Bộ YTÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI II ''''''''0 & HOCo£ NGUYỄN TÀI SỨC TRIẼN KHAI MÔ HÍNH THỰC NGHIỆM GÂY UNG THƯ NÃO TRÊN CHUỘT SUY GIẢM MIỄN DỊCH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC sĩ HÀ NỘI 2023 BỘYTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌ[.]
Bộ YTÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI II - HOCo£ '0 & NGUYỄN TÀI SỨC TRIẼN KHAI MƠ HÍNH THỰC NGHIỆM GÂY UNG THƯ NÃO TRÊN CHUỘT SUY GIẢM MIỄN DỊCH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC sĩ HÀ NỘI - 2023 BỘYTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI rà® - rà® NGUYỀN TÀI SỨC MÃ SINH VIÊN: 1801608 TRIỂN KHAI MƠ HÌNH THựC NGHIỆM GÂY UNG THƯ NÃO TRÊN CHUỘT SUY GIẢM MIỄN DỊCH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC sĩ Người hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Thị Lập TS BS BÙI Khắc Cường Nơi thực hiện: Trung tâm Nghiên cứu động vật thực nghiệm Học viện Quân y Trường Đại học Dược Hà Nội • • HÀ NỘI - 2023 • • LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Thị Lập, Bộ mơn Hóa sinh, Trường Đại học Dược Hà Nội, nhận hướng dẫn tơi tạo điều kiện tốt cho tơi hồn thành khóa luận Đặc biệt, tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến TS.BS Bùi Khắc Cường, Phó giám đốc Trung tâm nghiên cứu động vật thực nghiệm, Học viện Quân y, nhận hướng dẫn tạo điều kiện tốt cho tơi hồn thành khóa luận Kế đến, tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến anh chị làm việc Trung tâm Nghiên cứu động vật thực nghiệm, Học viện Quân y Khoa Giải phẫu bệnh-Pháp y, Bệnh viện Quân y 103 hướng dẫn tận tình tạo điều kiện tốt cho khoảng thời gian làm thực nghiệm Nhân đây, xin gửi lời cảm ơn đến Ban Giám hiệu toàn thầy cô Trường Đại học Dược Hà Nội đà giảng dạy tận tình tạo điều kiện khoảng thời gian học tập trường để tơi có tảng kiến thức để hồn thành khóa luận hành nghề sau Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến gia đình bạn bè tơi động viên, chia sẻ, ủng hộ chỗ dựa tinh thần vững đường nghiên cứu khoa học Do thời gian làm thực nghiệm có giới hạn kiến thức thân cịn hạn chế, nên khóa luận khơng tránh khói nhiều thiếu sót Tơi mong nhận góp ý thầy cơ, bạn bè đê khóa luận hồn thiện Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 05 tháng 06 năm 2023 Sinh viên Nguyễn Tài Sức MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẤT, KỶ HIẸU DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VÊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TÔNG QƯAN 1.1 Tổng quan u nguyên bào thần kinh đệm ác tính, ung thu đại trực tràng ung thư đại trực tràng di não 1.1.1 Đặc điểm dịch tễ 1.1.2 Các yếu tố nguy 1.1.3 Cơ chế bệnh sinh ung thư 1.2 Tổng quan mơ hình u não chuột 10 1.2.1 Mơ hình đồng ghép 11 1.2.2 Mơ hình động vặt biến đổi gen 12 1.2.3 Mơ hình dựa dòng tế bào ung thư người 12 1.2.4 Mơ hình dựa mẫu bệnh phẩm bệnh nhân 13 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CƯU 14 2.1 Đối tượng nghiên cứu 14 2.1.1 Động vật dùng nghiên cứu 14 2.1.2 Dòng tế bào dùng nghiên cứu 14 2.2 Nguyên liệu trang thiết bị dùng nghiên cứu 14 2.2.1 Trang thiết bị, dụng cụ dùng nghiên cứu 14 2.2.2 Hoá chất dùng nghiên cứu 15 2.3 Phương pháp nghiên cứu 16 2.3.1 Nuôi cấy tăng sinh dòng tế bào ung thư HCT116 Ư87MG 16 2.3.2 Tạo mơ hình u não chuột 17 2.3.3 Xử lý số liệu 20 2.3.4 Địa điềm nghiên cứu 20 2.3.5 Sơ đồ nghiên cứu 21 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỦƯ 22 3.1 Kết ni cấy tăng sinh dịng tế bào HCT116 u87MG 22 3.2 Kết sau ghép dòng tế bào HCT116 U87MG vào não chuột C57BL/6 BALB/c gây suy giảm miễn dịch chiếu xạ 22 3.2.1 Kết mơ hình ghép dịng tế bào ung thư đại trực tràng người HCT116 vào não chuột nhắt chủng C57BL/6 22 3.2.2 Kết mơ hình ghép dịng tế bào ung thư đại trực tràng người HCT116 vào não chuột nhắt chủng BALB/c 26 3.2.3 Kết mơ hình ghép dịng tế bào u nguyên bào thần kinh đệm U87MG vào não chuột nhắt chủng BALB/c 29 CHƯƠNG BÀN LUẬN 34 4.1 lựa chọn mơ hình nghiên cứu 34 4.2 kết mơ hình nghiên cứu 36 4.2.1 Q trình ni cấy dịng tế bào ung thư đại trực tràng HCT116 dòng tế bào u nguyên bào thần kinh đệm Ư87MG in vitro 36 4.2.2 Mơ hình ghép dịng tế bào ung thư HCT116 não chuột chủng C57BL/6 .36 4.2.3 Mơ hình ghép dịng tế bào ung thư HCT116 não chuột chủng BALB/C 37 4.2.4 Mơ hình ghép dòng tế bào ung thư Ư87MG não chuột chủng BALB/c .38 KẾT LUẬN 41 TÃI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT, KÝ HIỆU Viết đầy đủ theo tiếng Việt Chữ viết tắt Viết đầy đủ theo tiếng Anh Protein liên kết yếu tố khởi Eukaryotic translation initiation động dịch mã 4E sinh vật factor 4E-binding protein nhân chuân 4EBP1 Enzym protein kinase B AKT Protein kinase B Protein ức chế đa polyp tuyến APC Adenomatous polyposis coli Bộ sưu tập chủng giống Hoa American Type Culture Collection Kỳ ATCC Protein liên quan đến tự thực Autophagy Related 13 bào 13 Atgl3 Yếu tố tăng trưởng nguyên bFGF Basic fibroblast growth factor bào sợi The Central Brain Tumor Registry of Cơ quan đăng ký khối u CBTRƯS the United States trung ương Hoa Kỳ Kinase phụ thuộc cyclin CDK Cyclin-dependent kinase Ưng thư đại trực tràng CRC Colorectal cancer Môi trường DMEM nuôi cấy DMEM Dulbecco's Modified Eagle Medium tế bào Acid deoxyribonucleic DNA Deoxyribonucleic acid Yếu tố tăng trưởng biểu bì EGF Epidermal growth factor Hội chứng đa polyp gia đình FAP Familial adenomatous polyposis Huyết bào thai bị FBS Fetal bovine serum Formalin fixing and paraffine Cố định formalin vùi FFPE embedding paraffin Ư nguyên bào thần kinh đệm GBM Glioblastoma multiforme ác tính Guanosine diphosphat GDP Guanosine diphosphate Protein liên kết thụ thể yếu Growth factor receptor-bound Grb2 protein tố tăng trưởng Guanosine triphosphat GTP Guanosine triphosphate Hematoxylin Eosin H&E Hematoxylin and Eosin Yếu tố cảm ứng tình trạng thiếu oxy-1/2 HIF1/2 Hypoxia-Inducible Factor-1/2 Enzym isocitrate IDH Isocitrate dehydrogenase dehydrogenase Phạm vi tứ phân vị IQR Interquartile range Protein thuộc họ RAS KRAS Kirsten rat sarcoma virus Protein kinase • kích MAPK ERK Mitogen-activated protein kinase hoạt mitogen MEK1/2 MLH1 MSH2 mTOR mTORC /2 PBS PDGF PDGFR PDK1/2 PI3K PIP2 PIP3 PKC PPARy PTEN RAF RAS Rb Rheb RTK SD SH2 SH3 Sos Mitogen-activated protein kinase kinase-1/2 MutL protein homolog MutS homolog Protein kinase hoạt hóa MAPK-1/2 Protein tương dong MutL Chất tương đồng MutS Đích rapamycin động Mammalian target of rapamycin vật • có vú Phức họp đích Mammalian target of rapamycin rapamycin động vật có vúcomplex-1/2 1/2 Nước muối sinh lý đệm phosphate buffered saline phosphat Yếu tố tăng trưởng có nguồn Platelet-derived growth factor gốc từ tiểu cầu Thụ thể yếu tố tăng trưởng Platelet-derived growth factor receptor có nguồn gốc từ tiêu cầu Phosphoinositide-dependent protein Protein kinase phụ thuộc vào kinase-1/2 phosphoinositide - 1/2 Phosphatidylinositol-4,5Enzym phosphatidylinositolbisphosphate 3-kinase 4,5-bisphosphat 3-kinase Phosphatidylinositol 4,5Phosphatidylinositol 4,5bisphosphate bisphosphat Phosphatidylinositol-3, 4, 5Phosphatidylinositol-3, 4, 5triphosphate triphosphat Enzym protein kinase c Protein kinase c Thụ thể kích hoạt Peroxisome proliferator-activated chất tăng sinh peroxisome receptor-gamma gamma Phosphatase chắt tương Phosphatase and tensin homolog đồng tensin Một loại protein kinase hoạt Rapidly accelerated fibrosarcoma hóa MEK Một họ protein GTPase gây Rat sarcoma virus ung thư Protein u nguyên bào võng Retinoblastoma protein mạc Chất tương đồng Ras Ras homolog enriched in brain làm giàu não Receptor tyrosine kinase _ Thụ the tyrosine kinase Độ lệch chuẩn Standard deviation Src Homology Src Homology Một yếu tố trao đổi guanin nucleotide điều hòa hoạt Son of Sevenless ii STAT3 Sterol regulatory element-binding transcription factor Signal transducer and activator of transcription TERT Telomerase reverse transcriptase TGF-a TSC1/2 uPAR Transforming growth factor alpha Tuberous sclerosis complex-1/2 Urokinase-type plasminogen activator receptor VEGF WHO Vascular endothelial growth factor World Health Organization SREBP1 ili động họ protein RAS Yeu to phien ma lien ket yeu tố điều hịa sterol Chất truyền tín hiệu kích hoạt phiên mã Enzyme phiên mã ngược telomerase Yếu tố tăng trưởng biến đổialpha Phức họp xơ cứng củ-1 /2 Thụ thể bề mặt hoạt hóa plasminogen urokinase _ Yeu tồ tăng trưởng nội mô mạch máu Tổ chức Y tế Thế giới DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Kết phát triển khối u não nhóm chuột C57BL/6 đối chứng, ghép dịng tế bao HCT116 23 Bảng Kết phát triển khối u não nhóm chuột C57BL/6 chiếu xạ, ghép dòng tế bào HCT116 724 Bảng 3 Thể tích khối u nhóm chuột C57BL/6 đối chứng chiếu xạ, ghép dòng tế bào HCT116 25 Bảng Kết phát triển u não chuột BALB/c đối chứng, ghép dòng tế bào HCT116 26 Bảng Kết phát trien u não chuột BALB/c chiếu xạ, ghép dòng tế bào HCT116 27 Bảng Thê tích khối u nhóm chuột BALB/c đối chứng chiếu xạ, ghép dịng tế baoHCTlló ’ 28 Bảng Kết phát triển u não chuột BALB/c đối chứng, ghép dòng tế bào U87MG 30 Bảng Kết phát triển u não chuột BALB/c chiếu xạ, ghép dòng tế bào U87MG 31 Bảng Thê tích khối u nhóm chuột BALB/c đối chứng chiếu xạ, ghép dòng tế bao Ư87MG 32 iv DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình 1.1 Biểu đồ biểu diễn tỷ lệ mắc GBM (theo định nghĩa cũ WHO) (màu xanh) tỷ lệ mắc năm (màu cam) theo nhóm tuổi năm từ 2014-2018 Hình Con đường RAS/RAF/MAPK, đường PI3K7AKT/mTOR đường pl6/Rb co chế bệnh sinh GBM Hình Ví dụ minh họa chế bệnh sinh dẫn tới ung thư đại trực tràng người 10 Hình Chuột nhắt chủng C57BL/6 chuột nhắt trắng chủng BALB/c ni chăm sóc Trung tâm nghiên cứu động vật thí nghiệm, Học viện Quân y 14 Hình 2 Một số dụng cụ dùng trình ghép tế bào ung thư vào nãochuột 19 Hình 3.1 Hình ảnh tế bào HCT116 quan sát kính hiển vi quang học 22 Hình Hình ảnh tế bào Ư87MG quan sát kính hiển vi quang học 22 Hình 3 Biểu đồ so sánh kích thước khối u não chuột C57BL/6 ghépdịng tế bào HCT116 nhóm đối chứng nhóm chiếu xạ 25 Hình Biếu đồ so sánh kích thuớc khối u nhóm đối chứng nhóm chiếu xạ chuột BALB/c ghép dòng tế bào HCT116 .29 Hình 3.5 Biếu đồ thay đối số cân nặng trung bình nhóm đối chứng nhóm chiếu xạ chuột BALB/c ghép dòng tế bào HCT116 thời gian theo dõi 29 Hình Biểu đồ so sánh kích thước khối u nhóm đối chứng nhóm chiếu xạ chuột BALB/c ghép dịng tế bào Ư87MG 33 Hình Biểu đồ thể thay đổi số cân nặng trung bình nhóm đối chứng nhóm chiếu xạ chuột BALB/c ghép dòng tế bào U87MG thời gian theo dõi 33 V