Hoàn thiện quy trình sản xuất chế phẩm sinh học phân hủy 2 4 dichlorophenoxyacetic acid 2 4 d trong thuốc trừ cỏ từ vi khuẩn cupriavidus sp

BAN QUẢN LÝ KHU NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP.HCM TRUNG TÂM ƯƠM TẠO DOANH NGHIỆP NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO TỔNG KẾT NHIỆM VỤ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ HỒN THIỆN QUY TRÌNH SẢN XUẤT CHẾ PHẨM SINH HỌC PHÂN HỦY 2,4-DICHLOROPHENOXYACETIC ACID (2,4-D) TRONG THUỐC TRỪ CỎ TỪ VI KHUẨN Cupriavidus sp THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 12/2016 BAN QUẢN LÝ KHU NƠNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP.HCM TRUNG TÂM ƯƠM TẠO DOANH NGHIỆP NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO TỔNG KẾT NHIỆM VỤ KHOA HỌC CƠNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ HỒN THIỆN QUY TRÌNH SẢN XUẤT CHẾ PHẨM SINH HỌC PHÂN HỦY 2,4-DICHLOROPHENOXYACETIC ACID (2,4-D) TRONG THUỐC TRỪ CỎ TỪ VI KHUẨN Cupriavidus sp CƠ QUAN CHỦ TRÌ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) CHỦ NHIỆM (Ký ghi rõ họ tên) Nguyễn Ngọc Duy Huỳnh Xuân Vũ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 12/2016 MỤC LỤC DANH SÁCH HÌNH iii DANH SÁCH BẢNG iv PHẦN MỞ ĐẦU 1 Thông tin dự án Tính cấp thiết dự án Mục tiêu dự án 4 Phạm vi thực dự án CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU Sơ lược tình hình sử dụng thuốc Bảo vệ thực vật (BVTV) Việt Nam Tồn dư thuốc BVTV môi trường Một số đặc tính 2,4 -Dichlorophenoxyacetic acid (2,4–D) Ảnh hưởng 2,4-D lên loại sinh vật Một số phương pháp xử lý chất độc hóa học có 2,4-D Vi khuẩn Cupriavidus sp CHƯƠNG II VẬT LIỆU VÀ NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 11 Địa điểm, thời gian vật liệu nghiên cứu 11 1.1 Địa điểm thời gian thực 11 1.2 Vật liệu, thiết bị 11 1.3 Môi trường 11 Nội dung nghiên cứu 13 2.1 Khảo sát khả phân hủy 2,4-D vi khuẩn Cupriavidus sp phịng thí nghiệm 13 2.2 Sản xuất chế phẩm sinh học từ vi khuẩn Cupriavidus sp 14 2.3 Đánh giá khả phân hủy 2,4 D thuốc diệt cỏ chế phẩm 16 Xử lý số liệu 17 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 18 Khảo sát khả phân hủy 2,4-D vi khuẩn Cupriavidus sp phịng thí nghiệm 18 Sản xuất chế phẩm sinh học từ vi khuẩn Cupriavidus sp 21 Đánh giá khả phân hủy 2,4 D thuốc diệt cỏ chế phẩm 24 Sản phẩm dự án 26 Nhu cầu thị trường chế phẩm 26 i CHƯƠNG IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 28 Kết luận 28 Kiến nghị 30 PHỤ LỤC 31 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 ii DANH SÁCH HÌNH Hình 1: Cấu tạo hóa học 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid Hình 2: Con đường chuyển hóa 2,4-D chủng vi khuẩn Cupriavidus sp 10 Hình 3: (a) Hình thái giống gốc (b) hình thái giống nhân sinh khối MSM + Dglucose nhuộm gram quan sát kính hiển vi 18 Hình 4: (a) Dịch sinh khối Cupriavidus sp (b) hình thái vi khuẩn quan sát kính hiển vi 18 Hình 5: Cupriviadus sp ni mơi trường MSM có chứa 2,4-D điều kiện phịng thí nghiệm 19 Hình 6: Cupriviadus sp ni đất điều kiện phịng thí nghiệm 21 Hình 7: (a) Dịch lên men vi khuẩn Cupriavidus sp theo quy trình I (b) chế phẩm phối trộn từ dịch lên men 22 Hình 8: (a) Dịch lên men vi khuẩn Cupriavidus sp theo quy trình II (b) chế phẩm phối trộn từ dịch lên men 22 Hình Thuốc trừ cỏ 2,4-D 24 Hình 10 Bố trí thí nghiệm đánh giá khả phân hủy 2,4-D thuốc trừ cỏ chế phẩm 24 iii DANH SÁCH BẢNG Bảng 1: Liều độc 2,4-D Bảng 2: Hiệu suất phân hủy 2,4-D vi khuẩn Cupriavidus sp môi lỏng 19 Bảng 3: Hiệu suất phân hủy 2,4-D vi khuẩn Cupriavidus sp đất 20 Bảng Mật số vi sinh chế phẩm sau tháng bảo quản 23 Bảng 5: Chi phí sản xuất chế phẩm theo hai quy trình 23 Bảng 6: Hiệu suất phân hủy 2,4-D chế phẩm sinh học 24 Bảng Sự biến động lượng vi khuẩn phân hủy 2,4-D 26 iv PHẦN MỞ ĐẦU Thông tin dự án Chủ nhiệm Ho ̣ tên: Nguyễn Ngọc Duy Năm sinh: 1989 Học vị: Cử nhân Nam/Nữ: nam Chuyên ngành: Công nghê ̣ sinh ho ̣c Năm đa ̣t ho ̣c vi:̣ 2011 Chức vụ: Chun viên phịng Hỗ trợ cơng nghệ vi sinh Tên quan công tác: Trung tâm Ươm tạo Doanh nghiệp Nông nghiệp Công nghệ cao Địa quan: Ấp 1, xã Phạm Văn Cội, huyện Củ Chi, Tp.HCM Điện thoại quan: 08 62646103 Fax: 08 62646104 Điạ chỉ nhà riêng: 95, đường 490, ấ p 2, xã Phạm Văn Cô ̣i, huyê ̣n Củ Chi, TP.HCM Điện thoại: 01683290994 Email: ngocduy89@hotmail.com Chủ nhiệm Ho ̣ tên: Huỳnh Xuân Vũ Năm sinh: 1990 Học vị: Kỹ sư Nam/Nữ: Nam Chuyên ngành: Công nghê ̣ sinh ho ̣c Năm đa ̣t ho ̣c vi:̣ 2013 Chức vụ: Chuyên viên phịng Hỗ trợ cơng nghệ vi sinh Tên quan công tác: Trung tâm Ươm tạo Doanh nghiệp Nông nghiệp Công nghệ cao Địa quan: Ấp 1, xã Phạm Văn Cội, huyện Củ Chi, Tp.HCM Điện thoại quan: 08 62646103 Fax: 08 62646104 Điạ chỉ nhà riêng: lầu 2, 290 Nguyễn Công Trứ, Quận 1, Tp.HCM Điện thoại: 0933224221 Email: btiu08082@gmail.com Cơ quan chủ trì: Trung tâm Ươm tạo Doanh nghiệp Nông nghiệp Công nghệ cao Cán phối hợp chính: Họ tên TT (Học vị chức danh KH) ThS Nguyễn Chuyên Cơ quan ngành công tác Công nghệ sinh học Duy Long ThS.Nguyễn Thi ̣ Hồ ng Tuyề n Hóa sinh Duy thực phẩ m CN Thạch Thị Công nghệ sinh học Thảo CN gia đề tài Trung tâm Ươm tạo Doanh nghiệp Nông nghiệp Công nghệ cao TP.HCM nghiệp Nông nghiệp Công nghệ cao TP.HCM Công nghệ CN Lâm Ngọc nhận tham Trung tâm Ươm tạo Doanh KS Nguyễn Tiến Hồng Loan Chữ ký xác Trung tâm Ươm tạo Doanh nghiệp Nông nghiệp Công nghệ cao TP.HCM Trung tâm Ươm tạo Doanh nghiệp Nông nghiệp Công nghệ cao TP.HCM Trung tâm Ươm tạo Doanh Sinh học nghiệp Nông nghiệp Công nghệ cao TP.HCM Huỳnh Phương Anh Công nghệ sinh học Trung tâm Ươm tạo Doanh nghiệp Nơng nghiệp Cơng nghệ cao TP.HCM Tính cấp thiết dự án Nước ta nước nông nghiệp có khí hậu nhiệt đới nên có nhiều điều kiện thuận lợi cho trồng cũng cỏ dại, loại sâu bệnh phát triển Trước sản xuất nông nghiệp nước ta lạc hậu, suất trồng thấp so với nhiều nước khác Để nâng cao suất trồng nhiều biện pháp khác sử dụng, có thuốc bảo vệ thực vật (BVTV) cũng góp phần nâng cao suất cách hữu hiệu Theo ước tính từ năm 1976-1980 bình qn nước năm sử dụng 5.100 thuốc BVTV, năm 1985 khoảng 22.000 Đặc biệt năm 1998 sử dụng 42.000 tấn, với khoảng 200 loại thuốc trừ sâu, 100 loại thuốc trừ bệnh, diệt cỏ, diệt chuột sử dụng (Nguyễn Thị Kim Cúc, 2004) Việc sử dụng thuốc trừ cỏ trở nên phổ biến, có 2,4-D sử dụng cách rộng rãi Việt Nam giới Tồn song song với ưu điểm việc sử dụng thuốc BVTV vấn đề tồn dư tác động xấu đến người mơi trường Những vụ ngộ độc cấp tính ăn rau có dư lượng thuốc BVTV cao xảy liên tục năm qua nhiều địa phương nước Việc dư lượng 2,4-D thuốc BVTV tăng cao ảnh hưởng trực tiếp lên sinh trưởng phát triển trồng vật nuôi, làm giảm chất lượng nông sản gây tổn thất kinh tế nghiệm trọng Bên cạnh đó, dư lượng 2,4-D cịn ảnh hưởng trực tiếp đến sức khỏe người, đặc biệt người nông dân người sử dụng nông sản Do đó, việc giảm dư lượng 2,4-D mơi trường nhằm làm giảm, hạn chế ảnh hưởng tiêu cực đến xã hội kinh tế nông nghiệp điều thiết yếu Với xu hội nhập phát triển, Việt Nam gia nhập tổ chức thương mại giới WTO, Ký Hiệp định Đối tác xuyên Thái Bình Dương TPP,…mở hội phát triển cho lĩnh vực kinh tế nước, có Nơng nghiệp Bên cạnh hội thuận lợi thách thức không nhỏ cho nông nghiệp nước nhà, phải đảm bảo tiêu chuẩn chất lượng sản phẩm nơng nghiệp, có dư lượng thuốc BVTV nơng sản cũng mơi trường Vì phát triển nông nghiệp theo hướng bền vững xu hướng tất yếu Hiện công nghệ xử lý 2,4-D đất hạn chế, phương pháp xử lý vấp phải vấn đề tính kinh tế vấn đề mơi trường lâu dài Sử dụng vi sinh vật việc xử lý ô nhiễm môi trường, phân hủy chất độc hại công nghệ đem lại hiệu cao, tốn bền vững Từ trạng sử dụng thuốc BVTV trên, việc xử lý dư lượng 2,4-D môi trường điều cần thiết để đảm bảo nông nghiệp bền vững nước ta Trong có việc sử dụng chủng vi sinh vật có khả cải tạo chất lượng đất nước tập trung nghiên cứu Tiến sĩ Nguyễn Thị Kim Cúc với đề tài “Nghiên cứu công nghệ sản xuất chế phẩm vi sinh ứng dụng xử lý tồn dư thuốc bảo vệ thực vật” xác định khả phân hủy 2,4-D số vi sinh vật điều kiện cho trình lên men chủng vi khuẩn có hoạt tính phân giải 2,4D phịng thí nghiệm Nhưng nghiên cứu thực khảo sát phịng thí nghiệm, quy mơ nhỏ quy trình sản xuất phức tạp phải trải qua trình tiếp hợp chủng vi khuẩn khác nên khả ứng dụng thực tiễn chưa cao Kế thừa thành nghiên cứu đó, dự án “Hồn thiện quy trình sản xuất chế phẩm sinh học phân hủy 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) thuốc trừ cỏ từ vi khuẩn Cupriavidus sp.” thực nhằm hoàn thiện quy trình sản chế phẩm phục vụ cho việc xử lý dư lượng 2,4-D mơi trường góp phần xây dựng nông nghiệp bền vững nước ta Dự án kế thừa kết nghiên cứu từ phát triển thêm thử nghiệm thực tế đồng ruộng hoàn thiện quy trình sản xuất chế phẩm quy mơ nhà xưởng Mục tiêu dự án Hoàn thiện quy trình sản xuất chế phẩm từ vi khuẩn Cupriavidus sp có khả phân hủy 2,4-D từ thuốc trừ cỏ đất Phạm vi thực dự án Trong phạm vi thực dự án với giới hạn mặt thời gian cũng kinh phí nên dự án thực khảo sát mật độ vi khuẩn chế phẩm sau tháng; khảo sát khả phân hủy 2,4-D chế phẩm đất thực lơ thí nghiệm diện tích nhỏ Kiến nghị - Thúc đẩy giới thiệu quảng bá công nghệ sản phẩm tới doanh nghiệp sản xuất nhằm chuyể n giao công nghê ̣ sản cho các doanh nghiê ̣p, cá nhân mở rô ̣ng quy mơ sản x́ t - Bố trí thử nghiệm sản phẩm vùng địa lý khác, cũng thử nghiệm sử dụng giống nội địa thay cho giống nhập 30 PHỤ LỤC Phụ lục I: Quy trình sản xuất chế phẩm Sơ đồ quy trình Vi khuẩn Cupriavidus sp Nhân sinh khối Lên men Thu sinh khối & kiểm tra mật số vi khuẩn Phối trộn Xay mịn Đóng gói 31 Mơi trường lên men: * Mơi trường Rỉ đường: (g/l) Rỉ đường 20 K2HPO4 MgSO4.7H2O Nước cất 1000ml NH4Cl * Nhiệt độ: 30-320C * pH: 7,2 Thuyết minh quy trình Bước 1: Nhân sinh khối Vi khuẩn nhân sinh khối môi trường LB bình tam giác 250ml, điều kiện lắc 125vịng/phút 300C 48h Bước 2: Lên men Bổ sung 100ml dịch sinh khối vào 10 lít mơi trường dùng cho việc lên men thu sinh khối Môi trường lên men môi trưởng Rỉ đường thay cho mơi trường MSM so với quy trình 1, lên men 300C 72h, pH 7,2 Bước 3: Phối trộn Dịch sinh khối kiểm tra mật số vi khuẩn trước khí dùng để phối trộn với chất mang Tỷ lệ phối trộn 1:5(dịch lên men:chất mang), Bước 4: Xay mịn Sau phối trộn chế phẩm sấy khô 450C 48h nghiền mịn máy xay Bước 5: Đóng gói Trước đóng gói mật độ vi sinh cuối kiểm tra, đạt mật số từ 108 – 109 CFU/g chế phẩm đóng gói Chế phẩm đóng gói nhiều dạng 200g/gói, 500g/gói, 1kg/gói bao 50kg tùy theo mục đích sử dụng 32 Phụ lục II: Kết phân tích thống kê khảo sát khả phân hủy 2,4-D vi khuẩn Cupriavidus sp phịng thí nghiệm Group Statistics NghiemThuc Nongdo2.4D N Mean Std Deviation Std Error Mean NT1 225,0000 4,00000 2,30940 NT2 12,2000 ,95394 ,55076 Independent Samples Test Levene's Test for Equality of t-test for Equality of Variances Means F Nongdo2.4D Equal variances assumed Sig t 2,152 ,216 Equal variances not assumed df 89,631 89,631 2,227 Independent Samples Test t-test for Equality of Means Std Error Sig (2-tailed) Nongdo2.4D Mean Difference Difference Equal variances assumed ,000 212,80000 2,37417 Equal variances not assumed ,000 212,80000 2,37417 Independent Samples Test t-test for Equality of Means 95% Confidence Interval of the Difference Lower Nongdo2.4D Upper Equal variances assumed 206,20826 219,39174 Equal variances not assumed 203,51969 222,08031 33 Descriptives NongDo2.4D 95% Confidence Interval for Mean N Mean Std Deviation Std Error Lower Bound Upper Bound NT1 208,0333 2,80951 1,62207 201,0541 215,0125 NT2 214,0000 1,76918 1,02144 209,6051 218,3949 NT3 26,3333 1,15470 ,66667 23,4649 29,2018 Total 149,4556 92,39452 30,79817 78,4348 220,4763 Descriptives NongDo2.4D Minimum Maximum NT1 205,10 210,70 NT2 212,40 215,90 NT3 25,00 27,00 Total 25,00 215,90 ANOVA NongDo2.4D Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 68269,269 34134,634 24,713 4,119 68293,982 F 8287,340 Sig ,000 Post Hoc Tests 34 Multiple Comparisons Dependent Variable: NongDo2.4D 95% Confidence Interval Mean Difference LSD (I) NghiemThuc (J) NghiemThuc NT1 NT2 -5,96667* 1,65708 ,011 -10,0214 NT3 181,70000* 1,65708 ,000 177,6453 NT1 5,96667* 1,65708 ,011 1,9119 NT3 187,66667* 1,65708 ,000 183,6119 NT1 -181,70000* 1,65708 ,000 -185,7547 NT2 -187,66667* 1,65708 ,000 -191,7214 NT2 NT3 (I-J) Std Error Sig Lower Bound Multiple Comparisons Dependent Variable: NongDo2.4D 95% Confidence Interval LSD (I) NghiemThuc (J) NghiemThuc NT1 NT2 -1,9119 NT3 185,7547 NT1 10,0214 NT3 191,7214 NT1 -177,6453 NT2 -183,6119 NT2 NT3 Upper Bound * The mean difference is significant at the 0.05 level 35 Phụ lục III: Số liệu thí nghiệm hồn thiện quy trình sản xuất chế phẩm sinh học từ vi khuẩn Cupriavidus sp QT1 Mật độ vi khuẩn sau phối trộn tháng (CFU/g) TB 7 1,4x10 1,5x10 1,5x10 1,5x107 QT2 1,6x107 Nghiệm thức 1,7x107 1,5x107 1,6x107 QT1 Mật độ vi khuẩn sau phối trộn tháng (CFU/g) TB 7 1,2x10 1,4x10 1,3x10 1,3x107 QT2 1,3x107 Nghiệm thức Thời gian Nghiệm thức NT1 1,2x107 1,2x107 1,2x107 Mật số vi khuẩn phân hủy 2,4-D (CFU/g) ngày TB ngày TB 1,0x102 1,2x102 1,4x102 1,2x102 0,5x102 0,7x102 0,8x102 0,7x102 NT2 1,5x103 1,6x103 1,4x103 1,6x103 1,1x103 1,3x103 1,2x103 1,2x103 NT3 2,3x103 2,2x103 2,1x103 2,3x103 1,8x103 1,5x103 1,6x103 1,6x103 NT4 NT1 2,6x103 2,8x103 2,9x103 2,8x103 1,8x103 1,8x103 2x103 1,9x103 ngày TB 10 ngày TB 2 2 3 1,4x10 1,5x10 1,5x10 1,5x10 1,2x10 1,1x10 1,2x10 1,2x103 NT2 1,8x103 1,7x103 1,8x103 1,8x103 1,6x104 1,5x104 1,5x104 1,5x104 NT3 2,7x103 2,4x103 2,6x103 2,6x103 2,3x104 2,1x104 2,4x104 2,3x104 NT4 NT1 2,9x103 2,9x103 2,8x103 2,9x103 2,8x104 2,8x104 2,7x104 2,8x104 15 ngày TB 1,1x103 1,0x103 1,2x103 1,1x103 NT2 2,3x104 2,0x104 2,3x104 2,2x104 NT3 1,4x105 1,2x105 1,2x105 1,3x105 NT4 1,6x105 1,7x105 1,6x105 1,6x105 Phụ lục IV: Kết phân tích thống kê Đánh giá khả phân hủy 2,4 D chế phẩm 36 Descriptives 95% Confidence Interval for Mean N Ban dau Sau 15 Sau 30 Mean Std Deviation Std Error Lower Bound NT1 51,2000 2,62869 1,51767 44,6700 NT2 52,0333 3,27159 1,88886 43,9062 NT3 50,8333 2,71539 1,56773 44,0879 NT4 53,4333 1,95021 1,12596 48,5887 Total 12 51,8750 2,51473 ,72594 50,2772 NT1 44,7000 ,45826 ,26458 43,5616 NT2 43,0667 2,55016 1,47234 36,7317 NT3 38,8000 1,35277 ,78102 35,4395 NT4 37,1667 2,55799 1,47686 30,8123 Total 12 40,9333 3,60059 1,03940 38,6456 NT1 40,1333 1,10151 ,63596 37,3970 NT2 31,2667 ,90738 ,52387 29,0126 NT3 26,0000 1,96977 1,13725 21,1068 NT4 23,5333 1,49778 ,86474 19,8127 Total 12 30,2333 6,75538 1,95011 25,9412 Descriptives 95% Confidence Interval for Mean Upper Bound Ban dau Minimum Maximum NT1 57,7300 49,30 54,20 NT2 60,1604 48,30 54,40 NT3 57,5787 48,30 53,70 NT4 58,2779 51,50 55,40 Total 53,4728 48,30 55,40 37 Sau 15 Sau 30 NT1 45,8384 44,20 45,10 NT2 49,4016 40,50 45,60 NT3 42,1605 37,50 40,20 NT4 43,5211 34,50 39,60 Total 43,2210 34,50 45,60 NT1 42,8696 39,00 41,20 NT2 33,5207 30,30 32,10 NT3 30,8932 24,40 28,20 NT4 27,2540 22,30 25,20 Total 34,5255 22,30 41,20 ANOVA Sum of Squares Ban dau Sau 15 Mean Square Between Groups 11,982 3,994 Within Groups 57,580 7,198 Total 69,563 11 112,433 37,478 30,173 3,772 Total 142,607 11 Between Groups 485,667 161,889 16,320 2,040 501,987 11 Between Groups Within Groups Sau 30 df Within Groups Total F Sig ,555 ,659 9,937 ,004 79,357 ,000 Post Hoc Tests Multiple Comparisons Mean Difference Dependent Variable (I) Nghiemthuc (J) Nghiemthuc Ban dau NT1 NT2 LSD (I-J) -,83333 Std Error 2,19051 Sig ,714 38 NT2 NT3 NT4 Sau 15 LSD NT1 NT2 NT3 NT4 Sau 30 LSD NT1 NT2 NT3 ,36667 2,19051 ,871 NT4 -2,23333 2,19051 ,338 NT1 ,83333 2,19051 ,714 NT3 1,20000 2,19051 ,599 NT4 -1,40000 2,19051 ,541 NT1 -,36667 2,19051 ,871 NT2 -1,20000 2,19051 ,599 NT4 -2,60000 2,19051 ,269 NT1 2,23333 2,19051 ,338 NT2 1,40000 2,19051 ,541 NT3 2,60000 2,19051 ,269 NT2 1,63333 1,58570 ,333 NT3 5,90000* 1,58570 ,006 NT4 7,53333* 1,58570 ,001 NT1 -1,63333 1,58570 ,333 NT3 4,26667* 1,58570 ,027 NT4 5,90000* 1,58570 ,006 NT1 -5,90000* 1,58570 ,006 NT2 -4,26667* 1,58570 ,027 NT4 1,63333 1,58570 ,333 NT1 -7,53333* 1,58570 ,001 NT2 -5,90000* 1,58570 ,006 NT3 -1,63333 1,58570 ,333 NT2 8,86667* 1,16619 ,000 NT3 14,13333* 1,16619 ,000 NT4 16,60000* 1,16619 ,000 NT1 -8,86667* 1,16619 ,000 NT3 5,26667* 1,16619 ,002 39 NT3 NT4 NT4 7,73333* 1,16619 ,000 NT1 -14,13333* 1,16619 ,000 NT2 -5,26667* 1,16619 ,002 NT4 2,46667 1,16619 ,067 NT1 -16,60000* 1,16619 ,000 NT2 -7,73333* 1,16619 ,000 NT3 -2,46667 1,16619 ,067 Multiple Comparisons 95% Confidence Interval Dependent Variable (I) Nghiemthuc (J) Nghiemthuc Ban dau NT1 NT2 -5,8847 4,2180 NT3 -4,6847 5,4180 NT4 -7,2847 2,8180 NT1 -4,2180 5,8847 NT3 -3,8513 6,2513 NT4 -6,4513 3,6513 NT1 -5,4180 4,6847 NT2 -6,2513 3,8513 NT4 -7,6513 2,4513 NT1 -2,8180 7,2847 NT2 -3,6513 6,4513 NT3 -2,4513 7,6513 NT2 -2,0233 5,2900 NT3 2,2434 9,5566 NT4 3,8767 11,1900 NT1 -5,2900 2,0233 NT3 ,6100 7,9233 LSD NT2 NT3 NT4 Sau 15 LSD NT1 NT2 Lower Bound Upper Bound 40 NT3 NT4 Sau 30 LSD NT1 NT2 NT3 NT4 NT4 2,2434 9,5566 NT1 -9,5566 -2,2434 NT2 -7,9233 -,6100 NT4 -2,0233 5,2900 NT1 -11,1900 -3,8767 NT2 -9,5566 -2,2434 NT3 -5,2900 2,0233 NT2 6,1774 11,5559 NT3 11,4441 16,8226 NT4 13,9108 19,2892 NT1 -11,5559 -6,1774 NT3 2,5774 7,9559 NT4 5,0441 10,4226 NT1 -16,8226 -11,4441 NT2 -7,9559 -2,5774 NT4 -,2226 5,1559 NT1 -19,2892 -13,9108 NT2 -10,4226 -5,0441 NT3 -5,1559 ,2226 * The mean difference is significant at the 0.05 level 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO Nước ngoài: Germaine, K J., Liu, X., Cabellos, G G., Hogan, J P., Ryan, D., & Dowling, D N (2006) Bacterial endophyte-enhanced phytoremediation of the organochlorine herbicide 2,4-dichlorophenoxyacetic acid FEMS Microbiology Ecology, 57(2), 302310 Germaine, K., Keogh, E., Garcia-Cabellos, G., Borremans, B., Lelie, D., Barac, T., Dowling, D N (2004) Colonisation of poplar trees by gfp expressing bacterial endophytes FEMS Microbiology Ecology, 48(1), 109-118 González, A., Gallego, A., Gemini, V., Papalia, M., Radice, M., Gutkind, G., Korol, S (2012) Degradation and detoxification of the herbicide 2,4- dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) by an indigenous Delftia sp strain in batch and continuous systems International Biodeterioration & Biodegradation, 66(1), 8-13 Han, L., Zhao, D., & Li, C (2015) Isolation and 2,4-D-degrading characteristics of Cupriavidus campinensis BJ71 Brazilian Journal of Microbiology Braz J Microbiol., 46(2), 433-441 He, Y., Xu, J., Tang, C., & Wu, Y (2005) Facilitation of pentachlorophenol degradation in the rhizosphere of ryegrass (Lolium perenne L.) Soil Biology and Biochemistry, 37(11), 2017-2024 Jacobsen, C.S (1997) Plant protection and rhizosphere colonization of barley by seed inoculated herbicide degrading Burkholderia (Pseudomonas) cepacia DB01 (pR0101) in 2,4-D contaminated soil Plant Soil, 189, 139-144 Mcguinness, M., & Dowling, D (2009) Plant-Associated Bacterial Degradation of Toxic Organic Compounds in Soil International Journal of Environmental Research and Public Health IJERPH, 6(8), 2226-2247 Moore, F P., Barac, T., Borremans, B., Oeyen, L., Vangronsveld, J., Lelie, D V., Moore, E R (2006) Endophytic bacterial diversity in poplar trees growing on a BTEX-contaminated site: The characterisation of isolates with potential to enhance phytoremediation Systematic and Applied Microbiology, 29(7), 539-556 42 Shaw, L J., & Burns, R G (2004) Enhanced Mineralization of [U-14C]2,4Dichlorophenoxyacetic Acid in Soil from the Rhizosphere of Trifolium pratense Applied and Environmental Microbiology, 70(8), 4766-4774 Zabaloy, M C., & Gómez, M A (2013) Isolation and characterization of indigenous 2,4-D herbicide degrading bacteria from an agricultural soil in proximity of Sauce Grande River, Argentina Ann Microbiol Annals of Microbiology, 64(3), 969974 Trong nước: Huong, N L., Itoh, K., & Suyama, K (2007) Diversity of 2,4- Dichlorophenoxyacetic Acid (2,4-D) and 2,4,5-Trichlorophenoxyacetic Acid (2,4,5T)-Degrading Bacteria in Vietnamese Soils Microbes and Environments Microb Environ., 22(3), 243-256 Huong, N L., Itoh, K., & Suyama, K (2008) 2,4-Dichlorophenoxyacetic Acid (2,4D)- and 2,4,5-Trichlorophenoxyacetic Acid (2,4,5-T)-Degrading Bacterial Community in Soil-Water Suspension during the Enrichment Process Microbes and Environments Microb Environ., 23(2), 142-148 Lê Kế Sơn, Nguyễn Xuân Nết, Phạm Ngọc Cảnh, Nguyễn Văn Minh, Misugu Saito, Nguyễn Mỹ Hằng, Từ Bình Minh, Trần Mỹ Hạnh, Đặng Thị Ngọc Châu (2013) Báo cáo tổng thể tình hình nhiễm dioxin ba điểm nóng: sân bay biên hịa, đà nẵng phù cát Bộ Tài nguyên Môi trường Nguyễn Thị Kim Cúc (2004) Nghiên cứu công nghệ sản xuất chế phẩm vi sinh ứng dụng xử lý tồn dư thuốc bảo vệ thực vật Viện Công nghệ Sinh học, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Nguyễn Thị Phi Oanh, Hứa Văn Ủ Dirk Springael (2011) Vi khuẩn phân hủy 2,4-D đất lúa Tiền giang Sóc Trăng Tạp chí Khoa học, 18a, 65-70 Phạm Ngọc Long (2009) Nghiên cứu khả phân hủy 2,4,5-t đặc điểm phân loại chủng vi khuẩn phân lập từ bioreactor xử lý đất nhiễm chất diệt cỏ/dioxin Phịng Cơng nghệ sinh học Mơi trường, Viện Công nghệ Sinh học, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam 43 Trần Văn Tuấn, Kiều Hữu Ảnh Nghiên cứu khả phân giải 2,4-D số chủng vi nấm Tạp chí khoa học ĐHQGHN, KHTN & CN, T.XX, số 2PT, 2004 44