Thông tin tài liệu
BAN QUẢN LÝ KHU NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP.HCM TRUNG TÂM ƯƠM TẠO DOANH NGHIỆP NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO TỔNG KẾT NHIỆM VỤ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ SẢN XUẤT THỬ NGHIỆM CHẾ PHẨM SINH HỌC CHỨA TRICHOBRACHIN ĐỂ PHÒNG TRỪ MỘT SỐ LOẠI NẤM BỆNH GÂY HẠI TRÊN CÂY TRỒNG THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 3/2017 BAN QUẢN LÝ KHU NƠNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP.HCM TRUNG TÂM ƯƠM TẠO DOANH NGHIỆP NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO TỔNG KẾT NHIỆM VỤ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ 2018 SẢN XUẤT THỬ NGHIỆM CHẾ PHẨM SINH HỌC CHỨA TRICHOBRACHIN ĐỂ PHÒNG TRỪ MỘT SỐ LOẠI NẤM BỆNH GÂY HẠI CÂY TRỒNG CƠ QUAN CHỦ TRÌ (Ký tên, đóng dấu xác nhận) CHỦ NHIỆM NHIỆM VỤ (Kí ghi rõ họ tên) Nguyễn Duy Long THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG /2018 Mục lục trang Danh sách bảng .iii Danh sách hình .iv TÓM TẮT vi THÔNG TIN CHUNG .viii PHẦN MỞ ĐẦU CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu nấm Trichoderma .3 1.2 Giới thiệu trichobrachin 1.3 Tình hình nghiên cứu nước giới 1.4 Lên men nuôi cấy sinh khối nấm Trichoderma sp sản xuất trichobrachin 13 CHƯƠNG II NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Nội dung nghiên cứu 16 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 16 2.3 Vật liệu nghiên cứu 16 2.4 Phương pháp nghiên cứu 17 2.4.1 Các kết đạt giai đoạn .17 2.4.2 Phương pháp tiến hành 17 2.4.2.1 Phương pháp tách chiết tinh peptainbol trichobrachin thô 17 2.4.2.2 Xác định thành phần, yếu tố tác động đến hoạt tính kháng nấm phương pháp sắc kí .19 a Xác định môi trường lên men chủng nấm Trichoderma thích hợp cho khả sinh trichobrachin 20 b Khảo sát hoạt tính kháng nấm dịch chiết trichobrachin điều kiện lên men bioreoactor 100L 21 i 2.5 Phương pháp xử lý số liệu .21 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 3.1 Kết qủa giai đoạn 22 3.2 Quan sát hình thái chủng Trichoderma có khả sinh trichobrachin mơi trường PDA 22 3.3 Quá trình tách chiết trichobrachin từ ba chủng Trichoderma 24 3.5 Xác định peptaibols chứa dịch chiết trichobrachin 25 3.5.1 Kết phân tích phổ IR 25 3.5.2 Kết phân tích sắc ký phương pháp HPLC-UV .27 3.5.3 Kết phân tích sắc ký phương pháp LC-MS 30 3.5.3.1 Kết trích xuất sở liệu từ database 30 3.5.3.2 So sánh ngân hàng liệu xác định nhóm trình tự peptaibol tương đồng 35 3.6 Xây dựng quy trình sản xuất trichobrachin .47 3.6.1 Nghiên cứu mơi trường thích hợp cho khả sinh trichobrachin cao từ chủng Trichoderma sp .47 3.6.2 Khảo sát sơ hiệu kháng nấm dịch chiết trichobrachin từ chủng nấm TC25 .51 CHƯƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 54 4.1 Kết luận 54 4.2 Kiến nghị 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO .56 Phụ lục 59 ii Danh sách bảng Bảng trang Bảng Một số trình tự amino acid peptaibols trichobrachin Bảng Bảng sở liệu CPD alamethicin (comprehensive Peptaibiotics Database - Stoppacher, 2013) Bảng sở liệu trích xuất từ CPD aminoacid peptaibol 30 Bảng 4: so sánh trình tự trichobrachin chủng Trichoderma TC8 37 Bảng 5: so sánh trình tự trichobrachin chủng Trichoderma TC15 40 Bảng 6: so sánh trình tự trichobrachin chủng Trichoderma TC25 46 Bảng Khối lượng Trichobarchin thu từ chủng TC8 qua nuôi cấy môi trường khác .47 Bảng Khối lượng trichobarchin thu từ chủng TC15 qua nuôi cấy môi trường khác .49 Bảng Khối lượng trichobarchin thu từ chủng TC25 qua nuôi cấy môi trường khác .50 Bảng 10 Tỉ lệ ức chế sinh trưởng nấm bệnh Neoscytalidium dimidiatum Fusarium mơi trường PDA có chứa dịch chiết trichobrachin từ chủng Trichoderma sp TC25 theo độ pha loãng (2X, 4X, 6X, 8X) .51 iii Danh sách hình Hình trang Hình Hình thái màu sắc chủng Trichoderma sp Hình Cơ sở liệu CPD (comprehensive Peptaibiotics DatabaseStoppacher, 2013) Hình Cấu trúc phân tử alamethicin Hình Tác động ức chế theo độ pha loãng khác M2 C chrysosperma YL sau ngày nuôi cấy tỉ lệ pha loãng (2, 4, 6, 8, 16) hình (A) (B) 10 Hình Phổ peptaibol trichobrachin thu từ T longibrachiatum 13 Hình phổ MS-HPCL peptaibol Trichoderma .13 Hình Hệ thống bioreactor gắn với DCU 14 Hình Sơ đồ tách chiết trichobrachin 18 Hình Hệ thống lên men quy mơ pilot Trung tâm Ươm tạo Doanh nghiệp Nông nghiệp CNC .20 Hình 10 Hình thái ba chủng Trichoderma sp có khả sinh trichobrachin mơi trường thạch PDA 23 Hình 11 Các chủng nấm Trichodema TC25, TC15, TC8 ni cấy môi trường lỏng PD máy lắc (250C, 160v/p), sau ngày ni cấy 23 Hình 12 Dịch canh trường Trichoderma lọc qua hệ thống lọc tiếp tuyến24 Hình 13 Thu nhận hỗn hợp trichobrachin máy cô quay chân không chiết suất với butanol tinh với methanol/chloroform 25 iv Hình 14 Phân tích phổ IR alamethicin trichobrachin chủng Trichoderma TC25, TC15, TC8 hệ thống chạy phổ IR 27 Hình 15: Phổ HPLC – UV almethicin bước sóng 215nm 27 Hình 16: Phổ HPLC – UV chủng TC8 bước sóng 215nm 28 Hình 17: Phổ HPLC – UV chủng TC15 bước sóng 215nm 29 Hình 18: Phổ HPLC – UV chủng TC25 bước sóng 215nm 29 Hình 19 phổ phân tích LC-MS chủng TC8 36 Hình 20: so sánh trình tự trichobrachin chủng Trichoderma TC8 37 Hình 21: phổ phân tích LC-MS chủng TC15 39 Hình 22: so sánh trình tự trichobrachin chủng Trichoderma TC15 40 Hình 23: Phổ phân tích LC-MS chủng TC25 45 Hình 24: so sánh trình tự trichobrachin chủng Trichoderma TC25 46 Hình 25 Chủng TC25 ni mơi trường có bổ sung axit amin tổng hợp sau ngày nhân nuôi 51 Hình 26 Nấm bệnh Neoscytalidium dimidiatum mọc mơi trường PDA có chứa dịch chiết trichobrachin từ chủng Trichoderma sp TC25 theo nồng độ pha loãng (đối chứng, 2X, 4X, 6X, 8X) sau ngày ni cấy 52 Hình 27 Nấm bệnh Fusarium mọc mơi trường PDA có chứa dịch chiết Trichobrachin từ chủng Trichoderma theo độ pha loãng (đối chứng, 2X, 4X, 6X, 8X) sau ngày nuôi cấy 53 v TÓM TẮT Nhiệm vụ KHCN cấp sở “ Sản xuất thử nghiệm chế phẩm sinh học chứa Trichobrachin để phòng trừ số loại nấm bệnh gây hại trồng” gồm giai đoạn Giai đoạn thực sàng lọc chủng Trichoderma chứa trichobrachin xác định hoạt tính kháng số loại nấm phịng thí nghiệm Giai đoạn xác định thành phần, yếu tố tác động đến hoạt tính kháng nấm phương pháp sắc kí khảo sát thành phần dinh dưỡng ảnh hưởng đến khả sinh tổng hợp trichobrachin quy mô pilot Kết nghiên cứu giai đoạn cho thấy từ 20 chủng Trichoderma sp sưu tầm sưu tập giống trường Đại học Cơng nghệ Tp Hồ Chí Minh – HUTECH sàng lọc chủng nấm TC8, TC15, TC25 cho hàm lượng trichobrachin sau tách chiết từ 250ml dịch nuôi nấm là: 3,6g/l, 4,4 g/L 4,6g/L Xây dựng quy trình tách chiết trichobrachin : nhân nuôi Trichoderma đĩa petri (môi trường PDA, nuôi ngày, 260C), sau cấy chuyển sang 250ml môi trường PD lỏng lắc (nuôi ngày, tốc độ lắc:160 vòng/ phút) Tiếp theo loại bỏ tế bào lọc tiếp tuyến thu 250ml dịch lọc, đem kết tủ với 750ml butanol để 48 nhiệt độ phịng Sau phân đoạn 750 ml butanol thu ống chiết cô máy cô quay chân không (áp suất chân không 50mbar, tốc độ quay 50 vòng/phút, nhiệt độ 60 0C) để thu chiết xuất thô làm bay để thu phân đoạn dạng khô dịch chiết trichobrachin Dịch chiết trichobrachin bổ sung vào tích mơi trường PDA theo tỉ lệ 2X, 4X, 6X, 8X cho kết đối kháng cao với chủng nấm bệnh Thanh chủng vi TC25 với tỉ lệ bổ sung vào tích mơi trường PDA tốt 2X với tỉ lệ ức chế nấm bệnh Neoscytalidium dimidiatum 93,86% tỉ lệ ức chế nấm Fusarium đạt 94,08% Kết giai đoạn xác định hoạt chất kháng nấm phân tử peptailbol thành phần dịch chiết thô trichobrachin Từ kết phân tích HPCL-UV bước sóng 215 cho thấy chủng TC8, TC15 TC25 có khả sinh tổng hợp loại trichobrachin khác nhau, chủng TC15 có khả sinh tổng hợp trichobrachin cao chiếm 13,57% chủng TC8 TC25 có 9,4% 4,4% tương ứng tổng dịch chiết thơ thu Các trình tự phân tích so sánh ngân hang liệu peptaibol CPD qua phân tích trình tự amino acid từ phổ LC-MS với xuất trình tự chủng TC8 Aib-Ala-Ala-X-Aib-Ala-X-X-X-Aib-Gly-XXXXX cho thấy peptaibols thuộc nhóm trichobrachin I1, trichobrachin I2 có 19 aminoacid trichobrachin II03 có chứa 20aa lồi Trichoderma parceramosum sinh tổng hợp; chủng TC25: Aib-Asn-X-X-Aib-Pro-X-X-Aib-Pro-Valol-XXXXX peptaibols thuộc nhóm hazianin có chứa 14 aa chủ yếu loài Trichoderma harzianum sinh tổng hợp, ngoại trừ chủng trichovirin Trichoderma viride Trong đó, chủng TC15 với trình tự dự đốn Aib-Asn-X-X-Aib-Pro-X-X-Aib-Pro-ValolXXXXX…chưa thể kết luận peptailbol thuộc nhóm tổng số 23 trình tự tương đồng: chúng đa số peptailbol chứa 11aa chủ yếu loài Trichoderma parceramosum sinh tổng hợp, ngoại trừ hazianin PCU4 có trình tự 14aa Trichoderma hazianum Đề tài khảo sát ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng bổ sung acid amin tổng hợp có ảnh hưởng đến khả sản xuất chế phẩm sinh học chứa trichobrachin Trong đó, bổ sung g/L axit amin tổng hợp 6,15g/L vii Trichichorbachin thô tăng 1,5 lần so với môi trường không bổ sung chủng TC25 THÔNG TIN CHUNG Tên nhiệm vụ: Sản xuất thử nghiệm chế phẩm sinh học chứa trichobrachin để phòng trừ số loại nấm bệnh gây hại trồng Chủ nhiệm Họ tên: Nguyễn Duy Long Năm sinh: 1981 Học vị: Thạc sĩ Nam/Nữ: nam Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Năm đạt học vị: 2010 Chức vụ: Phó trưởng phịng Hỗ trợ cơng nghệ vi sinh Tên quan công tác: Trung tâm Ươm tạo Doanh nghiệp Nông nghiệp Công nghệ cao Địa quan: Ấp 1, xã Phạm Văn Cội, huyện Củ Chi, Tp.HCM Điện thoại quan: 08 62646103 Fax: 08 62646104 Địa nhà riêng: 201, Nguyễn Văn Khạ, ấp Cây Trắc, xã Phú Hịa Đơng, huyện Củ Chi, TP.HCM Điện thoại: 0909.909.776 Email: duylong@abi.com.vn Cơ quan chủ trì Trung tâm Ươm tạo Doanh nghiệp Nông nghiệp Công nghệ cao Điện thoại: 08.62646103 Fax: 08.62646104 E-mail: info@abi.com.vn Website: www.abi.com.vn Địa chỉ: ấp 1, xã Phạm Văn Cội, huyện Củ Chi, Tp HCM Văn phòng giao dịch: 499, Cách mạng Tháng 8, phường 13, quận 10, Tp HCM Thời gian thực hiện: từ tháng 1/2018 đến tháng 12/2018 viii Đối với chủng nấm bệnh Neoscytalidium dimidiatum, sau ngày nuôi cấy nồng độ pha loãng trichobrachin thu chủng nấm Trichoderma khác gây ức chế khác phát triển nấm Neoscytalidium dimidiatum môi trường thạch dĩa Trong công thức đối chứng không chứa dịch chiết trichobrachin nấm bệnh phát triển tốt bao phủ bề mặt môi trường thạch đĩa 100% Ở nồng độ pha loãng 2X, sản phẩm trichobrachin thu nấm TC25 ức chế tốt (đạt 93,7%) so với nồng độ pha lỗng cịn lại Ở nồng độ pha loãng cao, tỷ lệ đối kháng giảm, thấp tỷ lệ pha loãng 8X với phần trăm đối kháng cịn 21,7% Hình 26 Nấm bệnh Neoscytalidium dimidiatum mọc mơi trường PDA có chứa dịch chiết trichobrachin từ chủng Trichoderma sp TC25 theo nồng độ pha loãng (đối chứng, 2X, 4X, 6X, 8X) sau ngày nuôi cấy Đối với nấm bệnh Fusarium, dịch chiết trichobrachin từ chủng Trichoderma sp TC25 nồng độ pha lỗng thích hợp cho ức chế sinh trưởng nấm bệnh tốt Theo bảng 3.4 nồng độ 2X, tỷ lệ ức chế cao mức 93,1 %, nồng độ pha lỗng tăng dần tỷ lệ giảm dần xuống mức thấp 21,4% (nồng độ pha loãng 8X) 52 Như dịch chiết trichobrachin chủng nấm Trichoderma sp TC25 từ dịch chiết lên men cho khả kháng bệnh tốt nấm bệnh Neoscytalidium dimidiatum Fusarium với tỷ lệ đối kháng nồng độ thích hợp 93% (trong quy mơ phịng thí nghiệm) Hình 27 Nấm bệnh Fusarium mọc mơi trường PDA có chứa dịch chiết Trichobrachin từ chủng Trichoderma theo độ pha loãng (đối chứng, 2X, 4X, 6X, 8X) sau ngày nuôi cấy Kandasamy cộng (2017) báo cáo Trichoderma đặc hiệu cho vi khuẩn gây bệnh ứng dụng thực tế thành cơng Trichobrachin từ Trichoderma sp tác nhân cho hiệu Do đó, nhóm tác giả sàng lọc tổng cộng 100 Trichoderma phân lập chống lại Fusarium graminearum, chọn Trichoderma harzianum (CCTCC-RW0024) cho thí nghiệm nhà kính nghiên cứu ảnh hưởng phát triển bắp ngơ kiểm sốt sinh học bênh thối rễ Các chủng CCTCC-RW0024 có hoạt tính đối kháng cao (96,30%), giảm bệnh (86,66%) Kết nghiên cứu nhóm tác giả với kết nghiên cứu khẳng định hiệu kháng bệnh nấm Fusarium gây dịch chiết trichobrachin nấm Trichoderma Đây minh chứng chứng minh hữu ích việc sử dụng Trichoderma tác nhân phịng trừ sinh học mang tính ổn định, bền vững cho hiệu cao 53 CHƯƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 4.1 Kết luận Kết giai đoạn xác định hoạt chất kháng nấm phân tử peptailbol thành phần dịch chiết thô trichobrachin Từ kết phân tích HPCL-UV bước sóng 215 cho thấy chủng TC8, TC15 TC25 có khả sinh tổng hợp loại trichobrachin khác nhau, chủng TC15 có khả sinh tổng hợp trichobrachin cao chiếm 13,57% chủng TC8 TC25 có 9,4% 4,4% tương ứng tổng dịch chiết thô thu Các trình tự phân tích so sánh ngân hang liệu peptaibol CPD qua phân tích trình tự amino acid từ phổ LC-MS với xuất trình tự chủng TC8 Aib-Ala-Ala-X-Aib-Ala-X-X-X-Aib-Gly-XXXXX cho thấy peptaibols thuộc nhóm trichobrachin I1, trichobrachin I2 có 19 aminoacid trichobrachin II03 có chứa 20aa loài Trichoderma parceramosum sinh tổng hợp; chủng TC25: Aib-Asn-X-X-Aib-Pro-X-X-Aib-Pro-Valol-XXXXX peptaibols thuộc nhóm hazianin có chứa 14 aa chủ yếu loài Trichoderma harzianum sinh tổng hợp, ngoại trừ chủng trichovirin Trichoderma viride Trong đó, chủng TC15 với trình tự dự đốn Aib-Asn-X-X-Aib-Pro-X-X-AibPro-Valol-XXXXX…chưa thể kết luận peptailbol thuộc nhóm tổng số 23 trình tự tương đồng: chúng đa số peptailbol chứa 11aa chủ yếu loài Trichoderma parceramosum sinh tổng hợp, ngoại trừ hazianin PCU4 có trình tự 14aa lồi Trichoderma hazianum Mơi trường thích hợp lên men hệ thống bioreactor 100l cho ba chủng Trichoderma TC8, TC15 TC25 có bổ sung g/L axit amin tổng hợp amin tổng hợp có khả tăng hàm lượng trichichorbachin thu từ 4,6g/L 6,15g/L (tăng 1,5 lần so với môi trường không bổ sung); chủng 54 Trichoderma TC15, tăng 1,25 lần từ 4,4g/L - 5,52g/L Trichoderma TC8 tăng 1,33 lần từ 3,6g/L lên 4,8g/L 4.2 Kiến nghị - Triển khai sản xuất tạo sản phẩm thử nghiệm ứng dụng loại trồng long số loài dễ bị nhiễm bệnh với nấm Fusarium sp - Tiếp tục khảo sát phân đoạn peak số kết phân tích HPLC - UV để làm rõ vai trò thành phần chứa trichobrachin chủng Trichoderma TC8, Trichoderma TC15 Trichoderma 25, làm sở để phối hợp trichobrachin chủng ứng dụng bệnh cụ thể gây bệnh trồng - Định danh tới mức loài chủng Trichoderma TC8, Trichoderma TC15 Trichoderma 25, củng cố sở liệu giống nấm có ích Việt Nam làm sở để bảo vệ quyền đăng ký sản xuất chế phẩm sinh học trichobrachin 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO Baek Jong-Min, C R Howell, Charles M Kenerley (1998), “The role of an extracellular chitinase from Trichoderma virens Gv29-8 in the biocontrol of Rhizoctonia solani”, Curr Genet, Vol 35, pp 41-50 Brukner H, Reinecke C, Kripp T 1993 4th International Congress of Plant Pathology, pp 2918-2921 Chen K, Yang HT, Li JS 2007 Analysis of chemical components and antifungal activity of extraction from conidia of Trichoderma viride Ltr-2 J Microbiol 34: 455-458 Chen 1,2,3., 2017 Effect of Trichoderma harzianum on maize rhizosphere microbiome and biocontrol of Fusarium Stalk rot Dennis C, Webster J 1971 Antagonistic properties of species-groups of Trichoderma: iii hyphal interaction Trans Br Mycol Soc 57: 363-369 Druzhinina S I et al (2006), “The first 100 Trichoderma species characterized by monecular data”, Mycoscience, 47, pp 55-64 D Ezra, O Liarzi, T Gat, and M Hershcovich (2013), First Report of Internal Black Rot Caused by Neoscytalidium dimidiatum on Hylocereus undatus (Pitahaya) Fruit in Israel, Volume 97, Number 11 Howell C R (2002), “Mechanisms employed by Trichoderma spp in the biological control of plant diseases: the history and evolution of current concepts”, Plant Diseases, 87(1), pp 4-10 Kandasamy Saravanakumar,#1,2,3 Yaqian Li, #1,2,3 Chuanjin Yu,1,2,3 Qiangqiang Wang,1,2,3 Meng Wang,1,2,3 Jianan Sun,1,2,3 Jin-xin Gao,1,2,3 and Jie 10 Li GH, Yang ZS, Zhao PJ, Zheng X, Luo SL, Sun R, et al 2011 Three new acorane sesquiterpenes from Trichoderma sp Ymf1.02647 Phytochem Lett 4: 8688 11 M S Salkinoja-Salonen., 2012 Microbiology, Department of Food and Environmental Science 56 12 Nguyễn Thành Hiếu cộng sự, 2014, Nghiên cứu xác định tác nhân, đặc điểm hình thái sinh học nấm Neoscytalidium dimidiatum gây bệnh đốm trắng Thanh Long (Hylocereus undatus), Hội thảo Quốc gia Bệnh hại thực vật Việt Nam 6-7/4/2014 13 Prasun K and R Kanthadai (1997), “Effect of temperature an ortagonistic and biocontrol potential of Trichoderma spp on Scerotium rolfsii”, Mycopathology, 139, pp 151-155 14 Phan Thị Thu Hiền cộng sự, 2014, Nghiên cứu định danh khảo sát đặc điểm sinh học tác nhân gây bệnh đốm trắng hại Thanh Long (Hylocereus undatus), Hội thảo Quốc gia Bệnh hại thực vật Việt Nam 6-7/4/2014 15 Roiger D J, Jeffers S N., Caldwell R W (1991), “Occurrence of Trichoderma species in apple orchard and wooland soil”, Soil Biol Biochems, 23, pp 353-359 16 Raimo Mikkola, Maria A Andersson, László Kredics, Pavel A Grigoriev, Nina Sundell, Mirja S Salkinoja-Salonen, 2012., 20-Residue and 11-residue peptaibols from the fungus Trichoderma longibrachiatum are synergistic in forming Na+/K+permeable channels and adverse action towards mammalian cells FEBS Journal 17 Ruiz N, Wielgosz-Collin G , Poirier L , Grovel O , Petit KE , Mohamed, Benkada M , du Pont TR , Bissett J , Vérité P , Barnathan G , Pouchus YF., 2007 New Trichobrachin s, 11-residue peptaibols from a marine strain of Trichoderma longibrachiatum 18 Samuels G J (2000), “Trichoderma systematic, the sexual state and ecology”, Phytopathology, 96, pp 195-206 19 Stoppacher N, Kluger B, Zeilinger S, Krska R, Schuhmacher R 2010 Identification and profiling of volatile metabolites of the biocontrol fungus Trichoderma atroviride by Hs-SpmeGc-Ms J Microbiol Methods 81: 187-193 20 Sun CY, Pan J, Chen XL 2002 Screen of biocontrol Trichoderma spp inhibiting Pseudomonas solanacearum of ginger and its mechanism J Shandong Univ 37: 373-376 57 21 Toyama, Hideo (1995), “Intra species karyoduction in Trichoderma reesei QM 9414 using the smaller nuclei”, Journal of Biotechnology, 39(1), pp 35-40 22 Weindling R (1932), “Trichoderma lignorum as a parasite of other fungi”, Phytopathology, 22, pp 837-845 23 Zoltan Nasztora, J.nos Horv.tha, Bal.zs Leitgeb (2015), Studying the Structural and Folding Features of Long-Sequence Trichobrachin Peptides, Chemistry & Biodiversity, Vol 12, pp.1365-1378 58 PHỤ LỤC Kết xử lý thống kê – khối lượng trichobrachin thu từ ba chủng nấm TC8, TC15 TC25 Chủng nấm TC8 The ANOVA Procedure Dependent Variable: N DF Model 5.00431429 0.83405238 14 0.37940000 0.02710000 Error Corrected Total 20 T Mean Square Coeff Var Root MSE 0.929528 7.892777 0.164621 DF F Value Pr > F 30.78 F 31.13 F F 46.23 F F 13.24 F F 13.15 F F 13.15 F 0.1468 100 A A A A A A A A Pr > F 6.67998095 R-Square Source Kratio Sum of Squares Source B B B B B A A A 3.0867 PD+A5 2.8333 YE 2.6233 PD ngày The ANOVA Procedure Dependent Variable: N Sum of Squares Source DF Model 2.94958095 0.49159683 14 1.39700000 0.09978571 Error Corrected Total 20 Coeff Var Root MSE 0.678598 5.673678 0.315889 DF T F Value 4.93 0.0066 Anova SS 2.94958095 N Mean 5.567619 Mean Square 0.49159683 F Value 4.93 Error Degrees of Freedom 14 Error Mean Square 0.099786 F Value 4.93 Critical Value of t 3.24686 Minimum Significant Difference 0.5795 Means with the same letter are not significantly different Waller Grouping Mean A A A A A C A C A C C D C D C D C D D 6.1600 5.9167 N T PD+A3 PD+A4 5.6633 PD+A2 5.6233 PD+A5 5.4467 PD+A1 5.1567 5.0067 3 ngày The ANOVA Procedure Dependent Variable: N 65 YE PD Pr > F 0.0066 100 B B B B B B B Pr > F 4.34658095 R-Square Source Kratio Mean Square DF Model 2.79302857 0.46550476 14 1.41080000 0.10077143 Error Corrected Total 20 Mean Square Coeff Var Root MSE 0.664401 5.691896 0.317445 DF T F Value 4.62 0.0086 Anova SS 2.79302857 N Mean 5.577143 Mean Square 0.46550476 F Value 4.62 Error Degrees of Freedom 14 Error Mean Square 0.100771 F Value 4.62 Critical Value of t 2.26882 Minimum Significant Difference 0.5881 Means with the same letter are not significantly different Waller Grouping Mean A A A A A C A C A C C D C D C D C D D 6.1533 5.9033 N T PD+A3 PD+A4 5.6833 PD+A2 5.6333 PD+A5 5.4733 PD+A1bcd 5.1500 5.0433 3 66 YE PD Pr > F 0.0086 100 B B B B B B B Pr > F 4.20382857 R-Square Source Kratio Sum of Squares Source
Ngày đăng: 05/10/2023, 20:12
Xem thêm:
