Nghiên cứu thu nhận sản phẩm thủy phân protein từ bã đậu nành của công nghiệp sản xuất sữa bằng chế phẩm enzyme thương mại

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - CAO THỊ KIM CHI NGHIÊN CỨU THU NHẬN SẢN PHẨM THỦY PHÂN PROTEIN TỪ BÃ ĐẬU NÀNH CỦA CÔNG NGHIỆP SẢN XUẤT SỮA BÀNG CÁC CHẾ PHẨM ENZYME THƯƠNG MẠI LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ SINH HỌC Hà Nội – 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - CAO THỊ KIM CHI NGHIÊN CỨU THU NHẬN SẢN PHẨM THỦY PHÂN PROTEIN TỪ BÃ ĐẬU NÀNH CỦA CÔNG NGHIỆP SẢN XUẤT SỮA BÀNG CÁC CHẾ PHẨM ENZYME THƯƠNG MẠI LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS QUẢN LÊ HÀ Hà Nội - 2018 LỜI CAM ĐOAN Học viên: Cao Thị Kim Chi Nơi đào tạo: Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Người hướng dẫn : PGS.TS Quản Lê Hà Tên luận văn: “Nghiên cứu thu nhận sản phẩm thủy phân protein từ Bã đậu nành công nghiệp sản xuất sữa chế phẩm enzyme thương mại” Nội dung cam đoan: Em xin cam đoan, suốt trình nghiên cứu luận văn thạc sĩ, hướng dẫn bảo tận tình giáo viên hướng dẫn, em tiến hành nghiên cứu luận văn cách trung thực, toàn nội dung báo cáo luận văn em trực tiếp thực Tất kết nghiên cứu không chép từ báo cáo khoa học, luận văn tiến sĩ, thạc sĩ hay sách tác giả Học viên Cao Thị Kim Chi LỜI CẢM ƠN Đối với học viên cao học, luận văn tốt nghiệp cơng trình khoa học nhỏ mang ý nghĩa lớn, đánh dấu bước trưởng thành cá nhân đường ứng dụng kiến thức học vào thực tiễn Trước hết, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Quản Lê Hà, Viện trưởng – Viện Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm – Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội, PGS.TS Phạm Thu Thủy – giảng viên mơn Cơng nghệ sinh học tận tình hướng dẫn truyền đạt kiến thức quý báu để giúp em hoàn thành luận văn Trong thời gian thực tập làm việc phịng Thí nghiệm môn Công nghệ Sinh học- Viện Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm, em nhận quan tâm giúp đỡ, bảo tận tình chuyên môn, kĩ thuật động viên chân thành thầy cô tập thể học viên, sinh viên thực tập phòng Em xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quý báu Em xin gửi lời cảm ơn đến Ban lãnh đạo Viện Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm – Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội, tạo điều kiện thuận lợi giúp em hoàn thành luận văn Cuối em xin cảm ơn gia đình bạn bè động viên khuyến khích em suốt q trình học tập để đạt kết ngày hôm Hà Nội, tháng năm 2018 Học viên Cao Thị Kim Chi DANH MỤC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT [a.a]: Hàm lượng axit amin BĐ: Bã đậu CK: Chất khô ĐPL: Độ pha loãng HSTH: Hiệu suất thu hồi HSTP: Hiệu suất thủy phân KL: Khối lượng KLTB: Khối lượng trung bình OD: Optical density (mật độ quang) [Pr]: Hàm lượng protein TLPT: Tỉ lệ phối trộn MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN MỞ ĐẦU CHƢƠNG I TỔNG QUAN 10 ậu nành 10 1.1.1.Sản xuất sữa đậu nành 10 1.1.2.Bã đậu nành 11 1.1.3.Thành phần Bã đậu nành: 13 1.1.4.Protein Bã đậu nành 14 1.1.5.Phương pháp xử lí protein 15 1.2.Hệ enzyme protease 18 1.2.1.Định nghĩa 18 1.2.2.Phân loại protease 19 1.2.3.Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính protease 20 1.3.Protein thủy phân hoạt tính chống oxy hóa protein thủy phân 22 CHƢƠNG II VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Vật liệu nghiên cứu: 26 2.1.1.Bã đậu nành 26 2.1.2.Các chế phẩn enzyme thương mại 26 2.2.Hóa chất 26 2.3.Thiết bị 26 2.4.Phương pháp xác định hoạt độ protease chế phẩm 27 2.5.Phương pháp xác định độ ẩm nguyên liệu 29 2.6.Phương pháp xác định protein hòa tan phương pháp Lowry 30 2.7.Phương pháp xác định axit amin Ninhydrin 32 2.8.Phương pháp xác định hoạt tính chống oxy hóa DPPH: 34 2.9.Sơ đồ nghiên cứu thủy phân Bã đậu nành chế phẩm protease 36 CHƢƠNG III KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 40 3.1.Phân tích thành phần ban đầu Bã đậu nành 40 3.2.Xác định hoạt độ chế phẩm enzyme thương mại 40 3.3.Nghiên cứu thu hồi protein bã đậu ướt chế phẩm protease thương mại 40 3.3.1.Nghiên cứu thủy phân protein bã đậu ướt chế phẩm protease 40 3.3.2.Nghiên cứu lựa chọn tỷ lệ phối trộn bã đậu ướt nước đến khả thuỷ phân protein 42 3.3.3.Nghiên cứu lựa chọn chế độ khuấy đến hoạt tính chống oxy hóa dịch thủy phân 45 3.3.4.Nghiên cứu lựa chọn nồng độ enzyme đến khả thủy phân protein47 3.3.5.Nghiên cứu kết hợp loại enzyme Neutrase Flavourzyme thủy phân protein Bã đậu nành thu nhận sản phẩm có hoạt tính chống oxy hóa cao 49 3.4 Nghiên cứu khảo sát tỉ lệ phối trộn bã đậu khô nước tới khả thu hồi protein 51 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO 54 PHỤ LỤC 58 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần dinh dưỡng 100g bã đậu nành ướt 13 Bảng 1.2 Bảng so sánh thành phần axit amin protein Bã đậu nành ướt hạt đậu nành 15 Bảng 3.1 Thành phần Bã đậu nành 40 Bảng 3.2 Hoạt độ chế phẩm enzyme 40 Bảng 3.3 Nghiên cứu kết hợp chế phẩm enzyme Neutrase Flavourzyme thủy phân protein Bã đậu nành 50 Bảng 3.4 Nghiên cứu khảo sát tỉ lệ phối trộn bã đậu khô nước tới khả thu hồi protein 51 Bảng 1.1’: Bảng xác định độ ẩm nguyên liệu 58 Bảng 1.2’: Bảng xác định protein hòa tan Bã đậu nành 59 Bảng 2.1’ : Xác định lượng protein dịch 60 Bảng 2.2’: Xác định lượng axit amin dịch 61 Bảng 3.1’ Bảng xác định lượng protein dịch 64 Bảng 3.2’ Bảng xác định lượng axit amin dịch 65 Bảng 3.3’ : Kết phân tích dịch khảo sát tỷ lệ phối trộn bã đậu nước 67 Bảng 3.4’ : Kết phân tích hoạt tính chống oxy hóa dịch khảo sát tỷ lệ phối trộn bã đậu nước 68 Bảng 4.1’ Bảng xác định lượng protein dịch 69 Bảng 4.2’ Bảng xác định lượng axit amin dịch 70 Bảng 4.3’ : Kết phân tích hoạt tính chống oxy hóa dịch khảo sát chế độ khuẩy 71 Bảng 5.1’ Bảng xác định lượng protein dịch 72 Bảng 5.2’ Bảng xác định lượng axit amin dịch 74 Bảng 5.3’: Kết phân tích hoạt tính chống oxy hóa dịch khảo sát nồng độ enzyme 75 Bảng 5.4’: Kết phân tích hoạt tính chống oxy hóa dịch khảo sát tỉ lệ phối trộn bã đậu khô nước 76 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Mơ hình enzyme Protease thủy phân phân tử Protein 19 Hình 1.2 Hỗn hợp protein thủy phân 23 Hình 2.1 Đường chuẩn Tyrosine 28 Hình 2.2 Đường chuẩn albumin 31 Hình 2.3 Đồ thị đường chuẩn glutamic 33 36 Hình 2.4 Sơ đồ quy trình thu hồi protein sử dụng enzyme 36 Hình 3.1 (a) Lượng axit amin dịch thủy phân bã đậu ướt chế phẩm Flavourzyme Neutrase 41 Hình 3.1 (b) Khả thủy phân protein BĐ ướt chế phẩm enzyme 41 Hình 3.2 (a) Ảnh hưởng tỷ lệ phối trộn BĐ nước tới lượng axit amin 42 Hình 3.2 (b) Ảnh hưởng tỷ lệ phối trộn BĐ nước tới hiệu suất thủy phân enzyme 43 Hình 3.2 (c) Ảnh hưởng tỷ lệ phối trộn BĐ nước tới hiệu suất thu hồi protein 43 Hình 3.2 (d) Ảnh hưởng tỷ lệ phối trộn BĐ nước tới hoạt tính chống oxy hóa dịch thủy phân protein 44 Hình 3.3 (a) Ảnh hưởng chế độ khuấy tới lượng axit amin dịch sau thủy phân 45 Hình 3.3 (b) Ảnh hưởng chế độ khuấy tới hiệu suất thủy phân protein 46 Hình 3.3 (c) Ảnh hưởng chế độ khuấy tới hiệu suất thu hồi protein 46 Hình 3.3 (d) Ảnh hưởng chế độ khuấy tới hoạt tính chống oxy hóa dịch thủy phân protein 46 Hình 3.4 (a) Ảnh hưởng nồng độ enzyme tới hàm lượng axit amin dịch thủy phân 47 Hình 3.4 (b) Ảnh hưởng nồng độ enzyme tới hiệu suất thủy phân protein 48 Hình 3.4 (c) Ảnh hưởng nồng độ enzyme tới hiệu suất thu hồi protein 49 Hình 3.4 (d) Ảnh hưởng nồng độ enzyme tới hoạt tính chống oxy hóa dịch thủy phân protein 49 MỞ ĐẦU Trong năm gần đây, ngành sản xuất sữa đậu nành phát triển cách vượt bậc Theo số liệu thống kê hãng thống kê thị trường Neilsen, năm 2014 Việt Nam tiêu thụ khoảng 613 triệu lít sữa đậu nành, có nghĩa khoảng 1,5 triệu lít / ngày Việt Nam nước tiêu thụ sữa đậu nành nhiều thứ giới [34] Với thị trường tiềm này, doanh nghiệp mạnh tay đầu tư sở, công nghệ để sản xuất mặt hàng này, bật nhà máy Vinasoy (Bắc Ninh Quảng Ngãi), nhà máy Vinamilk …Nhưng đôi với việc đẩy mạnh chế biến đậu nành việc lượng lớn bã đậu thải Theo số thống kê cho biết, riêng nhà máy Vinasoy với cơng suất thiết kế 180 triệu lít/năm, năm nhà máy thải 20000 bã đậu [34] Phần lớn lượng bã sấy khô bán cho nhà máy chế biến thức ăn gia súc Với phương pháp tận thu tiêu tốn lượng không đem lại lợi nhuận cao Còn phần bã đậu bán tươi, nhiên bã đậu chứa nhiều chất dinh dưỡng độ ẩm cao nên dễ hư hỏng cần sử dụng Để khắc phục nhược điểm trên, có nhiều nghiên cứu ứng dụng bã đậu lên men thu hồi axit xitric hay dùng enzyme cellulase pectinase thủy phân bã đậu thu hồi sản phẩm kích thước nhỏ bổ sung phần vào bột làm bánh mì….bởi phần bã đậu sau trình sản xuất sữa đậu nành chứa nhiều thành phần dinh dưỡng protein (20-30%), gluxit, chất béo chất xơ Nhận thấy nguồn protein bã đậu có khả thu hồi việc thu hồi protein bã đậu giúp tiết kiệm lượng tăng giá trị thương mại bã đậu Xu hướng mở phối hợp chế phẩm enzyme thương mại để thủy phân bã đậu tạo peptide, axit amin có hoạt tính chống oxy hóa sử dụng để bổ sung vào thực phẩm chức hay ứng dụng dược phẩm Xuất phát từ mục đích thăm dị khả thu hồi protein bã đậu khô chế phẩm Neutrase Flavourzyme nhằm đưa hướng giúp tận dụng tốt đa nguồn bã đậu thải hàng năm mang lại giá trị kinh tế cao, tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu thu nhận sản phẩm thủy phân protein Bảng 3.1’ Bảng xác định lượng protein dịch Mẫu phân TLPT Thể tích tích (m/w) (ml) 1:2 Neutrase ĐPL 216 OD Flavourzyme [pr] KL KLTB (mg/ml) protein Protein (mg) (mg) 0,179 24,477 264,355 0,181 24,932 269,264 0,183 25,386 274,173 269,264 OD [pr] KL KLTB (mg/ml) protein Protein (mg) (mg) 0,165 21,523 229,991 0,166 21,295 232,445 0,167 21,750 234,900 4,909 Mẫu thí nghiệm 1:4 216 (PTN) 50 0,232 36,523 394,445 0,233 36,750 396,900 0,237 37,659 406,718 399,355 2,455 0,209 31,295 337,991 0,211 31,750 342,900 0,213 32,205 347,809 7,363 1:6 216 0,239 38,114 411,627 0,241 38,568 416,536 0,243 39,023 421,445 416,536 1:8 216 48,795 526,991 0,289 48,795 526,991 0,286 49,477 534,355 529,445 4,910 342,900 4,909 0,213 32,205 347,809 0,218 33,341 360,082 0,220 33,795 364,991 4,909 0,286 232,445 357,627 9,818 0,263 43,568 470,536 0,264 43,795 472,991 0,268 44,705 482,802 475,445 7,364 64 1:10 216 0,286 48,795 526,991 0,288 49,25 531,900 0,293 50,386 544,173 544,355 0,265 44,023 475,445 0,268 44,705 482,809 0,268 44,705 482,809 9,818 Mẫu đối chứng 1:8 216 50 (PĐC) 0,152 18,341 198,082 0,155 19,023 205,445 0,152 18,341 198.082 480,355 4,910 200,536 4,909 0,155 19,023 205,445 0,153 18,568 200,536 0,154 18,795 202,991 202,991 2,455 Mẫu kiểm chứng (PKC) - 240 50 0,132 13,795 165,545 0,131 13,568 162,818 0,135 14,477 173,727 167,364 0,135 14,477 173,727 0,138 15,159 181,909 0,139 15,386 184,636 6,363 180,091 6,364 Bảng 3.2’ Bảng xác định lượng axit amin dịch Mẫu phân BĐ: Thể tích nước tích (m/w) (ml) 1:2 216 Neutrase ĐPL OD Flavourzyme [a.a] KL a.a KLTB (mg/ml) (mg) ĐPL OD [a.a] KL a.a KLTB a.a (mg/ml (mg) a.a (mg) (mg) ) 27,814 0,311 0,036 15,534 15,678 0,394 0,043 27,761 0,316 0,036 15,713 0,395 0,043 27,814 65 1:4 216 Mẫu thí nghiệm (PTN) 1:6 1:8 216 0,318 0,037 15,785 0,396 0,043 27,868 0,054 0,396 0,043 18,579 18,615 0,482 0,050 32,489 32,596 0,397 0,043 18,615 0,485 0,050 32,650 0,398 0,043 18,650 0,485 0,050 32,650 0,107 0,468 0,049 21,158 21,373 0,599 0,060 38,775 39,043 0,475 0,050 21,408 0,602 0,060 38,936 0,479 0,050 21,552 0,215 0,611 0,061 39,420 0,268 0,639 0,063 27,283 27,283 0,951 57,68 0,089 57,687 0,144 0,026 216 0,641 0,063 27,354 0,143 0,952 57,74 0,089 0,643 0,063 27,426 0,948 57,52 0,089 1:10 216 0,717 0,070 30,076 30,148 1,058 0,098 63,453 0,719 0,070 30,148 1,062 0,098 63,650 0,721 0,070 30,220 1,063 0,098 63,704 66 0,072 63,597 0,144 Bảng 3.3’ : Kết phân tích dịch khảo sát tỷ lệ phối trộn bã đậu nước Dịch Tỷ lệ phối trộn (m/w) Lượng a.a (mg) Loại chế phẩm 15,678 ± 0,144 1:2 18,615 ± 0,026 1:4 21,373 ± 0,215 Neutrase 1:6 1:8 27,283 ± 0,143 30,148 ± 0,072 1:10 27,814 ± 0,054 1:2 Flavourzyme 1:4 1:6 1:8 32,596± 0,107 39,043± 0,268 57,687 ± 0,162 1:10 63,597 ± 0,144 Lượng Pr thủy phân Lượng Pr thu hồi (mg) (mg) 269,264 101,900 ± 4,909 1,818 399,355 231,991 ±7,363 1,000 416,536 249,173 ± 4,909 1,818 529,445 362,082 ± 4,910 2,091 544,355 366,991 ± 9,818 3,455 Các số HSTH(g/100gBĐ) HSTP(%) 0,340 0,006 0,773 0,003 0,831 0,006 1,207 0,007 1,223 0,012 8,694 0,323 25,151 0,706 27,325 0,243 41,608 0,239 42,229 0,444 Lượng a.a g/100g NL 0,052 4,8.10-4 0,062 8,67.10-5 0,071 7,17.10-4 0,091 4,77.10-4 0,100 2,4.10-4 232,445 ±2,455 342,900 ± 4,909 357,627 ± 9,818 50,536 2,455 162,089 1,455 177,536 3,455 0,168 0,008 0,543 0,005 0,592 0,012 3,726 0,987 17,699 0,552 19,562 0,232 0,093 1,8.10-4 0,109 3,57.10-4 0,130 8,93.10-4 475,445 ± 7,364 295,355 4,273 0,985 0,014 34,466 0,304 0,192 5,4.10-4 480,355 ± 4,910 300,264 2,091 35,087 0,277 0,212 4,8.10-4 67 1,000 0,007 Bảng 3.4’ : Kết phân tích hoạt tính chống oxy hóa dịch khảo sát tỷ lệ phối trộn bã đậu nước Tỉ lệ phối Neutrase 1:2 1:4 1:6 1:8 1:10 OD trộn kiểm BĐ/nước chứng: (m/w) 0,667 Lượng chất 0,273 0,546 0,819 0,453 0,906 1,359 0,493 0,986 khô(mg) OD 1,47 0,41 0,82 1,23 0,393 0,786 1,179 0,331 0,189 0,109 0,443 0,249 0,099 50,37 71,66 83,66 33,64 62,64 85,11 0,372 0,313 0,201 0,362 0,187 0,123 0,319 0,185 0,10 Flavourzyme IP(%) 44,23 IC50 (mg) 0,428 Lượng chất 0,153 53,02 69,865 45,73 71,96 81,56 0,519 0,306 0,459 0,137 52,17 72,26 0,399 0,274 0,411 0,217 0,374 0,434 khô(mg) OD 84,7 0,65 0,627 0,14 0,28 0,42 0,117 0,234 0,351 0,506 0,317 0,230 0,517 0,362 0,331 24,19 52,42 65,48 22,48 45,67 50,35 0,539 0,410 0,288 0,523 0,396 0,217 0,483 0,329 0,21 IP(%) 19,21 38,57 56,78 21,55 40,67 67,51 27,58 50,65 68,2 IC50 0,402 0,314 0,447 68 0,297 0,311 Nghiên cứu lựa chọn chế độ khuấy đến hoạt tính chống oxy hóa dịch thủy phân: Bảng 4.1’ Bảng xác định lượng protein dịch Neutrase Mẫu Chế độ khuẫy Thể tích (ml) ĐPL Tĩnh Liên tục Mẫu thí nghiệm (PTN) 30 phút/lần 1h/lần 216 45 Tĩnh Liên tục Mẫu đối chứng (PĐC) 30p/ lần 216 30 1h/ lần Mẫu kiểm chứng (PKC) - 240 30 Flavourzyme OD [pr] (mg/ml) 0,266 0,269 0,269 0,255 0,261 0,258 0,286 0,286 0,289 0,279 0,285 0,282 0,149 0,149 0,150 0,147 0,148 0,149 0,152 0,155 0,152 0,151 0,152 0,152 0,132 0,131 44,250 44,932 44,932 41,750 43,114 42,432 48,795 48,795 49,477 47,205 48,568 47,886 17,659 17,659 17,886 17,205 17,432 17,659 18,341 19,023 18,341 18,114 18,341 18,341 13,795 13,568 69 KL protein (mg) 477,900 485,264 485,264 450,900 465,627 458,564 526,991 526,991 534,355 509,809 524,536 517,173 190,718 190,718 193,173 185,809 188,264 190,178 198,082 205,445 198,082 195,627 198,082 198,082 165,545 162,818 KLTB protein (mg) 482,809 4,909 458,264 7,364 529,445 4,910 517,173 7,364 191,536 1,637 188,264 2,455 200,536 4,909 197,264 1,637 167,364 6,363 OD [pr] (mg/ml) 0,251 0,254 0,254 0,231 0,235 0,236 0,262 0,267 0,269 0,261 0,264 0,264 0,149 0,151 0,149 0,148 0,149 0,148 0,155 0,153 0,154 0,152 0,152 0,153 0,135 0,138 40,481 41,523 41,523 36,925 37,205 37,432 43,341 44,477 44,932 43,114 43,795 43,795 17,659 18,114 17,659 17,432 17,659 17,659 19,023 18,568 18,795 18,341 18,341 18,568 14,477 15,159 KL protein (mg) 441,082 448,445 448,445 391,991 401,809 404,264 468,082 480,355 485,264 465,627 472,991 472,991 190,718 195,627 190,718 188,264 190,718 190,718 205,445 200,536 202,991 198,082 198,082 200,536 173,727 181,909 KLTB protein (mg) 445,991 4,909 399,355 7,364 477,900 9,818 470,536 4,909 192,355 3,272 189,900 1,636 202,991 2,454 189,900 1,636 180,091 6,364 Bảng 4.2’ Bảng xác định lượng axit amin dịch Mẫu Chế độ khuấy Thể tích (ml) Neutrase ĐPL Tĩnh Flavourzyme OD [a.a] (mg/ml) KL a.a (mg) KLTB a.a (mg) 0,367 0,414 0,081 0,089 1,015 1,037 0,348 0,078 0,976 0,565 0,528 0,114 0,108 1,425 0,474 0,099 1,238 0,806 0,154 1,920 0,721 0,140 1,750 0,709 0,138 1,73 0,577 0,667 0,116 0,131 1,450 ĐPL 1,120 OD [a.a] (mg/ml) KL a.a (mg) KLTB a.a (mg) 0,367 0,203 0,304 0,177 2,540 2,450 0,379 0,208 2,600 0,458 0,241 0,434 0,231 3,010 0,504 0,260 3,250 0,637 0,315 3,940 0,572 0,288 3,600 0,651 0,321 4,011 0,533 0,272 0,485 0,252 3,402 2,210 0,083 Mẫu thí nghiệm (PTN) Liên tục 216 1,338 1,350 0,100 30 phút/ lần 1h/ lần 0,15 1,800 0,12 1,500 1,640 2,891 0,159 0,113 1,412 70 3,850 0,250 3,237 3,150 0,14 0,559 3,050 0,165 0,487 0,253 3,162 Bảng 4.3’ : Kết phân tích hoạt tính chống oxy hóa dịch khảo sát chế độ khuẩy Neutrase Chế độ khuấy Tĩnh Lượng chất khô(mg) 0,412 0.824 1.236 0.431 0.862 1.293 0,583 1,166 1,749 0,57 Liên tục 30 phút/lần giờ/ lần 1,14 OD 1,71 kiểm chứng: OD 0,389 0,232 0,166 0,490 0,321 0,265 0,310 0,189 0,064 0,331 0,209 0,072 0,706 44,89 67,13 76,45 30,63 54,57 62,45 56,13 73,21 90,87 53,16 70,38 89,82 IP(%) IC50 (mg) Flavourzyme Lượng chất khô(mg) 0,507 0,882 0,467 0,934 1,401 0,48 0,381 0,96 1,44 0,52 0,484 1,04 1,56 0,767 1,534 2,301 OD 0,334 0,154 0,082 0,411 0,234 0,192 0,317 0,206 0,129 0,288 0,119 0,038 IP(%) 52,67 78,19 88,39 41,78 66,86 72,8 55,15 70,88 81,7 59,22 83,2 IC50 0,365 0,295 0,327 0,672 71 94,59 Nghiên cứu lựa chọn nồng độ enzyme đến hoạt tính chống oxy hóa dịch thủy phân: Bảng 5.1’ Bảng xác định lượng protein dịch Neutrase Mẫu Nồng độ Thể tích enzyme (ml) ĐPL 10U 20U Mẫu thí nghiệm 10U (mg/ml) KL KLTB protein protein (mg) (mg) 239,809 0,167 21,750 234,900 0,169 22,205 239,809 0,171 22,659 244,718 0,254 41,523 448,445 0,257 42,205 455,809 0,263 43,568 470,536 0,323 57,205 617,809 0,324 57,659 622,718 0,325 57,432 620,264 0,327 58,114 627,627 0,331 59,023 637,445 0,326 57,886 625,173 0,138 15,159 163,718 0,139 15,386 166,173 OD [pr] (mg/ml) KL KLTB protein protein (mg) (mg) 593,264 0,308 53,795 580,991 0,315 55,386 598,173 4,909 0,316 55,614 600,627 458,264 0,338 60,614 654,627 0,342 61,523 664,445 0,343 61,750 666,900 7,364 0,299 51,750 558,900 571,173 0,305 53,114 573,627 0,308 53,795 580,991 0,307 53,568 578,536 0,308 53,795 583,445 7,363 0,309 54,023 580,991 2,454 167,809 0,139 15,386 166,173 169,454 0,140 15,614 168,627 620,264 2,455 216 40U [pr] 12,272 30U (PTN) OD Flavourzyme 12,273 661,991 12,273 45 72 630,082 580,991 Mẫu đối chứng 20U (PĐC) 216 30 30U 40U Mẫu kiểm chứng (PKC) - 240 30 0,142 16,068 173,536 5.727 0,142 16,068 173,536 4,091 0,145 16,750 180.900 184,991 0,147 17,205 185,809 188,264 0,146 16,977 183,355 0,148 17,432 188,264 0,149 17,659 190,718 5,727 0,149 17,659 190,718 2,455 0,149 17,659 190,718 196,445 0,153 18,568 200,536 202,173 0,152 18,341 198,082 0,154 18,795 202,991 0,153 18,568 200,536 5,727 0,154 18,795 202,991 1,637 0,149 17,659 190,718 193,173 0,152 18,341 198,082 199,718 0,150 17,886 193,173 0,153 18,568 200,536 0,151 18,114 195,627 2,455 0,153 18,568 200,536 0,818 0,131 13,568 162,818 167,364 0,135 14,477 173,727 180,091 0,132 13,795 165,545 0,138 15,159 181,909 0,135 14,477 173,727 0,139 15,386 184,636 73 6,363 6,364 Bảng 5.2’ Bảng xác định lượng axit amin dịch Mẫu Nồng độ enzyme Thể tích (ml) Neutrase ĐPL 10U 216 30U OD [a.a] (mg/ml) KL a.a (mg) KLTB a.a (mg) 0,367 0,414 0,081 0,089 1,015 1,037 0,348 0,078 0,976 0,565 0,528 0,114 0,108 1,425 0,474 0,099 1,238 0,806 0,154 1,920 0,721 0,140 1,750 0,709 0,138 1,73 0,577 0,667 0,116 0,131 1,450 ĐPL 1,120 OD [a.a] (mg/ml) KL a.a (mg) KLTB a.a (mg) 0,367 0,203 0,304 0,177 2,540 2,450 0,379 0,208 2,600 0,458 0,241 0,434 0,231 3,010 0,504 0,260 3,250 0,637 0,315 3,940 0,572 0,288 3,600 0,651 0,321 4,011 0,533 0,272 0,485 0,252 3,402 2,210 0,083 Mẫu thí nghiệm (PTN) 20U Flavourzyme 0,15 1,338 1,350 0,100 1,800 0,12 1,500 1,640 2,891 0,159 0,559 0,113 1,412 74 3,850 0,250 3,237 3,150 0,14 40U 3,050 0,165 0,487 0,253 3,162 Bảng 5.3’: Kết phân tích hoạt tính chống oxy hóa dịch khảo sát nồng độ enzyme Neutrase Nồng độ enzym 10U Lượng chất khô(mg) 0.597 20U 1.194 1.791 0.717 30U 1.434 2.151 0.663 40U 1.326 1.989 0.73 OD 1.46 2.19 kiểm chứng: Flavourzyme OD 0.363 0.163 0.080 0.279 0.174 0.037 0.276 0.110 0.056 0.257 0.148 0.020 IP (%) 43.71 74.72 87.64 56.72 72.98 94.27 57.15 82.89 91.35 60.08 77.13 96.94 IC50 (mg) 0.713 Lượng chất khô(mg) 0.473 0.946 1.419 0.593 1.186 1.779 0.587 1.174 1.761 0.521 1.042 1.563 OD 0.360 0.143 0.035 0.296 0.152 0.101 0.269 0.135 0.049 0.271 0.174 0.066 IP (%) 44.17 77.89 94.57 54.17 76.44 84.29 58.32 79.12 92.4 58.02 72.95 89.79 IC50 0.544 0.498 0.357 0.395 0.272 75 0.351 0.269 0.645 Bảng 5.4’: Kết phân tích hoạt tính chống oxy hóa dịch khảo sát tỉ lệ phối trộn bã đậu khô nước Tỉ lệ phối trộn BĐ khô/nước 1:6 1:8 1:10 1:12 OD (m/w) Neutrase Lượng chất khô(mg) kiểm 0,316 0,632 0,948 0,441 0.882 1.323 0.397 0.794 1.191 0.265 0.53 0.795 chứng: 0,577 Flavourzyme OD 0,399 0,298 0,172 0,343 0,136 0,092 0,286 0,178 0,084 0,331 0,269 0,107 IP (%) 30,68 48,39 70,15 40,57 76,49 84,12 50,46 69,08 85,43 42,67 53,34 81,39 IC50 (mg) 0,636 Lượng chất khô(mg) 0,198 0,396 0,594 0,149 0,298 0,447 0,135 0,27 0,405 0,131 0,262 0,393 OD 0,465 0,343 0,172 0,471 0,365 0,257 0,447 0,298 0,184 0,458 0,328 0,264 IP (%) 19,38 40,51 70,12 18,34 36,66 55,47 22,59 48,32 68,18 20,58 43,19 54,25 IC50 0,448 0,579 0,379 0,404 0,291 76 0,413 0,342 77 78 ... hành nghiên cứu đề tài: ? ?Nghiên cứu thu nhận sản phẩm thủy phân protein từ Bã đậu nành công nghiệp sản xuất sữa chế phẩm enzyme thƣơng mại? ?? Nghiên cứu bã đậu ướt bã đậu khô thủy phân chế phẩm. .. enzyme chế phẩm, tính lượng chế phẩm enzyme cần đưa vào nghiên cứu thủy phân protein Bã đậu nành 3.3 Nghiên cứu thu hồi protein bã đậu ƣớt chế phẩm protease thƣơng mại 3.3.1 Nghiên cứu thủy phân. .. - CAO THỊ KIM CHI NGHIÊN CỨU THU NHẬN SẢN PHẨM THỦY PHÂN PROTEIN TỪ BÃ ĐẬU NÀNH CỦA CÔNG NGHIỆP SẢN XUẤT SỮA BÀNG CÁC CHẾ PHẨM ENZYME THƯƠNG MẠI LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THU? ??T CÔNG NGHỆ SINH HỌC