Nghiên cứu bào chế và bước đầu đánh giá sinh khả dụng viên lornoxicam giải phóng có kiểm soát.Nghiên cứu bào chế và bước đầu đánh giá sinh khả dụng viên lornoxicam giải phóng có kiểm soát.Nghiên cứu bào chế và bước đầu đánh giá sinh khả dụng viên lornoxicam giải phóng có kiểm soát.Nghiên cứu bào chế và bước đầu đánh giá sinh khả dụng viên lornoxicam giải phóng có kiểm soát.Nghiên cứu bào chế và bước đầu đánh giá sinh khả dụng viên lornoxicam giải phóng có kiểm soát.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỒNG THỊ HOÀNG YẾN NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VÀ BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG VIÊN LORNOXICAM GIẢI PHĨNG CĨ KIỂM SỐT Chun ngành: Công nghệ dược phẩm bào chế thuốc Mã số: 62720402 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC Hà Nội, năm 2019 Cơng trình hồn thành tại: Bộ môn Bào chế - Trường Đại học Dược Hà Nội Bộ môn Bào chế - CN Dược - Trường đại học Y Dược - Đại học Thái Nguyên Trung Tâm Tương Đương Sinh học - Viện kiểm nghiệm thuốc Trung ương Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Nguyễn Đăng Hòa TS Nguyễn Thạch Tùng Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá luận án cấp Trường họp tại: ……………………………………………………………………… Vào hồi:………… giờ…… ngày……… tháng…… năm…… Có thể tìm hiểu luận án tại: Thư viện Quốc gia Việt Nam Thư viện Trường Đại học Dược Hà Nội MỞ ĐẦU Tính cấp thiết luận án Lornoxicam hoạt chất thuộc nhóm giảm đau chống viêm phi steroid, phân lớp oxicam có tác dụng hạ sốt, giảm đau, chống viêm Hiệu lực giảm đau chống viêm lornoxicam mạnh gấp 10 lần so với tenoxicam, liều điều trị 1/6 so với thuốc hệ trước giảm nhiều tác dụng khơng mong muốn Khác với dược chất thuộc nhóm oxicam, LNX có thời gian bán thải ngắn (thường từ đến giờ), đặc tính hịa tan phụ thuộc nhiều vào pH, tan mơi trường pH thấp dày nên tốc độ giảm đau không nhanh cần sử dụng nhiều lần ngày Do việc phát triển dạng bào chế vừa có khả cải thiện tốc độ hịa tan mơi trường acid, vừa có khả kéo dài giải phóng dược chất cần thiết Qua tham khảo tài liệu, chưa có cơng trình nghiên cứu nước viên giải phóng có kiểm sốt gồm lớp giải phóng nhanh lớp giải phóng kéo dài cho hoạt chất lornoxicam Trên giới có nghiên cứu tồn diện viên lornoxicam giải phóng có kiểm sốt Hạn chế nghiên cứu lớp giải phóng nhanh thường không đạt hiệu cao LNX tan pH 1,2 chưa có bố trí thí nghiệm đánh giá sinh khả dụng để chứng minh hiệu dạng bào chế Xuất phát từ ý nghĩa khoa học thực tiễn trên, việc phát triển dạng bào chế giải phóng có kiểm soát nhằm khắc phục hạn chế nghiên cứu trước khắc phục hạn chế nội LNX vấn đề cấp thiết Mục tiêu luận án Xây dựng công thức quy trình bào chế viên bao dập hai lớp, lớp bao chứa mg LNX giải phóng nhanh viên nhân cốt chứa mg lornoxicam GPKD quy mơ phịng thí nghiệm Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng bước đầu đánh giá độ ổn định chế phẩm nghiên cứu Bước đầu đánh giá sinh khả dụng viên nghiên cứu chó thí nghiệm Những đóng góp luận án Cho đến thời điểm nay, chưa có cơng bố nghiên cứu bào chế đánh giá sinh khả dụng viên nén lornoxicam giải phóng có kiểm sốt Việt Nam Vì vậy, kết nghiên cứu luận án xem đóng góp Cụ thể là: - Đã xây dựng dựng công thức quy trình bào chế viên lornoxicam giải phóng có kiểm sốt gồm hai lớp, lớp bao chứa 4mg LNX giải phóng nhanh viên nhân chứa 8mg giải phóng kéo dài Lớp bao giải phóng nhanh làm tăng độ tan biện pháp giảm kích thước tiểu phân dược chất, thêm tá dược kiềm chất diện hoạt, kết hợp với sử dụng tá dược siêu rã Disolcel tá dược độn Avicel PH 101 Nhân giải phóng kéo dài bào chế phương pháp tạo hạt ướt, sử dụng tá dược tạo cốt ăn mòn Methocel K4M Methocel E15LV Viên LNX 12 mg KSGP bào chế cách kết hợp nhân GPKD với lớp bao GPN phương pháp bao dập Đây phương pháp đơn giản, dễ áp dụng quy mô lớn - Đã xây dựng thẩm định phương pháp định lượng LNX huyết tương có giới hạn định lượng nhỏ, khoảng tuyết tính rộng, độ nhạy độ xác cao kỹ thuật sắc ký lỏng khối phổ (LC- MS/MS) hệ thống UPLC với chất chuẩn nội meloxicam Kết bước đầu đánh giá SKD viên nghiên cứu cho thấy viên đạt nồng độ dược chất máu cao sau trì nồng độ dược chất máu ổn định kéo dài tới 24 Cấu trúc luận án Luận án gồm 154 trang, 61 bảng, 29 hình, 115 tài liệu tham khảo (13 tài liệu Tiếng Việt, 102 tài liệu Tiếng Anh) Bố cục sau: Đặt vấn đề trang, tổng quan 34 trang, đối tượng phương pháp nghiên cứu 24 trang, kết nghiên cứu 69 trang, bàn luận 23 trang, kết luận trang, đề xuất trang, danh mục cơng trình cơng bố có liên quan đến luận án trang, tài liệu tham khảo 11 trang CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 LORNOXICAM 1.1.1 Công thức OH O NH Cl S O S N N CH3 O Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo lornoxicam Công thức phân tử: C13H10ClN3O4S2 - Khối lượng phân tử: 371,8 - Tên khoa học: 6-chloro4- hydroxy-2-methyl-N-2pyridyl-5H-thieno(2,3e)- [(1,2)]-thiazin-2carboxamid- 1,1-dioxid 1.1.2 Tính chất - Bột kết tinh màu vàng, vị đắng, tan cloroform, tan methanol, không tan nước Nhiệt độ nóng chảy 225oC - 230oC Lornoxicam tồn hai dạng thù hình có độ tan khác Có tính acid yếu, số phân ly pKa = 4,7 tan hạn chế mơi trường acid Độ tan lornoxicam phụ thuộc vào pH, tan tốt môi trường đệm phosphat pH 6,8 7,4 hình thành liên kết hydro tương tác tĩnh điện nhóm OH natri hydroxyd có dung dịch đệm phosphat LNX thân dầu, với hệ số phân bố 1,8 (n-octanol đệm pH 7,4) - Lornoxicam chất lưỡng tính khoảng pH - dạng anion pH ≥ Tồn dạng đồng phân hỗ biến keto-enol 1.1.3 Chỉ định - Điều trị viêm khớp, viêm xương khớp mãn tính Giảm đau trước sau phẫu thuật phụ khoa, phẫu thuật chỉnh hình, phẫu thuật miệng 1.2 MỘT SỐ KỸ THUẬT VÀ CÔNG NGHỆ BÀO CHẾ ĐƯỢC ÁP DỤNG TRONG NGHIÊN CỨU PHÁT TRIỂN DẠNG THUỐC VỚI LORNOXICAM Để làm tăng độ hòa tan LNX, cơng trình nghiên cứu thường đề cập đến phương pháp cải thiện cách tác động vào thân dược chất nhằm làm tăng độ tan tốc độ hịa tan Điều thực cách thay đổi tính chất vật lý dược chất giảm kích thước tiểu phân để tăng diện tích tiếp xúc, sử dụng chất diện hoạt để làm tăng tính thấm dược chất, bào chế hệ phân tán rắn… Bào chế hệ phân tán rắn Bào chế hệ phân tán rắn LNX với chất mang phù hợp biện pháp cải thiện đáng kể độ tan dược chất, cải thiện sinh khả dụng Các chất mang thường dùng hệ phân tán rắn là: PVP K30, PEG 4000, PEG 6000, cyclodextrin dẫn chất Bào chế viên giải phóng nhanh Đối với dược chất sử dụng theo đường uống có độ tan nước lornoxicam bào chế dạng viên nén rã nhanh, giải phóng nhanh dược chất vài giây dạng hỗn dịch mịn, làm tăng diện tích bề mặt tiếp xúc với mơi trường hịa tan, làm tăng hấp thu dược chất Bào chế viên giải phóng kéo dài Bào chế dạng giải phóng kéo dài thích hợp với dược chất có thời gian bán thải ngắn lornoxicam Ngoài ra, dạng thuốc GPKD cịn làm giảm tác dụng phụ kích ứng chỗ đường tiêu hóa lornoxicam dược chất giải phóng từ từ, tránh tập trung lượng lớn dược chất đường tiêu hóa uống viên nén quy ước Để điều trị bệnh: thấp khớp, viêm khớp, viêm xương khớp viêm cột sống dính khớp, lornoxicam bào chế dạng bào chế khác như: viên giải phóng theo nhịp, viên lưu dày… Bào chế viên giải phóng có kiểm soát Theo bảng phân loại sinh dược học bào chế (BCS) LNX thuộc nhóm II có độ tan thấp, tính thấm cao Lornoxicam có thời gian bán thải ngắn (3-5 giờ) nên phải uống nhiều lần ngày đạt nồng độ có tác dụng điều trị máu Hơn nữa, LNX tan nước, độ tan phụ thuộc vào pH đặc biệt tan mơi trường pH thấp dày, làm chậm tác dụng giảm đau Bào chế viên giải phóng có kiểm sốt gồm lớp giải phóng nhanh lớp giải phóng kéo dài khắc phục hai nhược điểm LNX thời gian bán thải ngắn tan mơi trường acid Bào chế viên giải phóng có kiểm sốt gồm nhân giải phóng kéo dài bao dập lớp bao giải phóng nhanh có ưu điểm thiết bị có sẵn, lại dễ dàng áp dụng quy mô lớn chọn để bào chế viên lornoxicam 12 mg KSGP luận án 1.3 SINH KHẢ DỤNG Trình bày nội dung: nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng in vitro lornoxicam, quy định đánh giá sinh khả dụng in vivo nghiên cứu sinh khả dụng in vivo chế phẩm chứa lornoxicam CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu, trang thiết bị đối tượng nghiên cứu 2.1.1 Nguyên liệu, trang thiết bị Các nguyên liệu sử dụng bào chế đạt tiêu chuẩn dược dụng theo Dược điển Anh, Mỹ, Việt Nam; hóa chất sử dụng kiểm nghiệm đạt tiêu chuẩn tinh khiết phân tích theo quy định Các thiết bị bào chế phân tích đại nước EU, Mỹ, Đức, Nhật Bản, Ấn độ, Trung Quốc sản xuất, đảm bảo độ tin cậy 2.1.2 Đối tượng nghiên cứu Lornoxicam nguyên liệu (Ấn Độ): đạt tiêu chuẩn USP 40 Viên nén lornoxicam 12 mg KSGP nghiên cứu Động vật thí nghiệm: chó ta trưởng thành, giống đực, khỏe mạnh, cân nặng 10 - 12 kg, nuôi dưỡng điều kiện thí nghiệm với chế độ ăn uống đầy đủ kiểm sốt Chó để nhịn ăn 10 trước tiến hành thí nghiệm 2.2 - Nội dung nghiên cứu Xây dựng công thức bào chế lớp bao chứa mg LNX giải phóng nhanh - Xây dựng công thức bào chế viên nhân LNX mg giải phóng kéo dài - Xây dựng cơng thức bào chế viên nén LNX 12 mg giải phóng có kiểm sốt gồm viên nhân giải phóng kéo dài bao dập lớp bao giải phóng nhanh - Xây dựng quy trình bào chế viên LNX 12 mg giải phóng có kiểm sốt quy mơ 2000 viên/mẻ - Xây dựng tiêu chuẩn sở bước đầu theo dõi độ ổn định viên nghiên cứu - Bước đầu đánh giá sinh khả dụng viên nghiên cứu động vật thí nghiệm 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp bào chế - Cải thiện độ tan lornoxicam môi trường acid ba phương pháp: giảm kích thước tiểu phân, thêm tá dược kiềm chất diện hoạt - Bào chế lớp bao chứa mg LNX giải phóng nhanh phương pháp tạo hạt ướt - Bào chế viên nhân chứa LNX mg giải phóng kéo dài dạng cốt thân nước sử dụng tá dược hydroxypropyl methylcellulose phương pháp tạo hạt ướt - Bào chế viên lornoxicam 12 mg giải phóng có kiểm soát gồm viên nhân chứa mg LNX GPKD bao dập lớp bao chứa mg lornoxicam GPN 2.3.2 Các phương pháp đánh giá 2.3.2.1 - Đánh giá độ tan - Đánh giá kích thước phân bố kích thước - Đánh giá kích thước hình thái tiểu phân 2.3.2.2 - Phương pháp đánh giá nguyên liệu Phương pháp đánh giá viên nén Kiểm nghiệm tiêu chung viên nén theo DĐVN IV Phương pháp đánh giá chất lượng bột, hạt: độ đồng hàm lượng bột, độ trơn chảy, phân bố kích thước hạt, khối lượng riêng biểu kiến, độ ẩm hạt - Định lượng LNX chế phẩm: Sử dụng phương pháp đo quang phổ hấp thụ tử ngoại phương pháp HPLC với điều kiện: Cột Phenomenex RP18, 250 x 4,6 mm, µm; Tốc độ dịng 1,5 ml/ phút; Thể tích tiêm mẫu 20 µl; Pha động: Dung dịch natri acetat 0,025M (chứa 0,05 % (tt/tt) triethylamin) : methanol 50 : 50; Detector UV, đo bước sóng 379 nm Phương pháp phân tích thẩm định có khoảng tuyến tính thích hợp, độ đặc hiệu, độ đúng, độ lặp lại, độ xác cao - Phương pháp thử hỏa tan: viên LNX kiểm sốt giải phóng: Được thực thiết bị hòa tan Jasco DT 810 với thông số: tốc độ quay cánh khuấy 100 vịng/ phút; nhiệt độ mơi trường hịa tan 37± 0,5oC Mơi trường hịa tan 900 ml dung dịch acid hydrocloric 0,1 N pH 1,2 đầu, dung dịch đệm phosphat pH 6,8 Thời điểm hút mẫu sau đến 10 giờ, mật độ quang ghi bước sóng 372 nm dung dịch acid hydrocloric 0,1 N pH 1,2 bước sóng 375 nm dung dịch đệm phosphat pH 6,8 2.3.3 Xây dựng thẩm định quy trình bào chế quy mơ 2000 viên Nâng cấp quy trình mức 2000 viên/ mẻ Quy trình bào chế viên nén lornoxicam kiểm sốt giải phóng gồm giai đoạn: Bào chế lớp bao chứa mg LNX giải phóng nhanh, bào chế viên nhân giải phóng kéo dài chứa mg LNX bào chế viên lornoxicam giải phóng có kiểm sốt cách kết hợp nhân giải phóng kéo dài bao dập lớp bao giải phóng nhanh Trong giai đoạn bào chế, tiến hành đánh giá yếu tố nguy thông số trọng yếu quy trình cần thẩm định đề biện pháp xử lý Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng viên LNX 12 mg KSGP: Dựa vào tiêu chất lượng lô bào chế theo công thức tối ưu để đánh giá ảnh hưởng chất diện hoạt tới độ hòa tan LNX (N12) Kết tỷ lệ dược chất : calci carbonat 1: cải thiện độ tan LNX tốt so với tỉ lệ khác Với viên nén N10, LNX hòa tan đạt 58,01% sau phút, 71,62% sau 15 phút Khi kết hợp thêm NLS, sau phút lượng LNX hòa tan 69,83% sau 15 phút 80,67% Hơn thế, công thức N12 cải thiện đáng kể thời gian rã (23 ± giây) so với viên khảo sát trước Như vậy, từ kết nghiên cứu trên, lựa chọn công thức bào chế lớp bao chứa mg LNX GPN với thành phần gồm: LNX mg, tá dược gồm: tá dược kiềm calci carbonat, tá dược siêu rã Disolcel, chất diện hoạt natri lauryl sulfat, tá dược độn Avicel PH 101, tá dược trơn magnesi stearat Aerosil kết hợp với kỹ thuật làm giảm kích thước tiểu phân dược chất trước bào chế viên 3.1.2 Nghiên cứu xây dựng công thức viên nhân chứa mg lornoxicam GPKD Nghiên cứu lựa chọn polyme kiểm sốt giải phóng Qua tham khảo tài liệu, kết hợp với khảo sát sơ bộ, lựa chọn tiêu chí giải phóng dược chất viên LNX GPKD mơi trường đệm phosphat pH 6,8 là: giải phóng 20 - 50% dược chất sau giờ, 45 - 75% sau 75 - 100% sau Để xây dựng cơng thức, tiến hành khảo sát nhóm HPMC có độ nhớt thấp, trung bình cao - Đối với nhóm HPMC có độ nhớt thấp: Cơng thức D1, D2 sử dụng Methocel K15LV K100LV không đạt % giải phóng DC đầu (32,8% 26,7%) Công thức D3 D4 sử dụng Methocel E6LV E15LV (6 15mPa.s) đạt mức độ giải phóng 75% sau giờ, polyme tạo cốt có độ nhớt thấp so với polyme sử dụng công thức D1, D2 (15mPas 100mPas), tạo lớp gel mỏng có tác dụng kiểm sốt giải phóng thời điểm ban đầu - Đối với nhóm HPMC có độ nhớt trung bình: Khi sử dụng tỷ lệ 10% viên, khả giải phóng dược chất viên thấp, không đạt % dược chất giải phóng so với dự kiến 75 - 100% sau Trong công thức trên, Methocel K4M cơng thức D5 có vai trị kiểm sốt giải phóng DC tốt - Đối với nhóm HPMC có độ nhớt cao: Khi sử dụng với tỷ lệ 10% viên, % LNX giải phóng thấp so với dự kiến % dược chất giải phóng sau đạt khoảng 30,0% Nguyên nhân polyme có khối lượng phân tử lớn, độ nhớt cao, tạo thành hàng rào cản trở trình thấm nước từ mơi trường làm chậm q trình khuếch tán dược chất Tỷ lệ % LNX giải phóng từ viên sử dụng loại HPMC có độ nhớt cao Methocel K100M 90SH - 100000 không khác đáng kể Từ kết khảo sát loại polyme HPMC có độ nhớt khác nhau, tỷ lệ 10% cho thấy: sử dụng HPMC có độ nhớt cao làm chậm q trình giải phóng dược chất Cịn sử dụng HPMC có độ nhớt thấp q trình giải phóng dược chất lại q nhanh Trong nhóm HPMC có độ nhớt trung bình, Methocel K4M có khả kiểm sốt giải phóng gần với dự kiến, mức độ giải phóng dược chất sau chưa tới 75% Do vậy, để tăng tốc độ giải phóng dược chất cần kết hợp Methocel K4M với polyme HPMC có độ nhớt thấp Lựa chọn Methocel K4M Methocel E15LV làm tá dược kiểm sốt giải phóng để tiến hành nghiên cứu Viên nén dạng cốt phối hợp loại polyme Tiến hành bào chế công thức kết hợp loại polyme Methocel K4M Methocel E15LV với tỷ lệ 10% : 5%; 10% : 10%; 10% : 15% so với khối lượng viên 120 100 % lorno 80 xicam 60 giải 40 phón 20 g X D10 Methocel K4M 10% Methocel E15LV 5% D11 Methocel K4M 10% Methocel E15LV 10% D12 Methocel K4M 10% Methocel E15LV 15% Thời gian (giờ) Hình 3.11 Tỷ lệ % LNX giải phóng từ viên sử dụng kết hợp polyme Kết hình 3.11 cho thấy cơng thức D11 sử dụng polyme tạo cốt Methocel K4M Methocel E15LV tỷ lệ 10% có tốc độ giải phóng dược chất tốt, phù hợp với tiêu chuẩn giải phóng DC dự kiến Mỗi giải phóng khoảng 10% sau giải phóng 79,6% lượng dược chất Từ kết nghiên cứu trên, lựa chọn cơng thức viên nhân có thành phần gồm: mg lornoxicam, sử dụng kết hợp loại polyme Methocel K4M Methocel E15LV làm tá dược GPKD, dung dịch PVP 5% ethanol 70 làm tá dược dính, magnesi stearat, Aerosil làm tá dược trơn, Avicel PH 101 làm tá dược độn, khối lượng vừa đủ 200 mg 3.1.3 Xây dựng công thức viên LNX 12 mg giải phóng có kiểm sốt Tiến hành xây dựng cơng thức viên LNX 12 mg KSGP gồm hai lớp: lớp bao GPN nhân GPKD Biến đầu vào lựa chọn lượng calci carbonat (X1) biến thiên từ - 10 mg Hai biến đầu vào trọng yếu cho lớp lõi GPKD lượng Methocel K4M (X2) biến thiên từ 10 - 30 mg, Methocel E15LV (X3) biến thiên từ 10 - 30 mg Biến đầu phần trăm giải phóng DC từ viên KSGP chứa 12 mg LNX sau giờ, giờ, 10 Khoảng biến thiên biến đầu xây dựng từ phần trăm hòa tan viên GPN chứa mg LNX môi trường pH 1,2 (1 giờ: 84,54%; giờ: 84,62%) viên nhân GPKD chứa mg LNX môi trường pH 6,8 (2giờ: 21,94%; 4giờ: 41,87%; giờ: 60,91%; 8h: 79,58%) Thiết kế thí nghiệm theo mơ hình mặt hợp tử tâm thu 17 cơng thức Trong có công thức tâm để đánh giá mức độ lặp lại thí nghiệm Tiến hành thử hịa tan 17 công thức, công thức lần, hai đầu môi trường acid hydrocloric 0,1N pH 1,2 môi trường dung dịch đệm phosphat pH 6,8 Tối ưu hóa cơng thức Để tìm cơng thức tối ưu với đích dự kiến % LNX giải phóng sau giờ: 33%; giờ: 60%, giờ: 90% 10 giờ: 100%, cần tiến hành tối ưu hóa cơng thức từ số liệu xây dựng bảng 3.12 thông qua phương pháp phân tích mặt đáp ứng với khả thất bại nhỏ Kết cho thấy 20 công thức tối ưu thu từ phần mềm cơng thức có thành phần gồm: X1 (CaCO3): 10,88 mg; X2 (Methocel K4M): 13,26 mg; X3 (Methocel E15LV) có khả thất bại nhỏ Tiến hành bào chế theo công thức tối ưu, thử hòa tan kết bảng 3.14 hình 3.16 % LNX giải phóng từ viên tối ưu giá trị thực tế dự đoán phần mềm MODDE 12 gần tương đồng (f2 = 84) So với khoảng % LNX giải phóng dự kiến, % dược chất giải phóng thời điểm đáp ứng yêu cầu Bảng 3.14 Công thức tối ưu thiết kế phần mềm MODDE 12.0 % LNX giải phóng Thiết kế cơng thức Lớp nhân GPKD (mg) Lornoxicam Lornoxicam (0,50 - 1,50 µm) 13,26 Natri croscarmellose 14,90 Calci carbonat 6,00 Natrilauryl sulphat 1,00 PVP K30 1,00 Magnesi stearat 200 mg Aerosil Avicel PH 101 vừa đủ % LNX giải phóng Giá trị dự đoán 20 - 40 35,38 45 - 65 61,67 75 - 95 89,38 ≥ 90 100,00 f2 8,00 Methocel K4M Methocel E15LV PVP K30 Magnesi stearat Aerosil Avicel PH 101 vừa đủ Yêu cầu Sau Sau Sau Sau 10 % lor no xic am gi ải ph ón Lớp vỏ GPN (mg) 4,00 12,00 10,88 6,00 25,00 3,00 3,00 600 mg Giá trị thực tế 35,32 ± 0,51 60,98 ± 1,16 90,47 ± 4,99 97,07 ± 3,76 84 100 80 60 40 Công thức tối ưu 20 0 10 11 12 Thời gian (giờ) Hình 3.16 Đồ thị giải phóng LNX từ công thức tối ưu (n = 5) 3.2 Xây dựng quy trình bào chế viên lornoxicam 12 mg giải phóng có kiểm sốt quy mơ 2000 viên Tỷ lệ thành phần công thức viên giữ nguyên theo cơng thức chọn Quy trình bào chế thực theo phương pháp mô tả mục 2.2.1.3 Kết cho thấy, quy trình bào chế viên nén lornoxicam giải phóng có kiểm sốt với thiết bị tương ứng, lựa chọn thông số thiết bị tối ưu giai đoạn để bào chế lô chế phẩm viên nén lornoxicam 12 mg giải phóng có kiểm sốt đạt u cầu chất lượng đề lô bào chế đảm bảo đồng chất lượng % lo rn ox ic a m gi ải p h 100 80 60 40 Lô 20 Lô 10 Thời gian (giờ) Hình 3.18 % lornoxicam giải phóng lô viên nén quy mô 2000 viên 3.3 Thẩm định phương pháp định lượng, nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn sở bước đầu đánh giá độ ổn định viên lornoxicam giải phóng có kiểm sốt 3.3.1 Kết thẩm định phương pháp định lượng 3.3.1.1 Phương pháp quang phổ tử ngoại Kết khảo sát cho thấy: có phụ thuốc tuyến tính mật độ quang nồng độ LNX bước sóng 372 nm dung dịch acid hydrocloric 0,1N pH 1,2 bước sóng 375 nm dung dịch đệm phosphat pH 6,8 khoảng nồng độ khảo sát với hệ số tương quan r ≈ Như vậy, sử dụng phương pháp quang phổ tử ngoại để định lượng LNX từ bột, hạt mẫu viên trình nghiên cứu cơng thức thử độ hịa tan dược chất từ mẫu viên Lô 3.3.1.2 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Kết thẩm định phương pháp định lượng cho thấy phương pháp HPLC xây dựng có khoảng tuyến tính thích hợp, độ đặc hiệu, độ đúng, độ xác cao Do đó, sử dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao với điều kiện để định lượng LNX viên nghiên cứu độ ổn định chế phẩm 3.3.2 Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn sở Các mẫu viên bào chế quy mô mẻ 2000 viên theo phương pháp ghi mục 2.2.1.3 Tiến hành bào chế lô Dựa vào kết kiểm nghiệm tiêu chuẩn chất lượng, đề xuất tiêu chuẩn sở cho viên nghiên cứu Bảng 3.43 Đề xuất tiêu chuẩn chất lượng viên LNX 12 mg giải phóng có kiểm sốt Tính chất Độ đồng hàm lượng Định tính Độ hịa tan Định lượng Viên nén tròn màu vàng nhạt, hai mặt trơn, cạnh thành viên lành lặn Hàm lượng lornoxicam (C13H10ClN3O4S2) viên chứa từ 85,0% - 115,0% so với hàm lượng trung bình viên Chế phẩm phải thể phép thử định tính lornoxicam - Sau mơi trường pH 1,2: Độ hịa tan viên phải từ 25,0% đến 40% lượng lornoxicam (C13H10ClN3O4S2) so với lượng ghi nhãn - Trong môi trường pH 6,8: Độ hòa tan lornoxicam (C13H10ClN3O4S2) viên so với lượng ghi nhãn phải: + Sau giờ: 25,0% - 40,0% + Sau giờ: 45,0% - 65,0% + Sau giờ: 75,0% - 95,0% + Sau 10 giờ: ≥ 90% Hàm lượng lornoxicam (C13H10ClN3O4S2) viên phải đạt từ 90,0% - 110,0%, so với lượng ghi nhãn, tính theo khối lượng trung bình viên 3.3.3 Sơ đánh giá độ ổn định Do hạn chế thời gian, theo dõi độ ổn định điều kiện thường điều kiện lão hóa cấp tốc thời gian tháng Kết cho thấy: điều kiện thường điều kiện lão hóa cấp tốc, mẫu khơng có thay đổi hình thức, độ hòa tan, thay đổi thay đổi hàm lượng mẫu thử nghiệm nằm giới hạn cho phép Các mẫu viên tiếp tục theo dõi, lấy mẫu định lượng điều kiện thực để có kết luận xác độ ổn định viên nghiên cứu 3.5 Bước đầu nghiên cứu sinh khả dụng Kết thẩm định phương pháp định lượng LNX huyết tương UPLC/MS-MS cho thấy phương pháp có giá trị giới hạn định lượng thấp (0,015 µg/ml), khoảng tuyến tính rộng (0,015-1,5 µg/ml), độ cao (94,0% - 103,2%), độ lặp lại với giá trị CV% nhỏ (3,5% - 8,5%), phương pháp xử lý mẫu nhanh, đơn giản thời gian phân tích ngắn (2,2 phút cho mẫu) Phương pháp phân tích ứng dụng nghiên cứu sinh khả dụng tương đương sinh học chế phẩm thuốc chứa lornoxicam Kết định lượng LNX huyết tương chó Tiến hành chó, bố trí uống viên LNX 12 mg KSGP bào chế Nồng độ LNX tron g huy ết tươ ng (µg/ ml) Viên GPKS 12 mg 0 12 16 20 24 Thời gian (giờ) Hình 3.24 Đường cong nồng độ thuốc trung bình theo thời gian huyết tương chó uống viên LNX 12 mg nghiên cứu Nhận xét: Viên nghiên cứu có nồng độ LNX máu cao thời điểm hai giờ, tiếp tục tăng nhẹ thời điểm giờ; kéo dài tới 24 Từ sơ kết luận: thiết kế viên LNX 12 mg KSGP gồm viên nhân GPKD (chứa mg LNX) bao dập lớp bao (chứa 4mg LNX giải phóng nhanh) đạt mục tiêu mà nghiên cứu hướng tới lớp bao GPN hòa tan nhanh, viên nhân GPKD trì nồng độ dược chất máu ổn định thời gian dài CHƯƠNG BÀN LUẬN 4.1 Nghiên cứu cải thiện độ tan lornoxicam Đã tiến hành khảo sát ảnh hưởng biện pháp tới độ tan LNX bao gồm: giảm kích thước tiểu phân dược chất khí nén, thêm tá dược kiềm chất diện hoạt Đây kỹ thuật đơn giản, dễ triển khai sử dụng chất mang dung môi hữu kỹ thuật bào chế hệ phân tán rắn 4.2 Nghiên cứu bào chế viên lornoxicam 12 mg giải phóng có kiểm sốt 4.2.1 Nghiên cứu bào chế lớp bao giải phóng nhanh Bằng kỹ thuật nghiền khí nén, kích thước tiểu phân LNX giảm xuống tới vùng nano Với dược chất tan LNX, tiểu phân LNX kích thước nhỏ, diện tích tiếp xúc với mơi trường sinh học lớn nên độ tan tốc độ hòa tan tăng Việc thêm tá dược kiềm làm tăng hấp thu LNX sau uống tạo lớp khuếch tán có tính kiềm bao quanh tiểu phân LNX đường tiêu hóa, làm tăng độ tan LNX, dược chất có tính acid yếu Biện pháp thích hợp với dược chất giảm đau chống viêm cần tác dụng nhanh, lại tan môi trường pH dày LNX Ngoài ra, sử dụng phối hợp với chất diện hoạt, làm giảm sức căng bề mặt tiếp xúc dược chất với mơi trường hịa tan, giảm lượng tự bề mặt, làm tăng nhanh q trình thấm rã viên, tăng độ tan, tốc độ hòa tan dược chất 4.2.2 Nghiên cứu bào chế viên nhân giải phóng kéo dài LNX có thời gian bán thải ngắn (khoảng - giờ) nên dạng viên nén quy ước định dùng nhiều lần ngày Do đó, để giảm số lần dùng thuốc cho LNX, việc phát triển dạng thuốc GPKD phù hợp Trong kỹ thuật bào chế dạng thuốc GPKD viên nén dạng cốt thân nước sử dụng polyme hydroxypropyl methylcellulose (HPMC) có nhiều ưu điểm an tồn, dễ kiếm, khả kiểm sốt giải phóng tốt Việc kết hợp polyme Methocel K4M có độ nhớt cao với Methocel E15LV độ nhớt thấp giúp cho q trình giải phóng dược chất đạt mục tiêu mong muốn 4.2.3 Bào chế viên lornoxicam giải phóng có kiểm sốt Thiết kế thí nghiệm lựa chọn công thức tối ưu cho viên LNX KSGP sử dụng phần mềm Modde 12.0 Kết thực nghiệm tìm cơng thức tối ưu nhất, tiến hành bào chế lặp lại lần theo công thức tối ưu để khẳng định kết công thức tối ưu, làm sở để nâng cấp quy mô, thu kết khả quan, viên bào chế theo công thức tối ưu có % giải phóng LNX nằm khoảng tiêu chuẩn dự kiến, chứng tỏ kết tối ưu hóa có độ tin cậy cao Thơng qua phân tích mặt đáp ứng, viên GPKS tối ưu xây dựng gồm: lớp bao LNX giải phóng nhanh, đạt khoảng 35,32 ± 0,51% (~ 4,2 mg) sau đầu tạo hiệu giảm đau nhanh viên nhân LNX giải phóng kéo dài (4 giờ: 60,98; giờ: 90,47; 10 giờ: 97,07%) đảm bảo cho việc giảm số lần dùng thuốc ngày Phát triển thành cơng dạng viên KSGP khơng có ý nghĩa với riêng dược chất LNX mà cịn có tiềm ứng dụng với thuốc tan dày cần hấp thu nhanh có thời gian bán thải ngắn 4.3 Quy trình bào chế Khi tiến hành bào chế quy mơ 2000 viên, q trình bào chế tự động, giai đoạn quy trình sử dụng máy Vì vậy, thiết bị trộn, thiết bị nhào ẩm, thiết bị xát hạt thông số trình mức độ phân bố đồng khối bột, tá dược dính, tốc độ thời gian nhào trộn, tốc độ xát hạt ảnh hưởng đến hiệu suất độ bền học viên Trong q trình bào chế cần phải kiểm sốt chặt chẽ thơng số q trình để đảm bảo chất lượng viên đồng viên lô lô với Trong phạm vi luận án này, sử dụng LNX nguyên liệu đắt tiền, khối lượng viên lớn (800 mg/ viên), thiết bị quy mơ phịng thí nghiệm có cơng suất nhỏ Do đó, qui mơ mẻ thực mức 2000 viên 4 Tiêu chuẩn chất lượng sơ đánh giá độ ổn định 4.4.1 Tiêu chuẩn chất lượng Đã đề xuất tiêu chuẩn chất lượng cho viên nhân, hạt bao viên lornoxicam 12 mg kiểm sốt giải phóng bào chế tiêu: hình thức, cảm quan, độ đồng hàm lượng, định lượng, độ hịa tan Các phương pháp có độ xác cao dễ dàng áp dụng với điều kiện thực tế Việt nam 4.4.2 Sơ đánh giá độ ổn định Về độ ổn định LNX chế phẩm bào chế: Nhìn vào cơng thức hóa học thấy LNX dễ bị phân hủy, phản ứng phân hủy là: thủy phân môi trường acid hay kiềm nhiệt; phản ứng oxy hóa khử; phản ứng quang hóa Sản phẩm phân hủy 5'- hydroxylornoxicam hợp chất khác Để tránh phản ứng phân hủy xảy ra, áp dụng biện pháp như: sử dụng tá dược khan, hạn chế ẩm trình bào chế (sản xuất phịng có thiết bị kiểm sốt độ ẩm chọn ngày nắng, sử dụng thiết bị hút ẩm), giai đoạn bào chế tiến hành thiết bị kín Sản phẩm cuối đóng gói vỉ nhơm - nhơm Kết ban đầu cho thấy viên nghiên cứu ổn định sau thời gian tháng Tuy nhiên, để có kết luận xác tuổi thọ thuốc, cần tiếp tục theo dõi thời gian dài 4.5 Đánh giá sinh khả dụng Các kết nghiên cứu in vivo bước đầu cho thấy viên LNX 12 mg KSGP nghiên cứu đạt nồng độ thuốc máu cao sau giờ, tiếp tục tăng sau trì nồng độ máu tương đối ổn định kéo dài tới 24 giờ, đạt mục tiêu mà nghiên cứu hướng tới Điều chứng tỏ đề tài lựa chọn bào chế viên LNX 12 mg KSGP hợp lý KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Kết luận Về xây dựng cơng thức quy trình bào chế - Đã nghiên cứu làm tăng độ hòa tan lornoxicam ba biện pháp: giảm kích thước tiểu phân dược chất khí nén, thêm tá dược kiềm chất diện hoạt, lựa chọn tá dược kiềm chất diện hoạt thích hợp cho lớp bao GPN calci carbonat natri laurylsulfat - Đã bào chế viên LNX 12mg KSGP, gồm viên nhân chứa mg LNX giải phóng kéo dài bao dập lớp bao chứa mg LNX giải phóng nhanh - Đã xây dựng thẩm định quy trình bào chế viên lornoxicam 12 mg kiểm sốt giải phóng quy mơ 2000 viên 2.Về xây dựng tiêu chuẩn theo dõi độ ổn định - Đã đề xuất tiêu chuẩn sở cho viên nén lornoxicam 12mg KSGP gồm tiêu: tính chất, độ đồng hàm lượng, định tính, định lượng, độ hịa tan - Đã theo dõi độ ổn định viên nén lornoxicam 12 mg giải phóng có kiểm sốt hai điều kiện: thực lão hóa cấp tốc Kết cho thấy viên nén bào chế ổn định thời gian nghiên cứu Về đánh giá sinh khả dụng viên lornoxicam 12 mg giải phóng có kiểm sốt - Đã xây dựng thẩm định quy trình định lượng LNX huyết tương chó thí nghiệm sắc ký lỏng hiệu cao với detector khối phổ có độ nhạy cao, đáp ứng đủ yêu cầu phương pháp định lượng dược chất dịch sinh học theo qui định FDA - Đã áp dụng phương pháp định lượng dược chất huyết tương sắc ký lỏng - khối phổ (LC-MS/MS) đánh giá sinh khả dụng chế phẩm nghiên cứu chó Kết cho thấy: viên LNX 12 mg nghiên cứu đạt nồng độ thuốc máu cao sau trì nồng độ máu tương đối ổn định kéo dài tới 24 Đề xuất - Tiếp tục hoàn thiện cơng thức quy trình bào chế viên lornoxicam 12 mg giải phóng có kiểm sốt quy mơ lớn - Tiếp tục theo dõi độ ổn định viên nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng động vật thí nghiệm DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC Đồng Thị Hoàng Yến, Trịnh Thị Vân Anh, Phạm Thành Đạt, Vũ Đình Tuấn, Nguyễn Thạch Tùng, Nguyễn Đăng Hòa (2018), “Nghiên cứu cải thiện độ tan lornoxicam ứng dụng bào chế viên nén giải phóng nhanh”, Nghiên cứu Dược Thông tin thuốc, tập 9, số 2, tr 27-32 Đồng Thị Hoàng Yến, Phạm Thành Đạt, Vũ Đình Tuấn, Nguyễn Thạch Tùng, Nguyễn Đăng Hịa (2018), “Nghiên cứu xây dựng cơng thức viên nén dạng cốt lornoxicam giải phóng kéo dài với tá dược hydroxypropyl methylcellulose”, Tạp chí dược học, tập 58, số 508, tr 15-20 Đồng Thị Hoàng Yến, Phạm Thành Đạt, Vũ Đình Tuấn, Nguyễn Thạch Tùng, Nguyễn Đăng Hịa (2018), “Nghiên cứu bào chế viên nén lornoxicam giải phóng kéo dài kết hợp lớp bao giải phóng nhanh”, Tạp chí dược học, tập 58, số 509, tr 3-7 Đồng Thị Hoàng Yến, Nguyễn Thị Dung, Tạ Mạnh Hùng (2018), “Nghiên cứu định lượng lornoxicam huyết tương phương pháp sắc ký lỏng khối phổ”, Tạp chí dược học, tập 58, số 511, tr 73-77 ... trình bào chế viên LNX 12 mg giải phóng có kiểm sốt quy mơ 2000 viên/ mẻ - Xây dựng tiêu chuẩn sở bước đầu theo dõi độ ổn định viên nghiên cứu - Bước đầu đánh giá sinh khả dụng viên nghiên cứu. .. án 1.3 SINH KHẢ DỤNG Trình bày nội dung: nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng in vitro lornoxicam, quy định đánh giá sinh khả dụng in vivo nghiên cứu sinh khả dụng in vivo chế phẩm chứa lornoxicam. .. trình nghiên cứu nước viên giải phóng có kiểm sốt gồm lớp giải phóng nhanh lớp giải phóng kéo dài cho hoạt chất lornoxicam Trên giới có nghiên cứu tồn diện viên lornoxicam giải phóng có kiểm sốt