Mục tiêu của đề tài Triển khai mô hình gây sa sút trí nhớ thực nghiệm bằng trimethyltin là thăm dò được khả năng gây sa sút trí nhớ bằng trimethyltin trên chuột nhắt trắng theo liều và thời gian đánh giá thử nghiệm hành vi; triển khai được mô hình gây sa sút trí nhớ bằng trimethyltin, áp dụng đánh giá tác dụng với thuốc đối chứng donepezil.
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC ====== ====== NGUYỄN PHƯƠNG THANH TRIỂN KHAI MÔ HÌNH GÂY s SA SÚT TRÍ NHỚ THỰC NGHIỆM BẰNG TRIMETHYLTIN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI – 2022 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC NGUYỄN PHƯƠNG THANH TRIỂN KHAI MƠ HÌNH GÂY SA SÚT TRÍ NHỚ THỰC NGHIỆM BẰNG TRIMETHYLTIN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa: QH 2017.Y Người hướng dẫn: NCS.ThS ĐẶNG KIM THU PGS TS BÙI THANH TÙNG HÀ NỘI – 2022 HÀ NỘI - 2022 LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình thực khóa luận tốt nghiệp này, tơi nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ động viên q báu từ thầy cơ, gia đình bạn bè Bằng tất kính trọng tình cảm chân thành nhất, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới NCS ThS Đặng Kim Thu, PGS.TS Bùi Thanh Tùng – Bộ môn Dược lý, Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, người thầy hết lịng quan tâm giúp đỡ, tận tình bảo, trực tiếp hướng dẫn cho lời khun bổ ích từ ngày đầu làm khóa luận Xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới toàn thể thầy cô Bộ môn Dược lý Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ q trình học tập, nghiên cứu để hồn thành khóa luận tốt nghiệp Tôi xin trân trọng lời cảm ơn Ban Giám hiệu tất quý Thầy cô Trường Đại học Y Dược dạy dỗ, trang bị kiến thức, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt q trình học tập thực khóa luận Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới bố mẹ, gia đình, bạn bè người thân tôi, người theo sát động viên, quan tâm giúp đỡ vượt qua khó khăn suốt thời gian học tập, nghiên cứu sống Do kiến thức hạn hẹp, thời gian nghiên cứu thực không dài nên Khố luận khơng tránh khỏi thiếu sót Tơi mong nhận lời nhận xét, góp ý Q thầy để Khố luận tốt nghiệp Dược sĩ hồn thiện Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 20 tháng 06 năm 2022 Sinh viên Nguyễn Phương Thanh DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tên tiếng việt Tên tiếng anh A𝛽 Mảng beta amyloid AChE Enzym Acetylcholinesterase AD Bệnh Alzheimer Alzheimer’s disease APP Protein tiền thân amyloid Amyloid Precursor Protein BDNF Yếu tố dinh dưỡng thần kinh có Brain-derived neurotrophic nguồn gốc từ não factor Amyloid beta BuChE Enzym Butyrylcholinesterase ChAT Choline acetyltransferase DLB Sa sút trí nhớ thể Lewy DPZ Donepezil FDA Cục quản lý Thực phẩm Dược Food and Drug phẩm Hoa Kỳ Administration HDF Chế độ ăn giàu chất béo High fat diet NMDA Thụ thể N – Methyl – D - Asparta SAM Chuột tăng tốc độ lão hóa SAMP Chuột tăng tốc độ lão hóa nhạy cảm SCP Scopolamin SD Sai số chuẩn Standard Deviation SSTN Sa sút trí nhớ Dementia STZ Streptozotocin Streptozotocine TMT Trimethyltin Trimethyltine WHO Tổ chức Y tế Thế giới World Health Organization Dementia with Lewy bodies DANH MỤC HÌNH ẢNH, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Cơ chế bệnh sinh theo giả thuyết stress oxy hóa .6 Hình 1.2 Cơ chế tác dụng thuốc ức chế AChE Hình 2.1 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 17 Hình 2.2 Quy trình đánh giá khả gây suy giảm trí nhớ trimethyltin thử nghiệm hành vi .20 Hình 2.3 Quy trình triển khai mơ hình gây sa sút trí nhớ trimethyltin với thuốc đối chứng donepezil 21 Hình 2.4 Dụng cụ thử nghiệm mê lộ chữ Y 22 Hình 2.5 Dụng cụ thử nghiệm mê lộ nước Morris 23 Hình 2.6 Hình ảnh chuột sau truyền đẩy máu tuần hoàn não chuột sau thu lấy để nhuộm .25 Hình 3.1 Ảnh hưởng trimethyltin tới thời gian tìm thấy bến đỗ .30 Hình 3.2 Ảnh hưởng donepezil thử nghiệm mê lộ chữ Y 33 Hình 3.3 Ảnh hưởng donepezil tới thời gian tìm thấy bến đỗ thử nghiệm mê lộ nước Morris 34 Hình 3.4 Ảnh hưởng donepezil đến thời gian lưu góc phần tư có bến đỗ thử nghiệm mê lộ nước Morris 35 Hình 3.5 Hình ảnh nhuộm tế bào mô não chuột vùng hồi hải mã 36 Hình 3.6 Ảnh hưởng donepezil tới tế bào thần kinh vùng hồi hải mã 37 DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 3.1 Ảnh hưởng liều trimethyltin tiêm phúc mạc đến chuột nhắt trắng 26 Bảng 3.2 Ảnh hưởng trimethyltin thử nghiệm mê lộ chữ Y 27 Bảng 3.3 Ảnh hưởng trimethyltin tới thời gian tìm thấy bến đỗ 29 Bảng 3.4 Ảnh hưởng trimethyltin tới thời gian lưu góc phần tư có bến đỗ 32 Bảng 3.5 Ảnh hưởng trimethyltin donepezil tới thời gian tìm thấy bến đỗ thử nghiệm mê lộ nước Morris 34 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC HÌNH ẢNH, ĐỒ THỊ DANH MỤC BẢNG BIỂU MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG I TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan bệnh học 1.1.1 Khái niệm 1.1.2 Dịch tễ học 1.1.3 Các thể sa sút trí nhớ giả thuyết chế bệnh sinh 1.2 Các thuốc điều trị sa sút trí nhớ 1.2.1 Thuốc ức chế enzym acetylcholinesterase (AChE) 1.2.2 Thuốc ức chế thụ thể N-methyl-D-aspartate (NMDA) 1.2.3 Thuốc phối hợp 1.2.4 Thuốc kháng thể đơn dòng nhằm vào amyloid beta 1.3 Các mơ hình gây sa sút trí nhớ động vật thí nghiệm 1.3.1 Các tiêu chí đánh giá mơ hình sa sút trí nhớ 10 1.3.2 Mơ hình tự phát 10 1.3.3 Mơ hình sử dụng tác nhân hóa học 11 1.3.4 Mô hình động vật chuyển gen 13 1.3.5 Mơ hình sa sút trí nhớ chế độ ăn giàu chất béo (HDF) 13 1.3.6 Các mơ hình khác 13 1.4 Các thử nghiệm hành vi đánh giá mô hình động vật thí nghiệm 13 1.4.1 Đánh giá trí nhớ nhận diện 14 1.4.2 Đánh giá trí nhớ không gian 14 1.4.3 Đánh giá trí nhớ cảm xúc 15 CHƯƠNG II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Đối tượng nghiên cứu 16 2.1.1 Hóa chất, dụng cụ thiết bị 16 2.1.2 Động vật nghiên cứu 16 2.1.3 Chuẩn bị hoá hoá chất gây sa sút trí nhớ 17 2.2 Nội dung nghiên cứu 17 2.3 Điều kiện tiến hành thí nghiệm 18 2.4 Phương pháp nghiên cứu 18 2.4.1 Thử nghiệm thăm dò liều gây độc trimethyltin chuột nhắt trắng 18 2.4.2 Thử nghiệm thăm dị khả gây sa sút trí nhớ trimethyltin theo thời gian 18 2.4.3 Triển khai mơ hình gây sa sút trí nhớ trimethyltin với thuốc đối chứng donepezil 21 2.4.4 Phương pháp tiến hành thử nghiệm hành vi 22 2.4.5 Phương pháp xử lý số liệu 25 CHƯƠNG III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 26 3.1 Kết thăm dị khả gây sa sút trí nhớ thực nghiệm trimethyltin liều thời gian đánh giá thử nghiệm hành vi 26 3.1.1 Kết thăm dò liều trimethyltin gây độc chuột nhắt trắng 26 3.1.2 Kết lựa chọn thời gian tiến hành thử nghiệm hành vi sau tiêm trimethyltin 26 3.2 Kết đánh giá tác dụng thuốc đối chứng donepezil mơ hình gây sa sút trí nhớ trimethyltin 33 3.2.1 Tác dụng donepezil tới thử hành vi chuột bị sa sút trí nhớ trimethyltin 33 3.2.2 Ảnh hưởng donepezil tới số lượng tế bào thần kinh vùng hồi hải mã 36 CHƯƠNG IV BÀN LUẬN 38 4.1 Về kết thăm dò khả gây sa sút trí nhớ thực nghiệm trimethyltin liều thời gian đánh giá thử nghiệm hành vi 38 4.1.1 Về thăm dò liều gây sa sút trí nhớ trimethyltin động vật 39 4.1.2 Về thăm dò khả gây sa sút trí nhớ trimethyltin động vật thực nghiệm theo thời gian 40 4.2 Về kết triển khai mô hình gây sa sút trí nhớ trimethyltin áp dụng với thuốc chứng donepezil 41 CHƯƠNG V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 43 5.1 Kết luận 43 5.2 Đề xuất 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO ĐẶT VẤN ĐỀ Theo Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), sa sút trí nhớ nguyên nhân tàn tật tử vong hàng đầu người cao tuổi giới Hiện nay, có khoảng 55,2 triệu người mắc hội chứng sa sút trí nhớ giới, số 60% tập trung nước có thu nhập thấp trung bình, số dự kiến tăng tới khoảng 78 triệu vào năm 2030 139 triệu vào năm 2050 [1] Các nước thuộc khu vực Đơng Á, Châu Phi có số lượng người mắc sa sút trí nhớ nhiều nhất, khoảng 9,8 triệu người, tiếp sau nước thuộc khu vực Tây Âu với 7,4 triệu người [2] Tỉ lệ ước tính dân số từ 60 tuổi trở lên mắc hội chứng sa sút trí nhớ – 8% Hiện nay, hội chứng có xu hướng trẻ hoá với tỉ lệ mắc người 60 tuổi 9% Mặc dù tỷ lệ mắc tăng nhanh tác động ngày lớn đến sức khỏe cộng đồng nguyên nhân chế bệnh sinh liên quan đến sa sút trí nhớ chưa xác định rõ ràng Điều trị sa sút trí nhớ gặp phải nhiều khó khăn như: chi phí điều trị cho bệnh nhân lớn, thời gian điều trị kéo dài, đối tượng điều trị chủ yếu người già người thường có nhiều bệnh lý mắc kèm Trong đó, Cục quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa Kỳ (FDA) phê duyệt 05 thuốc sử dụng để điều trị triệu chứng rối loạn nhận thức, có thuốc sử dụng lâm sàng từ trước donepezil, rivastigmin, galantamin, memantin 01 thuốc phê duyệt vào tháng 06/2021 tháng aducanumab, đặt nhiều nghi vấn nhà khoa học giới [3] Thực tế đặt yêu cầu phải tiếp tục nghiên cứu làm sáng tỏ chế bệnh sinh sa sút trí nhớ, từ tìm đích tác dụng tiềm thuốc chống sa sút trí nhớ Để phục vụ cho hướng nghiên cứu này, cần xây dựng mơ hình thực nghiệm tin cậy, có tính tương đồng với đặc điểm bệnh học người Trimethyltin chất có độc tính cao thần kinh, độc tính tổn thương tế bào thần kinh, có tác động lên hệ thống Glutamat GABAnergic [4] Nhiễm độc trimethyltin dẫn đến suy giảm chức thần kinh, hành vi nhận thức người động vật [5] Vì vậy, gây sa sút trí nhớ trimethyltin mơ hình có giá trị sử dụng phổ biến nhờ mô tốt nguyên nhân triệu chứng hội chứng sa sút sa sút trí nhớ lâm sàng Tuy nhiên, khơng có quy trình gây sa sút trí nhớ thống có khác biệt điều kiện thực nghiệm phịng thí nghiệm liều trimethyltin thời gian đánh giá tác dụng, kết nghiên cứu từ nhóm tác giả khác có mâu thuẫn Do đó, nhằm xây dựng mơ hình có giá trị nghiên cứu chế bệnh sinh sa sút trí nhớ có khả áp dụng để đánh giá tác dụng chống sa sút trí nhớ thuốc phịng thí nghiệm Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, chúng tơi tiến hành đề tài: “Triển khai mơ hình gây sa sút trí nhớ thực nghiệm trimethyltin” với mục tiêu: Mục tiêu 1: Thăm dò khả gây sa sút trí nhớ trimethyltin chuột nhắt trắng theo liều thời gian đánh giá thử nghiệm hành vi Mục tiêu 2: Triển khai mơ hình gây sa sút trí nhớ trimethyltin, áp dụng đánh giá tác dụng với thuốc đối chứng donepezil ... độc trimethyltin chuột nhắt trắng 18 2.4.2 Thử nghiệm thăm dò khả gây sa sút trí nhớ trimethyltin theo thời gian 18 2.4.3 Triển khai mô hình gây sa sút trí nhớ trimethyltin. .. tài: ? ?Triển khai mơ hình gây sa sút trí nhớ thực nghiệm trimethyltin? ?? với mục tiêu: Mục tiêu 1: Thăm dị khả gây sa sút trí nhớ trimethyltin chuột nhắt trắng theo liều thời gian đánh giá thử nghiệm. .. vật 39 4.1.2 Về thăm dị khả gây sa sút trí nhớ trimethyltin động vật thực nghiệm theo thời gian 40 4.2 Về kết triển khai mơ hình gây sa sút trí nhớ trimethyltin áp dụng với thuốc