Nghiên cứu bào chế viên nang cứng bảo nhãn nhang dưỡng huyết và thử độc tính cấp của chế phẩm

T À I L IỆ U T H A M K H Ả O Đỗ Tất Lọi (1999), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, tr.844­846 Chen H.J., et al.(2010), “Mast cell dependent allergic responses are inhibited by ethanolic extract of adlay testa”, Journal o fAgricultural and Food Ch mistry, 58(4), pp 2596­2601 CoeFredric L­, et al "Pathology and ứeatment of kidney stone", Mdicalprogrss, VOỈ327, pp 1141­1150 Gohel Wong s.p (2006), “Chinese herbal medicines and their efficacy in treating renal stones”, Urology R s arch, 34, pp 365­372 Jaganathan KS, et al (2013), “Events associated with apoptotic effect of p ­Coumaric acid in HCT­15 colon 21, pp.7726­7734 cancer cells”, WorldJournalGastront rol Karadi VR, et al (2006) “Effect of Moringa ol if Lam root­wood on ethylene glycol induced urolithiasis in rats”, Journal of Ethnopharmacology 105 pp.306­311 M Beghalia, et al (2008), “Inhibition of canxium oxalate monohydrate crystal growth using Algerian medicinal plants”, Journal o f m dicinal plants r s arch, pp.66 ­ 70 Takahashi H., et al.(1999), “Coumaroyl triterpenes from Casuarina quis tifolid”, Phytoch mmistry, 51, pp.543­550 NGHIÊN c ứ BÀO CHỂ VIÊN NANG CÚNG BẢO NHÃN KHANG DƯỠNG HUYÉT VÀ TH ĐỘC TÍNH CÁP CỦA CHỂ PHẢM ThS N guyễn Th ị K im Oanh*; ThS K kể n g T hị Hoa*; T hS Đ ặng T hu H ằng * T Ó M TẲ T H ởn g dẫn: PG S.TS H oàng N ăng Trọng* Viên nang cứng Bảo nhãn khang dưỡng huyết chứa 98% cao chiết 14 vị dược liệu với tá dược thích hợp Hỗn hợp bột đóng vào nang số 0, khối lượng trung b nh nang ià 590 mg, thích hợp cho việc chia liều sử đụng Sản phẩm nghiên cứa thử độc tính cấp xác định liều an tồn Kết cho thấy không xác định LD50 động vật thực nghiệm, sàn phẩm an toàn liều tương đối an toàn Ds = 0,43 gam/kg chuột * Từ khóa: Viên nang cống; Bảo nhãn khang dưỡng huyết; Độc tính cấp Preparation o f h a rd capsule Bao nhan khang đuong h uyet a n d determination o f its acute toxicity in a p ilo t study Sum m ary Hard capsule Bao nhan khang duong huy t includes 98% of extract from 14 herbals and compatible excipients Mixed powder is filled into the capsule number 0, mean weight of 590 mg This product is appropriate for divided doses The study was conducted to assess the acute toxicity (LD) and determine safety of dosage The result showed that no LD50was observed on experimental animals and the relative safety was Ds= 0.43 gram/kg weight * Key word: Hard capsule; Bao nhan khang duong huyet; Acute toxicity I Đ Ặ T V Ấ N Đ È Ngày nay, tổn thương hắc ­ võng mạc trở thành nguyên nhân phổ biến gây giảm thị lực mù lòa, đặc biệt người cao tuổi Việc điều trị tổn thương phục hồi thị lực cho bệnh nhân cịn gặp nhiều khó khăn v cần điêu trị toàn thân thời gian kéo dài * Đợi học Y Dược Thái Bình 522 Hiện nay, thị trường có nhiều sản phẩm giúp bảo vệ mắt, nhằm nâng cao cải thiện chức sinh lý mắt, góp phần phục vụ nhu cầu phịng điều trị bệnh võng mạc Để góp phần tạo m ột sản phẩm vừa an toàn, hiệu lại tiện đụng mà giữ nguyên tác dụng thuốc y học cổ truyền, tiến hành đề tài nhằm: “ Xây dự ng quy trìn h bào c h ế viên nan g ng Bảo nh ãn kh an g dưỡ n g huyết - Xác định độc tính cấp (LĐ) c h ế p h ẩ m n ĐÓI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u 2.1 Đổi tượng nghiên cứu ­ Các liệu có cơng thức ­ Các tá dùng cho thuốc nang cứng ­ Kỹ thuật sản xuất thuốc nang cứng ~ Động vật nghiên cứu: 80 chuột nhắt trắng chủng Swiss đáp ứng tiêu chuẩn nghiên cứu trọng lượng từ 18 ­ 22g không phân biệt đực cái, không chửa 2.2 ThM gian nghiên cứu Từ tháng 10 ­ 2013 đến ­ 2014 2.3 Địa điểm nghiên cứu Y Nghiên cứu thực Bộ M ôn Bào chế ­ Công nghiệp dược ­ Khoa Dược ­ Trường Đại học Dưạc Thái B nh 2.4 Nguyên vật liệu, thiết bị 2.4.1 N guyên v ậ t liệu Các dược liệu c công thúc: Xuyên khung, Đương quy, Bạch thuợc, Sinh địa, Hạ khô thảo, Ngưu tất, Phòng phong, Kim ngân hoa, Mẩu đơn b , Cam thảo, Tri mẫu, Cúc hoa, X a tiền tử, Hoàng liên Đạt theo tiêu chuẩn Dược điển V iệt Nam ­ 2010 Các tá dược ­ Lactose (DĐVN4­2010), calci carbonat (DĐVN4­2010), Talc (DĐVN4­2010), Nipagin (TCCS), nước tinh khiết (DĐVN4­2010), vỏ nang số o (TCCS), lọ nhựa, nút nắp, nhãn (TCCS) 2.4.2 T hiết bị » Thiết bị để bào chế nang: Các dụng cụ thí nghiệm inox, thủy tinh chịu nhiệt, rây cỡ, khay sấy, cối chày sứ, thùng nấu cao, nồi cách thủy, tủ lạnh, máy đóng nang cứng bán tự động model D T i­ c , tủ sấy M O V ­112 ­ Thiết bị để thử độc tính: Cân điện tử AND ­ G F ­ 300, kim đầu tù, methyl đỏ, phịng ni động vật thực nghiệm: nền, trần, vách, khoảng khơng phịng, đụng cụ ni: kệ ni, lồng, nắp, chai ọ đựng nước ng, quạt, hệ thống điều hịa; hệ thống sấy trẩu vô trùng, hệ thống nước: b nh chứa nước, máy lọc nước, vật dụng, phương tiện vận chuyển vào phịng ni: xe, kệ đẩy, khu vực bão quản thức ăn: Thức ăn cho chuột từ Viện V ệ sinh dịch tễ TW 2.5 Phương pháp nghiên cún 2.5.1 Phương pháp bào chế cao dược liệu [6 ,9 ] Có nhiều phương pháp bào chế cao liệu, phương pháp có un nhược điểm, k ỹ Èhuật tiến hành riêng vào đặc điểm dược liệu hạch toán kinh tế Quá tr nh điều chế cao gồm bước: 523 + Điều chévdịch chiết + Loại tạp chất địch chiết + Cơ đặc, sấy khơ + Hồn chỉnh chế phẩm Chóng tơi chọn phương pháp điều chế dịch chiết cách nấu với nước v phù hợp với đặc tính liệu có cơng thức, cách làm tương đối đơn giản, chi phí hợp lý Mỗi lô gồm 14 dược liệu đạt tiêu chuẩn, nấu liên tục thời gian Đủ thời gian, rút dịch chiết, tiếp tục ỉằm lần địch chiết 1, 2, Bỏ bã ­ Loại tạp, cô sấy cao Cô riêng dịch chiết nồi cách thủy nhiệt độ khoảng 70 ­ 80°c, thể chất dịch chiết gần giống nhau, gộp dịch chiết lại Loại tạp cách để lắng qua 48 giờ, gạn bỏ cặn Dịch chiết cô chung cách thủy thu cao mềm, sờ khồng dính tay Cho cao mềm vào tủ sấy, sấy độ ẩm cao đạt khoảng 10% 2.5.2 Phương pháp bào chế viên nang cứng từ cao dược liệu [2 ,9 ] Cao dược liệu đạt yêu cầu nghiền nhỏ, rây qua cỡ rây 180 ­ Chọn cỡ nang: Chúng xác định cỡ nang theo công thức: Khối iượng thuốc đóng vào nang = Khối lượng riêng biểu kiến XDung tích nang Khối lượng riêng biểu kiến khối bột tính theo cơng thức: đ = m /v Từ chọn cỡ nang thích hợp 2.5.3 Vận hành máy đóng nang bán tự động Máy đóng nang bán tự động model DTJ­C cùa Trung Quốc vận hành với thông số sau: ­N guồ n điện: 380V­ 50Hz ­ Công suất: 3,15 KW ­ Độ chân không: 20 m3/giờ 0,02 ­ 0,03 Mpa ­ Cỡ nang số ­ Năng suất: 11.000 nang/giờ 2.5.4 Công thức hỗn h ọp đóng vào nang Cao dược liệu: 98%; bột Talc:l,0% ; Aerosil: 1,0% 2.5.5 Phưong pháp thử độc tilth c p [ , , ,8 ] Xác định độc tính cẩp LDso chuột nhắt trắng theo đường uống phương pháp Litchfield ­ Wilcoxon Thử độc tính cấp nhằm xác định: Liều an tồn, liều đung nạp tối đa, liều gây độc tính quan sát được, liều thấp gây chết động vật thí nghiệm (nếu có), liều LD50, xác định quan đích gây độc tính thuốc, triệu chứng ngộ độc điển h nh quan sát động vật khả phục hồi (nếu có) Chuột nhắt trắng (đực cái) tuần tuổi sử dụng cho việc nghiên cửu độc tính cấp lai tạo ni dưỡng Viện Vệ sinh dịch tễ TW Chuột nhốt lồng thép không rỉ rải vỏ trấu Các loài động vật đưa đến điều kiện phịng th í nghiệm tuần trước thử nghiệm Nhiệt độ lồng tr từ 25 ± ° c với độ ầm tương đối 30 ­ 70% chu kỳ chiếu sáng thiết lập để chiếu sáng 12 gịờ để tối 12 Chuột cho ăn thức ăn viên phịng thí nghiệm tiêu chuan (M/s Gold Mohur Thực phẩm Feeds Ltd, Bangalore, Ấn Độ) 524 Chuột nhắt chia ngẫu nhiên thành nhóm (n = 10) Chuột cho nhịn ăn qua đêm, uống nước tự sau uống địch chiết nước Bảo nhãn khang dường huyết mức liều Nhóm chứng cho uống 10 ml/kg dung dịch muối sinh lý Cách xử lý m ẫu chuẩn bị mẫu thử: Cân xác lượng mẫu thử, nghiền mịn, cho từ từ nước cất để hòa tan, thêm nước cất vừa đủ để thu dung dịch lg /lm l T dung dịch gốc pha loãng với nước cất để hỗn dịch cỏ nồng độ thích họp, cụ thể sau: Đảng Liều dự kiến chuột Số gam cao D L /lnang Liều trê n ngưòi Liều quy đồi chuột {1/12 liều người) Liều d kiến chuột (20g) Tỉ lệ liều dùng chuột/người 0,578 g 18 nang/người/ngày 0,017 g/kg/ngày 0,17 g/kg/ngày 10 lần 0,017 g/kg/ngày 0,51 g/kg/ngày 30 lần 0,017 g/kg/ngày 0,85 g/kg/ngày 50 lần 0,017 g/kg/ngày 1,19 g/kg/ngày 70 lần 0,0Í7 g/kg/ngày 1,36 g/kg/ngày 80 lần 0,017 g/kg/ngày 1,53 g/kg/ngày 90 lần Th o dõi đánh giá + Neu thí nghiệm độc cấp diễn tiến hành thuận lợi th thu LD50 (để đánh giá mức độ độc cẩn thận sử đụng), thu liều tối đa an tồn cho thí nghiệm khác, thu số triệu chứng quý giá có giá trị gợi ý cho việc t m chế gây độc theo dõi lâm sàng + Khi tiến hành thí nghiệm độc tính cấp thuốc cổ truyền, gặp phải số phức tạp khác biệt vói lý thuyết y học cổ truyền y học đại, không xử lý dạng thuốc để thử đường uống t nh h nh súc vật chết không theo quy luật lượng đổi, chất đổi Tiến hành theo dôi chuột vòng 14 ngày sau uống chế phẩm thử, ghi chép lại thông số sau: ­ T nh trạng chung chuột: hoạt động tự nhiên, tư thế, màu sắc (mũi, tai, đuôi), lông, phấn, nước tiểu “ Sự tiêu thụ thức ăn, nước uổng ­ Số động vật chết Khi chuột chết mổ để quan sát đại thể quan phủ tạng Nếu cần làm thêm vi thể để xác định nguyên nhân ­ Xác định LD50: Đếm số chuột chết lơ vịng 72 để tính tốn LDS0 Quan sát dấu hiệu nhiễm độc thực 15, 30 ,6 0, 120,180 phút, 24 ngày đến ngày thứ 14 sau cho chuột uống dịch chiết 2.6 Phương pháp xử lý Ỉhốiỉg kê tính kết [7] 2.6.1 Trường họp xác định cụ thể số động vật chết Kết xử lý test t­student (để t m khác biệt nhóm) test ANOVA chiều để t m khác biệt có ý nghĩa nhóm Các két thống kê thục phần mềm S­plus 8.0 Kiểm tra phương sai nhóm đồ thị h nh hộp (box­plot) Giá trị p < 0,05 xem khác biệt có ý nghĩa thống kê Tính LD50 theo Behrens _ ( ­ a) X d LD 50 = A + ­­­­­­­­­­­­­­­­­ b ­a Trong đó: A ­ Liều gây chết a% ĐVTN; a ­ % ĐVTN chết sát 50% cho a < 50%; b ­ % ĐVTN chết sát 50% cho b > 50%; d ­ khoảng cách ỉiều (g) 525 T ín h sa i s ố c h u ẩ n : kSd (sLDsO)2 = -Trong đó: k: hệ số Behrens = 0,66 n: Số chuột nhóm Tinh sai sỗ chuẩn: kSđ (SjLD5o)2 “ ­­­­­­ 7­­­­­­ n Trong đó: k: hệ số Behrens = 0,66 n: Số chuột nhóm kSd Sai số chuẩn: (sL sO)2 = -n Độ độc chuột ­ .M ư/m l dịch chiết 2.6.2.Trường hợp xác định độc tính c p, khơng tìm LDso Có thể gặp trường hợp: ­ Đã thử đến liều có động vật thí nghiệm chết, khơng có liều đạt mức độ chết 100% gần 100% Khi khơng xác định LDso ta xác định liều tối đa mà khơng có vật chết, gọi liều liều chết (LD0) Trong nghiên cứu, để xác định LĐ50, thông thường LD50 gấp ­ lần LD0 V vậy, liều tương đối an toàn Ds dùng cho thực nghiệm dược lý ban đầu lấy giá trị 1/5 LD0 (nếu xác định LD 50 th liều Ds = 1/10 LD jO) ­ Trường họp tất liều thử khơng có vật chết, th liều lớn thử Dmaxchưa liều LĐ0 liềụ tương đối an toàn Ds dùng cho thực nghiệm dược lý ban đầu dùng 1/5 Dmax r a K Ế T QUẢ 3.1 Bào chế viên nang Bảo nhãn khang dư ng huyết 3.1.1 Bào chế cao dược liệu Qua khảo sát ỉô nhỏ, mồi lô 600 g dược liệu, thu số liệu sau: Khối lượng cao dược liệu thu thể bảng sau: Bảng Kết bào chế cao dược liệu Khổỉ lượng riêng Khếi lượng riêng Khối lượng riêng Tổng số liệu đưa vào bào chế Gam 624 Dịch chiết MiỉiUt 1000 Địch chiết Mililit 870 Dịch chiết Miỉilit 500 Lượng cao khô thu Gam 62 Như vậy, lượng cao khô thu từ dược liệu thèo tỷ lệ ­ 1/10 (cao khô/dược liệu) 526 Khối lượng riêng 3.1.2 Kiểm tra độ ẩm cao dược liệu Tiến hành kiểm tra số tiêu độ ẩm theo phương pháp sấy khô tù sấy điều kiện nhiệt độ định để xác định khối lượng làm khô (PL 9.6 DĐVN IV): bột cao đựng chén sứ chịu nhiệt, đem sấy 80°c đến khối lượng không đổi Kết kiểm tra lô sản phẩm sau: Bảng Kết kiểm tra độ ẩm cao dược liệu Tên lô Độ ẩm Lô số 5,6% Lô số 6,0% Lô số 6,7% Lô số 5,7% Lô số 1,3% G hi Cao dược liệu với độ ẩm dạt yêu cầu để đóng vào nang cứng với tiêu chí viên nang chứa íá dược tốt 3.1.3 Kết bào chế viên nang cứng Bảo nhãn khang dư ng huyết * Chọn cỡ nang: Khối lượng thuốc đóng vào nang = KLR biểu kiến Xdung tích nang Khối lượng riêng biểu kiến bột cao tính theo cơng thức: d = m /v Cân lg bột cao cho vào ống đong xác loại 10 ml, gõ nhẹ thể tích khơng đổi, kết thể tích 1,30 ml Vậy KLR biểu kiến bột d 1/1,3 = 0,76 g/mi D ự kiến đ ng m i nang 500 mg 500 mg bột cao chiếm dung tích ỉà: 0,5/0,76 ­ 0,66 mi Dung tích gần với nang số (có đung tích 0,67 ml).Vậy chọn cỡ nang số thích họp * Đ ng nang: Kết đóng nang sau: ­ Tổng khối lượng bột: m = 316,2 g ­ Khối lượng trang b nh nang 590 mg ­ Tổng số nang đóng 525 nang Với kết tính liều dùng ngày hợp lý cho sản phẩm Toàn quy tr nh bào chế viên nang cứng Bảo nhãn khang dưỡng huyết mô tả qua sơ đồ tóm tắt sau đây: 527 H nh Sơ đồ quy tr nh bào chế viên nang cứng Bảo nhãn khang dưỡng huyết 3.1.4 K ết q u ả th độc tín h cấp ­ Chuột nhịn ãn 15 trước thí nghiệm, nước uống theo nhu cầu Kiểm tra cân nặng trước thử nghiệm Chuột đạt yêu cầu cân nặng đưa vào thử nghiệm ­ Tiến hành thử nghiệm thức 80 chuột, ch a thành nhóm thử theo mức liều dự tính ­ Lịch theo dõi: Theo dõi biểu chuột sau uống 24 đầu theo dõi hoạt động ĐVTN thời gian 14 ngày sau uống * K ết th o dõi: a Tiêu thụ thức ăn uống cửa chuột Sau uống dung dich thử: chuột hoạt động, ăn uống b nh thường, b Quan sá t đẩu h iệu n gộ độc: Khơng nhận thấy biểu ngộ độc chuột thí nghiệm ngày theo dõi Mổ chuột lô thấy tim, thận tươi nhuận; dày, ruột hết thuốc c K ết tỷ lệ chuột ch ết lô 528 Bảng Kết thử độc tính cấp chuột Mức liều Liều thử (ml địch chiết gốc/kg chuột) Sổ chuột chết/sếng thực tế s ế chuột chết/sếng kỳ vọng % chết Mức liều 0,17 ml/kg 0 Mức liều 0,51 ml/kg 0 Mức liều 0,85 ml/kg 0 Mức liều 1,19 ml/kg 0 Mức liều 1,36 ml/kg 0 Mức liều 1,53 ml/kg 0 IV BÀN LUẬN Kết sau uống thuốc Bảo nhãn khang dưỡng huyết với mức liều, chuột hoạt động b nh thường, sau 72 đầu ngày theo dõi khơng có chuột chết Để đảm bảo cho kết tin cậy, định thử tiếp lô chuột (10 con) với mức liều lớn (nồng độ thể tích tối đa cho phép hòa tan cho chuột uống được) Qua tr nh khảo sát nhận thấy mức liều cao 1,7 g/kg chuột, sau ngày quan sát chưa thấy chuột chết N hư vậy, chuột uống đến liều cao (nồng độ thể tích tối đa cho phép) 1,7 g/kg trọng lượng chưa thấy biểu ngộ độc khơng có chuột chểt vịng 72 giờ, v chưa xác định LDgo chuột nhắt trắng theo đường uống, liều lớn thử (Dmax= 1,7 g/kg) chưa LD0 Theo tài liệu [14] th liều tương đối an toàn D s dùng cho thực nghiệm dược lý ban đầu lúc tính Ds= l/5 Dmax= 0,34 gam/kg trọng lượng Có thể nhận thấy cao thuốc Bảo nhãn khang dưỡng huyết thuốc có dược liệu nhân dân ta sử dụng từ lâu an toàn với người sử dụng Điều cho thấy m ẫu thử thuốc an toàn Kết luận: viên nang Bảo nhãn khang dưỡng huyết an toàn Liều tưcmg đối an toàn Ds= 0,34 gam/kg chuột V K Ế T LUẬN ­ Đ ã bào chế viên nang cứng Bảo nhãn khang dưỡng huyết quy mô pilot: Tổng số nang đóng 525 nang ­ Đã thử độc tính cấp: viên nang bảo nhãn khang dưỡng huyết an toàn Liều tương đối an toàn Ds~ 0,34 g/kg chuột TÀI LIỆU THAM KHẢO Đỗ Trung Đàm (1996), Phương pháp xác định độc tính cẩp thuốc, Nhà xuất Y học, Hà Nội Trường Đại Học Dược Hà Nội (2006), Kỹ thuật Bào chế sinh dược học tập 1,2, Nhà xuất Y học, Hà Nội Trường Đại Học Dược Hà Nội (2002), Dược học cổ truyền, Nhà xuất Y học, Hà Nội Nguyễn Văn Đàn, Ngô Ngọc Khuyển, Hợp chất thiên nhiên đùng làm thuốc, Nhà xuất Y học, Hà Nội Đỗ Tất Lợi (2000), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội Viện Dược liệu (2006), Nghiên cứu thuốc từ thảo dược, Nhà xuất bàn Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Phương pháp nghiên cứu tác đụng lý thuốc từ thảo 2006 ^ OECD guidelines for testing of chemicals Acute oral toxicity ­ Fixed dose procedure OECD 420, 2001 Handbook of pharmaceutical excipients ­ Published by the pharmaceutical Press and American pharmasists Association ­ 2009 529 ... chuột V K Ế T LUẬN ­ Đ ã bào chế viên nang cứng Bảo nhãn khang dưỡng huyết quy mơ pilot: Tổng số nang đóng 525 nang ­ Đã thử độc tính cấp: viên nang bảo nhãn khang dưỡng huyết an toàn Liều tương... tính liều dùng ngày hợp lý cho sản phẩm Toàn quy tr nh bào chế viên nang cứng Bảo nhãn khang dưỡng huyết mơ tả qua sơ đồ tóm tắt sau đây: 527 H nh Sơ đồ quy tr nh bào chế viên nang cứng Bảo nhãn. .. cứng với tiêu chí viên nang chứa íá dược tốt 3.1.3 Kết bào chế viên nang cứng Bảo nhãn khang dư ng huyết * Chọn cỡ nang: Khối lượng thuốc đóng vào nang = KLR biểu kiến Xdung tích nang Khối lượng