chuối lên tăng 22 2.3.4 Khảo sát tỷ lệ sống lan giai đoạn vườn ươm 23 2.4 Phương pháp nghiên cứu 24 2.5 Phương pháp xử lý số liệu .26 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 Nội dung 1: Ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với NAA lên tạo 27 3.2 Nội dung 2: Nhân nhanh chồi lan Brassavola nodosa 31 3.2.1 Ảnh hưởng số cytokinin riêng lẻ đế nhân nhanh 31 3.2.2 Ảnh hưởng thời gian ngập chìm tần suất ngập chìm lên 33 3.3 Nội dung 3: Tăng trưởng chồi lan Brassavola nodosa in vitro .37 3.3.1 Ảnh hưởng môi trường khoáng lên tăng trưởng chồi lan .37 3.3.2 Ảnh hưởng dịch chiết chuối lên tăng trưởng chồi lan 39 3.4 Tỷ lệ sống giai đoạn vườn ươm sau tháng trồng 40 Chương 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .45 4.1 Kết luận 45 4.2 Kiến nghị 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO 48 PHỤ LỤC BM20-QT.QLKH Trang iii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt ANOVA Thuật ngữ tiếng Việt Analysis of variance BA 6-benzyladenin ctv Cộng tác viên CV Coefficient of variation Duncan Duncan’s multiple range test ĐC Đối chứng ĐHSTTV Điều hịa sinh trưởng thực vật HCl Axít chlohydric IAA Axít indole-3-acetic IBA Axít indole-3-butyric Kinetin N-(2-furfurylamino)-1-H-purine-6amine KC Mơi trường Knudson C, 1946 KOH Kali hyđrơxít MS Mơi trường Murashige Skoog, 1962 NAA Axít 1-naphthalene acetic NT Nghiệm thức PLBs Protocorm-like bodies RITA® SH Hệ thống ni cấy ngập chìm tạm thời Môi trường Schenk Hildebrandt, 1972 TDZ Thidiazuron TIS Temporary immersion system Zeatin 6-(4-hydroxy-3-methyl-trans-2butanylamino)purine 2-ip 6-γ-γdimethyl-aminopurine BM20-QT.QLKH Trang iv DANH SÁCH BẢNG Bảng Tên bảng Trang 2.1 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với NAA lên tạo chồi 18 từ chồi đỉnh lan Brassavola nodosa in vitro 2.2 Khảo sát ảnh hưởng số cytokinin riêng lẻ lên nhân nhanh 19 chồi lan Brassavola nodosa 2.3 Khảo sát ảnh hưởng thời gian ngập chìm tần suất ngập chìm lên 21 nhân nhanh chồi lan Brassavola nodosa hệ thống ni cấy ngập chìm tạm thời RITA® 2.4 Khảo sát ảnh hưởng mơi trường khống lên tăng trưởng chồi lan 22 Brassavola nodosa in vitro 2.5 Hàm lượng chuối 23 3.1 28 3.2 Chồi tái sinh từ chồi đỉnh lan Brassavola nodosa sau 60 ngày nuôi cấy Sự nhân nhanh chồi lan Brassavola nodosa sau 60 ngày nuôi cấy 3.3 Sự nhân nhanh chồi lan Brassavola nodosa hệ thống nuôi cấy 34 32 ngập chìm tạm thời RITA®sau 60 ngày ni cấy 3.4 Chồi lan Brassavola nodosa in vitro tăng trưởng môi trường 37 khống sau 60 ngày ni cấy 3.5 Ảnh hưởng dịch chiết chuối lên tăng trưởng chồi lan Brassavola 39 nodosa in vitro sau 15 ngày nuôi cấy BM20-QT.QLKH Trang v DANH SÁCH HÌNH Hình Tên hình Trang 1.1 Lan Brassavola nodosa 1.2 Hệ thống RITA® 1.3 Hệ thống bình sinh đơi BIT® 1.4 Hệ thống Plantima với hệ thống điều khiển chu kỳ ngập 2.1 Mẫu chồi lan Brassavola nodosa 17 2.2 Ni cấy hệ thống ngập chìm tạm thời RITA® 20 3.1 Ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp với NAA lên tạo chồi từ chồi 30 đỉnh lan Brassavola nodosa sau 60 ngày nuôi cấy 3.2 Ảnh hưởng BA Kinetin riêng lẻ lên nhân nhanh chồi lan 33 Brassavola nodosa sau 60 ngày nuôi cấy 3.3 Chồi lan Brassavola nodosa hệ thống ni cấy ngập chìm tạm 36 thời RITA®sau 60 ngày nuôi cấy 3.4 Chồi lan Brassavola nodosa in vitro sau 60 ngày nuôi cấy môi 38 trường khoáng khác 3.5 Ảnh hưởng dịch chiết chuối lên tăng trưởng chồi lan Brassavola 40 nodosa in vitro sau 15 ngày nuôi cấy 3.6 Cây lan Brassavola nodosa ex vitro sau tháng nuôi trồng ngồi 41 vườn ươm 3.7 Quy trình nhân giống in vitro lan Brassavola nodosa 42 3.8 Bình chồi in vitro lan Brassavola nodosa 44 3.9 Cây lan Brassavola nodosa 44 BM20-QT.QLKH Trang vi THÔNG TIN ĐỀ TÀI Tên đề tài/dự án: Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống in vitro lan Brassavola nodosa Chủ nhiệm đề tài/dự án:  Họ tên: Nguyễn Thị Điệp  Năm sinh: 1987  Học vị: Thạc sĩ Giới tính: Nữ Chuyên ngành: Di truyền Năm đạt học vị: 2013  Chức danh khoa học: Năm phong chức danh:  Chức vụ: Phó phịng Cơng nghệ Tế bào Thực vật  Tên quan công tác: Trung tâm Nghiên cứu Phát triển Nông nghiệp Công nghệ cao  Địa quan: Ấp 1, xã Phạm Văn Cội, huyện Củ Chi, TPHCM  Điện thoại quan: (028) 8862726 Fax: (028) 37990500  Địa nhà riêng:  Điện thoại nhà riêng: DTDĐ: 0909259807  E-mail: nguyenthidiep.bio@gmail.com Cơ quan chủ trì: - Tên quan chủ trì nội dung nghiên cứu quan chủ quản: Trung tâm Nghiên cứu Phát triển Nông nghiệp Công nghệ cao – Ban Quản lý Khu Nông nghiệp Công nghệ cao Tp Hồ Chí Minh - Điện thoại: 028 38862726 - Fax: 028 37990500 - Email: nghiencuu.ahtp@tphcm.gov.vn - Website: www.chta.com.vn - Địa chỉ: Ấp 1, Xã Phạm Văn Cội, Huyện Củ Chi, Tp Hồ Chí Minh - Số tài khoản: 9527 1032617 Kho bạc Nhà nước Củ Chi Thời gian thực hiện: Từ tháng 01/2019 đến tháng 12/2019 Kinh phí duyệt: 222.360.338 đồng Mục tiêu: a Mục tiêu tổng quát Tạo nguồn giống với số lượng lớn, đồng nhất, đáp ứng nhu cầu thị trường góp phần phát triển bảo tồn, lưu giữ nguồn gen giống lan phục vụ cho BM20-QT.QLKH trang BM20-QT.QLKH trang 46 BM20-QT.QLKH trang 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1] Dương Công Kiên, Nuôi cấy mô thực vật, Nhà xuất Đại học Quốc gia Tp Hồ Chí Minh, 2002 [2] Vũ Quốc Luận, Nguyễn Phúc Huy, Hoàng Xuân Chiến, Trịnh Thị Hương, Vũ Thị Hiền, Nguyễn Bá Nam, Đỗ Khắc Thịnh Dương Tấn Nhựt, Nghiên cứu nhân giống in vitro lan Vân Hài (Paphiopedilum Callosum), Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 2012, 10(3): 497-505 [3] Vũ Ngọc Lan Nguyễn Thị Lý Anh, Nhân giống in vitro loài lan địa Dendrobium Nobile Lindl, Tạp chí Khoa học Phát triển, 2013, tập 11, số 7: 917925 [4] Võ Thị Bạch Mai, phát triển chồi rễ, Nhà xuất Đại học Quốc gia Tp Hồ Chí Minh, 2004 [5] Trần Văn Minh, Công nghệ sinh học thực vật, Giáo trình dành cho Cao học Nghiên cứu sinh, trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh, 2013 [6] Cung Hoàng Phi Phượng ctv, Bước đầu ứng dụng hệ thống ni cấy ngập chìm tạm thời nhân giống lan Hồ điệp lai – Phalaenopsis Hybrid, Kỷ yếu hội nghị khoa học Công nghệ sinh học thực vật công tác nhân giống chọn tạo giống hoa, NXB nông nghiệp, 2007, trang 10-15 [7] Nguyễn Ngọc Quỳnh ctv, Ứng dụng hệ thống nuôi cấy ngập chìm tạm thời việc nhân nhanh PLBs chồi lan Dendrobium, Phalaenopsis, Viện khoa học kỹ thuật Nơng nghiệp miền Nam, 2008 [8] Nguyễn Quang Thạch, Hồng Thị Nga, Hoàng Minh Tú, Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống địa lan kỹ thuật ni cấy mô, 2004 [9] Bùi Trang Việt, Sinh lý thực vật đại cương (phần I), Nhà xuất Đại học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh, 2000 [10] Bùi Trang Việt, Sinh lý thực vật đại cương, phần I, NXB Đại học Quốc gia Tp Hồ Chí Minh, 2002 Tài liệu tiếng Anh BM20-QT.QLKH trang 48 [11] Berthouly M and Etienne H., Temporary immersion system: a new concept for use liquid medium in mass propagation, Liquid Culture Systems for in vitro Plant Propagation, 2005, 165–195 [12] Krueger S., Robacker C and Simonton W., Cullture of Amelanchier x grandiflora in a programmable micropropagation apparatus, Plant Cell, Tiss Org Cult., 1991, 219-226 [13] Mengarda L.H.G., Cola G.P.A., Oliveira S.C de Freitas A R de, Multiplication, rooting in vitro, and acclimatization of Brassavola tuberculata Hook (Orchidaceae), an orchid endemic to the Brazillian atlantic rainforest, Bioscience Journal, 2017, 33(3): 730-738 [14] Luciana G Giuseppina P.P.L., BAP (6-benzylaminopurine) in the regeneration in vitro of Blc Owen Holmes Ponkan × Brassavola digbiana n02, Science of Agrotechnology, 2007, 33(5): 1279 - 1285 [15] Pierik R.L.M Steegmans H.H.M., The effect of 6-benzylamino purine on growth and development of Cattleya seedlings grown from unripe seeds, Zeitschrift fur Pflanzenphysiologie, 1972, 68(3): 228 – 234 [16] Jorge M.T., Esther J.N., Lucia A., In vitro propagation of Phalaenopsis (Orchidaceae) from protocorms using the temporary immersion system “RITA”, Revista Colombiana de Biotecnology, 2007, Vol 7, No 1; 25-31 [17] Yih-Juh S., Satish M.N., Chi-Ni H., Vanisree M., Andhsin-Sheng T., Micropropagation of Dendrobium draconis Rchb f from thin cross-section culture, Scientia Horticulturae, 2005, Vol 122: 662–665 [18] Koravisd N., Effects of NAA, amino acids and sucrose on growth of in vitro culture of wild Orchid, Dendrobium chrysanthum Linld, 37th Congress on Science and Technology of Thailand, 2011 [19] Hajong S., Kumaria1 S Tandon P., Effect of Plant Growth Regulators on Regeneration Potential of Axenic Nodal Segments of Dendrobium chrysanthum Wall ex Lindl., J Agr Sci Tech., 2013, Vol 15: 1425-1435 [20] Someswar R., Bikramjit B., In vitro Micropropagation of Dendrobium chrysanthum Wall ex Lindl –A Threatened Orchid, Scholars Academic Journal of Biosciences, 2014, Vol.2: 39-42 BM20-QT.QLKH trang 49 Trang web [21] www.http//wikipedia.org BM20-QT.QLKH trang 50 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Quy trình nhân giống in vitro lan Brassavola nodosa Từ kết luận rút quy trình nhân giống in vitro lan Brassavola nodosa sau: Chồi non dài – 10 cm Khử trùng, nuôi môi trường MS + mg/L BA + 100 ml/L nước dừa + 30 g/L đường sucrose + g/L agar tháng Tạo chồi in vitro Tách đỉnh chồi, môi trường MS + 1,5 mg/L BA + 0,25 mg/L NAA + 30 g/L đường + g/L agar -3 tháng 10- 12 tháng Tạo chồi – tháng Môi trường MS + mg/L Kinetin +100 ml/L nước dừa + 30 g/L đường sử dụng hệ thống RITA® với tần suất ngập phút sau Nhân nhanh chồi 2-3 tháng Môi trường Knudson C bổ sung hàm lượng 40-50 g/L chuối sứ + 100 ml/L nước dừa + 30 g/L đường sucrose + g/L agar Tăng trưởng -4 tuần Huấn luyện thích nghi Cây in vitro hoàn chỉnh: cao – cm, – rễ, – Hình 3.7 Quy trình nhân giống in vitro lan Brassavola nodosa (đề xuất) BM20-QT.QLKH Thuyết minh quy trình Chọn mẹ Cây mẹ chọn khoẻ mạnh, sinh trưởng phát triển tốt, không bị sâu bệnh, khơng bị biến dị hình thái Khử trùng mẫu Sử dụng chồi non lan Brassavola nodosa – tháng tuổi có chiều cao -10 cm để làm vật liệu nghiên cứu ban đầu Tiến hành loại bỏ bẹ lá, rửa mẫu vòi nước chảy thời gian 20 phút Mẫu cấy lắc với xà phòng 10 phút rửa Chuyển vào tủ cấy, rửa với nước cất vơ trùng, sau lắc mẫu với cồn 70o phút Sau rửa mẫu với nước cất vô trùng, sử dụng javel Mỹ Hảo với tỷ lệ javel: nước vô trùng : để khử trùng mẫu 30 phút, rửa lại nước cất vô trùng, cắt phần mẫu bị tổn thương, cấy mẫu vào môi trường MS (Murashige & Skoog, 1962) bổ sung đường sucrose 30 g/L, agar g/L Sau tuần nuôi cấy, mẫu sống, vô trùng cấy chuyền sang mơi trường khống MS bổ sung BA mg/L, nước dừa 100 ml/L, đường sucrose 30 g/L, agar g/L Sau tuần nuôi cấy, chồi in vitro đạt kích thước khoảng – 2,5 cm sử dụng để bố trí thí nghiệm Tạo chồi: Sau tạo chồi in vitro, tiến hành tách đỉnh chồi nuôi cấy môi trường MS + 1,5 mg/L BA + 0,25 mg/L NAA + 30 g/L đường sucrose + g/L agar Nhân nhanh chồi: Sự nhân nhanh chồi đạt hiệu cao nuôi cấy môi trường MS + mg/L kinetin + 30 g/L đường sucrose, sử dụng hệ thống RITA® với tần suất ngập phút sau Tăng trưởng lan in vitro: Sau tạo lượng chồi cần thiết cấy chuyền sang môi trường để chồi phát triển thành con, sử dụng môi trường nuôi cấy môi trường Knudson C bổ sung hàm lượng 40 - 50 g/L chuối sứ chín + 100 ml/L nước dừa + 30 g/L đường sucrose + g/L agar Sau tháng nuôi cấy, đạt chiều cao từ – 5,5 cm, – rễ, – Giai đoạn huấn luyện cây: Cây đạt tiêu chuẩn chiều cao, số lá, số rễ đưa khỏi phịng ni bắt đầu giai đoạn huấn luyện thích nghi BM20-QT.QLKH Mục đích: giúp làm quen từ từ với điều kiện bên khơng cịn ni điều kiện phịng thí nghiệm tránh cho bị sốc, tăng tỷ lệ sống vườn ươm Khi phát triển hoàn chỉnh bình ni chuyển tới khu huấn luyện thích nghi thiết kế đón ánh sáng tự nhiên thống gió Thời gian giai đoạn khoảng -4 tuần Phụ lục 2: Thí nghiệm 1: ANOVA Table for tlmtc by nt Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 66532.6 19 3501.72 189.09 0.0000 Within groups 740.741 40 18.5185 Total (Corr.) 67273.3 59 Table of Means for tlmtc by nt with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nt Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -NT1 0.0 2.48452 -3.55067 3.55067 NT10 48.8889 2.48452 45.3382 52.4396 NT11 0.0 2.48452 -3.55067 3.55067 NT12 0.0 2.48452 -3.55067 3.55067 NT13 55.5556 2.48452 52.0049 59.1062 NT14 97.7778 2.48452 94.2271 101.328 NT15 93.3333 2.48452 89.7827 96.884 NT16 0.0 2.48452 -3.55067 3.55067 NT17 0.0 2.48452 -3.55067 3.55067 NT18 55.5556 2.48452 52.0049 59.1062 NT19 68.8889 2.48452 65.3382 72.4396 NT2 0.0 2.48452 -3.55067 3.55067 NT20 80.0 2.48452 76.4493 83.5507 NT3 24.4444 2.48452 20.8938 27.9951 NT4 42.2222 2.48452 38.6715 45.7729 NT5 48.8889 2.48452 45.3382 52.4396 NT6 0.0 2.48452 -3.55067 3.55067 NT7 0.0 2.48452 -3.55067 3.55067 NT8 42.2222 2.48452 38.6715 45.7729 BM20-QT.QLKH NT9 55.5556 2.48452 52.0049 59.1062 -Total 60 35.6667 Multiple Range Tests for tlmtc by nt -Method: 95.0 percent Duncan nt Count Mean Homogeneous Groups -NT7 0.0 X NT6 0.0 X NT2 0.0 X NT16 0.0 X NT17 0.0 X NT11 0.0 X NT12 0.0 X NT1 0.0 X NT3 24.4444 X NT4 42.2222 X NT8 42.2222 X NT10 48.8889 XX NT5 48.8889 XX NT13 55.5556 X NT18 55.5556 X NT9 55.5556 X NT19 68.8889 X NT20 80.0 X NT15 93.3333 X NT14 97.7778 X ANOVA Table for so choi by nt Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 898.852 19 47.308 638.66 0.0000 Within groups 2.96296 40 0.0740741 Total (Corr.) 901.815 59 Table of Means for so choi by nt with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nt Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit BM20-QT.QLKH NT1 0.0 0.157135 -0.224564 0.224564 NT10 2.88889 0.157135 2.66432 3.11345 NT11 0.0 0.157135 -0.224564 0.224564 NT12 0.0 0.157135 -0.224564 0.224564 NT13 2.22222 0.157135 1.99766 2.44679 NT14 16.8889 0.157135 16.6643 17.1135 NT15 8.44444 0.157135 8.21988 8.66901 NT16 0.0 0.157135 -0.224564 0.224564 NT17 0.0 0.157135 -0.224564 0.224564 NT18 2.55556 0.157135 2.33099 2.78012 NT19 4.22222 0.157135 3.99766 4.44679 NT2 0.0 0.157135 -0.224564 0.224564 NT20 4.33333 0.157135 4.10877 4.5579 NT3 1.88889 0.157135 1.66432 2.11345 NT4 1.88889 0.157135 1.66432 2.11345 NT5 2.44444 0.157135 2.21988 2.66901 NT6 0.0 0.157135 -0.224564 0.224564 NT7 0.0 0.157135 -0.224564 0.224564 NT8 2.11111 0.157135 1.88655 2.33568 NT9 2.33333 0.157135 2.10877 2.5579 -Total 60 2.61111 Multiple Range Tests for so choi by nt -Method: 95.0 percent Duncan nt Count Mean Homogeneous Groups -NT6 0.0 X NT7 0.0 X NT11 0.0 X NT2 0.0 X NT17 0.0 X NT1 0.0 X NT12 0.0 X NT16 0.0 X NT3 1.88889 X NT4 1.88889 X NT8 2.11111 XX NT13 2.22222 XX NT9 2.33333 XX NT5 2.44444 XX NT18 2.55556 XX NT10 2.88889 X NT19 4.22222 X NT20 4.33333 X BM20-QT.QLKH NT15 NT14 3 8.44444 16.8889 X X Thí nghiệm 2: ANOVA Table for he so tang sinh by nt Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 52.1093 8.68488 2116.35 0.0000 Within groups 0.0574519 14 0.0041037 Total (Corr.) 52.1667 20 Table of Means for he so tang sinh by nt with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nt Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -?C 1.57222 0.0369851 1.51613 1.62831 NT1 4.31889 0.0369851 4.2628 4.37498 NT2 3.25 0.0369851 3.19391 3.30609 NT3 3.1 0.0369851 3.04391 3.15609 NT4 4.80444 0.0369851 4.74835 4.86054 NT5 6.95556 0.0369851 6.89946 7.01165 NT6 4.85 0.0369851 4.79391 4.90609 -Total 21 4.12159 Multiple Range Tests for he so tang sinh by nt -Method: 95.0 percent Duncan nt Count Mean Homogeneous Groups -?C 1.57222 X NT3 3.1 X NT2 3.25 X NT1 4.31889 X NT4 4.80444 X NT6 4.85 X NT5 6.95556 X BM20-QT.QLKH Thí nghiệm 3: ANOVA Table for cstt by nt Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 351.083 39.0092 153.47 0.0000 Within groups 5.08376 20 0.254188 Total (Corr.) 356.167 29 Table of Means for cstt by nt with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nt Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -R1 8.06778 0.291083 7.63843 8.49713 R2 8.43444 0.291083 8.0051 8.86379 R3 9.14222 0.291083 8.71287 9.57157 R4 14.4844 0.291083 14.0551 14.9138 R5 16.6444 0.291083 16.2151 17.0738 R6 16.7222 0.291083 16.2929 17.1516 R7 13.2622 0.291083 12.8329 13.6916 R8 13.5944 0.291083 13.1651 14.0238 R9 13.0356 0.291083 12.6062 13.4649 dc 6.95556 0.291083 6.52621 7.3849 -Total 30 12.0343 Multiple Range Tests for cstt by nt -Method: 95.0 percent Duncan nt Count Mean Homogeneous Groups -dc 6.95556 X R1 8.06778 X R2 8.43444 XX R3 9.14222 X R9 13.0356 X R7 13.2622 X R8 13.5944 X BM20-QT.QLKH R4 14.4844 X R5 16.6444 X R6 16.7222 X -Thí nghiệm ANOVA Table for chieu cao choi by nt Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 14.7877 3.69693 163.10 0.0000 Within groups 0.226667 10 0.0226667 Total (Corr.) 15.0144 14 Table of Means for chieu cao choi by nt with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nt Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -K1 2.85556 0.0869227 2.71861 2.99251 K2 3.3 0.0869227 3.16305 3.43695 K3 5.44444 0.0869227 5.30749 5.58139 K4 2.71111 0.0869227 2.57416 2.84806 K5 3.23333 0.0869227 3.09638 3.37028 -Total 15 3.50889 Multiple Range Tests for chieu cao choi by nt -Method: 95.0 percent LSD nt Count Mean Homogeneous Groups -K4 2.71111 X K1 2.85556 X K5 3.23333 X K2 3.3 X K3 5.44444 X ANOVA Table for re by nt Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value - BM20-QT.QLKH Between groups 28.1926 7.04815 45.31 0.0000 Within groups 1.55556 10 0.155556 Total (Corr.) 29.7481 14 Table of Means for re by nt with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nt Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -K1 1.11111 0.22771 0.752346 1.46988 K2 3.66667 0.22771 3.3079 4.02543 K3 4.22222 0.22771 3.86346 4.58099 K4 1.44444 0.22771 1.08568 1.80321 K5 1.0 0.22771 0.641235 1.35877 -Total 15 2.28889 Multiple Range Tests for re by nt -Method: 95.0 percent LSD nt Count Mean Homogeneous Groups -K5 1.0 X K1 1.11111 X K4 1.44444 X K2 3.66667 X K3 4.22222 X ANOVA Table for so la by nt Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1.36296 0.340741 6.57 0.0073 Within groups 0.518519 10 0.0518519 Total (Corr.) 1.88148 14 Table of Means for so la by nt with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nt Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -K1 4.11111 0.131468 3.90398 4.31824 BM20-QT.QLKH K2 4.22222 0.131468 4.01509 4.42936 K3 4.11111 0.131468 3.90398 4.31824 K4 3.44444 0.131468 3.23731 3.65158 K5 3.66667 0.131468 3.45953 3.8738 -Total 15 3.91111 Multiple Range Tests for so la by nt -Method: 95.0 percent LSD nt Count Mean Homogeneous Groups -K4 3.44444 X K5 3.66667 X K3 4.11111 X K1 4.11111 X K2 4.22222 X BM20-QT.QLKH