tóm tắt luận án: Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin

Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI PHAN THỊ NGHĨA NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VÀ ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG VIÊN NANG CHỨA HỆ NANO TỰ NHŨ HĨA ROSUVASTATIN CHUN NGÀNH: CƠNG NGHỆ DƯỢC PHẨM VÀ BÀO CHẾ THUỐC MÃ SỐ: 9720202 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI, năm 2023 Cơng trình đƣợc hồn thành tại: - Khoa Bào chế Công nghệ dược phẩm - Trường Đại học Dược Hà Nội - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương - Công ty Cổ phần Dược phẩm Fresh Life - Trung tâm nghiên cứu động vật thực nghiệm - Học viện Quân y - Viện Công nghệ Dược phẩm Quốc gia - Trường Đại học Dược Hà Nội Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS Vũ Thị Thu Giang PGS.TS Trần Thị Hải Yến Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá Luận án cấp Trường họp tại: Vào hồi: ngày tháng năm Có thể tìm hiểu luận án tại: Thư viện Quốc gia Việt Nam Thư viện trường Đại Học Dược Hà Nội MỞ ĐẦU Tính cấp thiết luận án Rosuvastatin sử dụng đường uống để điều trị tăng cholesterol máu phòng ngừa biến cố tim mạch Do có ưu điểm hiệu an tồn q trình điều trị so với statin nhóm, nên rosuvastatin lựa chọn phổ biến điều trị rối loạn mỡ máu nay, lại hạn chế đặc điểm lý hóa đặc tính hấp thu dược chất, có sinh khả dụng đường uống thấp (khoảng 20%) không ổn định Hệ phân phối thuốc nano tự nhũ hóa (self-nanoemulsifying drug delivery system -SNEDDS) xem hướng nghiên cứu bào chế đại, khả thi nghiên cứu cải thiện sinh khả dụng đường uống thuốc Tại Việt Nam, nghiên cứu bào chế hệ nano tự nhũ hóa mang dược chất statin nói chung rosuvastatin nói riêng cịn hạn chế Do đó, việc nghiên cứu bào chế ứng dụng SNEDDS chứa dược chất điều trị rối loạn mỡ máu thuộc nhóm statin rosuvastatin, có khả ứng dụng vào thực tiễn sản xuất thực cần thiết, góp phần phát triển công nghệ bào chế, thúc đẩy ngành công nghiệp dược nước phát triển Mục tiêu luận án - Xây dựng cơng thức quy trình bào chế hệ nano tự nhũ hóa (SNEDDS) rosuvastatin - Xây dựng cơng thức quy trình bào chế viên nang cứng chứa SNEDDS rosuvastatin 10 mg - Đánh giá sinh khả dụng viên nang cứng chứa SNEDDS rosuvastatin 10 mg bào chế so với chế phẩm Crestor® 10 mg Những đóng góp luận án Lần Việt Nam, nghiên cứu xây dựng cơng thức quy trình bào chế hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin Cơng thức tối ưu hóa kỹ thuật tối ưu hóa theo vùng nhờ mạng neuron nhân tạo phần mềm SAS JMP 15 dựa mối tương quan in vitro – in vivo SNEDDS Ros SNEDDS Ros bào chế có khả tự nhũ hóa, cho nano nhũ tương có KTG ≤ 200 nm, PDI ≤ 0,3, tỷ lệ dược chất pha dầu ≥ 90% Đã hóa rắn SNEDDS Ros cách tạo hạt với tá dược hấp phụ để đưa vào bào chế viên nang cứng chứa SNEDDS tương ứng 10 mg rosuvastatin với qui mô 10.000 viên/lô Cấu trúc luận án - Luận án gồm 150 trang, 55 bảng, 26 hình, 200 tài liệu tham khảo Bố cục gồm: Đặt vấn đề (2 trang); tổng quan (23 trang); nguyên liệu, trang thiết bị phương pháp nghiên cứu (23 trang); kết nghiên cứu (69 trang); bàn luận (31 trang); kết luận kiến nghị (2 trang); danh mục cơng trình công bố liên quan đến luận án (1 trang); tài liệu tham khảo (21 trang); phụ lục (93 trang) Chƣơng TỔNG QUAN Phần tổng quan trình bày nội dung: Khái quát chung rosuvastatin; số biện pháp làm tăng sinh khả dụng dùng đường uống rosuvastatin; tổng quan SNEDDS; tương quan in vitro – in vivo; đánh giá sinh khả dụng thuốc Chƣơng NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 2.1.1 Nguyên vật liệu - Nguyên liệu dùng bào chế đạt tiêu chuẩn USP, EP, BP, DĐVN V - Nguyên liệu dùng phân tích, kiểm nghiệm đạt tiêu chuẩn tinh khiết phân tích dùng cho HPLC LC-MS/MS - Động vật thí nghiệm: chó khỏe mạnh - Người tình nguyện: người tình nguyện khỏe mạnh - Thuốc chứng: viên nén Crestor® 10 mg (Viên nén bao phim rosuvastatin 10 mg), Số lô: RE683; SĐK: VN-18150-14, công ty IPR Pharmaceuticals Inc., Mỹ sản xuất 2.1.2 Thiết bị Sử dụng thiết bị bào chế đánh giá: bể điều nhiệt WB-22, máy cánh khuấy WiseStir HS-120A, máy gõ đo tỷ trọng ERWEKA, máy nhào tạo hạt cao tốc GHL-10 cơng suất 2.2 kw, thiết bị đóng nang tự động NJP1200-2, thiết bị trộn lập phương ERWEKA dung tích buồng trộn lít, tủ sấy UM 500 Memmert, cân kĩ thuật độ xác 0,01 gam, cân phân tích độ xác 0,01 gam, cân xác định hàm ẩm nhanh, hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao Shimazu M20A, hệ thống sắc ký lỏng khối phổ TSQ vantange Thermo Fisher Scientific, thiết bị phân tích kích thước tiểu phân Zetasizer NanoZS90, máy quang phổ UV-VIS Hitachi U-1900 Shimadzu, máy thử độ hòa tan ERWERKA DT 600 LOGAN, tủ lạnh sâu MDF-U5412 Panasonic, tủ vi khí hậu số thiết bị khác 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1 Nghiên cứu bào chế hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin 2.2.1.1 Xác định độ tan rosuvastatin calci tá dược Cho lượng dư dược chất vào ml tá dược (chất diện hoạt, đồng diện hoạt, dầu), lắc bể điều nhiệt nhiệt độ 30°C Tại thời điểm 48 lấy mẫu, định lượng nồng độ dược chất phương pháp HPLC 2.2.1.2 Nghiên cứu đánh giá tương hợp rosuvastatin calci tá dược Đánh giá mức độ ổn định rosuvastatin các tá dược dầu, chất diện hoạt chất đồng diện hoạt sau bảo quản điều kiện dài hạn (30 ± 2ºC, độ ẩm 75% ± 5%) điều kiện lão hóa cấp tốc (40°C ± 2°C, độ ẩm 75% ± 5%) 2.2.1.3 Xây dựng giản đồ pha xác định vùng hình thành nano nhũ tương Giản đồ pha hệ thành phần: chất diện hoạt, đồng diện hoạt pha dầu Vùng hình thành nano nhũ tương xác định sở yêu cầu KTG ≤ 200 nm với hệ số PDI ≤ 0,3 sau nhũ hóa hỗn hợp chất diện hoạt, đồng diện hoạt dầu với tỷ lệ xác định nước Giản đồ pha xác định vùng hình thành nano nhũ tương vẽ phần mềm CHEMIX School 7.0 2.2.1.4 Bào chế hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin Hịa tan dược chất hỗn hợp tá dược điều kiện khuấy từ với tốc độ 50 vòng/phút, nhiệt độ 50°C thu dung dịch suốt 2.2.1.5 Phương pháp thiết kế thí nghiệm tối ưu hóa cơng thức SNEDDS rosuvastatin Sử dụng phần mềm SAS JMP 15 để thiết kế thí nghiệm, biến đầu gồm: KTG, PDI tỷ lệ dược chất pha dầu Tối ưu hóa cơng thức dựa mơ hình mạng neuron nhân tạo 2.2.1.6 Phương pháp đánh giá SNEDDS rosuvastatin - Định lượng phương pháp HPLC với điều kiện sắc ký: cột sắc ký: RP18; 250 mm x 4,6 mm; µm; nhiệt độ cột: 40oC, pha động: acetonitril - nước - acid trifluoroacetic 1% với tỷ lệ 37: 62: (tt/tt/tt), tốc độ dịng: 1,2 ml/phút; thể tích tiêm: 20 µl, detector: 242 nm - Định lượng phương pháp UV-VIS bước sóng 242 nm - Đánh giá KTG PDI máy Zetasizer NanoZS90 - Xác định tỷ lệ dược chất pha dầu: Tỷ lệ dược chất pha dầu xác định sở định lượng dược chất nano nhũ tương pha nước phương pháp đo quang phổ tử ngoại khả kiến (UV-VIS) bước sóng 242 nm - Đánh giá độ ổn định vật lý nano nhũ tương tạo thành: nano nhũ tương ly tâm với tốc độ 5000 vòng/phút thời gian 30 phút Đánh giá tách lớp tủa sau ly tâm 2.2.1.7 Đánh giá độ ổn định SNEDDS rosuvastatin Độ ổn định SNEDDS rosuvastatin bào chế bảo quản điều kiện dài hạn (30oC ± 2°C; 75% ± 5%) theo dõi đến 12 tháng điều kiện lão hóa cấp tốc (40°C ± 2°C, độ ẩm 75% ± 5%) theo dõi đến tháng 2.2.2 Nghiên cứu khả cải thiện hấp thu SNEDDS rosuvastatin qua đƣờng tiêu hóa đánh giá tƣơng quan in vitro – in vivo 2.2.2.1 Phương pháp đánh giá in vivo chó Thực 06 chó đực khỏe mạnh, nghiên cứu giai đoạn, mức liều 10 mg rosuvastatin, giai đoạn cách ngày Giai đoạn chó tiêm tĩnh mạch dung dịch rosuvastatin, giai đoạn cho chó uống SNEDDS rosuvastatin, giai đoạn uống nguyên liệu rosuvastatin calci Lấy mẫu máu giai đoạn theo thời điểm định trước, ly tâm, tách lấy huyết tương bảo quản huyết tương tủ âm -35oC Định lượng rosuvastatin huyết tương chó phương pháp LC-MS/MS thẩm định đầy đủ tiêu theo yêu cầu phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học theo hướng dẫn US-FDA EMA 2.2.2.2 Phương pháp đánh giá giải phóng in vitro SNEDDS rosuvastatin đóng vào viên nang cứng, tiến hành thử độ hịa tan in vitro môi trường khác gồm: đệm pH 1,2; pH 4,5; pH 6,6; pH 6,8; nước Trong mơi trường hịa tan, thực thử nghiệm hịa tan thể tích khác 250 ml, 500 ml, 900 ml Mỗi điều kiện hòa tan thực 12 mẫu Sự hòa tan dược chất từ SNEDDS Ros điều kiện khác khớp đồng thời với mơ hình Hill, Weibull, DoubleWeibull, Makoid Banakar với trọng số khác Mơ hình mơ mức độ hòa tan in vitro tốt tương ứng với giá trị AIC bé 2.2.2.3 Phương pháp thiết lập tương quan in vitro – in vivo Tiến hành xây dựng tương quan mức độ hấp thu in vivo mức độ hòa tan in vitro rosuvastatin qua mơ hình tương quan tuyến tính Mơ hình phản ánh tương quan tốt tương ứng với giá trị AIC bé 2.2.2.4 Áp dụng tương quan in vitro - in vivo để dự đoán công thức SNEDDS rosuvastatin tối ưu Bào chế mẫu công thức SNEDDS Ros vùng tối ưu xác định phần mềm SAS JMP 15 Thực độ hòa tan in vitro môi trường pH chọn làm mơ hình hóa độ hịa tan Từ kết độ hịa tan thu được, dự đốn giá trị AUC Cmax mẫu Lựa chọn mẫu SNEDDS Ros tối ưu có dự đốn giá trị AUC lớn 2.2.3 Nghiên cứu bào chế viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg 2.2.3.1 Nghiên cứu hóa rắn SNEDDS rosuvastatin bào chế viên nang cứng SNEDDS rosuvastatatin 10 mg - Đánh giá khả hấp phụ SNEDDS rosuvastatin chất mang - Hóa rắn SNEDDS Ros phương pháp tạo hạt - Hóa rắn SNEDDS Ros phương pháp phun sấy - Bào chế viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg Tối ưu hóa thành phần cơng thức viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg lựa chọn cỡ viên nang phù hợp 2.2.3.2 Phương pháp đánh giá SNEDDS Ros rắn - Xác định hiệu suất nano nhũ tương hóa - Xác định tỷ lệ dược chất pha dầu - Đánh giá kích thước giọt phân bố kích thước giọt nano nhũ tương - Định lượng hàm lượng dược chất S-SNEDDS Ros - Xác định tỷ trọng biểu kiến độ trơn chảy S-SNEDDS Ros - Đánh giá hiệu suất tạo hạt phương pháp phun sấy - Đánh giá tỷ lệ hạt có kích thước 180-800 µm - Xác định độ ẩm - Phân tích nano nhũ tương phương pháp chụp kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM) - Phân tích nhiệt quét vi sai (DSC) 2.2.3.3 Đánh giá viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg Đánh giá viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg tiêu: hình thức, định tính, độ đồng đơn vị liều, độ hòa tan, tạp chất liên quan, định lượng tương đương hòa tan in vitro so với viên chứng Crestor 2.2.4 Phƣơng pháp đánh giá độ ổn định viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin Viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg bào chế từ 03 lô khác nhau, ép vỉ nhôm/nhôm, qui cách 10 viên/vỉ Độ ổn định thuốc nang cứng SNEDDS bào chế, đánh giá tiêu theo TCCS theo dõi điều kiện dài hạn (30oC ± 2°C; 75% ± 5%) 12 tháng điều kiện lão hóa cấp tốc (40°C ± 2°C, độ ẩm 75% ± 5%) 06 tháng 2.2.5 Đánh giá sinh khả dụng xây dựng mơ hình dƣợc động học sinh lý viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg 2.2.5.1 Thiết kế nghiên cứu Thuốc chứng: Crestor® 10 mg Nghiên cứu thực 24 người tình nguyện khỏe mạnh Thiết kế nghiên cứu chéo, ngẫu nhiên, đơn liều, phác đồ, trình tự, giai đoạn người tình nguyện (NTN) khỏe mạnh tình trạng đói Thời gian nghỉ hai giai đoạn ngày Liều dùng: 20 mg (tương ứng 02 viên thử 02 viên chứng) Lấy mẫu máu theo thời điểm định trước theo đề cương nghiên cứu Mẫu huyết tương tách bảo quản nhiệt độ -35oC phân tích 2.2.5.2 Định lượng rosuvastatin huyết tương người Định lượng rosuvastatin huyết tương người phương pháp LC-MS/MS Phương pháp thẩm định đầy đủ theo hướng dẫn phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học theo hướng dẫn US-FDA EMA 2.2.5.3 Phân tích dược động học thống kê Các thông số dược động học xác định phần mềm Phoenix WinNonlin 8.3 theo mơ hình dược động học khơng ngăn từ liệu nồng độ thuốc theo thời gian NTN gồm Cmax, AUClast, AUCinf Xác định khoảng tin cậy 90% tỉ lệ trung bình hình học thuốc thử thuốc chứng 2.2.5.4 Mơ hình dược động học sinh lý Thực độ hòa tan in vitro thuốc nghiên cứu thuốc chứng, sử dụng kết độ hòa tan để mơ hình hóa dược động học sinh lý Sử dụng phần mềm GastroPlus™ 9.8.3 (Simulations Plus Inc.), PBPKPlus™, mơ đun chuyển hóa vận chuyển sử dụng để xây dựng mơ hình dược động học sinh lý cho rosuvastatin Các thơng số dự đốn hấp thu phân bố lấy từ tài liệu tham khảo dự đoán từ phần mềm GastroPlus Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 BÀO CHẾ SNEDDS ROSUVASTATIN 3.1.1 Thẩm định phƣơng pháp định lƣợng SNEDDS rosuvastatin Phương pháp định lượng thẩm định đầy đủ tiêu : độ thích hợp hệ thống, độ đặc hiệu, khoảng tuyến tính, độ đúng, độ xác đạt yêu cầu theo hướng dẫn ASEAN 3.1.1.1 Thẩm định phương pháp định lượng rosuvastatin SNEDDS quang phổ tử ngoại Kết cho thấy, khoảng nồng độ khảo sát - 18 μg/ml có tương quan tuyến tính chặt chẽ độ hấp thụ bước sóng 242 nm nồng độ dung dịch với hệ số tương quan xấp xỉ Như vậy, phương pháp quang phổ UV-VIS thẩm định phù hợp để định lượng nồng độ rosuvastatin SNEDDS Ros 3.1.1.2 Thẩm định phương pháp định lượng rosuvastatin SNEDDS sắc ký lỏng hiệu cao ghép đầu dò chuỗi diode (HPLC-DAD) Kết thẩm định cho thấy, khoảng nồng độ khảo sát 50 – 250 μg/ml, có tương quan tuyến tính diện tích pic nồng độ rosuvastatin với hệ số tương quan R = 1,0000 Như vậy, phương Khoảng biến thiên Mức thấp Mức cao X3 = Tỷ lệ Capryol 90 0,10 0,50 X4 = Tỷ lệ PEG 400 (biến lấp đầy tá dược) Vừa đủ 1,00 Biến phụ thuộc Yêu cầu KTG (d.nm) ≤ 100 PDI ≤ 0,3 Tỷ lệ dược chất pha dầu (EE) (%) ≥ 90 c Ảnh hưởng thành phần SNEDDS Ros đến đặc tính nano nhũ tương Các biến đầu luyện riêng biệt mạng neuron nhân tạo lớp ẩn nút thể Hình Biến độc lập Hình Sơ đồ mạng neuron nhân tạo Bảng Kết luyện thẩm định mạng neuron nhân tạo Tỷ lệ dược chất KTG PDI pha dầu Tham số Thẩm Thẩm Thẩm Luyện Luyện Luyện định định định R 0,989 0,999 0,875 0,891 0,907 1,000 Phương sai 3,617 0,925 0,060 0,093 0,564 0,014 Độ lệch 1,639 0,757 0,031 0,074 0,279 0,014 chuẩn 11 Tham số KTG PDI Tỷ lệ dược chất pha dầu 11,858 -8,491 -Loglikelihood 37,864 4,023 -18,086 -3,830 Tổng sai số 183,161 2,567 0,047 0,035 4,460 0,001 bình phương Số thí 14 13 14 nghiệm Giá trị R2 cho trình luyện thẩm định lớn 0,87 chứng tỏ mơ hình áp dụng phù hợp với liệu thực nghiệm dược áp dụng dự đoán kết nghiên cứu d Tối ưu hóa cơng thức bào chế SNEDDS rosuvastatin Tiến hành phân tích dự đốn cơng thức tối ưu SNEDDS Ros phần mềm SAS JMP 15 Kết thu vùng công thức tối ưu ứng với nồng độ 8%, 10% 12% dược chất e Bào chế đánh giá SNEDDS rosuvastatin Tiến hành bào chế đánh giá 04 mẫu SNEDDS Ros có cơng thức nằm vùng tối ưu khác tương ứng tỷ lệ dược chất 10% (với 03 công thức ký hiệu S1, S2, S3), 11% (công thức S4) so với lượng tá dược Kết cho thấy, có chênh lệch KTG PDI so với dự đoán phần mềm, kết nghiên cứu đặc tính hóa lý mẫu nhũ tương tạo từ SNEDDS Ros sau tự nhũ hóa đáp ứng u cầu tối ưu hóa ban đầu: kích thước giọt nhỏ 100 nm với PDI nhỏ 0,3, ổn định trạng thái phân tán sau ly tâm 5000 vòng/phút 30 phút tỷ lệ dược chất pha dầu tất mẫu SNEDDS Ros đạt 90% Từ kết thu được, cơng thức S4 chọn đánh giá chó thí nghiệm 3.1.5.2 Đánh giá khả cải thiện hấp thu qua đường tiêu hóa SNEDDS rosuvastatin dự đốn công thức bào chế SNEDDS rosuvastatin tối ưu sở xây dựng mối tương quan in vitro in vivo 12 a Đánh giá khả cải thiện hấp thu chó Kết đánh giá khả hấp thu cho thấy giá trị thông số dược động học sau uống SNEDDS Ros cao uống nguyên liệu rosuvastatin calci (Cmax cao khoảng 2,1 lần, AUClast lớn khoảng 1,7 lần) Khi giải chập với dung dịch tiêm làm chế phẩm đối chiếu, thu đường cong hấp thu in vivo SNEDDS Ros nguyên liệu Ros thể Hình 12 Hình 12 Đường cong hấp thu trung bình SNEDDS Ros nguyên liệu Ros b Nghiên cứu xây dựng tương quan in vitro - in vivo SNEDDS Ros Mô hình hóa liệu hịa tan in vitro điều kiện hịa tan, mơ hình với trọng số cho giá trị AIC bé lựa chọn để mô hình hóa liệu thử hịa tan Xây dựng mối tương quan đường cong hấp thu in vivo liệu hòa tan in vitro điều kiện hòa tan khác nhau, sử dụng giá trị AIC quan sát dự đoán đường cong hấp thu in vivo dựa vào đường cong hòa tan in vitro Kết cho thấy với điều kiện hòa tan 900 ml mơi trường pH 6,6 có mối tương quan tốt với giá trị AIC nhỏ (AIC = - 506,9; R2 = 0,996), mơ hình tương quan in vitro - in vivo xác định theo phương trình: 13 Fabs = 0,485 x Diss(0,01 x Tvivo - 8,8E-06) Áp dụng tương quan in vitro – in vivo để dự đốn cơng thức SNEDDS Ros tối ưu: Từ liệu độ hịa tan cơng thức khác vùng tối ưu, sử dụng Toolkit IVIVC để tính giá trị AUC Cmax dự đoán Giá trị dự đoán cho thấy, giá trị AUClast lớn mẫu mẫu cơng thức S4 có tỷ lệ rosuvastatin calci Cremophor RH40 - Capryol 90 - PEG 400 (11:42:42:16, kl/kl) 3.1.6 Nghiên cứu bào chế SNEDDS rosuvastatin quy mô 1050 gam (tƣơng ứng 10.000 viên/lô) Nghiên cứu tiến hành khảo sát ảnh hưởng thông số kỹ thuật, trình tự phối hợp dược chất đến đặc tính SNEDDS Ros Từ kết thu được, qui trình bào chế SNEDDS Ros tiến hành cách hòa tan dược chất vào hỗn hợp tá dược PEG 400 Capryol 90, hòa tan đến hỗn hợp suốt, sau thêm Cremophor RH 40 vào hỗn hợp tiếp tục khuấy cho đồng Sử dụng thiết bị máy cánh khuấy WiseStir HS-120A; nhiệt độ hòa tan: 50oC; tốc độ khuấy: 1500 vòng/ phút 3.1.7 Xây dựng tiêu chuẩn chất lƣợng nghiên cứu độ ổn định SNEDDS rosuvastatin 3.1.7.1 Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng SNEDDS rosuvastatin Tiêu chuẩn chất lượng SNEDDS rosuvastatin xây dựng với tiêu: Tính chất, định tính, hàm lượng 95,0 – 105,0%, KTG ≤ 200 nm; PDI ≤ 0,3 3.1.7.2 Đánh giá độ ổn định SNEDDS rosuvastatin SNEDDS Ros ổn định thời gian theo dõi điều kiện dài hạn sau 12 tháng lão hóa cấp tốc sau tháng 3.2 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VIÊN NANG CỨNG SNEDDS ROSUVASTATIN 10 MG 3.2.1 Nghiên cứu hóa rắn SNEDDS rosuvastatin 3.2.1.1 Đánh giá khả hấp phụ SNEDDS rosuvastatin số tá dược 14 Kết đánh giá khả hấp phụ SNEDDS Ros nhóm tá dược hấp phụ: nhóm tá dược silic dioxyd; nhóm tá dược cellulose vi tinh thể; nhóm tá dược siêu rã Kết Aerosil có khả hấp phụ tốt nhất, ảnh hưởng đến khả giải phóng dược chất nhũ hóa Do đó, tiếp tục nghiên cứu hóa rắn SNEDDS theo hướng: sử dụng tá dược cellulose vi tinh thể (MCC) kết hợp MCC Aerosil làm chất mang phun sấy 3.2.1.2 Khảo sát ảnh hưởng phương pháp hóa rắn a Phương pháp tạo hạt Khảo sát sử dụng tá dược Avicel PH101, Avicel PH 102 Prosolv SMCC 90 làm tá dược hấp phụ, để rắn hóa SNEDDS Ros (S-SNEDDS Ros) Hình 15 Hiệu suất nano nhũ tương hóa, KTG PDI nano nhũ tương tạo thành từ S-SNEDDS Ros Kết mẫu TH4 (Prosolv SMCC 90, dung dịch PVP 10% nước) lựa chọn để tiếp tục khảo sát đánh giá b Phương pháp phun sấy Kết mẫu khảo sát đạt yêu cầu KTG, PDI, hiệu suất nano nhũ tương hóa Tuy nhiên, hiệu suất hóa rắn SNEDDS Ros phương pháp phun sấy thấp, đạt khoảng 50% Do đó, phương pháp tạo hạt lựa chọn để hóa rắn SNEDDS Ros nghiên cứu 3.2.1.3 Hóa rắn SNEDDS rosuvastatin 15 Kết cơng thức hóa rắn mẫu S4 (SS4) được chọn để nghiên cứu xây dựng công thức bào chế viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg, với SNEDDS Ros chiếm tỷ lệ 70% so với hỗn hợp tá dược Prosolv SMCC 50 : Syloid XDP 3050 (tỷ lệ 97:3, kl/kl) 3.2.2 Xây dựng công thức bào chế viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg 3.2.2.1 Lựa chọn cỡ vỏ nang Dựa tỷ trọng biểu kiến hạt, chọn nang cứng số để bào chế viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg 3.2.2.2 Khảo sát ảnh hưởng tá dược trơn Khảo sát ảnh hưởng đến S-SNEDDS Ros tạo thành tá dược trơn sơ nước gồm magnesi stearat, acid stearic talc Kết thuốc đóng nang bào chế theo công thức sử dụng hỗn hợp tá dược trơn có tỷ lệ talc:acid stearic 1:2 có đặc tính S-SNEDDS Ros đạt yêu cầu, khả trơn chảy tốt, có khả hạn chế hấp phụ ẩm khả giải phóng dược chất nhanh 3.2.2.3 Hình thái S-SNEDDS rosuvastatin Kết chụp TEM nano nhũ tương tạo thành công thức SSNEDDS Ros cho thấy giọt nano nhũ tương tạo thành tách rời nhau, không bị kết tụ vào nhau, có KTG nhỏ 30 nm, đáp ứng yêu cầu hệ nano tự nhũ hóa có KTG tương tự phương pháp đo KTG phương pháp DLS 3.2.2.4 Phân tích nhiệt vi sai Kết phân tích nhiệt vi sai S-SNEDDS Ros tá dược chứng tỏ SNEDDS Ros có chất hệ đồng thể hấp phụ vào tá dược Prosolv SMCC 50 Syloid XPD 3050 3.2.3 Xây dựng quy trình bào chế viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg quy mô 10.000 viên/lô Căn vào thể tích nang cần lấp đầy tỷ trọng biểu kiến hạt tá dược, công thức S-SNEDDS Ros điều chỉnh thành phần tá dược hóa rắn phù hợp với quy mơ lơ 10.000 viên 16 Hình PL Sơ đồ tóm tắt giai đoạn bào chế viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg quy mô 10.000 viên/lô 17 3.2.4 Xây dựng thẩm định tiêu chuẩn sở viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg 3.2.4.1 Kết xây dựng tiêu chuẩn sở nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg Bảng 42 Đề xuất tiêu chuẩn chất lượng viên nang SNEDDS rosuvastatin 10 mg Chỉ tiêu Yêu cầu Phƣơng pháp thử Hình thức Viên nang cứng, cỡ nang Cảm quan số 0, bên chứa bột thuốc màu trắng Định tính Chế phẩm phải thể Phương pháp HPLC phép thử định tính rosuvastatin Độ đồng - Phương pháp HPLC Giá trị chấp nhận AV  đơn vị 15% - DĐVN V, phụ lục 11.9, liều phương pháp đồng hàm lượng Độ hòa ≥ 85% hòa tan sau 30 phút - Môi trường: 900 ml đệm tan citrat 0,05M pH 6,6 - Thiết bị: kiểu cánh khuấy - Tốc độ quay: 50 vòng/phút - Nhiệt độ : 37oC ± 0,5oC - Thời điểm lấy mẫu: 30 phút Tạp chất Phương pháp HPLC Rosuvastatin ketone  liên quan 2,1% Rosuvastatin lactone  1,5% Rosuvastatin ethyl ester  0,5% Tạp chất khác  0,2% Tổng tạp chất  3,6% Định 90,0% - 110,0% Phương pháp HPLC lượng 18 Viên nang bào chế Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương đánh giá đạt yêu cầu chất lượng theo tiêu chuẩn sở 3.2.4.2 Kết thẩm định tiêu chuẩn chất lượng viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg Các quy trình phân tích định lượng, độ hòa tan, tạp chất liên quan TCCS thẩm định đầy đủ tiêu: độ thích hợp hệ thống, độ đặc hiệu, khoảng tuyến tính, độ đúng, độ xác theo hướng dẫn ASEAN ICH để chứng minh quy trình phù hợp để áp dụng kiểm tra chất lượng viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg 3.2.5 Kết đánh giá độ ổn định viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg Các mẫu viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg 03 lơ quy mơ 10.000 viên/lơ đóng gói bao bì nhơm/nhơm Kết viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg ổn định sau 12 tháng bảo quản điều kiện dài hạn tháng bảo quản điều kiện lão hóa cấp tốc 3.3 ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG VÀ XÂY DỰNG MƠ HÌNH DƢỢC ĐỘNG HỌC SINH LÝ VIÊN NANG CỨNG SNEDDS ROSUVASTATIN 10 MG 3.3.1 Kết thẩm định phƣơng pháp định lƣợng rosuvastatin huyết tƣơng ngƣời Phương pháp có khoảng đường chuẩn từ 0,15 ng/ml đến 30 ng/ml (r > 0,99) Phương pháp thẩm định đầy đủ phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học theo hướng dẫn US-FDA va EMA 3.3.2 Kết đánh giá sinh khả dụng rosuvastatin huyết tƣơng ngƣời Nghiên cứu thực 24 người tình nguyện khỏe mạnh Kết xác định nồng độ thuốc huyết tương cho thấy 19 sinh khả dụng tương đối thuốc nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg bào chế tương đương với viên đối chiếu Crestor® 10 mg với độ tin cậy 90% Hình 23 Đường cong trung bình nồng độ rosuvastatin theo thời gian 24 NTN 3.3.3 Mơ hình dƣợc động học sinh lý dự đốn nồng độ rosuvastatin huyết tƣơng ngƣời 3.3.3.1 Độ hòa tan in vitro Đường cong hòa tan viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg viên nén Crestor® 10 mg môi trường pH 1,2; 4,5; 6,6 6,8 để xây dựng mơ hình dược động học sinh lý 3.3.3.2 Mơ hình dược động học sinh lý Dự đốn phần hấp thu: Mơ hình dược động học sinh lý (PBPM) mô tả đầy đủ đường cong theo thời gian lượng hòa tan, hấp thu, vào tĩnh mạch cửa, vào tuần hoàn chung rosuvastatin sau uống Dự đoán nồng độ dược chất huyết tương: Sau cho kết dự đoán sát với giá trị thực nghiệm nồng độ thuốc huyết tương, cho thấy mô hình áp dụng để dự đốn nồng độ rosuvastatin chế phẩm huyết tương người, khả tương đương sinh học thuốc thử thuốc chứng 20 Dự đoán vùng hấp thu: áp dụng mơ hình thiết lập để đánh giá vùng hấp thu rosuvastatin đường tiêu hóa Điều sở giải thích hai chế phẩm có nồng độ thuốc huyết tương tương tự với kết đánh giá Cmax, AUC khoảng 80,00% - 125,00% với khoảng tin cậy 90% Chƣơng BÀN LUẬN 4.1 XÂY DỰNG CÔNG THỨC VÀ QUY TRÌNH BÀO CHẾ HỆ NANO TỰ NHŨ HĨA ROSUVASTATIN Kết nghiên cứu cho thấy Ros hòa tan tốt tá dược Capryol 90, Cremophor RH 40, PEG 400 tương hợp với tá dược Giản đồ pha chọn cho vùng hình thành nano nhũ tương rộng, kết giúp xây dựng vùng công thức tối ưu phù hợp Sử dụng phần mềm SAS JMP 15 để thiết kế thí nghiệm, thu không gian thiết kế, với vùng tối ưu khác Việc tối ưu hóa cơng thức bào chế theo vùng cho phép nhà nghiên cứu lựa chọn nhiều công thức bào chế khác không giới hạn công thức bào chế tối ưu nhất, phù hợp với phát triển dược phẩm theo cách tiếp cận chất lượng theo thiết kế (Quality by DesignQbD) SNEDDS Ros có khả cải thiện hấp thu so với nguyên liệu Ros, xem SNEDDS Ros nguyên liệu có khả hấp thu tốt so với nguyên liệu Đây sở để tiếp tục sử dụng công thức tối ưu để tiến hành thực nghiệm nghiên cứu Xây dựng mối tương quan in vitro – in vivo SNEDDS Ros, từ lựa chọn cơng thức SNEDDS Ros có khả hấp thu tốt để tiếp tục cho thí nghiệm thử nghiệm lâm sàng Kết lựa chọn điều kiện hòa tan tối ưu 21 900 ml mơi trường hịa tan pH 6,6 Đây sở để xác định điều kiện độ hòa tan xây dựng tiêu chuẩn sở cho chế phẩm 4.2 BÀO CHẾ VIÊN NANG CỨNG SNEDDS ROSUVASTATIN 10 MG Nghiên cứu hóa rắn SNEDDS Ros phương pháp khác thực để khắc phục nhược điểm mức độ ổn định SNEDDS lỏng Sau SNEDDS Ros hóa rắn, hệ đạt yêu cầu khả tự nhũ hóa KTG, PDI, tỷ lệ dược chất pha dầu Trong q trình nâng cấp quy mơ bào chế 10.000 viên/lô, lựa chọn thông số kỹ thuật phù hợp giai đoạn bào chế sau hóa rắn giữ đặc tính hệ nano tự nhũ hóa KTG, PDI, tỷ lệ dược chất pha dầu 4.3 ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG CỦA THUỐC TRÊN NGƢỜI TÌNH NGUYỆN Kết đánh giá SKD NTN cho thấy thuốc bào chế có khả tương đương sinh học so với thuốc phát minh Crestor® 10 mg Crestor có chế tăng hấp thu kỹ thuật tạo hệ phân tán rắn Với hệ nano tự nhũ hóa phương pháp bào chế đơn giản, dễ triển khai, điều phù hợp với trang thiết bị, điều kiện Việt Nam Kết đường cong nồng độ theo thời gian, cho thấy giá trị dự đoán sát với giá trị nồng độ rosuvastatin định lượng huyết tương người, vậy, sử dụng mơ hình xây dựng để dự đoán nồng độ rosuvastatin huyết tương người dựa vào liệu độ hịa tan in vitro cơng thức Mơ hình dược động sinh lý (PBPM) có tầm quan trọng miễn thử in vivo tiêu chí dựa BCS dựa IVIVC khơng đáp ứng miễn thử in vivo PBPM phù hợp để dự đốn tỷ lệ thành cơng nghiên cứu TĐSH đưa định việc bắt đầu nghiên cứu TĐSH điều chỉnh công thức 22 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Sau thời gian nghiên cứu, luận án thu số kết sau: Đã xây dựng cơng thức quy trình bào chế hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin - Đã khảo sát độ tan dược chất tá dược để xây dựng giản đồ pha với hệ thành phần dầu, chất diện hoạt, chất đồng diện hoạt Công thức bào chế SNEDDS Ros xây dựng sở: tối ưu hóa mơ hình tốn học sở mối tương quan in vitro – in vivo Theo cách tiếp cận chất lượng theo thiết kế QbD, SNEDDS Ros bào chế đạt yêu cầu khả tự nhũ hóa, cho nano nhũ tương có KTG ≤ 200 nm, PDI ≤ 0,3, tỷ lệ dược chất pha dầu ≥ 90,0% - Công thức bào chế SNEDDS Ros có thành phần rosuvastatin calci Cremophor RH40 - Capryol 90 - PEG 400 (11:42:42:16, kl/kl) SNEDDS Ros chứng minh có khả cải thiện hấp thu chó thí nghiệm so với dược chất dạng tự - Đã xây dựng quy trình bào chế SNEDDS Ros quy mô 1050 gam (tương đương qui mô 10.000 viên/lô) SNEDDS Ros ổn định tháng bảo quản điều kiện lão hóa cấp tốc 12 tháng bảo quản điều kiện dài hạn Đã xây dựng cơng thức quy trình bào chế viên nang cứng chứa SNEDDS rosuvastatin 10 mg - Đã khảo sát lựa chọn tá dược hấp phụ hóa rắn SNEDDS Ros phương pháp phun sấy phương pháp tạo hạt; đánh giá hiệu suất hóa rắn, khả giải phóng dược chất đặc tính tự nhũ hóa SNEDDS Ros dạng rắn thu (KTG, PDI, hiệu suất nano nhũ tương hóa, tỷ lệ dược chất pha dầu) - SNEDDS Ros hóa rắn phương pháp tạo hạt với tá dược hấp phụ hỗn hợp Prosolv SMCC 50 : Syloid XDP 3050 (97:3, 23 kl/kl), tá dược dính PVP K30, tá dược trơn hỗn hợp Talc : Acid stearic (1:2, kl/kl) - Đã xây dựng cơng thức quy trình bào chế viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg quy mô 10.000 viên/lô Đã xây dựng tiêu chuẩn sở cho viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg với quy trình định lượng, thử độ hịa tan, xác định tạp chất liên quan thẩm định đầy đủ theo hướng dẫn ASEAN ICH Viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg ổn định điều kiện bảo quản dài hạn sau 12 tháng điều kiện lão hóa cấp tốc sau tháng Đánh giá sinh khả dụng viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg so với chế phẩm Crestor® 10 mg - Đã đánh giá sinh khả dụng viên nang SNEDDS rosuvastatin 10 mg so với thuốc đối chiếu thuốc phát minh Crestor® 10 mg người tình nguyện khỏe mạnh Kết cho thấy sinh khả dụng tương đối viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg bào chế tương đương với viên đối chiếu Crestor® 10 mg với độ tin cậy 90% - Đã xây dựng mơ hình dược động học sinh lý viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg người Có thể áp dụng mơ hình dược động học sinh lý để dự đoán nồng độ rosuvastatin huyết tương người từ liệu độ hòa tan in vitro KIẾN NGHỊ - Tiếp tục theo dõi độ ổn định nâng cấp quy mô bào chế viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg phù hợp với thực tế sản xuất để ứng dụng vào thực tiễn 24 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƢỢC HỌC Phan Thị Nghĩa, Trần Thị Hải Yến, Vũ Thị Thu Giang (2020), “Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng nghiên cứu độ ổn định hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin”, Tạp chí Khoa học Đại học Quốc gia Hà Nội: Khoa học Y Dược, 36(4), tr 3140 Giang Thi Thu Vu, Nghia Thi Phan, Huyen Thi Nguyen, Hung Canh Nguyen, Yen Thi Hai Tran, Tung Bao Pham, Linh Tran Nguyen, Hoa Dang Nguyen (2020), “Application of the artificial neural network to optimize the formulation of self-nanoemulsifying drug delivery system containing rosuvastatin”, Journal of Applied Pharmaceutical Science, 10(09), pp 001-011 Phan Thị Nghĩa, Đặng Thị Hồng Ngọc, Trần Thị Hải Yến, Nguyễn Đăng Hòa, Vũ Thị Thu Giang (2022), “Xây dựng quy trình bào chế viên nang cứng chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin”, Nghiên cứu Dược & Thơng tin thuốc, 13(2), tr 1-9 Nghia Thi Phan, Yen Thi Hai Tran, Linh Tran Nguyen, Yen Kieu Hoang, Cuong Khac Bui, Hoa Dang Nguyen, Giang Thi Thu Vu (2022), “Self Nanoelmusifying Drug Delivery System of Rosuvastatin: Bioavailability evaluation and in vitro – in vivo correlation”, Current Drug Delivery Ngày chấp nhận đăng: 30/12/2022 http://dx.doi.org/10.2174/1567201820666221220104244