Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau tại chỗ chứa cao Ớt .
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN ĐỨC CƯỜNG NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ MIẾNG DÁN GIẢM ĐAU TẠI CHỖ CHỨA CAO ỚT CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ DƯỢC PHẨM VÀ BÀO CHẾ THUỐC MÃ SỐ: 9720202 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC Hà Nội, năm 2023 Cơng trình hồn thành tại: - Trường Đại học Dược Hà Nội; Học viện Quân y; Trường Đại học y Hà Nội - Viện kiểm nghiệm thuốc Trung ương - Công ty cổ phần Dược phẩm VCP Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Đỗ Quyên PGS.TS Nguyễn Thạch Tùng Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá Luận án cấp Khoa họp tại: Vào hồi: ngày tháng năm Có thể tìm hiểu luận án tại: Thư viện Quốc gia Việt Nam Thư viện trường Đại Học Dược Hà Nộ ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam nước có khí hậu nhiệt đới phù hợp với điều kiện phát triển Ớt Ở nước ta, Ớt chủ yếu dùng làm gia vị xuất nguyên liệu thô với giá thành thấp Quả Ớt chín có hai thành phần quan trọng sử dụng với nhiều mục đích khác gia vị, chất màu, chất bảo quản Y - Dược học, chất màu đỏ (carotenoid) chất cay (capsaicinoid) Từ nguyên liệu cao mềm định chuẩn Ớt hay nhựa dầu Ớt capsaicin (tự nhiên, tổng hợp) có nhiều sản phẩm thuốc dạng kem, gel, miếng dán nhiều hãng dược phẩm sản xuất lưu hành Song Việt Nam chưa có cơng trình nghiên cứu bào chế cao định chuẩn Ớt thuốc dán tác dụng chỗ chứa cao định chuẩn Ớt Xuất phát từ thực tiễn trên, đề tài: “Nghiên cứu bào chế miếng dán giảm đau chỗ chứa cao Ớt ” tiến hành với mục tiêu sau: Bào chế cao định chuẩn Ớt từ nguồn nguyên liệu Ớt thu hái Việt Nam Bào chế miếng dán giảm đau chỗ chứa cao định chuẩn Ớt Đánh giá tính kích ứng tác dụng giảm đau, chống viêm sản phẩm thực nghiệm Những đóng góp luận án Cho đến thời điểm nay, nghiên cứu đầy đủ việc xây dựng quy trình chiết xuất tối ưu hóa capsaicinoid từ Ớt nguồn gốc Việt Nam phát triển dạng bào chế từ cao định chuẩn Ớt Đã xây dựng quy trình bào chế cao định chuẩn Ớt từ nguồn nguyên liệu thu hái Việt Nam phương pháp chiết hồi lưu Các thông số cơng thức, quy trình chiết tối ưu hóa để đưa quy trình chiết ổn định, dễ kiểm sốt q trình chiết, triển khai quy mô công nghiệp Đây nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn sở cao định chuẩn Ớt, bước đầu đánh giá ổn định chế phẩm cao định chuẩn Ớt, tiền đề để phát triển cao định chuẩn Ớt thành nguồn nguyên liệu hóa dược đưa vào nghiên cứu phát triển dạng bào chế đại Điều mang lại giá trị kinh tế cao gấp nhiều lần cho thị trường Ớt Việt Nam, chủ yếu dùng làm thực phẩm Từ nguyên liệu cao định chuẩn Ớt bào chế được, xây dựng cơng thức quy trình bào chế miếng dán giảm đau chỗ chứa cao định chuẩn Ớt hàm lượng 0,025% capsaicin Đây số nghiên cứu dạng bào chế miếng dán da tác dụng chỗ phát triển từ nguyên liệu cao định chuẩn dược liệu Luận án phát triển quy mô với cỡ mẫu 1000 miếng/lơ với quy trình sản xuất ổn định có khả phát triển với quy mô lớn Miếng dán bước đầu đánh giá độ ổn định 12 tháng điều kiên khí hậy vùng IVb chứng minh có tác dụng giảm đau chống viêm động vật thực nghiệm, không gây kích ứng da Đã áp dụng phương pháp đo quang phổ ATR-FTIR đánh giá khả hydrat hóa để nghiên cứu tương tác tá dược tăng thấm với lớp sừng da nghiên cứu Cấu trúc luận án - Luận án gồm 153 trang, 61 bảng, 34 hình, 108 tài liệu tham khảo Bố cục gồm: Đặt vấn đề (2 trang); tổng quan (36 trang); nguyên liệu, trang thiết bị phương pháp nghiên cứu (25 trang); kết nghiên cứu (65 trang); bàn luận (23 trang); kết luận đề xuất (2 trang); danh mục cơng trình cơng bố liên quan đến luận án (1 trang); tài liệu tham khảo (12 trang); phụ lục (57 trang) Chương TỔNG QUAN Phần tổng quan trình bày nội dung cao thuốc miếng dán da tác dụng chỗ Kỹ thuật bào chế miếng dán, yêu cầu chất lượng phương pháp đánh giá miếng dán Tổng quan Ớt, capsaicinoid nghiên cứu chiết xuất capsaicinoid từ Ớt nghiên cứu miếng dán chứa capsaicin Chương NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ, NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 2.1.1 Nguyên vật liệu Nguyên liệu nghiên cứu: Các mẫu Ớt có nguồn gốc rõ ràng trồng vùng khác Nguyên liệu dùng bào chế đạt tiêu chuẩn EP, DĐVN V, TCNSX Nguyên liệu dùng phân tích, kiểm nghiệm đạt tiêu chuẩn tinh khiết phân tích HPLC Động vật thí nghiệm: chuột nhắt trắng - tháng tuổi, khối lượng 20 - 25 gam, chuột cống trắng giống đực khỏe mạnh có khối lượng từ 150 - 180 gam, thỏ trưởng thành đực khoẻ mạnh, khối lượng không kg Thuốc đối chiếu: Miếng dán Wellpatch® cơng ty Metholatum sản xuất 2.1.2 Thiết bị Sử dụng thiết bị sau bào chế đánh giá: bể điều nhiệt WISD DAIHAN Sicentific, bếp cách thủy Memmert WNB, cân phân tích Sartorius BP121S, dụng cụ cán phim cầm tay, hệ thống cất thu hồi dung môi áp suất giảm Buchi, máy khuấy từ IKA RH basic 1, tủ sấy Binder, máy trộn hành tinh B15, máy trộn chân không ZKJ50, máy Hydrogel coating ST50-B, máy hàn miệng FRM-9801, hệ thống thử giải phóng tế bào khuếch tán Franz - Hanson, máy sắc kí lỏng hiệu cao Agilent, máy sắc ký lỏng hiệu cao Shimadzu 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1 Thẩm định phương pháp định lượng Phương pháp HPLC với detector quang phổ tử ngoại lựa chọn định lượng capsaicin nghiên cứu bào chế cao định chuẩn Ớt detector huỳnh quang nghiên cứu bào chế miếng dán Thẩm định phương pháp định lượng dựa vào tiêu: tính thích hợp hệ thống, độ đặc hiệu, khoảng tuyến tính, độ độ xác 2.2.2 Nghiên cứu xây dựng quy trình bào chế cao định chuẩn Ớt 2.2.2.1 Phương pháp lựa chọn nguyên liệu Các mẫu Ớt nghiên cứu thu mua theo vụ đông xuân, hè - thu chợ đầu mối tỉnh Thái Bình, Hưng Yên, Hà Nội, Thanh Hóa, Nghệ An, Lâm Đồng Các mẫu sau thu hái sau sây khô chia nhỏ, tiến hành định lượng capsaicinoid HPLC theo chuyên luận Ớt (quả) Dược điển châu Âu (EP 8.0, No 1859) 2.2.2.2 Đánh giá ảnh hưởng số yếu tố đến chiết xuất capsaicinoid từ Ớt Các yếu tố ảnh hưởng đến chiết xuất capsaicinoid từ ớt khảo sát gồm: nhiệt độ chiết, thời gian chiết, số lần chiết, tỷ lệ dung môi/dược liệu (khối lượng/khối lượng), nồng độ EtOH 2.2.2.3 Nghiên cứu xây dựng quy trình bào chế cao định chuẩn Ớt Quy trình bào chế cao thuốc gồm giai đoạn sau: chiết xuất dược liệu, loại tạp, hoàn chỉnh thành phẩm 2.2.2.4 Nghiên cứu thiết kế thí nghiệm tối ưu hóa điều kiện chiết capsaicinoid - Hàm mục tiêu, biến phạm vi nghiên cứu: xác định sau có kết khảo sát sơ ảnh hưởng yếu tố đến quy trình chiết xuất: X1, X2, X3 Hàm mục tiêu Y là: Quy trình tối ưu chiết hàm lượng capsaicinoid tồn phần cao - Thiết kế thí nghiệm: Tiến hành thiết kế thí nghiệm phương pháp đáp ứng bề mặt, sử dụng thiết kế Box–Behnken (BBD) 2.2.3 Phương pháp đánh giá cao định chuẩn Ớt 2.2.3.1 Phương pháp định lượng capsaicinoid mẫu cao định chuẩn Ớt Định lượng capsaicinoid mẫu phương pháp HPLC 2.2.3.2 Phương pháp đánh giá cao định chuẩn Ớt Để đánh giá xây dựng tiêu chuẩn sở cao định chuẩn Ớt, tham khảo EP 8.0 DĐVN V, tiến hành đánh giá theo nội dung phương pháp sau: tính chất, định tính, xác định cắn khơ 2.2.3.3 Đánh giá độ ổn định cao định chuẩn Ớt Thực theo hướng dẫn Asean Điều kiện thực: nhiệt độ độ ẩm phịng thí nghiệm: nhiệt độ 20oC - 35oC, độ ẩm 60% - 90% điều kiện lão hóa cấp tốc: nhiệt độ 40 ± 2ºC, độ ẩm 75 ± 5% 2.2.4 Nghiên cứu xây dựng quy trình bào chế miếng dán Miếng dán thiết kế dạng cốt, khảo sát với hai phương pháp bào chế: miếng dán lớp miếng dán hai lớp 2.2.5 Phương pháp đánh giá miếng dán 2.2.5.1 Đánh giá tính dính miếng dán Đánh giá tính dính miếng dán thiết bị Texture Analyzer CT3-1500 dụng cụ TA-PF90 2.2.5.2 Đo độ dày lớp cốt miếng dán Độ dày lớp cốt đo cách sử dụng đồng hồ đo cầm tay xuất xứ Trung Quốc, dải đo: - 10 mm; độ phân giải 10 µm 2.2.5.3 Định lượng capsaicin miếng dán đánh giá giải phóng Sử dụng phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao Đánh giá giải phóng dược chất: tiến hành tế bào khuếch tán Franz, sử dụng màng thẩm tích kích cỡ lỗ 12-14 kD Đánh giá khả thấm dược chất: sử dụng da chuột xử lý Thông lượng thấm dùng để đánh giá khả thấm dược chất qua da 2.2.5.4 Đánh giá tính kích ứng da miếng dán Sử dụng thỏ trắng trưởng thành, mẫu thử 06 thỏ Điểm kích ứng mẫu thử lấy trung bình điểm phản ứng thỏ thử Đối chiếu điểm kích ứng với mức độ quy định để xác định khả gây kích ứng da thỏ mẫu thử 2.2.5.5 Nghiên cứu độ ổn định miếng dán Thực theo hướng dẫn Asean Điều kiện thực: nhiệt độ 20 C - 35oC, độ ẩm 60% - 90% điều kiện lão hóa cấp tốc: nhiệt độ o 40 ± 2ºC, độ ẩm 75 ± 5% 2.2.6 Nghiên cứu tương tác tá dược tăng thấm tới cấu trúc da Để đánh giá tương tác tá dược tăng thấm tới da chuột, nghiên cứu sử dụng hai phương pháp: đánh giá tương tác chất tăng thấm tới cấu trúc da đo phổ ATR-FTIR đánh giá khả hydrat hóa da 2.2.7 Phương pháp đánh giá tác dụng giảm đau, chống viêm miếng dán động vật thí nghiệm Đánh giá tác dụng giảm đau mơ hình xác định cảm giác đau nhiệt Đánh giá tác dụng giảm đau mơ hình xác định ngưỡng đau cổ chân chuột Đánh giá tác dụng chống viêm mơ hình xác định độ phù bàn chân chuột Đánh giá tác dụng chống viêm giải phẫu bệnh bàn chân chuột Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 KẾT QUẢ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG CAPSAICIN Kết thẩm định phương pháp định lượng capsaicin HPLC với detector quang phổ tử ngoại dectector huỳnh quang có tính thích hợp hệ thống độ đặc hiệu Trong khoảng nồng độ khảo sát, có tương quan tuyến tính diện tích pic nồng độ capsaicin Phương pháp có độ độ xác cao với RSD < 3.2 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH BÀO CHẾ CAO ĐỊNH CHUẨN ỚT 3.2.1 Kết khảo sát mẫu nguyên liệu Ớt thu hái Việt Nam Các mẫu Ớt thu hái, mã hóa, tiến hành xử lý mẫu định lượng hàm lượng capsaicinoid toàn phần, capsaicin nonivamid theo chuyên luận Ớt (quả) Dược điển châu Âu (EP 8.0, No 1859) phương pháp sắc ký lỏng (mục 2.2.2.1), kết trình bày bảng 3.1 Bảng 3.1 Hàm lượng capsaicinoid toàn phần, capsaicin TT nonivamid mẫu Ớt nghiên cứu Tỉ lệ (%) Khối Tỉ lệ Hàm lượng Tên lượng capsaicin/ nonivamid/ capsaicinoid mẫu NL capsaicinoid capsaicinoid (%) (g) (%) (%) CF.MB1 2,50 0,32 67,32 1,42 CF.MB2 2,50 0,40 64,81 1,78 CF.MB3 2,50 0,45 67,23 1,26 CF.MB4 2,51 0,80 74,23 1,34 Tỉ lệ (%) Khối Tỉ lệ Hàm lượng lượng capsaicin/ nonivamid/ capsaicinoid NL capsaicinoid capsaicinoid (%) (g) (%) (%) TT Tên mẫu CF.MB5 2,51 0,15 63,95 1,10 CF.MT1 2,51 0,52 69,33 1,38 CF.MT2 2,51 0,04 72,16 CF.MT3 2,52 0,10 71,82 CF.MT4 2,50 0,36 66,64 1,44 10 CF.MT5 2,50 0,35 69,91 2,47 11 CA.MB1 2,57 0 12 CA.MT1 2,61 0 13 CA.MT2 2,49 0 14 CA.MT3 2,61 0 Kết khảo sát hàm lượng capsaicinoid cho thấy: - Khơng có capsaicinoid lồi Ớt chng (Capsicum annuum L.) trồng Việt Nam - Các loài Ớt thiên Ớt sừng (Capsicum frutescens L.) có capsaicinoid, với hàm lượng dao động từ 0,04 - 0,80% - Trong loài Ớt thiên Ớt sừng, tỷ lệ nonivamid tổng hàm lượng capsaicinoid toàn phần dao động - 2,5%, thấp so với tỷ lệ 5% quy định EP 8.0 3.2.2 Ảnh hưởng số yếu tố đến chiết xuất capsaicinoid từ Ớt 3.2.2.1 Ảnh hưởng nhiệt độ, thời gian số lần chiết đến chiết xuất capsaicinoid từ Ớt Kết nghiên cứu cho thấy hàm lượng capsaicinoid chiết tăng dần tăng nhiệt độ chiết đạt cực đại 80oC Do đó, nghiên Nhìn vào giá trị hệ số phương trình hồi quy, dễ dàng nhận hệ số nồng độ EtOH (X3) lớn so với hệ số khác, chứng tỏ ảnh hưởng đáng kể nồng độ EtOH đến q trình chiết xuất Ngồi ra, hàm lượng capsaicinoid tỉ lệ thuận với tỉ lệ DM/NL (X2) nồng độ EtOH (X3) 3.2.3.4 Kết nghiên cứu điều kiện chiết xuất tối ưu Kết phân tích đánh giá ảnh hưởng yếu tố đến hàm lượng capsaicinoid, đưa điều kiện chiết tối ưu sau: thời gian chiết: 2,345 giờ; tỉ lệ DM/NL: 8,61/1; nồng độ EtOH: 95% 3.2.4 Kết nghiên cứu xây dựng quy trình bào chế cao định chuẩn Ớt Áp dụng điều kiện chiết xuất tối ưu mục 3.2.3.4 kết nghiên cứu phương mục 3.2.4.1, quy trình bào chế cao định chuẩn Ớt quy mơ phịng thí nghiệm xây dựng gồm giai đoạn sau: Giai đoạn chiết xuất: Cho ngun liệu Ớt khơ kích thước khoảng mm vào bình cầu tích thích hợp, thêm EtOH 95 % theo tỷ lệ DM/NL: 8,6/1, lắp hệ thống sinh hàn, chiết nhiệt độ 80oC 2,3 tính từ dung mơi bắt đầu sôi Rút dịch chiết lần Thêm tiếp EtOH 95 % theo tỷ lệ DM/NL: 8,6/1, lặp lại quy trình chiết Rút dịch chiết lần Gộp dịch chiết lần lần (dịch chiết A) Giai đoạn cô dịch chiết loại tạp:Cất thu hồi dung môi dịch chiết A áp suất giảm, nhiệt độ 70oC, áp suất - 0,05 ÷ - 0,09 Mpa, thu dịch chiết B (sánh, màu nâu đỏ) tích 1/4 - 1/2 thể tích dịch chiết A Dịch chiết B để lắng qua đêm, tránh ánh sáng Thêm đồng lượng EtOH 95% lạnh vào cốc thủy tinh chứa dịch chiết B, khuấy từ giờ, sau lấy phần dịch chiết tan, rửa phần không tan EtOH 95% lạnh, gộp lại thu dịch chiết C Cất loại dung môi áp suất giảm dịch chiết C, nhiệt độ 70 oC, áp 11 suất - 0,05 ÷ - 0,09 Mpa, đến thu khối mềm, đặc, sánh, màu nâu đỏ Định lượng bán thành phẩm, xác định hàm lượng CAP tồn phần Hồn chỉnh thành phẩm: Đóng gói lọ polyethylen sẫm màu, tránh ánh sáng 3.2.5 Kết xây dựng tiêu chuẩn sở cao định chuẩn Ớt Áp dụng điều kiện chiết xuất tối ưu mục 3.2.4.2, triển khai bào chế lô cao định chuẩn Ớt với quy mô kg nguyên liệu/ mẻ Thành phẩm thu được đóng lọ nhựa polyethylen sẫm màu, tránh ánh sáng Khối lượng 10 gam/lọ Thành phẩm 03 lô, đánh giá theo số tiêu chí EP 8.0, kết sau: - Khối lượng cao thu từ 98,367 g đến 109,54 g tiêu cắn khơ lơ thí nghiệm 75,50 đến 81,76% - Kết định tính mẫu cao định chuẩn Ớt sắc ký lớp mỏng cho hai vết tương ứng với chất chuẩn capsaicin dihydrocapsaicin - Kết định lượng capsaicinoid toàn phần, hiệu suất trình chiết xuất Bảng 3.13 Kết định lượng capsaicinoid tồn phần, hiệu suất quy trình chiết xuất cao định chuẩn Ớt 03 lô nghiên cứu Nguyên liệu Cao thành phẩm Lô Khối lượng NL (g) Hàm ẩm (%) % capsaicinoid Khối lượng cao (g) % capsaicin -oid Tỷ lệ % capsaicin/ capsaicinoid Hiệu suất chiết Lô 1012,0 9,8 0,413 109,54 2,310 64,37 67,11% Lô 1015,0 10,5 0,407 102,16 2,392 65,12 66,09% Lô 1026,0 9,5 0,409 98,367 2,485 64,48 65,65% 12 Từ kết khảo sát lô SCE, luận án đề xuất TCCS cao định chuẩn Ớt chiết xuất bào chế từ nguyên liệu Ớt lấy từ loài C frutescens L trồng Việt Nam bảng 3.14 Bảng 3.14 Dự kiến tiêu chuẩn sở cao định chuẩn Ớt STT Phép thử Hình thức Định tính Yêu cầu Khối mềm, đồng nhất, màu nâu đỏ, có mùi đặc trưng Ớt, vị cay Chế phẩm phải thể phép thử định tính CAP dihydrocapsaicin Hàm lượng capsaicinoid toàn phần phải đạt từ 2,0 đến 2,4% capsaicinoid tồn Định lượng phần tính theo CAP (C18H27NO3; Mt 305,4), hàm lượng CAP khơng 1,2%, chiếm 60% hàm lượng capsaicinoid tồn phần Cắn khô Không nhỏ 70% 3.2.6 Nghiên cứu độ ổn định cao định chuẩn Ớt Các lô cao định chuẩn Ớt ổn định điều kiện bảo quản nghiên cứu Các tiêu hình thức, định tính, định lượng sau tháng theo dõi điều kiện lão hóa cấp tốc 12 tháng điều kiện thực đạt theo TCCS 3.3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ MIẾNG DÁN CAPSAICIN 0,025% 3.3.1 Kết nghiên cứu lựa chọn phương pháp bào chế miếng dán Miếng dán bào chế theo phương pháp, tương ứng với kiểu thiết kế: miếng dán lớp miếng dán hai lớp Kết khảo sát cho thấy: hai loại miếng dán có độ bám dính tương đương 13 với miếng dán đối chiếu có % giải phóng dược chất sau đạt gần 70%, cao so với miếng dán đối chiếu Thông lượng thấm miếng dán hai lớp thấp so với miếng dán đối chiếu miếng dán lớp Bên cạnh đó, phương pháp bào chế miếng dán lớp đơn giản miếng dán hai lớp Từ kết nghiên cứu thực tế trên, luận án lựa chọn phương pháp bào chế thiết kế miếng dán lớp cho nghiên cứu 3.3.2 Kết nghiên cứu bào chế miếng dán lớp capsaicin 0,025% 3.3.2.1 Khảo sát thành phần công thức lớp cốt Kết lựa chọn khoảng tỷ lệ tá dược, loại tá dược tăng thấm bề dày lớp cốt đưa vào thiết kế thí nghiệm tối ưu hóa sau: - Tỷ lệ tá dược dính Viscomate: - 6% - Tỷ lệ tá dược hóa dẻo glycerin 30 - 50% - Loại tá dược tăng thấm: NMP TCT - Bề dày lớp cốt: 500 µm 3.3.2.2 Thiết kế thí nghiệm tối ưu hóa công thức lớp cốt miếng dán Tiến hành thiết kế thí nghiệm phần mềm MODDE 12.0 thu 20 công thức Bào chế miếng dán theo phương pháp mục 2.2.4 đánh giá thơng lượng giải phóng sau độ bám dính, thu kết bảng 3.26 Bảng 3.26 Thiết kế thí nghiệm kết thực nghiệm Chất Tỉ lệ Tỉ lệ Thông Độ bám Tên tăng VIS GLY lượng dính STT cơng thấm (%) (%) – (µg.cm-2.h-1) (mJ) – thức – X1 – X2 X3 – Y1 Y2 N1 TCT 30 0,700 10,89 N2 TCT 30 0,541 16,99 N3 TCT 50 0,612 15,42 14 STT Tên công thức N4 Chất tăng thấm – X1 TCT Tỉ lệ VIS (%) – X2 Tỉ lệ GLY (%) – X3 50 Thơng lượng (µg.cm-2.h-1) – Y1 0,204 Độ bám dính (mJ) – Y2 18,77 N5 TCT 36,67 0,508 10,57 N6 TCT 43,33 0,475 14,71 N7 TCT 4,67 30 0,591 11,54 N8 TCT 3,33 50 0,463 12,45 N9 TCT 40 0,261 13,23 10 N10 NMP 30 0,370 7,87 11 N11 NMP 30 0,452 13,39 12 N12 NMP 50 0,539 15,49 13 N13 NMP 50 0,534 13,11 14 N14 NMP 43,33 0,398 9,80 15 N15 NMP 36,67 0,649 18,82 16 N16 NMP 3,33 30 0,362 12,79 17 N17 NMP 4,67 50 0,401 16,27 18 N18 NMP 40 0,871 14,47 19 N19 NMP 40 0,845 13,47 20 N20 NMP 40 0,727 14,98 3.3.2.3 Ảnh hưởng thành phần đến thông lượng thấm qua da miếng dán Kết khớp mơ hình phương pháp hồi quy bình phương tối thiểu phần (partial least squares regression) cho thấy khơng có số hạng ảnh hưởng có ý nghĩa (p < 0,05) tới thông lượng thấm dược chất qua da Mức ý nghĩa khả dự đốn mơ hình đạt u cầu (R2 > 0,25, Q2 > 0,1) Về loại chất tăng thấm, 15 NMP có xu hướng làm tăng tốc độ thấm dược chất qua da, TCT ngược lại 3.3.2.4 Ảnh hưởng thành phần đến độ bám dính miếng dán Trong mơ hình sau xử lý, có số hạng ảnh hưởng có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) tới độ bám dính miếng dán, tỉ lệ VIS (%) tỉ lệ GLY (%) Hệ số ảnh hưởng số hạng 1,73 1,07 3.3.2.5 Kết nghiên cứu tối ưu hóa cơng thức lớp cốt miếng dán Tiến hành tối ưu hóa công thức phần mềm MODDE 12.0 với yêu cầu 02 biến đầu tham khảo giá trị đánh giá miếng dán đối chiếu Wellpatch Công thức tối ưu lớp cốt miếng dán lớp sau: SCE (tương ứng CAP) 0,025%; glycerin 40%, Viscomate 6%, nhôm hydroxyd 0,2%; acid tartaric 0,12%, NMP 5% Tiến hành bào chế miếng dán theo công thức tối ưu để so sánh giá trị thực tế mơ hình dự đốn, kết cho thấy công thức tối ưu phù hợp với mơ hình dự đốn 3.4 KẾT QUẢ XÂY DỰNG QUY TRÌNH SẢN XUẤT MIẾNG DÁN CAPSAICIN 0,025% QUY MƠ 1000 MIẾNG/ LƠ 3.4.1 Cơng thức Bảng 3.29 Cơng thức cho mẻ 1000 miếng dán CT 1000 CT Tên nguyên liệu miếng Tiêu chuẩn miếng dán dán SCE (hàm lượng 145,9 mg 145,9 g TCCS CAP 1,5%) N-methyl 437,5 mg 437,5 g TCNSX pyrrolidon TCNSX 525,0 g Viscomate NP-700 525,0 mg 16 Tên nguyên liệu CT miếng dán CT 1000 miếng dán Tiêu chuẩn Glycerin Nhôm hydroxyd dạng gel khô Acid tartaric Nước RO 3500,0 mg 3500,0 g TCNSX 17,5 mg 17,5 g TCNSX 10,5 mg 4120,0 mg 10,5 g 4120,0 g TCNSX DĐVN V 3.4.2 Danh sách thiết bị sử dụng sản xuất Các thiết bị dùng sản xuất bao gồm: máy trộn hành tinh (xuất xứ: Trung Quốc, dung tích: 15 lít, tốc độ khuấy: 100 – 300 vòng/ phút); Máy trộn nhũ hóa chân khơng TFZRJ – 200L – D (xuất xứ: Trung Quốc, kích thước: 2110 x 900 x 1760 mm, trọng lượng tịnh: 2400 kg, dung tích bồn phối hợp: 280 L); máy Hydrogel Coating ST50B 3.4.3 Tóm tắt quy trình sản xuất - Bào chế hydrogel - Phối hợp SCE vào khối hydrogel - Cán cắt miếng dán - Đóng gói: Đóng túi nhơm, hàn kín 3.4.4 Thẩm định quy trình sản xuất miếng dán Tỷ lệ thành phần công thức miếng dán giữ nguyên công thức tối ưu nghiên cứu quy mơ phịng thí nghiệm Các thiết bị sử dụng quy trình sản xuất gồm: máy trộn hành tinh, máy trộn nhũ hóa chân khơng ZKL-50, máy Hydrogel Coating ST50B Kết thẩm định cho thấy, quy trình bào chế đạt u cầu, có tính lặp lại mẻ thẩm định 3.4.5 Đánh giá thành phẩm quy trình sản xuất 1000 miếng/1 mẻ 17 - Về hình thức: mẫu đạt yêu cầu, miếng dán cắt gọn đẹp, kích thước, độ dày - Về tính chất: sau bóc lớp bảo vệ quan sát miếng dán đồng nhất, có màu đỏ cam - Độ đồng khối lượng, hàm lượng độ dính đạt theo yêu cầu đề 3.4.6 Kết đánh giá tính kích ứng Sau 72 theo dõi, tính điểm theo bảng chia độ kích ứng da, khơng có điểm phù ban đỏ nên tổng điểm mẫu điểm Các mẫu đem thử kích ứng khơng gây kích ứng, khơng xuất nốt ban đỏ phù 3.5 KẾT QUẢ XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA MIẾNG DÁN 3.5.1 Xây dựng tiêu chuẩn sở Dựa vào kết đánh giá chất lượng lô, lô 1000 miếng tham khảo yêu cầu chất lượng “Thuốc dán thấm qua da cao dán” DĐVN V; tiêu chuẩn chất lượng miếng dán CAP 0,025% đề xuất bảng 3.41 Bảng 3.41 Dự kiến tiêu chuẩn sở miếng dán capsaicin 0,025% STT Chỉ tiêu Yêu cầu Tính chất Miếng dán có kích thước 10 x 14 cm; sau bóc lớp bảo vệ, quan sát miếng dán đồng nhất, có màu đỏ cam Định tính Thời gian lưu pic sắc ký đồ dung dịch thử tương ứng với thời gian lưu pic capsaicin dihydrocapsaicin sắc ký đồ dung dịch chuẩn Định lượng Hàm lượng CAP, C18H27NO3, từ 90,0% đến 110,0% so với lượng ghi nhãn 18 STT Chỉ tiêu Độ bám dính u cầu Cơng kéo cần để bóc chế phẩm khỏi bề mặt chuẩn khoảng 12,5 mJ – 15,5 mJ Đồng khối Các miếng dán có khối lượng nằm lượng khoảng 95% đến 105% so với khối lượng trung bình Khả giải Lượng dược chất giải pzahóng qua màng phóng dược thẩm tích sau khơng 70% so chất với hàm lượng ghi nhãn Thử tính kích ứng Giới hạn vi sinh vật Chế phẩm khơng gây kích ứng kích ứng nhẹ da thỏ Trong 14 cm2 chế phẩm yêu cầu: - Tổng số vi khuẩn hiếu khí: Khơng q 100 CFU - Tổng số nấm: Khơng q 10 CFU - Khơng có P aeruginosa, S aureus 3.5.2 Kết đánh giá độ ổn định miếng dán Các mẫu miếng dán capsaicin 0,025% ổn định điều kiện bảo quản nghiên cứu Các tiêu hình thức, định tính, định lượng sau tháng theo dõi điều kiện lão hóa cấp tốc 12 tháng điều kiện thực đạt theo TCCS 3.6 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA TÁ DƯỢC TĂNG THẤM ĐẾN CẤU TRÚC CỦA DA Khơng có thay đổi đáng kể rung động bên giao động kéo giãn đối xứng (vsCH2) nhóm nghiên cứu sử dụng tá dược tăng thấm NMP TCT Như vậy, không phát tương tác tá dược tăng thấm thành phần lớp sừng phương pháp sử dụng quang phổ ATR-FTIR Kết nghiên cứu cho thấy có khác biệt độ dày lớp sừng nhóm khơng sử dụng chất tăng thấm, nhóm sử dụng tá dược 19 tăng thấm TCT nhóm sử dụng tá dược tăng thấm NMP Mẫu sử dụng tá dược tăng thấm NMP độ dày lớp sừng dày nhóm cịn lại có ý nghĩa thống kê p < 0,05 3.7 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG GIẢM ĐAU, CHỐNG VIÊM CỦA MIẾNG DÁN Tác dụng giảm đau, chống viêm miếng dán CAP 0,025% tiến hành nghiên cứu mơ hình động vật gây viêm Complete Freund's adjuvant (CFA) Kết nghiên cứu cho thấy, miếng dán nghiên cứu có tác dụng giảm đau chống viêm động vật thí nghiệm tương đương với chế phẩm đối chiếu, tác dụng chống viêm thể sau ngày sử dụng, tác dụng giảm đau thể hiệu sau khoảng ngày sử dụng Chương BÀN LUẬN 4.1 VỀ NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH BÀO CHẾ CAO ĐỊNH CHUẨN ỚT Để đề xuất hàm lượng capsaicinoid nguyên liệu Ớt trồng Việt Nam, luận án khảo sát mẫu Ớt trồng với diện tích sản lượng lớn vùng nguyên liệu miền Bắc, miền Trung Tây Nguyên Kết cho thấy, Việt Nam có loại Ớt thiên Ớt sừng (C frutescens L.) có capsaicinoid, hàm lượng dao động khoảng lớn từ 0,04 – 0,80 % hàm lượng nonivamid mẫu nghiên cứu mức 5% so với capsaicinoid tồn phần Với giống Ớt có hàm lượng capsaicinoid ≥ 0,4% hàm lượng nonivamide dao động từ 1,26 – 1,78% so với capsaicinoid toàn phần Chính ngun liệu Ớt sử dụng chuyên luận Ớt (quả) EP 8.0 khác với nguyên liệu Ớt (quả) luận án nghiên cứu nên luận án đề xuất khơng có tiêu giới hạn nonivamid TCCS nguyên liệu Ớt (quả) 20 Có nhiều phương pháp khác áp dụng để chiết xuất capsaicinoid từ Ớt, kể đến chiết Soxhlet hồi lưu, chiết xuất có tác động siêu âm, chiết hỗ trợ vi sóng, chiết xuất dung môi siêu tới hạn Trong nghiên cứu này, phương pháp chiết hồi lưu lựa chọn thiết bị đơn giản, dễ thao tác, dễ triển khai quy mơ phịng thí nghiệm nâng cấp quy mơ công nghiệp Với xu hướng sử dụng dung môi xanh chiết xuất, EtOH chọn làm dung môi chiết trình xây dựng quy trình chiết xuất bào chế SCE EtOH dung môi dễ kiếm, dễ thu hồi, thân thiện với môi trường sử dụng dung môi cho hiệu suất chiết gần tương đương với methanol n-hexan Áp dụng thông số chiết xuất nghiên cứu tối ưu mục 3.2.3, luận án xây dựng quy trình bào chế SCE quy mơ phịng thí nghiệm (1kg/1 lơ) Thẩm định quy trình với 03 lơ bào chế khác nhau, kết cho thấy tiêu chí về: hình thức, định tính, định lượng 03 lô tương đồng Dược điển Việt Nam chưa có chuyên luận nguyên liệu Ớt (quả), cao định chuẩn Ớt, nhựa dầu Ớt … Dược điển châu Âu Căn Dược điển Việt Nam tham khảo chuyên luận cao mềm định chuẩn Ớt Dược điển Châu Âu (EP 8.0), luận án xây dựng TCCS cao định chuẩn Ớt gồm tiêu chí: hình thức, định tính, định lượng, cắn khô Về kết nghiên cứu độ ổn định cho thấy cao định chuẩn Ớt ổn định khoảng 12 tháng điều kiện thực tháng điều kiện lão hóa cấp tốc Trong cơng thức nhóm capsaicionid chứa nhóm –OH phenol, dễ bị oxy hóa, khả dễ bị oxy hóa tăng tiếp xúc với ánh sáng, khơng khí, tác nhân oxy hóa bảo quản nhiệt độ cao Với mục đích bào chế cao định chuẩn Ớt 21 nguyên liệu hóa dược, giữ nguyên đặc điểm tự nhiên cao nên luận án lựa chọn không đưa thêm chất chống oxy hóa vào q trình bào chế cao định chuẩn Ớt, mà lựa chọn phương án bảo quản tránh ánh sáng nhiệt độ thấp để trì ổn định cao định chuẩn Ớt 4.2 VỀ NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH BÀO CHẾ MIẾNG DÁN Miếng dán có 02 dạng thiết kế dạng cốt dạng khoang chứa Dạng bào chế dạng cốt với ưu điểm dễ triển khai quy mơ phịng thí nghiệm cơng nghiệp lựa chọn để nghiên cứu bào chế miếng dán da tác dụng chỗ CAP 0,025% Tá dược dính thành phần quan trọng miếng dán, lựa chọn tá dược dính thích hợp vấn đề cần thiết việc thiết kế công thức miếng dán Trên sở nguồn cung có, luận án khảo sát số tá dược lựa chọn Viscomate tá dược dính sử dụng nghiên cứu Viscoamate tên thương mại polyme tạo thành từ monome acid acrylic natri acrylat Viscoamte tạo hydrogel dính lên bề mặt theo chế: tạo lớp điện tích kép trao đổi bề mặt, khóa học, hấp phụ thâm nhập chuỗi polyme vào bề mặt Miếng dán kiểu dược chất tan dính có cấu trúc lớp dạng bào chế đơn giản, dễ thực thiết bị không phức tạp Trong công thức miếng dán, ngồi VIS tá dược dính, GLY lựa chọn để tăng độ dẻo ổn định thể chất miếng dán Để cải thiện tính thấm miếng dán qua da đồng thời dung mơi hịa tan cao định chuẩn Ớt, nên tá dược tăng thấm dung môi hữu không phân cực lựa chọn Phần mềm Modde 12.0 sử dụng để thiết kế công thức, với biến đầu vào gồm: biến định lượng biến định tính Kết xây dựng cơng thức 22 tối ưu miếng dán capsaicin 0,025% có độ bám dính, thơng lượng thấm tương đương dự đốn phần mềm sản phầm đối chiếu Quy trình sản xuất miếng dán nâng cấp quy mô 1000 miếng/mẻ, giai đoạn sử dụng máy tự động dễ dàng kiểm sốt thơng số Quy trình sản xuất thẩm định đạt tiêu chí đề ban đầu, xác định thông số trọng yếu, nguy dự kiến biện pháp xử lý Chế phẩm nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn sở vào tiêu chuẩn dành cho thuốc dán thấm qua da DĐVN V kết thực nghiệm xây dựng cơng thức, quy trình đánh giá chất lượng Luận án đề xuất tiêu chuẩn chất lượng cho miếng dán gồm tiêu: tính chất, định tính, định lượng, độ bám dính, độ đồng hàm lượng, khả giải phóng dược chất, tính kích ứng giới hạn vi sinh vật Các phương pháp có độ xác cao dễ dàng áp với điều kiện thực tế Việt Nam KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ kết nghiên cứu luận án, rút số kết luận sau: Đã xây dựng quy trình bào chế cao định chuẩn Ớt đạt hàm lượng capsaicinoid 2,0 – 2,4% từ nguồn nguyên liệu Ớt (quả) trồng Việt Nam (có hàm lượng capsaicinoid tồn phần ≥ 0,4% tính theo capsaicin), với thông số kỹ thuật chiết xuất sau: phương pháp chiết hồi lưu, dung môi ethanol 95%, nhiệt độ chiết 80ºC, số lần chiết lần; thời gian chiết 2,3 giờ/lần; tỷ lệ dung môi/nguyên liệu: 8,6/1 Đã xây dựng thẩm định quy trình bào chế cao định chuẩn Ớt quy mơ phịng thí nghiệm với kg nguyên liệu/ mẻ Đã xây dựng tiêu chuẩn sở cao định chuẩn Ớt bao gồm 23 tiêu: hình thức, định tính, định lượng tỷ lệ cắn khô Đã đánh giá độ ổn định chế phẩm, cao định chuẩn Ớt có ổn định điều kiện thực thời gian 12 tháng Đã xây dựng công thức tối ưu quy trình bào chế miếng dán capsaicin 0,025% dạng cốt thiết kế lớp, với công thức sau: cao định chuẩn Ớt (tương ứng 0,025% capsaicin), Glycerin (40%), Viscomate (6%), nhôm hydroxyd (0,2%), acid tartaric (0,12%), N-methyl pyrrolidon (5%), nước RO, lớp bảo vệ, lớp đế Đã nâng cấp quy trình bào chế miếng dán giảm đau chỗ capsaicin 0,025% quy mô 1.000 miếng/mẻ Đã xây dựng tiêu chuẩn sở miếng dán nghiên cứu gồm tiêu chí: tính chất, độ bám dính, độ đồng khối lượng, định lượng, khả giải phóng, tính kích ứng, giới hạn vi sinh vật Bước đầu đánh giá độ ổn định miếng dán hai điều kiện thường lão hóa cấp tốc, kết cho thấy miếng dán ổn định thời gian nghiên cứu 12 tháng Đã chứng minh miếng dán capsaicin 0,025% có tác dụng giảm đau, chống viêm chỗ động vật thực nghiệm, hiệu tương đương với miếng dán đối chiếu Wellpatch Đã chứng minh miếng dán khơng gây kích ứng da mơ hình thử nghiệm thỏ thời gian 72 Kiến nghị Tiếp tục hồn thiện cơng thức, quy trình bào chế tăng độ ổn định, tuổi thọ cao định chuẩn Ớt miếng dán giảm đau chỗ capsaicin 0,025% Nâng cấp, hồn thiện quy trình sản xuất chế phẩm nghiên cứu quy mô lớn 24 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Nguyễn Đức Cường, Nguyễn Chí Đức Anh, Đỗ Thị Phương Chi, Nguyễn Tiến Đạt, Đào Minh Hạnh, Đỗ Quyên, Nguyễn Thanh Bình, Nguyễn Thạch Tùng (2019); “Thẩm định phương pháp định lượng HPLC để ứng dụng đánh giá độ ổn định capsaicin”; Tạp chí Y – Dược học quân sự, số 5-2019, trang 5-12 Nguyễn Đức Cường, Nguyễn Chí Đức Anh, Phạm Tiến Đạt, Đặng Quang Anh, Đỗ Quyên, Nguyễn Thanh Bình, Nguyễn Thạch Tùng (2020); “Nghiên cứu xây dựng công thức bào chế miếng dán giảm đau chỗ capsaicin 0,025%”; Tạp chí Dược học, 7/2020, số 531, năm 69, trang 62-66 Duc-Cuong Nguyen, Quang-Anh Dang, Tien-Dat Nguyen, VanTrung Bui, Sang-Cheol Chi, Quyen-Do, Nguyen-Thach Tung (2023); “DoE-based formulation, physicochemical properties, and antiinflammatory investigation of a topical patch preparing by partially neutralized polyacrylate-based adhesive hydrogel”; Materials Today Communications, 35(2023) https://doi.org/10.1016/j.mtcomm.2023.105606