Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI PHAN THỊ NGHĨA NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VÀ ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG VIÊN NANG CHỨA HỆ NANO TỰ NHŨ HÓA ROSUVASTATIN LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI, NĂM 2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI PHAN THỊ NGHĨA NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VÀ ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG VIÊN NANG CHỨA HỆ NANO TỰ NHŨ HÓA ROSUVASTATIN LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ DƢỢC PHẨM VÀ BÀO CHẾ THUỐC MÃ SỐ: 9720202 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS Vũ Thị Thu Giang PGS TS Trần Thị Hải Yến HÀ NỘI, NĂM 2023 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu luận án phần số liệu đề tài ―Nghiên cứu bào chế viên nang chứa hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin‖ có mã số KC.10.34/16-20 thuộc chƣơng trình ―Nghiên cứu ứng dụng phát triển công nghệ tiên tiến phục vụ bảo vệ chăm sóc sức khỏe cộng đồng‖ Bộ Khoa học Cơng nghệ Trong đó, nghiên cứu sinh thành viên tham gia thực nội dung nghiên cứu đƣợc Chủ nhiệm đề tài thành viên nhóm nghiên cứu đồng ý cho phép sử dụng số liệu Các số liệu, kết trình bày luận án trung thực chƣa đƣợc cơng bố cơng trình khác Phan Thị Nghĩa LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình nghiên cứu hồn thành luận án, tơi nhận đƣợc hƣớng dẫn, giúp đỡ thầy cô giáo, nhà khoa học, cá nhân, tập thể, đồng nghiệp gia đình Trƣớc tiên, tơi xin đƣợc tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến: PGS.TS Vũ Thị Thu Giang PGS.TS Trần Thị Hải Yến Những ngƣời thầy nhiệt tình hƣớng dẫn, hết lịng giúp đỡ, bảo trực tiếp hƣớng dẫn suốt thời gian nghiên cứu làm luận án Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới PGS.TS Nguyễn Đăng Hòa, TS Nguyễn Trần Linh, GS.TS Phạm Thị Minh Huệ, GS.TS Nguyễn Ngọc Chiến, PGS.TS Nguyễn Thạch Tùng, TS Phạm Bảo Tùng tồn thể thầy giáo, kỹ thuật viên Khoa Bào chế - Công nghệ dƣợc phẩm, Viện Công nghệ Dƣợc phẩm Quốc gia - Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội nhiệt tình giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi giúp tơi hồn thành luận án Tơi xin đƣợc cảm ơn Ban giám hiệu, phịng Đào tạo Sau đại học –Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội quan tâm, giúp đỡ tơi q trình học tập nghiên cứu Trƣờng Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban Lãnh đạo Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ƣơng, cán Trung tâm đánh giá Tƣơng đƣơng sinh học - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ƣơng nhiệt tình giúp đỡ tơi q trình thực luận án Tôi xin cảm ơn bạn học viên Cao học sinh viên thực số nội dung luận án Cuối cùng, xin cảm ơn ngƣời thân gia đình bạn bè ln động viên, tạo điều kiện để tơi n tâm hồn thành luận án Hà Nội, ngày tháng Phan Thị Nghĩa năm 2023 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ………………………………………………………………………1 Chƣơng TỔNG QUAN………………………………………………………… 1.1 ROSUVASTATIN .3 1.1.1 Công thức 1.1.2 Tính chất lý hóa 1.1.3 Tác dụng dƣợc lý 1.1.4 Dƣợc động học 1.1.5 Một số chế phẩm chứa rosuvastatin 1.2 MỘT SỐ BIỆN PHÁP LÀM TĂNG SINH KHẢ DỤNG DÙNG ĐƢỜNG UỐNG CỦA ROSUVASTATIN 1.2.1 Tạo phức với cyclodextrin 1.2.2 Hệ phân tán rắn 1.2.3 Hệ vi tiểu phân 1.3 TỔNG QUAN VỀ HỆ NANO TỰ NHŨ HÓA (SNEDDS) .10 1.3.1 Khái niệm 10 1.3.2 Thành phần hệ nano tự nhũ hóa 11 1.3.3 Ƣu, nhƣợc điểm hệ nano tự nhũ hóa 13 1.3.4 Hóa rắn hệ nano tự nhũ hóa .14 1.3.5 Phƣơng pháp đánh giá đặc tính lý hóa hệ nano tự nhũ hóa 16 1.3.6 Ứng dụng hệ mang thuốc SNEDDS cải thiện sinh khả dụng đƣờng uống 19 1.4 NGHIÊN CỨU TƢƠNG QUAN IN VITRO - IN VIVO 22 1.5 ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG 24 Chƣơng NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU……………………………………………………………………………… 26 2.1 NGUYÊN LIỆU VÀ THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 26 2.1.1 Nguyên vật liệu dùng nghiên cứu 26 2.1.2 Thiết bị nghiên cứu 27 2.1.3 Thuốc nghiên cứu 28 2.1.4 Động vật thí nghiệm 29 2.1.5 Ngƣời tình nguyện .29 2.1.6 Địa điểm thực nghiên cứu 29 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .29 2.2.1 Nghiên cứu bào chế hệ nano tự nhũ hóa rosuvastatin .29 2.2.2 Nghiên cứu khả cải thiện hấp thu SNEDDS rosuvastatin qua đƣờng tiêu hóa đánh giá tƣơng quan in vitro – in vivo 33 2.2.3 Nghiên cứu bào chế viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg……… 36 2.2.4 Phƣơng pháp đánh giá độ ổn định viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin .45 2.2.5 Đánh giá sinh khả dụng xây dựng mơ hình dƣợc động học sinh lý viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg 46 2.2.6 Phƣơng pháp xử lý số liệu 48 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU…………………………………………….49 3.1 BÀO CHẾ SNEDDS ROSUVASTATIN 49 3.1.1 Thẩm định phƣơng pháp định lƣợng SNEDDS rosuvastatin 49 3.1.2 Độ tan rosuvastatin calci số tá dƣợc dầu, chất diện hoạt chất đồng diện hoạt .51 3.1.3 Kết nghiên cứu đánh giá tƣơng hợp dƣợc chất tá dƣợc 53 3.1.4 Xây dựng giản đồ pha xác định vùng hình thành nano nhũ tƣơng 55 3.1.5 Xây dựng công thức bào chế SNEDDS rosuvastatin 56 3.1.6 Nghiên cứu bào chế SNEDDS rosuvastatin quy mô 1050 gam (tƣơng ứng 10.000 viên/lô) .72 3.1.7 Xây dựng tiêu chuẩn chất lƣợng nghiên cứu độ ổn định SNEDDS rosuvastatin .77 3.2 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VIÊN NANG CỨNG SNEDDS ROSUVASTATIN 10 MG 79 3.2.1 Nghiên cứu hóa rắn SNEDDS rosuvastatin 79 3.2.2 Xây dựng công thức bào chế viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg… .87 3.2.3 Xây dựng quy trình bào chế viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg quy mô 10.000 viên/lô 93 3.2.4 Xây dựng thẩm định tiêu chuẩn sở viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg 101 3.2.5 Kết đánh giá độ ổn định viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg .106 3.3 ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG VÀ XÂY DỰNG MƠ HÌNH DƢỢC ĐỘNG HỌC SINH LÝ VIÊN NANG CỨNG SNEDDS ROSUVASTATIN 10 MG… 109 3.3.1 Quy trình định lƣợng rosuvastatin huyết tƣơng ngƣời 109 3.3.2 Kết đánh giá sinh khả dụng rosuvastatin huyết tƣơng ngƣời… 111 3.3.3 Mơ hình dƣợc động học sinh lý dự đoán nồng độ rosuvastatin huyết tƣơng ngƣời 113 Chƣơng BÀN LUẬN………………………………………………………… 118 4.1 XÂY DỰNG CÔNG THỨC VÀ QUY TRÌNH BÀO CHẾ HỆ NANO TỰ NHŨ HÓA ROSUVASTATIN 118 4.1.1 Về phƣơng pháp xây dựng công thức bào chế 118 4.1.2 Khả cải thiện hấp thu qua đƣờng tiêu hóa SNEDDS rosuvastatin xây dựng mối tƣơng quan in vitro – in vivo 123 4.1.3 Về thông số kỹ thuật trình bào chế 127 4.1.4 Về xây dựng tiêu chuẩn chất lƣợng độ ổn định SNEDDS rosuvastatin .129 4.1.5 Về phƣơng pháp đánh giá số đặc tính nano nhũ tƣơng tạo thành…… 130 4.2 BÀO CHẾ VIÊN NANG CỨNG SNEDDS ROSUVASTATIN 10 MG…… 132 4.2.1 Hóa rắn SNEDDS rosuvastatin .132 4.2.2 Xây dựng công thức quy trình bào chế viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg quy mô 10.000 viên/lô .135 4.2.3 Xây dựng thẩm định tiêu chuẩn sở thuốc 137 4.2.4 Về theo dõi độ ổn định thuốc 139 4.3 ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG CỦA THUỐC TRÊN NGƢỜI TÌNH NGUYỆN 141 4.3.1 Chế phẩm thuốc chứng 141 4.3.2 Thiết kế nghiên cứu 141 4.3.3 Về phƣơng pháp phân tích xác định nồng độ rosuvastatin huyết tƣơng ngƣời .142 4.3.4 Kết đánh giá sinh khả dụng 143 4.3.5 Mơ hình dƣợc động học sinh lý .145 4.4 ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN 147 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ……………………………………………………149 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nội dung ACN Acetonitril AIC Tiêu chuẩn thông tin Akaike (The Akaike‘s information criterion) ASEAN Hiệp hội quốc gia Đông Nam Á (Association of South East Asian Nations) AUC Diện tích dƣới đƣờng cong (Area Under the Curve) BCS Hệ thống phân loại sinh dƣợc học bào chế (Biopharmaceutics classification system) CI Chỉ số Carr (Carr‘s Index) Cmax Nồng độ đỉnh CV Hệ số biến thiên (Coefficient of variation) DC Dƣợc chất DĐVN Dƣợc điển Việt Nam DLS Tán xạ ánh sáng động (Dynamic Light Scattering) DSC Phân tích nhiệt quét vi sai (Different Scanning Calorimetry) EMA Cơ quan dƣợc phẩm Châu Âu (European Medicines Agency) EP Dƣợc điển Châu Âu (European Pharmacopoeia) HDL-c Cholesterol tỷ trọng cao (High density liporotein cholesterol) HLB Chỉ số cân dầu nƣớc (Hydrophilic Lipophilic Balance) HMG-CoA 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzym A reductase reductase HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High-Performance Liquid Chromatography) HQC Mẫu kiểm tra nồng độ cao (High quanlity control ) IS Chuẩn nội (Internal standard) IVIVC Tƣơng quan in vitro – in vivo (In vitro – in vivo correlation) KTG Kích thƣớc giọt KTTP Kích thƣớc tiểu phân LC-MS/MS Sắc ký lỏng – khối phổ (Liquid chromatography - Mass spectrometry/ Mass spectrometry) LDL-c Cholesterol tỷ trọng thấp (Low density lipoprotein cholesterol) LLOQ Giới hạn định lƣợng dƣới (Lower limit of quantification) LQC Mẫu kiểm tra nồng độ thấp (Low quanlity control) MCC Cellulose vi tinh thể (Microcrystalline Cellulose) MF Hệ số mẫu (Matrix factor) MQC NSX NTN PBPM PDI PE PEG PTHQ PVP QTSX Ros SD SEM SKD SMEDDS Smix SNEDDS S-SNEDDS t1/2 TB TCCS TĐSH TEM TFA Tmax tR US-FDA USP VBE VLDL-c Mẫu kiểm tra nồng độ trung bình (Middle quanlity control) Nhà sản xuất Ngƣời tình nguyện Mơ hình dƣợc động học sinh lý (Physiologically based pharmacokinetic modeling) Chỉ số đa phân tán (Polydispersity index) Polyethylen Polyethylen glycol Phƣơng trình hồi quy Polyvinyl pyrolidon Quy trình sản xuất Rosuvastatin calci Độ lệch chuẩn (Standard deviation) Kính hiển vi điện tử quét (Scanning electron microscopy) Sinh khả dụng Hệ tự vi nhũ hóa (Self-Microemulsifying Drug Delivery Systems) Hỗn hợp chất diện hoạt- chất đồng diện hoạt (Surfactant mixture) Hệ nano tự nhũ hóa (Self-Nanoemulsifying Drug Delivery Systems) Hệ nano tự nhũ hóa đƣợc rắn hóa (Solid Self-nanoemulsifying Drug Delivery System) Thời gian bán thải Trung bình Tiêu chuẩn sở Tƣơng đƣơng sinh học Kính hiển vi điện tử truyền qua (Transmission electron microscopy) Acid trifloacetic Thời gian đạt đƣợc nồng độ dƣợc chất tối đa huyết tƣơng Thời gian lƣu (Retention time) Cơ quan quản lý thuốc thực phẩm Hoa Kỳ (United States Food and Drug Administration) Dƣợc điển Mỹ (The United States Pharmacopoeia) Thiết kế ảo tƣơng đƣơng sinh học (Virtual bioequivalence) Cholesterol tỷ trọng thấp (Very low density lipoprotein cholesterol) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1 Tác dụng giảm LDL-c statin mức liều khác Bảng Một số nghiên cứu sinh khả dụng SNEDDS 20 Bảng Nguyên liệu hóa chất sử dụng nghiên cứu………………….26 Bảng 2 Các thiết bị sử dụng nghiên cứu .27 Bảng Giới hạn chấp nhận tạp chất liên quan 45 Bảng Các thông số sử dụng mơ mơ hình dƣợc động học sinh lý 47 Bảng Kết thẩm định phƣơng pháp định lƣợng dƣợc chất quang phổ hấp thụ UV-VIS …………………………………………………………………….49 Bảng Kết thẩm định phƣơng pháp định lƣợng dƣợc chất phƣơng pháp HPLC 50 Bảng 3 Độ tan rosuvastatin calci số tá dƣợc 52 Bảng Sự thay đổi hàm lƣợng rosuvastatin tá dƣợc bảo quản điều kiện dài hạn 54 Bảng Sự thay đổi hàm lƣợng rosuvastatin tá dƣợc bảo quản điều kiện lão hóa cấp tốc 54 Bảng Kết đo KTG PDI mẫu 56 Bảng Các biến độc lập phụ thuộc 57 Bảng Kết luyện thẩm định mạng neuron nhân tạo 58 Bảng Một số công thức tối ƣu đặc tính hóa lý đƣợc dự đốn 63 Bảng 10 Đặc tính hóa lý mẫu nano nhũ tƣơng tạo thành từ SNEDDS bào chế theo công thức tối ƣu 64 Bảng 11 Kết đánh giá đặc tính SNEDDS Ros mơi trƣờng khác tỉ lệ pha lỗng khác 65 Bảng 12 Thông số dƣợc động học trung bình so sánh sinh khả dụng SNEDDS Ros nguyên liệu Ros 67 Bảng 13 Mơ hình hịa tan với giá trị AIC nhỏ .70 Bảng 14 Giá trị dự đoán Cmax AUC 72 Bảng 15 Ảnh hƣởng nhiệt độ đến bào chế đặc tính SNEDDS Ros 73 Bảng 16 Ảnh hƣởng thiết bị khuấy đến bào chế đặc tính SNEDDS Ros 74 Bảng 17 Ảnh hƣởng tốc độ khuấy đến bào chế đặc tính SNEDDS Ros 75 Bảng 18 Các cách phối hợp dƣợc chất 75 Bảng 19 Ảnh hƣởng cách phối hợp dƣợc chất đến bào chế đặc tính .76 Bảng 20 Kết đánh giá SNEDDS Ros theo quy trình xây dựng 77 Bảng PL 20 Độ ổn định huyết tƣơng thời gian ngắn nhiệt độ phòng sau STT LQCS: 0,440 ng/ml HQCS: 23,475 ng/ml Nồng độ (ng/ml) 0,383 21,501 0,471 21,477 0,463 22,348 0,424 22,845 0,433 21,996 0,433 27,149 Trung bình 0,434 22,886 CV (%) 6,6 8,6 % Độ ổn định 98,7 97,5 d Độ ổn định huyết tƣơng thời gian dài - Tiến hành: Độ ổn định mẫu huyết tƣơng thời gian dài đƣợc đánh giá nồng độ LQC HQC Chuẩn bị mẫu QC huyết tƣơng ngƣời nồng độ LQC HQC Bảo quản mẫu -350C Sau khoảng thời gian dự kiến (63 ngày), xác định nồng độ mẫu độ ổn định Các mẫu ổn định đƣợc phân tích với đƣờng chuẩn mẫu QC pha So sánh nồng độ trung bình mẫu ổn định với nồng độ pha thực tế - Yêu cầu: Độ ổn định phải nằm khoảng 85% - 115% Giá trị CV (%) kết định lƣợng phải ≤ 15 % - Kết quả: Kết đƣợc trình bày Bảng PL 21 Bảng PL 21 Độ ổn định huyết tƣơng thời gian dài sau 63 ngày STT LQCS: 0,440 ng/ml HQCS: 23,475 ng/ml Nồng độ (ng/ml) 0,480 22,840 0,486 24,649 0,328 24,054 0,484 22,252 PL79 STT LQCS: 0,440 ng/ml HQCS: 23,475 ng/ml Nồng độ (ng/ml) 0,419 23,284 0,439 25,167 Trung bình 0,439 23,708 CV (%) 13,9 4,7 % Độ ổn định 99,9 101,0 e Độ ổn định mẫu autosampler - Tiến hành: Chuẩn bị mẫu QC huyết tƣơng ngƣời nồng độ LQC HQC Xử lý mẫu theo qui trình thẩm định Mẫu sau xử lý đƣợc bảo quản autosampler nhiệt độ phòng Sau 71 giờ, phân tích sắc ký để xác định nồng độ chất phân tích có mẫu Q trình phân tích mẫu độ ổn định đƣợc phân tích song song với mẫu QC mẫu đƣờng chuẩn pha - Yêu cầu: Độ ổn định phải nằm khoảng 85% - 115% Giá trị CV (%) kết định lƣợng phải ≤ 15 % - Kết quả: Kết đƣợc trình bày Bảng PL 22 Bảng PL 22 Kết độ ổn định autosampler sau 71 STT LQCS: 0,439 ng/ml HQCS: 23,438 ng/ml Nồng độ (ng/ml) 0,464 22,677 0,531 25,881 0,455 26,156 0,410 20,425 0,415 24,006 0,413 24,791 Trung bình 0,448 23,989 CV (%) 10,5 9,0 % Độ ổn định 102,1 102,4 PL80 Nhận xét: Phân trăm độ ổn định LQCS HQCS nằm khoảng 85%115%, giá trị CV (%) nhỏ 15% Nhƣ vậy, tiêu độ ổn định mẫu huyết tƣơng đạt yêu cầu Kết luận: Kết thẩm định phƣơng pháp tiêu: độ đặc hiệu – chọn lọc, ảnh hƣởng mẫu, độ nhiễm chéo, độ - độ xác, độ pha lỗng, khoảng tuyến tính, giới hạn định lƣợng dƣới, tỷ lệ thu hồi, độ ổn định cho thấy phƣơng pháp xây dựng đáp ứng yêu cầu phƣơng pháp phân tích thuốc sinh học Phƣơng pháp đƣợc áp dụng để xác định nồng độ rosuvastatin huyết tƣơng ngƣời nghiên cứu SKD đánh giá TĐSH chế phẩm chứa rosuvastatin PL81 PHỤ LỤC 3.2 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU SINH KHẢ DỤNG TRÊN NGƢỜI TÌNH NGUYỆN Bảng PL 23 Nồng độ rosuvastatin huyết tƣơng sau uống thuốc Thử (ng/ml) Thời điểm lấy mẫu (giờ) Trình Mã tự NTN TR R01 0,000 22,291 18,246 21,247 25,409 25,517 25,155 20,579 18,849 19,422 14,843 11,437 10,177 7,005 4,851 2,890 1,679 0,879 0,548 0,353 RT R02 BQL 8,663 16,551 20,564 23,267 24,281 21,994 25,649 25,303 28,895 21,634 18,746 15,785 13,884 6,906 3,035 1,867 0,496 0,936 BQL RT R03 BQL 15,889 18,897 18,906 23,054 22,066 20,439 21,145 17,701 26,261 18,731 14,780 12,547 10,345 7,380 3,145 1,627 1,151 0,894 0,520 TR R04 0,000 4,621 5,863 8,269 9,829 12,776 13,424 13,775 13,283 19,260 16,795 13,199 12,846 11,365 5,469 2,349 1,678 0,793 0,567 0,225 RT R05 BQL 3,955 12,001 15,062 19,143 16,702 16,610 17,781 19,986 24,208 20,309 13,852 10,002 7,244 3,414 1,501 1,124 0,706 0,433 0,499 TR R06 BQL 6,126 9,223 11,741 14,090 18,114 17,810 17,699 21,169 21,184 17,755 12,470 9,607 5,439 3,540 1,662 1,258 1,254 0,513 0,417 RT R07 BQL 9,713 25,489 26,180 27,894 26,190 31,733 28,918 23,889 31,352 21,558 17,846 14,482 12,655 5,288 1,931 1,732 0,816 0,444* 0,249 RT R08 0,000 2,694 13,197 15,671 18,076 21,320 21,506 20,503 20,046 21,298 16,744 11,615 9,094 6,218 4,271 1,579 1,240 0,497 0,199* BQL TR R09 0,000 19,372 37,561 34,526 27,912 36,844 22,551 23,152 20,599 24,145 16,747 11,735 11,198 8,245 2,968 1,181 0,922 0,504 0,194 BQL RT R10 BQL 7,457 13,705 12,913 13,629 14,243 15,563 13,750 15,378 17,614 13,936 11,266 10,428 7,715 4,797 2,212 1,789 1,233 0,959 0,148 RT R11 0,000 2,598 5,466 8,486 12,985 14,328 13,687 19,040 16,240 18,379 10,746 9,790 6,529 4,540 2,582 1,888 1,285 0,628 0,421 0,159 TR R12 0,000 5,033 10,071 17,390 22,696 24,645 26,231 21,706 25,459 34,892 19,718 13,810 10,756 5,431 3,322 1,081 0,879 0,539 0,391 0,179 RT R13 0,000 3,012 6,975 11,980 12,161 15,016 13,316 12,766 12,026 14,352 11,135 8,935 6,970 5,175 2,755 1,240 0,860 0,385 0,235 BQL TR R14 0,000 4,252 6,330 8,245 9,454 9,136 12,200 10,592 11,890 13,395 9,848 8,063 7,955 5,961 3,878 1,615 0,770 0,667 0,337 BQL 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 PL82 5,0 6,0 7,0 9,0 12,0 16,0 24,0 36,0 48,0 72,0 Thời điểm lấy mẫu (giờ) Trình Mã tự NTN RT R15 0,000 17,878 16,500 18,810 19,464 18,153 19,006 23,419 17,922 26,463 17,007 10,842 13,453 6,892 3,753 1,593 1,149 0,510 0,336 BQL TR R16 0,000 10,382 20,749 26,392 26,119 22,960 22,981 23,498 23,128 21,630 18,277 11,089 7,146 4,041 2,468 1,251 1,187 0,981 0,477 0,254 RT R17 0,000 2,460 4,962 8,359 12,365 13,132 13,884 17,749 18,413 16,097 11,015 9,677 6,175 4,427 2,624 1,900 1,280 0,621 0,423 BQL TR R18 0,000 5,332 16,801 20,826 32,165 28,924 30,497 29,111 26,954 39,222 26,897 20,763 16,422 10,728 5,934 2,734 1,497 1,093 0,596 0,186 TR R19 BQL 6,102 14,545 23,618 25,906 31,324 32,768 36,214 39,884 41,015 27,588 19,776 13,552 8,460 3,691 1,599 1,145 0,554 0,261 BQL RT R20 0,000 3,539 7,117 11,453 14,209 16,693 16,989 17,900 17,513 17,138 11,308 10,499 6,929 4,398 1,895 0,895 1,075 0,427 0,594 BQL TR R21 0,000 4,269 8,453 8,675 7,091 9,401 8,996 9,848 9,462 12,453 10,652 8,268 6,745 6,559 2,739 0,913 0,661 0,603 0,200 BQL TR R22 BQL 4,110 7,820 12,205 9,921 10,639 10,132 9,414 9,167 10,485 9,055 6,089 5,126 3,087 1,424 0,631 0,620 0,291 0,206 BQL RT R23 0,000 7,565 8,420 10,290 11,094 13,893 13,898 11,956 11,406 14,987 12,868 10,387 8,592 5,497 2,822 1,181 0,859 0,452 0,164 0,175 TR R24 0,000 14,759 29,158 40,946 45,207 50,047 48,980 44,710 44,936 41,566 26,591 19,342 15,746 8,735 5,096 2,561 1,966 0,516 0,317 BQL 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 6,0 7,0 9,0 12,0 16,0 24,0 36,0 48,0 72,0 TB 0,000 8,003 13,921 17,198 19,298 20,681 20,431 20,453 20,025 23,155 16,740 12,678 10,344 7,252 3,911 1,774 1,256 0,692 0,455 0,140 SD 0,000 5,806 8,195 8,576 9,017 9,510 8,996 8,395 8,551 9,016 5,492 4,000 3,370 2,837 1,532 0,710 0,395 0,275 0,235 0,170 CV% 72,5 58,9 49,9 46,7 46,0 44,0 41,0 42,7 38,9 32,8 31,6 32,6 39,1 39,2 40,1 31,4 39,8 51,7 121,6 BQL: Dưới LLOQ, (*): thời gian lấy mẫu sai lệch so với đề cương, không đưa vào tính trung bình PL83 Bảng PL 24 Nồng độ rosuvastatin huyết tƣơng sau uống thuốc Chứng (ng/ml) Thời điểm lấy mẫu (giờ) Trình Mã tự NTN TR R01 BQL 5,463 12,025 14,913 14,657 14,011 22,228 16,950 21,348 26,099 18,159 13,840 11,882 9,553 5,238 2,616 2,122 1,130 0,797 0,219 RT R02 BQL 6,716 11,842 17,910 18,121 25,392 24,922 21,686 22,529 38,408 25,859 19,720 16,242 9,977 6,635 2,840 2,122 1,155 0,511 0,274 RT R03 BQL 7,297 10,231 13,991 16,755 18,558 19,642 18,600 17,448 24,087 18,236 14,071 13,315 10,025 6,179 3,875 1,420 1,119 0,551 0,251 TR R04 BQL 3,151 8,425 10,042 11,626 15,300 14,526 15,556 15,767 24,428 17,042 13,820 13,161 11,171 5,390 2,911 2,043 0,738 0,325 0,147 RT R05 BQL 7,750 16,792 26,134 21,940 20,580 20,000 15,978 16,672 20,906 13,136 12,840 7,542 3,908 2,284 1,191 0,624 0,301 0,293 0,209 TR R06 BQL 7,538 12,928 12,021 11,861 12,305 13,771 14,405 15,040 17,179 13,258 11,587 8,454 4,838 3,191 1,211 1,308 0,877 0,604 0,384 RT R07 BQL 1,042 3,840 6,400 7,456 10,111 10,215 14,492 14,981 22,459 21,309 18,092 13,947 8,131 4,707 1,752 1,229 1,323 0,468 0,245* RT R08 BQL 4,784 9,152 11,682 16,503 16,160 18,895 18,225 19,549 22,692 18,075 12,645 9,492 6,845 3,909 2,029 1,085 0,529 0,243 TR R09 0,000 12,725 16,034 18,058 15,885 18,498 18,695 18,786 17,348 22,936 15,448 11,955 10,719 10,148 4,152 1,699 1,277 0,979 0,467 0,285 RT R10 BQL 2,385 5,978 9,534 12,324 15,812 19,792 19,074 18,657 21,784 15,946 14,561 12,943 11,450 5,979 3,386 2,446 1,753 0,507 0,211 RT R11 0,000 3,906 6,134 7,866 10,792 11,580 10,501 11,852 9,493 11,211 7,504 6,383 5,079 2,725 1,394 0,992 0,795 0,483 0,284 TR R12 0,000 2,616 6,179 11,213 17,147 19,598 17,604 18,175 18,729 21,347 18,160 12,310 8,680 4,720 2,930 0,925 0,773 0,400 0,163* BQL RT R13 0,000 5,503 10,046 12,542 14,053 12,677 13,160 10,279 8,507 8,962 8,075 5,943 4,692 3,857 1,975 1,281 0,840 0,661 0,384 0,217 TR R14 0,000 4,213 9,009 9,947 10,374 11,432 12,469 10,712 10,590 11,537 21,058 8,881 7,670 5,689 3,635 1,243 0,661 0,594 0,367 BQL RT R15 0,000 7,480 7,721 8,238 11,450 10,713 11,752 9,659 11,064 12,868 11,367 8,359 7,024 4,495 2,382 1,040 0,933 0,403 0,263 BQL TR R16 0,000 5,850 10,617 14,482 16,604 16,727 16,383 15,817 19,384 20,978 16,023 8,700 4,895 4,895 2,253 1,236 0,930 0,533 0,344 0,445 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 PL84 4,5 5,0 6,0 7,0 9,0 12,0 16,0 24,0 36,0 48,0 72,0 BQL BQL Thời điểm lấy mẫu (giờ) Trình Mã tự NTN RT R17 0,000 2,532 6,302 10,605 17,396 16,936 17,415 22,502 18,678 18,639 17,673 12,207 8,518 4,775 3,055 0,861 0,750 0,349 0,372* 0,169 TR R18 0,000 10,197 28,809 41,240 49,683 40,785 36,161 28,444 27,342 35,567 26,243 20,965 19,298 12,007 6,535 2,486 1,649 1,103 0,551* 0,168 TR R19 0,000 3,076 9,320 16,595 21,092 24,436 47,925 43,619 43,213 42,953 26,599 15,505 12,317 8,849 3,328 1,125 1,440 0,491 0,287 BQL RT R20 0,000 5,945 11,724 15,031 16,575 17,814 17,590 15,883 17,311 19,776 14,844 11,788 8,505 4,888 2,303 0,965 0,918 0,596 0,187 BQL TR R21 0,000 3,351 6,515 6,725 8,080 10,041 9,929 9,526 10,134 12,560 11,889 8,968 7,202 5,914 2,631 1,020 0,625 0,536 0,347 BQL TR R22 BQL 6,492 7,856 9,504 10,915 13,191 12,430 12,600 12,226 14,225 13,775 9,135 8,544 5,139 4,411 1,904 0,643 0,298 0,191 BQL RT R23 0,000 9,503 9,337 11,772 9,576 9,368 8,212 6,155 7,726 10,361 7,423 7,444 5,928 4,948 1,942 0,751 0,552 0,473 0,253 BQL TR R24 0,000 12,474 32,295 29,102 26,451 28,897 29,615 24,844 28,310 28,524 19,174 14,343 12,142 6,711 3,708 1,408 1,186 0,501 0,154 BQL 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 6,0 7,0 9,0 12,0 16,0 24,0 36,0 48,0 72,0 TB 0,000 5,916 11,213 14,398 16,138 17,122 18,493 17,242 17,585 21,270 16,511 12,253 9,925 6,902 3,756 1,698 1,182 0,722 0,373 0,130 SD 0,000 3,102 6,731 7,922 8,474 7,165 9,008 7,637 7,675 8,741 5,372 3,916 3,722 2,794 1,569 0,875 0,547 0,375 0,159 0,142 CV% 52,4 60,0 55,0 52,5 41,8 48,7 44,3 43,6 41,1 32,5 32,0 37,5 40,5 41,8 51,5 46,3 52,0 42,6 109,3 BQL: Dưới LLOQ, (*): thời gian lấy mẫu sai lệch so với đề cương, khơng đưa vào tính trung bình PL85 Hình PL 23 Kết định lƣợng nồng độ rosuvastatin huyết tƣơng ngƣời tình nguyện R01 sau uống Nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg thời điểm 1,5 Hình PL 14 Kết định lƣợng nồng độ rosuvastatin huyết tƣơng ngƣời tình nguyện R01 sau uống viên Crestor®10 mg thời điểm 1,5 g PL86 PHỤ LỤC 3.3 CHẤP THUẬN THỰC HIỆN NGHIÊN CỨU 3.3.1 Chấp thuận Hội đồng đạo đức cho thực nghiên cứu PL87 PL88 3.3.2 Quyết định thực nghiên cứu Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ƣơng PL89 PHỤ LỤC 3.4 DỮ LIỆU MƠ HÌNH DƢỢC ĐỘNG HỌC SINH LÝ pH 1,2 pH 4,5 100 100 80 80 60 Nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg 40 % Hịa tan 120 % Hịa tan 120 Crestor® 10 mg 20 60 Nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg 40 Crestor® 10 mg 20 0 12 15 Thời gian (phút) 100 100 80 80 Nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg Crestor® 10 mg 20 12 15 pH 6,8 120 % Hòa tan % Hòa tan pH 6,6 40 Thời gian (phút) 120 60 60 40 Nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg 20 Crestor® 10 mg 0 12 15 Thời gian (phút) 12 15 Thời gian (phút) Hình PL Đƣờng cong hòa tan in vitro viên nang cứng SNEDDS rosuvastatin 10 mg Crestor® 10 mg mơi trƣờng pH khác Bảng PL 25 Giá trị thơng số sử dụng mơ mơ hình dƣợc động học sinh lý Thông số Khối lƣợng phân tử (Da) LogP Dạng dƣợc chất pKa Tỷ lệ máu/huyết tƣơng Phần không liên kết huyết tƣơng Giá trị 481,54 2,4 acid 4,6 0,625 0,107 PL90 Tham khảo [74] [10] [91] [78], [111] [78], [111] Thông số Giá trị Tham khảo Ƣớc lƣợng Gastroplus Độ tan sinh học (mg/ml) 0,926 Hấp thu Khả thấm (Peff) Phân bố 1,02 Giá trị tối ƣu Tmax Vss (l/kg) 0,227 Ƣớc lƣợng Gastroplus Kp Thải trừ CLint (µl/phút/mg protein) Phần trăm tái hấp thu Vận chuyển (chủ động thu động) Dòng chảy BCRP ruột 17 100 Jmax (pmol/phút/triệu tế bào) 380 [74] [74] Ƣớc 147,84 Gastroplus Ƣớc Km (mg/l) lƣợng lƣợng Gastroplus BCRP REF ruột CLint.T (μl/min) 0,0015 Ƣớc lƣợng Gastroplus 155 Ƣớc lƣợng Gastroplus Vận chuyển gan CLint,T,OATP1B1 (µl/phút/triệu tế bào gan) OATP1B1 REF gan CLint,T,OATP1B3 (µl/phút/triệu tế bào gan) 43 OATP1B3 REF gan CLint,T,NTCP (µl/phút/triệu tế bào gan) 24 NTCP REF gan CLint,T,MRP4 (µl/phút/triệu tế bào gan) 12 MRP4 REF gan CLint,T,BCRP (µl/phút/triệu tế bào gan) 3,8 BCRP REF gan CLPD (tính thấm thụ động hình sin) (µl/phút/triệu tế bào gan) Vận chuyển thận CLint, T, OAT3 (µl/phút/triệu tế bào) PL91 Ƣớc lƣợng Gastroplus Ƣớc lƣợng Gastroplus Ƣớc lƣợng Gastroplus Ƣớc lƣợng Gastroplus 0,0025 [93] 150 Ƣớc lƣợng Gastroplus Thông số Giá trị 150 Tham khảo REF CLint, T, BCRP (µl/phút/triệu tế bào) REF Hệ số tỷ lệ hấp thu ngăn Tá tràng (Duod) 2,321 Hỗng tràng (J1) 2,276 Hỗng tràng (J2) 2,146 Hồi tràng (I1) 2,021 Hồi tràng (I2) 1,914 Hồi tràng (I3) 1,806 Manh tràng (I4) 11,432 Đại tràng 1,304 Thời gian Thời gian lắng trung bình (giây) 900 Vận chuyển dày trung bình (giờ) 0,066 Vận chuyển ruột non trung bình (giờ) 4,001 Hấp thu đại tràng trung bình (giờ) 7,527 Tổng mơ (giờ) 72 Kích thƣớc Chiều dài ruột non (cm) 381,317 Bán kính ruột non (cm) 0,967 Hệ số hấp thu ngăn (ASF's) Duod J1 J2 I1 I2 I3 I4 Đại tràng 0 0 0 0 C1Alpha = 2.26E-9 C2Alpha = 0.31539 C3Alpha = 1.5187 C4Alpha = 2.7416 Stom Duod J1 J2 I1 I2 I3 I4 Colon 2,321 2,276 2,146 2,021 1,914 1,806 11,4321 COMPARTMENT pH's: Stom Duod J1 J2 I1 I2 I3 I4 Colon 1,3 6, 6,2 6,4 6,6 6,9 7,4 6,4 6,8 Thông số dƣợc động học Thanh thải (CL, L.h -1 ) 1,42E-3 Ƣớc lƣợng Gastroplus Vc 0,0277 Ƣớc lƣợng Gastroplus K12 0,04269 Ƣớc lƣợng Gastroplus PL92 Ƣớc lƣợng Gastroplus Mặc định Gastroplus Mặc định Gastroplus Mặc định Gastroplus Mặc định Gastroplus Mặc định Gastroplus Mặc định Gastroplus Mặc định Gastroplus Mặc định Gastroplus Mặc định Gastroplus Mặc định Gastroplus Mặc định Gastroplus Mặc định Gastroplus Mặc định Gastroplus Mặc định Gastroplus Mặc định Gastroplus Thông số K21 Khối lƣợng ngƣời tình nguyện (kg) Giá trị 2,6656 Tham khảo Ƣớc lƣợng Gastroplus 57,4 Ƣớc lƣợng Gastroplus Ƣớc lƣợng Gastroplus Thời gian bán thải 4,31 Ghi chú: BCRP: protein kháng ung thƣ vú (breast cancer resistance protein); CLint: thải gan (intrinsic hepatic clearance); CLPD: thải phúc mạc (peritoneal clearance); Jmax: lƣu lƣợng tối đa (maximum flux); Km: số Michaelis–Menten; Kp: hệ số phân vùng (partition coefficient); MRP4: protein đa kháng thuốc (multidrug resistance protein 4); NTCP: polypeptid đồng vận chuyển natritaurocholat (sodium-taurocholate co-transporting polypeptide); OATP: polypeptid vận chuyển anion hữu (organic anion-transporting polypeptide); pKa: số phân ly acid (acid dissociation constant); Vss: thể tích phân bố biểu kiến trạng thái ổn định (apparent volume of distribution at steady state) PL93