Đánh giá tác dụng trên mô hình gây sa sút trí nhớ thực nghiệm của hỗn hợp cao đinh lăng bạch quả

BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN CAO QUỲNH ANH ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG TRÊN MƠ HÌNH GÂY SA SÚT TRÍ NHỚ THỰC NGHIỆM CỦA HỖN HỢP CAO ĐINH LĂNG - BẠCH QUẢ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI – 2020 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN CAO QUỲNH ANH MSV: 1501014 ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG TRÊN MƠ HÌNH GÂY SA SÚT TRÍ NHỚ THỰC NGHIỆM CỦA HỖN HỢP CAO ĐINH LĂNG - BẠCH QUẢ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn PGS TS Đào Thị Vui ThS Trần Hồng Linh Nơi thực hiện: Bộ môn Dƣợc Lực, trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội Khoa Dƣợc Lý – Sinh Hóa, Viện Dƣợc Liệu HÀ NỘI – 2020 LỜI CẢM ƠN Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn đến PGS.TS Đào Thị Vui, ngƣời tận tình hƣớng dẫn, định hƣớng, giúp đỡ đƣa nhiều lời khuyên quý báu để thực tốt đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới ThS Trần Hồng Linh, TS Phạm Thị Nguyệt Hằng ngƣời cô trực tiếp bảo theo sát trình làm đề tài Sự tận tâm, hết lịng nghiên cứu khoa học thầy cô gƣơng sáng động lực lớn lao cho tơi hồn thành nghiên cứu nhƣ học tập Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới tồn anh chị kỹ thuật viên môn Dƣợc Lực - Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội nhƣ anh chị khoa Dƣợc lý – Sinh hóa, Viện Dƣợc Liệu quan tâm, hỗ trợ tơi nhiều suốt q trình nghiên cứu hồn thiện khóa luận Cuối tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến chị Bùi Thị Thắm – học viên cao học khóa 23 với gia đình, bạn bè đồng hành, động viên, chia sẻ với tơi suốt q trình học tập nghiên cứu dƣới mái trƣờng Dƣợc thân yêu Hà Nội, ngày 22 tháng năm 2020 Nguyễn Cao Quỳnh Anh MỤC LỤC DANH MỤC KÍ HIỆU CHỮ VIẾT TẮT -DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ - CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Đại cƣơng sa sút trí tuệ - 1.1.1 Định nghĩa - 1.1.2 Dịch tễ học 1.2 Các thể sa sút trí tuệ chế bệnh sinh liên quan 1.2.1 Sa sút trí tuệ bệnh Alzheimer 1.2.2 Sa sút trí tuệ bệnh mạch máu (Vascular Dementia - VaD) 1.2.3 Các thể sa sút trí tuệ khác - 1.3 Các mơ hình gây suy giảm trí nhớ thực nghiệm động vật thí nghiệm - 1.3.1 Mô hình gây suy giảm trí nhớ liên quan đến giả thuyết cholinergic 1.3.2 Mơ hình gây suy giảm trí nhớ liên quan đến giả thuyết β - amyloid protein Tau - 1.3.3 Mơ hình gây suy giảm trí nhớ liên quan đến giả thuyết stress oxy hóa - 1.3.4 Mơ hình gây suy giảm trí nhớ thiếu máu não cục 1.3.5 Một số mơ hình gây suy giảm trí nhớ khác - 10 1.4 Các test đánh giá hành vi động vật thực nghiệm đƣợc gây mơ hình suy giảm trí nhớ - 11 1.4.1 Test né tránh thụ động (Passive avoidance test – PAT) 11 1.4.2 Test mê lộ chữ Y (Y-maze test) - 12 1.4.3 Test mê lộ nước Moris (Moris water maze) 12 1.4.4 Test nhận diện đồ vật (Object Recognization Test – ORT) 13 1.5 Tổng quan dƣợc liệu - 13 1.5.1 Đinh Lăng 13 1.5.2 Bạch Quả - 14 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Đối tƣợng, nguyên liệu nghiên cứu - 16 2.1.1 Nguyên liệu - 16 2.1.2 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu 16 2.1.3 Động vật thí nghiệm - 16 2.2 Hóa chất, dụng cụ, thiết bị 16 2.2.1 Trang thiết bị dụng cụ - 16 2.2.2 Hóa chất 17 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu - 17 2.3.1 Phương pháp đánh giá tác dụng hỗn hợp cao Đinh lăng- Bạch mơ hình gây suy giảm trí nhớ thiếu máu não cục tạm thời - 17 2.3.2 Phương pháp đánh giá tác dụng hỗn hợp cao Đinh lăng- Bạch mơ hình gây suy giảm trí nhớ scopolamin - 22 2.4 Xử lý số liệu 27 CHƢƠNG KẾT QUẢ - 28 3.1 Đánh giá tác dụng hỗn hợp cao Đinh lăng - Bạch chuột gây suy giảm trí nhớ thiếu máu não cục tạm thời - 28 3.1.1 Kết test mê lộ chữ Y 28 3.1.2 Kết test nhận diện đồ vật 29 3.2 Đánh giá tác dụng hỗn hợp cao Đinh lăng - Bạch chuột gây suy giảm trí nhớ scopolamin 33 3.2.1 Kết test né tránh thụ động - 33 3.2.2 Kết test mê lộ chữ Y 34 3.2.3 Kết định lượng hoạt độ enzyme AChE mô não chuột 35 3.2.4 Kết định lượng hàm lượng MDA mô não chuột 37 CHƢƠNG BÀN LUẬN - 39 4.1 Về việc lựa chọn mơ hình thực nghiệm để đánh giá tác dụng hỗn hợp cao Đinh lăng – Bạch - 39 4.1.1 Về việc lựa chọn mơ hình gây suy giảm trí nhớ thiếu máu não cục tạm thời 39 4.1.2 Về việc lựa chọn mơ hình gây suy giảm trí nhớ scopolamin 40 4.2 Về tác dụng hỗn hợp cao Đinh lăng – Bạch test hành vi mơ hình gây suy giảm trí nhớ thiếu máu não cục tạm thời - 41 4.3 Về tác dụng hỗn hợp cao Đinh Lăng – Bạch Quả mô hình gây suy giảm trí nhớ scopolamin 43 4.3.1 Về tác dụng cải thiện trí nhớ hỗn hợp cao Đinh lăng – Bạch test hành vi 43 4.3.2 Về khả ức chế enzyme acetylcholinesterase hỗn hợp cao Đinh Lăng – Bạch - 45 4.3.3 Về tác dụng ức chế peroxy hóa lipid tế bào não chuột hỗn hợp cao Đinh lăng – Bạch - 46 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ - 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO -PHỤ LỤC 1: TIÊU CHUẨN CAO KHÔ LÁ BẠCH QUẢ - DƢỢC ĐIỂN TRUNG QUỐC CP 2015 -PHỤ LỤC 2: TIÊU CHUẨN CAO KHÔ RỄ ĐINH LĂNG - DANH MỤC KÍ HIỆU CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt 2VO 4VO Aβ Ach AChE APP APoE ATC DTNB Tên viết đầy đủ vessel occlusion (thắt hai động mạch cảnh chung) vessel occlusion (thắt bốn động mạch) β amyloid Acetylcholin Acetylcholinesterase Amyloid precursor protein (protein tiền chất amyloid ) Apolipoprotein E Acetylthiocholin Acid 5,5'-dithiobis-(2-nitrobenzoic) ĐLBQ Hỗn hợp cao Đinh lăng – Bạch EGb761 Dịch chiết bạch đƣợc tiêu chuẩn hóa MDA Malonyl dialdehyd NMDA N-methyl-D-aspartat ORT Object recognition test (thử nghiệm nhận diện đồ vật) SOD Superoxide dismutase SSTT Sa sút trí tuệ T2VO Transient vessel occlusion (thắt hai động mạch cảnh chung tạm thời) TBA Acid thiobarbituric TMP 1,1,3,3 – tetramethoxypropan VaD Vascular dementia (sa sút trí tuệ thể mạch máu) WHO World Health Organization (Tổ chức Y tế giới) DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU Bảng 3.1 Ảnh hƣởng hỗn hợp cao Đinh Lăng – Bạch Quả đến tỷ lệ thời gian khám phá cánh động vật thí nghiệm test mê lộ chữ Y 28 Bảng 3.2 Ảnh hƣởng hỗn hợp cao Đinh lăng – Bạch đến thời gian khám phá vật thể động vật thí nghiệm giai đoạn mẫu test nhận diện đồ vật 30 Bảng 3.3 Ảnh hƣởng hỗn hợp cao Đinh lăng – Bạch đến thời gian khám phá vật thể động vật thí nghiệm giai đoạn kiểm tra test nhận diện đồ vật 31 Bảng 3.4 Ảnh hƣởng hỗn hợp cao Đinh lăng – Bạch đến thời gian tiềm tàng vào buồng tối động vật thí nghiệm test né tránh thụ động 33 Bảng 3.5 Ảnh hƣởng hỗn hợp cao Đinh lăng – Bạch đến tỷ lệ chuyển tiếp cánh tay động vật thí nghiệm test mê lộ chữ Y 34 Bảng 3.6 Ảnh hƣởng hỗn hợp cao Đinh lăng – Bạch đến hoạt độ enzyme acetylcholin esterase mô não động vật thí nghiệm 36 Bảng 3.7 Ảnh hƣởng hỗn hợp cao Đinh lăng – Bạch đến hàm lƣợng MDA mơ não động vật thí nghiệm 37 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1 Sơ đồ phƣơng pháp nghiên cứu tác dụng cải thiện trí nhớ hỗn hợp cao Đinh lăng- Bạch 17 Hình 2.2 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu đánh giá tác dụng mơ hình gây suy giảm trí nhớ thiếu máu não cục tạm thời 19 Hình 2.3 Sơ đồ mơ hình test mê lộ chữ Y 20 Hình 2.4 Sơ đồ mơ hình test nhận diện đồ vật 21 Hình 2.5 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu đánh giá tác dụng mơ hình gây suy giảm trí nhớ thực nghiệm scopolamin 23 Hình 2.6 Sơ đồ minh họa test né tránh thụ động 24 Hình 3.1 Ảnh hƣởng hỗn hợp cao Đinh lăng – Bạch đến tỷ lệ thời gian khám phá cánh động vật thí nghiệm test mê lộ chữ Y 29 Hình 3.2 Thời gian khám phá hai vật giống O1 O2 chuột thí nghiệm giai đoạn mẫu test nhận diện đồ vật 30 Hình 3.3 Thời gian khám phá hai vật khác O1 O3 chuột thí nghiệm giai đoạn kiểm tra test nhận diện đồ vật 32 Hình 3.4 Ảnh hƣởng hỗn hợp cao Đinh Lăng – Bạch Quả đến tỷ lệ chuyển tiếp cánh tay động vật thí nghiệm test mê lộ chữ Y 35 Hình 3.5 Ảnh hƣởng hỗn hợp cao Đinh lăng – Bạch lên hoạt độ enzyme AChE mơ não động vật thí nghiệm 36 Hình 3.6 Ảnh hƣởng hỗn hợp cao Đinh lăng – Bạch lên hàm lƣợng MDA mô não động vật thí nghiệm 37 ĐẶT VẤN ĐỀ Sa sút trí tuệ (SSTT) rối loạn não bệnh lý thƣờng gặp ngƣời cao tuổi SSTT đƣợc đặc trƣng suy giảm nhận thức nhƣng tình trạng ý thức bình thƣờng khơng có rối loạn cấp tính hay bán cấp gây suy giảm nhận thức Đặc trƣng lâm sàng SSTT tình trạng rối loạn lĩnh vực trí tuệ, bao gồm: trí nhớ, học tập, định hƣớng, ngơn ngữ, thơng hiểu đánh giá phán xét [101] Theo ƣớc tính Tổ chức Y tế giới (WHO), năm 2015 có khoảng 50 triệu bệnh nhân chịu ảnh hƣởng sa sút trí tuệ, tới năm 2030 số tăng lên gấp đơi, nhiều gấp ba vào năm 2050 Tỉ lệ SSTT ngƣời 60 tuổi thay đổi từ 2,1% đến 8,5% tùy theo thống kê khu vực [102] ghi nhận bốn thể hay phân nhóm SSTT theo thứ tự lần lƣợt từ cao đến thấp bệnh Alzheimer, SSTT mạch máu, SSTT thể Lewy SSTT trán thái dƣơng [107] Số ngƣời mắc bệnh tăng nhanh trở thành gánh nặng cho ngành y tế Vì mong muốn tìm loại thuốc hiệu việc điều trị bệnh SSTT nhu cầu cấp bách nhà hóa học, dƣợc học Có nhiều cơng trình nghiên cứu đƣợc thực nhằm mục đích tìm phƣơng pháp hiệu để đẩy lùi bệnh SSTT Các thuốc điều trị sa sút trí tuệ chủ yếu tân dƣợc nhƣng kiểm sốt triệu chứng khơng ngăn chặn đẩy lùi bệnh Bên cạnh đó, giá thành thuốc tƣơng đối cao nhiều tác dụng không mong muốn Điều đặt nhu cầu cấp thiết việc nghiên cứu phát triển thuốc có nguồn gốc từ dƣợc liệu để hỗ trợ điều trị sa sút trí tuệ Ở Việt Nam, Đinh Lăng từ lâu đƣợc sử dụng dân gian nhằm mục đích bồi bổ thể, tăng sức dẻo dai [9] Một số nghiên cứu gần cho thấy rễ Đinh Lăng có tác dụng trí nhớ [7], [103] Trong y học cổ truyền, Bạch Quả loại thảo dƣợc quý đƣợc sử dụng lâu đời Hiện Bạch Quả đƣợc sử dụng để chữa trí nhớ, hay gắt bẳn ngƣời có tuổi, hay ngủ gà ngủ gật tác dụng vi tuần hoàn [9] Hơn nữa, cao chiết Bạch Quả cải thiện lƣu thông máu đến phần lớn mô quan, bảo vệ tổn thƣơng tế bào oxy hóa gốc tự do, ngăn chặn nhiều tác nhân hoạt hóa tiểu cầu có liên quan tới phát triển loạt rối loạn tim mạch, hô hấp hệ thần kinh trung ƣơng [68] Trên thị trƣờng có nhiều chế phẩm kết hợp cao rễ Đinh Lăng cao Bạch Quả với mục đích hỗ trợ cải thiện chứng SSTT Tuy nhiên, chế phẩm chƣa đƣợc nghiên cứu đầy đủ KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Về tác dụng hỗn hợp cao Đinh lăng – Bạch mơ hình gây suy giảm trí nhớ thiếu máu não cục tạm thời 1.1 Về tác dụng hỗn hợp cao Đinh lăng – Bạch 120 mg/kg ĐLBQ 120 mg/kg tác dụng cải thiện trí nhớ hai test hành vi, cụ thể là: - Trên test mê lộ chữ Y: thể xu hƣớng làm tăng tỷ lệ thời gian khám phá cánh giai đoạn kiểm tra so với lô bệnh lý nhƣng không đạt ý nghĩa thống kê (p>0,05) - Trên test nhận diện đồ vật: thể xu hƣớng làm tăng thời gian khám phá đồ vật so với vật cũ nhƣng không đạt ý nghĩa thống kê (p>0,05) 1.2 Về tác dụng hỗn hợp cao Đinh lăng – Bạch Quả 270 mg/kg ĐLBQ 270 mg/kg thể tác dụng cải thiện trí nhớ test mê lộ chữ Y, tác dụng cải thiện trí nhớ test nhận diện đồ vật, cụ thể là: - Trên test mê lộ chữ Y: làm tăng có ý nghĩa thống kê tỷ lệ thời gian khám phá cánh so với lô bệnh lý (tăng 13,3%, p0,05) Về tác dụng hỗn hợp cao Đinh lăng – Bạch mơ hình gây suy giảm trí nhớ scopolamin 2.1 Về tác dụng hỗn hợp cao Đinh lăng – Bạch 120 mg/kg ĐLBQ 120 mg/kg tác dụng cải thiện trí nhớ hai test hành vi Tuy nhiên, ĐLBQ 120 mg/kg thể tác dụng ức chế enzyme AChE ức chế peroxyl hóa lipid (MDA), cụ thể là: - Trên test né tránh thụ động: thể xu hƣớng làm tăng thời gian tiềm tàng vào buồng tối so với lô chứng bệnh lý nhƣng không đạt ý nghĩa thống kê (p>0,05) - Trên test mê lộ chữ Y: tỷ lệ chuyển tiếp khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh lý (p>0,05) - Trên hoạt độ enzyme AChE: làm giảm đáng kể hoạt độ enzyme AChE so với lơ chứng bệnh lý, có ý nghĩa thống kê (tỷ lệ giảm 19,4%, p=0,000) 48 - Trên hàm lƣợng MDA: làm giảm hàm lƣợng MDA có ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh lý (tỷ lệ giảm 24,3%, p=0,002) 2.2 Về tác dụng hỗn hợp cao Đinh lăng – Bạch Quả 270 mg/kg ĐLBQ 270 mg/kg thể tác dụng cải thiện trí nhớ hai test hành vi, khả ức chế AChE khả ức chế peroxyl hóa lipid (MDA), cụ thể là: - Trên test né tránh thụ động: làm tăng đáng kể thời gian tiềm tàng vào buồng tối so với lơ chứng bệnh lý, có ý nghĩa thống kê (p