Bước đầu nghiên cứu xây dựng quy trình nhân nhanh in vitro cây bơ (persea americana)

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC   KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN NHANH IN VITRO CÂY BƠ (Persea americana) HÀ NỘI, 9/2021 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC   KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN NHANH IN VITRO CÂY BƠ (Persea americana) Người thực : LÊ THỊ GIANG MSV : 620574 Lớp : K62CNSHC Giáo viên hướng dẫn : TS NINH THỊ THẢO HÀ NỘI, 9/2021 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan tồn kết nghiên cứu thực Số liệu kết khóa luận trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan thơng tin trích dẫn ghi rõ nguồn gốc giúp đỡ cảm ơn Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Sinh viên thực Lê Thị Giang i LỜI CẢM ƠN Trong thời gian học tập làm việc Học viện Nông Nghiệp Việt Nam, đặc biệt q trình làm khóa luận tốt nghiệp Bộ môn Công nghệ Sinh học Thực vật- khoa Công nghệ sinh học, giúp đỡ dìu dắt thầy cơ, bạn bè mơn tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Trước hết, tơi xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhiệm khoa Công nghệ Sinh học tồn thể thầy dìu dắt truyền đạt kiến thức vơ quan trọng, bổ ích suốt q trình học tập làm khóa luận tốt nghiệp Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc đến TS Ninh Thị Thảo dành thời gian, tâm huyết, tận tình giúp đỡ hướng dẫn tơi suốt q trình thực đề tài Tơi xin chân thành cảm ơn thầy giáo môn Công nghệ Sinh học Thực vật bạn làm khóa luận giúp đỡ tơi hồn thành đề tài Cuối cùng, xin gửi lời biết ơn chân thành tới gia đình, người thân, bạn bè động viên tạo điều kiện cho tơi hồn thành q trình học tập thực khóa luận tốt nghiệp Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2021 Sinh viên thực Lê Thị Giang ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC HÌNH v DANH MỤC CÁC CỤM TỪ - KÝ HIỆU VIẾT TẮT vii TÓM TẮT viii PHẦN I: ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục đích đề tài 1.2.2 Yêu cầu PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU 2.1 Giới thiệu chung bơ 2.1.1 Nguồn gốc 2.1.2 Phân loại 2.1.3 Đặc điểm sinh học bơ 2.1.4 Giá trị dinh dưỡng giá trị kinh tế bơ 2.2 Kỹ thuật nhân giống in vitro 2.3 Tình hình nghiên cứu nhân giống in vitro bơ giới Việt Nam 10 PHẦN III: ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 3.1 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 13 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 13 3.3 Nội dung nghiên cứu 13 3.3.1 Nội dung 1: Khảo sát chế độ khử trùng 13 3.3.2 Nội dung 2: Tạo vật liệu khởi đầu 15 3.3.3 Nội dung 3: Nhân nhanh chồi in vitro 16 3.4 Phương pháp nghiên cứu 16 iii PHẦN IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 18 4.1 Xác định chế độ khử trùng thích hợp cho vật liệu đoạn thân 18 4.1.1 Ảnh hưởng nồng độ NaOCl đến hiệu tạo vật liệu khởi đầu từ đoạn thân mang mắt ngủ 18 4.1.2 Ảnh hưởng thời gian khử trùng NaOCl 5% đến hiệu tạo vật liệu khởi đầu từ đoạn thân mang mắt ngủ 19 4.1.3 Ảnh hưởng thời gian khử trùng NaOCl 5% đến hiệu tạo vật liệu khởi đầu từ mô 21 4.1.4 Ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 0,1% hiệu tạo vật liệu khởi đầu từ mô 22 4.2 Kết tạo vật liệu khởi đầu từ đoạn thân mang mắt ngủ mô 24 4.2.1 Ảnh hưởng BA đến khả tái sinh chồi từ đoạn thân mang mắt ngủ 24 4.2.2 Ảnh hưởng 2,4D đến khả cảm ứng tạo callus từ mô 26 4.2.3 Ảnh hưởng tổ hợp chất điều tiết sinh trưởng đến khả tái sinh chồi từ callus 28 4.3 Kết nhân nhanh chồi in vitro 30 PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 31 5.1 Kết luận 31 5.2 Kiến nghị 31 TÀI LIỆU THAM KHẢO 32 PHỤ LỤC 35 iv DANH MỤC BẢNG Bảng Một số hàm lượng chất dinh dưỡng 100g bơ Bảng 4.1 Ảnh hưởng nồng độ NaOCl đến hiệu tạo vật liệu khởi đầu từ đoạn thân mang mắt ngủ 18 Bảng 4.2 Ảnh hưởng thời gian khử trùng NaOCl 5% đến hiệu tạo vật liệu khởi đầu từ đoạn thân 20 Bảng 4.3 Ảnh hưởng thời gian khử trùng NaOCl 5% đến hiệu tạo vật liệu khởi đầu từ mô 21 Bảng 4.4 Ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 0,1% hiệu tạo vật liệu khởi đầu từ mô 23 Bảng Ảnh hưởng BA đến khả tái sinh chồi từ đoạn thân mang mắt ngủ 25 Bảng 4.6 Ảnh hưởng 2,4D đến khả cảm ứng tạo callus từ mô 26 Bảng 4.7 Ảnh hưởng tổ hợp Cytokinin Auxin đến khả sinh trưởng khả tái sinh chồi từ callus 29 v DANH MỤC HÌNH Hình Đoạn thân mang mắt ngủ bơ 13 Hình 4.1 Chồi bơ in vitro sau khử trùng môi trường MS + 30 g/l đường sau tuần 19 Hình 4.2 Chồi bơ in vitro sau khử trùng môi trường MS + 30g/l đường sau tuần 21 Hình 4.3 Mẫu mô khử trùng NaOCl 5% môi trường sau tuần 22 Hình 4.4 Mẫu mơ khử trùng HgCl 0,1% môi trường sau tuần 24 Hình 4.5 Chồi tái sinh từ đoạn thân bơ môi trường bổ sung BA sau tuần 26 Hình 4.6 Mơ tái sinh tạo callus môi trường MS bổ sung 2,4D sau tuần 28 Hình 4.7 Callus từ mơ bơ môi trường bổ sung tổ hợp cytokinin auxin sau tuần 30 Hình 4.8 Chồi bơ in vitro sau cấy môi trường có bổ sung nồng độ BA sau tuần 30 vi DANH MỤC CÁC CỤM TỪ - KÝ HIỆU VIẾT TẮT Viết đầy đủ STT Viết Tắt BA Benzyl adenin CT Công thức ĐC Đối chứng IAA Indoleacetic acid LSV0,05 Độ lệch tiêu chuẩn mức nghĩa 5% MS Môi trường Murashige skoog - 1962 α-NAA α- Napthalene aceticacid 2,4D 2,4 – Dichlorophenoxyacetic acid vii TÓM TẮT Đề tài tiến hành nhằm xác định số yếu tố ảnh hưởng đến trình tạo vật liệu khởi đầu quy trình nhân giống in vitro bơ (Persea americana) giống 034 Kết xác định chế độ khử trùng thích hợp để tạo vật liệu khởi đầu từ đoạn thân mang mắt ngủ bơ sử dụng NaOCl 5% thời gian 25 phút; chế độ khử trùng thích hợp để tạo vật liệu khởi đầu mô sử dụng NaOCl 5% thời gian 15 phút Mơi trường thích hợp để tái sinh chồi từ đoạn thân mang mắt ngủ MS + mg/l BA Các kết đề tài sở ban đầu để thiết lập quy trình nhân nhanh in vitro bơ làm sở nhân giống bơ chất lượng cao viii PHẦN V: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Nghiên cứu bước đầu xác định số kết quy trình nhân nhanh in vitro bơ sau: - Chất khử trùng nồng độ khử trùng thích hợp để tạo vật liệu khởi đầu từ đoạn thân mang mắt ngủ tốt sử dụng NaOCl 5% thời gian 25 phút - Chất khử trùng nồng độ khử trùng thích hợp để tạo vật liệu khởi đầu từ mô tốt sử dụng NaOCl 5% thời gian 15 phút - Môi trường MS có bổ sung mg/l BA thích hợp để tái sinh chồi từ đoạn thân bơ - Môi trường bổ sung mg/l BA/kinetin phối hợp với 0,5 mg/l -NAA/IAA khơng thích hợp để tái sinh chồi từ callus bơ 5.2 Kiến nghị Cần tiếp tục khảo sát chế độ khử trùng khác cho hiệu tạo vật liệu khởi đầu tốt Đồng thời khảo sát cơng thức mơi trường thích hợp cho tái sinh chồi từ đoạn thân mang mắt ngủ, nhân nhanh chồi, tái sinh callus từ mô tái sinh chồi từ mô 31 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu nước Dương Tấn Nhựt, Nguyễn Ngọc Thi, Bùi Lê Thanh Khiết, Vũ Quốc Luân(2008a) Peptone kích thích tái sinh chồi in vitro rễ bơ (Persea Americana Mill.) Khoa học Hortic, 124-128 Trần Thị Hồng Cẩm, Nguyễn Thị Diệu My, Đặng Thị Thu Thảo, Nguyễn Thị Vân Tuyền, Lê Trần Tuấn Phong (2010) Tìm hiểu trái bơ sản phẩm từ bơ Tiểu luận rau quả, Trường Đại học Công Nghiệp TP.HCM: 8-9 Trần Hương Nhiên, 2013 Nghiên cứu phát sinh hình thái phơi hạt bơ (Persea americana) thơng qua kỹ thuật nuôi cấy phôi lát mỏng tế bào Trường Đại học Nơng Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh, 53tr Phạm Thị Bích Liễu (chủ biên), Lê Thị Nga, Nguyễn Quốc Khánh (2018) Giáo trình mơ đun xây dựng kế hoạch trồng bơ Bộ nông nghiệp phát triển nông thôn MĐ01: 917 Nguyễn Thị Hải Yến Trần Thị Thu Hương (2014) Nghiên cứu khả tái sinh in vitro câu chè Tạp chí Khoa Học Công nghệ Mai Văn Trị, Nguyễn Thị Nguyên Vân, Huỳnh Kỳ Nguyễn Lộc Hiền (2016) Phytophthora cinnamomi Rands gây thối rễ loét thân bơ miền Đơng Nam Bộ Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ 45b: 64-69 Nguyễn Như Hà, Lê Thị Bích Đào, Vương Thị Tuyết (2005) Giáo trình thổ nhưỡng, nơng hóa Nhà xuất Hà Nội, tr 26-27 Hoàng Thị Sản Hoàng Thị Bé (2005) Phân loại thực vật học Nhà xuất Đại học Sư phạm tr 18-19; 297-303 Đặng Quang Bích, Nguyễn Thị Phương Thảo, Nguyễn Văn Phú, Đinh Trường Sơn, Ninh Thị Thảo, Nguyễn Văn Huấn, Trần Văn Lin, Nguyễn Thị Thùy Linh (2018) Quy trình nhân giống in vitro trà hoa vàng (Camellia sp.) Tạp chí Khoa học Nông Nghiệp Việt Nam 10 Nguyễn Văn Kết Nguyễn Thị Cúc (2014) Khảo sát khả nhân giống trà my hoa đỏ (Camellia piquetiana (Pierre) Sealy) in vitro Tạp chí Khoa học, Đại học Quốc gia Hà Nội, Khoa học Tự nhiên Công nghệ 30(3) tr 17-25 11 Nguyễn Văn Niệm, Chử Quốc Doanh Lê Sỹ Thức (1994) Hoàn thiện kỹ thuật nhân giống chè 1A, Kết nghiên cứu khoa học phát triển công nghệ chè 19891993 Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội 12 Vũ Quang Sáng, Phạm Văn Cường, Nguyễn Thị Nhẫn, Nguyễn Văn Phú, Mai Thị Tân, Nguyễn Thị Kim Thanh (2015) Giáo trình Sinh lý thực vật ứng dụng NXB Nơng Nghiệp, Hà Nội Tài liệu nước ngồi: A Barceló-Moz, CL Encina, E Simón-Pérez, F Pliego-Alfaro 1999 Micropropagation of adult avocado Plant cell, tissue and organ culture 58 (1), 11-17 Barcelo´-Mun˜oz, A., Pliego-Alfaro, F., 2003 Micropropagation of avocado In: Jain, S.M., Ishii, K (Eds.), Micropropagation of Woody Trees and Fruits.Kluwer Academic Publishers, pp 519–542 Ding, Qunxing, Dimayuga, Edgardo, Keller Jeffrey (2007) Oxidative Damage, Protein Synthesis, and Protein Degradation in Alzheimer's Disease Current Alzheimer Research, 73-79 Pliego-Alfaro,Tosho Murashige, 1988 Somatic embryogenesis in avocado (Persea americana Mill.) in vitro Plant Cell, Tissue and Organ Culture,12, 61-66 32 HitiBandaralage, J.C.A.H., Hayward, A., O’Brien, C and Mitter, N (2015) Gibberellin and Cytokinin in Synergy for a Rapid Nodal Multiplication System of Avocado Proceedings of the World Avocado Congress VIII, Lima, 13-18 September 2015, 95-98 N Sahar P Spiegel-Roy, 1984 In Vitro Germination of Avocado Pollen HortScience 19(6):886-888 Brokaw, W.H., 1987 Avocado clonal propagation Proc Int Plant Prop Soc 37, 97–103 Capote de Sol, M., Rodriguez, N.N., Blanco, M., 2000 In vitro propagation of avocado Trop Fruits Newslett 36/37, 3–7 Blumenfeld, A., Gazit, S., 1971 Growth of avocado fruit callus and its relation to exogenous and endogenous cytokinins Physiol Plant 25,369–371 Gorzalez-Rosas, H., Salazar, S.G., 1984 Root induction and vegetative development from avocado plantlets (Persea americana Mill.) Calif Avo Soc Yrb 53, 97–100 10 Nel, D.D., Kotze, J.M., Snyman, C.P., 1982 In vitro propagation of Persea indica Calif Avo Soc Yrb 66, 167–168 11 Pliego-Alfaro, F., Encina, C.L., Barcelo´-Mun˜oz, A., 1987 Propagation of avocado rootstocks by tissue culture South Afr Avo Growers’ Assoc.Yrb 10, 36–39 12 Schroeder, C.A., 1956 Growth of avocado fruit tissue on artificial media Calif Avo Soc Yrb 40,165–168 13 Schroeder, C.A., 1971 The response of avocado pericarp tissue to temperature and light in vitro Calif Avo Soc Yrb 54, 85–89 14 Schroeder, C.A., 1975 The response of avocado flower budsin vitro Calif Avo Soc Yrb 58, 66–73 15 Schroeder, C.A., 1980 Avocado tissue in vitro Calif Avo Soc Yrb 64, 139– 141 16 Witjaksono, S.B., Colls, A., Litz, R.E., Moon, P.A., 1999 Avocado shoot culture, plantlet development and CO2 assimilation in an ambient and enhanced CO2 environment In vitro Cell Dev Biol Plant 35, 238–244 17 Zirari, A., Lionakis, S.M., 1994 Effect of cultivar, explant type, etiolation pretreatment and the age of plant material on the in vitro regeneration ability of avocado (Persea americana) Acta Hortic 365, 69–76 18 Schroeder, C.A., 1961 Some morphological aspects of fruit tissue grown in vitro Bot Gaz 112, 198–204 19 Seyring, M., 2005 Einfluss von Pepton auf die Differenzierung und Keimung somatischer Embryonen von Cyclamen persicum Mill BHGL-Schriftenreihe 23, S119 (Abstract) 20 Barceló-Mu-oz, A and Pliego-Alfaro, F 2003 Micropropagation of Avocado (Persea americana Mill.) In: Jain, S.M and Ishii, K., Eds., Micropropagation of Woody Trees and Fruits, Springer, Berlin, 519-542 21 Ben-Yaacov, A and Zilberstaine, M 1999 Clonal Avocado (Persea americana Mill.) Rootstocks in Israel Revista Chapingo Serie Horticultura, 5, 39-42 22 M Ashrafuzzaman , Sukarna Kar , Dilafroza Khanam, Shamsul Haque Prodhan In Vitro Regeneration and Multiplication of Jackfruit (Artocarpus Heterophyllus L.) Research Journal of Biology (2012) 23 Ahmed, M F., Kantharajah, A S., and Holford, P (2001) Factors affecting adventitious shoot and root formation from the avocado cultivar ‘Hass’ (Persea americana, Mill.) in vitro Gartenbauwissenschaft, 66(6), 293–297 24 Miguel Ángel Giacinti, 2002 Visión Mundial Del Consumo De Aguacate O Palta Sceilo Versión impresa ISSN 354-1316 25 Rohim, F M., Wanas, W H., Aziz, A B., and Eman, A (2013) In vitro rescue and regeneration of zygotic embryos of Avocado (Persea americana Mill.) cv Hass Journal of Applied Sciences Research, 9(7), 4132–4141.; Young, M J (1983) Avocado callus and 33 bud culture In Proceedings of the Florida State Horticultural Society (Vol 96, pp 181– 182) 26 Danso K., E Azu, W Elegba, A Asumeng, H M Amoatey and G Y P Klu (2011) "Effective decontamination and subsequent plantlet regeneration of sugarcane (Saccharum officinarum L.) in vitro." International Journal of Integrative Biology Vol 11(2) pp 9096 27 He H, Xiao S., Xian J., Xu H (2000) In-vitro culture and plant regeneration of Morinda officinalis How Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine 17 (4): 353-354 Tài liệu Website: https://www.nuoicaymothucvat.net/2018/03/peptone-kich-thich-tao-choi-va-rein.html?m=1 http://wasi.org.vn/phuong-phap-nhan-giong-va-trien-vong-nuoi-cay-mo-cay-boavocado/ https://buaanhoanhao.vn/bo-thanh-phan-dinh-duong-va-loi-ich-suc-khoe/ https://thanhnien.vn/suc-khoe/10-loi-ich-tuyet-voi-tu-qua-bo-1104591.html https://giongeakmat.com/mot-so-phuong-phap-nhan-giong-bo-pho-bien-hien-nay https://www.vinmec.com/vi/tin-tuc/thong-tin-suc-khoe/dinh-duong/gia-tri-dinh-duongtu-qua-bo/ http://camnangcaytrong.com/cay-bo-cd43.html https://vinacado.com/qua-bo/ 34 PHỤ LỤC Thí nghiệm 4.1.1: Ảnh hưởng nồng độ NaOCl đến hiệu tạo vật liệu khởi đầu từ đoạn thân New table : 8/25/2021 - 9:05:25 PM - [Version : 4/30/2020] Analysis of variance Ty le mau nhiem Variable N R² Adj R² CV Ty le mau nhiem 24 0.3889 0.2972 9.5150 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS F p-value Model 0.0933 0.0311 4.2424 0.0179 Nong NaOCl 0.0933 0.0311 4.2424 0.0179 Error 0.1467 20 0.0073 Total 0.2400 23 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.10313 Error: 0.0073 df: 20 Nong NaOCl Means n S.E 5.00 0.8333 0.0350 A 10.00 0.8667 0.0350 A 20.00 0.9000 0.0350 A 2.50 1.0000 0.0350 B B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Ty le mau sach 35 Variable N R² Adj R² CV Ty le mau sach 24 0.1304 0.0000 489.8979 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS F p-value Model 0.0050 0.0017 1.0000 0.4133 Nong NaOCl 0.0050 0.0017 1.0000 0.4133 Error 0.0333 20 0.0017 Total 0.0383 23 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.04917 Error: 0.0017 df: 20 Nong NaOCl Means n S.E 20.00 0.0000 0.0167 A 5.00 0.0000 0.0167 A 2.50 0.0000 0.0167 A 10.00 0.0333 0.0167 A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Ty le mau tao choi Variable N R² Adj R² CV Ty le mau tao choi 24 0.3566 0.2601 95.5195 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS F p-value Model 0.0850 0.0283 3.6957 0.0289 Nong NaOCl 0.0850 0.0283 3.6957 0.0289 Error 0.1533 20 0.0077 36 Total 0.2383 23 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.10545 Error: 0.0077 df: 20 Nong NaOCl Means n S.E 2.50 0.0000 0.0357 A 10.00 0.1000 0.0357 A B 20.00 0.1000 0.0357 A B 5.00 0.1667 0.0357 B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Thí nghiệm 4.1.2: Ảnh hưởng thời gian khử trùng NaOCl 5% đến hiệu tạo vật liệu khởi đầu từ đoạn thân New table : 9/17/2021 - 11:18:42 AM - [Version : 4/30/2020] Analysis of variance Ty le mau nhiem Variable Ty le mau nhiem N 24 R² 0.2593 Adj R² 0.1481 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df CV 9.8689 MS F p-value Model 0.0583 0.0194 2.3333 0.1047 Thoi gian khu trung 0.0583 0.0194 2.3333 0.1047 Error 0.1667 20 0.0083 Total 0.2250 23 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.10994 Error: 0.0083 df: 20 Thoi gian khu trung Means n S.E 30 phut 0.8667 0.0373 A 25 phut 0.9000 0.0373 A B 20 phut 0.9333 0.0373 A B 15 phut 1.0000 0.0373 B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) ty le mau sach Variable ty le mau sach N 24 R² 0.3000 Adj R² 0.1950 37 CV 204.9390 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS F p-value Model 0.0400 0.0133 2.8571 0.0628 Thoi gian khu trung 0.0400 0.0133 2.8571 0.0628 Error 0.0933 20 0.0047 Total 0.1333 23 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.08227 Error: 0.0047 df: 20 Thoi gian khu trung Means n S.E 25 phut 0.0000 0.0279 A 15 phut 0.0000 0.0279 A 20 phut 0.0333 0.0279 A B 30 phut 0.1000 0.0279 B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Ty le mau tao choi Variable Ty le mau tao choi N 24 R² 0.2000 Adj R² 0.0800 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df CV 190.9974 MS F p-value Model 0.0317 0.0106 1.6667 0.2061 Thoi gian khu trung 0.0317 0.0106 1.6667 0.2061 Error 0.1267 20 0.0063 Total 0.1583 23 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.09584 Error: 0.0063 df: 20 Thoi gian khu trung Means n S.E 15 phut 0.0000 0.0325 A 30 phut 0.0333 0.0325 A B 20 phut 0.0333 0.0325 A B 25 phut 0.1000 0.0325 B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Thí nghiệm 4.1.3: Ảnh hưởng thời gian khử trùng NaOCl 5% đến hiệu tạo vật liệu khởi đầu từ mô New table : 9/19/2021 - 3:12:49 AM - [Version : 4/30/2020] 38 Analysis of variance Ty le mau nhiem Variable Ty le mau nhiem N 24 R² 0.2000 Adj R² 0.0800 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df CV 7.5548 MS F p-value Model 0.0267 0.0089 1.6667 0.2061 Thoi gian khu trung 0.0267 0.0089 1.6667 0.2061 Error 0.1067 20 0.0053 Total 0.1333 23 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.08795 Error: 0.0053 df: 20 Thoi gian khu trung Means n S.E 20 phut 0.9333 0.0298 A 15 phut 0.9333 0.0298 A 10 phut 1.0000 0.0298 A phut 1.0000 0.0298 A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Ty le mau sach Variable Ty le mau sach N 24 R² 0.1746 Adj R² 0.0508 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df CV 263.3122 MS F p-value Model 0.0183 0.0061 1.4103 0.2691 Thoi gian khu trung 0.0183 0.0061 1.4103 0.2691 Error 0.0867 20 0.0043 Total 0.1050 23 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.07928 Error: 0.0043 df: 20 Thoi gian khu trung Means n S.E phut 0.0000 0.0269 A 10 phut 0.0000 0.0269 A 15 phut 0.0333 0.0269 A 20 phut 0.0667 0.0269 A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Ty le mau tao callus 39 Variable Ty le mau tao callus N 24 R² 0.1304 Adj R² 0.0000 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df CV 489.8979 MS F p-value Model 0.0050 0.0017 1.0000 0.4133 Thoi gian khu trung 0.0050 0.0017 1.0000 0.4133 Error 0.0333 20 0.0017 Total 0.0383 23 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.04917 Error: 0.0017 df: 20 Thoi gian khu trung Means n S.E phut 0.0000 0.0167 A 10 phut 0.0000 0.0167 A 20 phut 0.0000 0.0167 A 15 phut 0.0333 0.0167 A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Thí nghiệm 4.1.4: Ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 0,1% hiệu tạo vật liệu khởi đầu từ mô New table : 9/17/2021 - 11:24:55 AM - [Version : 4/30/2020] Analysis of variance Ty le mau nhiem Variable Ty le mau nhiem N 24 R² 0.6471 Adj R² 0.5941 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df CV 14.4884 MS F p-value Model 0.5133 0.1711 12.2222 0.0001 Thoi gian khu trung 0.5133 0.1711 12.2222 0.0001 Error 0.2800 20 0.0140 Total 0.7933 23 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.14250 Error: 0.0140 df: 20 Thoi gian khu trung Means n 20 phut 0.6000 15 phut 0.7667 10 phut 0.9333 40 S.E 0.0483 0.0483 0.0483 A B C phut 0.9667 0.0483 C Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Ty le mau sach Variable Ty le mau sach N 24 R² 0.6471 Adj R² 0.5941 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df CV 64.5391 MS F p-value Model 0.5133 0.1711 12.2222 0.0001 Thoi gian khu trung 0.5133 0.1711 12.2222 0.0001 Error 0.2800 20 0.0140 Total 0.7933 23 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.14250 Error: 0.0140 df: 20 Thoi gian khu trung Means n S.E phut 0.0333 0.0483 A 10 phut 0.0667 0.0483 A 15 phut 0.2333 0.0483 B 20 phut 0.4000 0.0483 C Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Ty le mau tao callus Variable Ty le mau tao callus N 24 R² nd Analysis of variance table (Partial S.V SS Model 0.0000 Thoi gian khu trung 0.0000 Error 0.0000 Total 0.0000 Adj R² nd SS) df 3 20 23 CV nd MS 0.0000 0.0000 0.0000 F nd nd p-value nd nd Thí nghiệm 4.2.1 Ảnh hưởng BA đến khả tái sinh chồi từ đoạn thân mang mắt ngủ New table : 9/17/2021 - 11:26:49 AM - [Version : 4/30/2020] Analysis of variance Variable Ty le mau tai sinh N 12 R² 0.2727 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS 41 Adj R² 0.0000 CV 26.6469 F p-value Model Nong Error Total 0.2500 0.2500 0.6667 0.9167 3 11 0.0833 0.0833 0.0833 1.0000 1.0000 0.4411 0.4411 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.54353 Error: 0.0833 df: Nong Means n S.E 1.0000 0.1667 A 1.0000 0.1667 A 1.0000 0.1667 A 1.3333 0.1667 A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Thí nghiệm 4.2.2 Ảnh hưởng 2,4D đến khả cảm ứng tạo callus từ mô New table : 9/17/2021 - 10:57:27 AM - [Version : 4/30/2020] Analysis of variance Ty le mau nhiem Variable Ty le mau nhiem N 30 R² 0.3416 Adj R² 0.2363 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS Model 0.1280 0.0320 Nong 2,4D 0.1280 0.0320 Error 0.2467 25 0.0099 Total 0.3747 29 CV 11.2028 F 3.2432 3.2432 p-value 0.0284 0.0284 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.11811 Error: 0.0099 df: 25 Nong 2,4D Means n S.E 0.50 0.7667 0.0406 A 1.00 0.8667 0.0406 A B 2.00 0.9333 0.0406 B 1.50 0.9333 0.0406 B 0.00 0.9333 0.0406 B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Ty le mau tao callus Variable Ty le mau tao callus N 30 R² 0.2081 Adj R² 0.0814 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS Model 0.0613 0.0153 Nong 2,4D 0.0613 0.0153 Error 0.2333 25 0.0093 Total 0.2947 29 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.11488 Error: 0.0093 df: 25 Nong 2,4D Means n S.E 0.00 0.0333 0.0394 42 CV 111.4721 F 1.6429 1.6429 A p-value 0.1948 0.1948 1.50 0.0667 2.00 0.0667 1.00 0.1000 0.50 0.1667 Means with a common letter are 0.0394 A B 0.0394 A B 0.0394 A B 0.0394 B not significantly different (p > 0.05) ty le mau khong tao callus Variable ty le mau khong tao callus N 30 R² 0.0854 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS Model 0.0187 0.0047 Nong 2,4D 0.0187 0.0047 Error 0.2000 25 0.0080 Total 0.2187 29 Adj R² 0.0000 CV 335.4102 F 0.5833 0.5833 p-value 0.6776 0.6776 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.10635 Error: 0.0080 df: 25 Nong 2,4D Means n S.E 2.00 0.0000 0.0365 A 1.50 0.0000 0.0365 A 0.00 0.0333 0.0365 A 1.00 0.0333 0.0365 A 0.50 0.0667 0.0365 A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) 43 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc BẢN NHẬN XÉT SINH VIÊN LÀM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Lê Thị Giang Chuyên ngành: Lớp: K62CNSHC Công nghệ sinh học Tên đề tài Khóa luận tốt nghiệp: Bước đầu nghiên cứu xây dựng quy trình nhân nhanh in vitro bơ (Persea americana) Thời gian thực tập: 3/2021 – 9/2021 Địa điểm thực tập: Bộ môn CNSH Thực vật – Khoa CNSH Ý KIẾN NHẬN XÉT CỦA GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN Tinh thần, thái độ học tập thực Khóa luận tốt nghiệp: Sinh viên có thái độ làm việc nghiêm túc, chủ động triển khai hoàn thành nội dung nghiên cứu, chấp hành nội quy, quy định sở thực tập Mức độ hoàn thành Khóa luận tốt nghiệp giao:  Hồn thành tốt:   Hoàn thành:  Chưa hoàn thành: Năng lực sáng tạo nghiên cứu viết Khóa luận tốt nghiệp: - Sinh viên có cố gắng, có lực nhiên cứu khoa học Sinh viên có trung thực nghiên cứu khoa học Sinh viên nỗ lực viết thành cơng khóa luận tốt nghiệp Kết luận - Sinh viên đủ điều kiện nộp Khóa luận tốt nghiệp:  - Sinh viên khơng đủ điều kiện nộp Khóa luận tốt nghiệp: Hà Nội, ngày 20 tháng năm 2021 Giáo viên hướng dẫn Ninh Thị Thảo 44 45