Đánh giá tác dụng trên mô hình gây sỏi tiết niệu in vivo và độc tính của bài thuốc gồm ba vị dược liệu ý dĩ, bồ đề, xấu hổ

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HẢI ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG TRÊN MƠ HÌNH GÂY SỎI TIẾT NIỆU IN VIVO VÀ ĐỘC TÍNH CỦA BÀI THUỐC GỒM BA VỊ DƯỢC LIỆU: Ý DĨ, BỒ ĐỀ, XẤU HỔ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2013 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HẢI ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG TRÊN MƠ HÌNH GÂY SỎI TIẾT NIỆU IN VIVO VÀ ĐỘC TÍNH CỦA BÀI THUỐC GỒM BA VỊ DƯỢC LIỆU: Ý DĨ, BỒ ĐỀ, XẤU HỔ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thùy Dương Nơi thực hiện: Bộ mơn Dược lí HÀ NỘI - 2013 i LỜI CẢM ƠN Trước tiên, xin chân thành gửi lời cảm ơn đến q thầy trường Đại học Dược Hà Nội trang bị cho nhiều kiến thức quí báu suốt năm học vừa qua Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Thùy Dương, người thầy tận tình hướng dẫn quan tâm giúp đỡ suốt trình thực đề tài Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Nguyễn Hoàng Anh, TS Nguyễn Quỳnh Chi có góp ý, giúp đỡ tơi q trình thực đề tài Trong q trình làm thực nghiệm, tơi nhận giúp đỡ nhiệt tình thầy cơ, anh chị kĩ thuật viên Bộ môn Dược lý Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ q báu Tôi xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô, anh chị kĩ thuật viên Bộ môn Dược liệu, anh chị Viện Dược liệu hỗ trợ thời gian thực đề tài Lời cuối cùng, xin chân thành cảm ơn đến người thân gia đình, người bạn tận tình hỗ trợ, góp ý, giúp đỡ ln bên cạnh tơi suốt thời gian học tập nghiên cứu Hà nội, ngày 20 tháng năm 2013 Sinh viên Nguyễn Thị Hải Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi ii MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ………………………………… CHƯƠNG TỔNG QUAN………………………………………………………………2 1.1 Sơ lược bệnh lý sỏi tiết niệu……………………………………… …….………2 1.1.1 Bệnh sỏi tiết niệu theo Y học đại……………………………………………… 1.1.2 Bệnh sỏi tiết niệu theo Y học cổ truyền………………………………………… ….9 1.2 Các nghiên cứu thực nghiệm điều trị bệnh sỏi tiết niệu thảo dược …….…10 1.2.1 Tình hình nghiên cứu điều trị sỏi tiết niệu thảo dược giới……… 10 1.2.2 Tình hình nghiên cứu điều trị sỏi tiết niệu thảo dược Việt Nam………… 11 1.3 Bài thuốc nghiên cứu……………… ……… ………………………….…… ….12 1.3.1 Các dược liệu sử dụng thuốc………………… ………….…… … .12 1.3.2 Những kết nghiên cứu bước đầu thuốc……………………… …… …17 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU…………… … … 18 2.1 Nguyên liệu nghiên cứu……………… …… ……………………… … 18 2.2 Phương tiện nghiên cứu……………….…………………… …… ………… … 18 2.2.1 Động vật thí nghiệm……………….……………………… ………….………… 18 2.2.2 Hóa chất thuốc thử……………….………………………… …………….……….19 2.2.3 Thiết bị dụng cụ…………………………………………………… ………… 19 2.3 Nội dung nghiên cứu……………………….……………… ….….…………… 19 2.4 Phương pháp nghiên cứu…………….……………… ……………………… ….19 2.4.1 Phương pháp đánh giá tác dụng thuốc sỏi tiết niệu in vivo…… …….19 2.4.2 Phương pháp xác định độc tính cấp độc tính bán trường diễn thuốc nghiên cứu……………………… …………………………….…………………… …23 2.4.3 Phương pháp xử lí số liệu……………………… ……………….…………… ….25 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU…………………………………….……….…26 3.1 Kết thử tác dụng thuốc nghiên cứu mơ hình gây sỏi tiết niệu in vivo…………………………………………………………… ……………………….26 iii 3.1.1 Ảnh hưởng thuốc nghiên cứu đến tăng trưởng khối lượng thể chuột mơ hình gây sỏi tiết niệu in vivo…………….………… …………………………26 3.1.2 Ảnh hưởng thuốc nghiên cứu đến thể tích pH nước tiểu chuột cống trắng mơ hình gây sỏi tiết niệu in vivo…………….……………… ………….27 3.1.3 Ảnh hưởng thuốc nghiên cứu đến ion , , mơ hình gây sỏi tiết niệu in vivo………………………………………………………………………….…… 28 3.1.4 Ảnh hưởng thuốc nghiên cứu tới tinh thể niệu chuột mơ hình gây sỏi tiết niệu in vivo……………………………… …………………………………….….29 3.1.5 Ảnh hưởng thuốc nghiên cứu đến mơ bệnh học thận mơ hình gây sỏi tiết niệu in vivo…………………………………….………………………… ……32 3.2 Kết xác định độc tính cấp độc tính bán trường diễn thuốc nghiên cứu…………………………………….…………… ………………… 39 3.2.1 Kết thử độc tính cấp thuốc nghiên cứu…………….… …….….…… 39 3.2.2 Kết xác định độc tính bán trường diễn (28 ngày) thuốc nghiên cứu 39 CHƯƠNG BÀN LUẬN…………………………………………….….………………49 4.1 Về tác dụng thuốc nghiên cứu mơ hình gây sỏi tiết niệu in vivo ….49 4.2 Về độc tính cấp độc tính bán trường diễn thuốc nghiên cứu……… 52 4.3.1 Về độc tính cấp thuốc nghiên cứu…………….…… …………… …… 52 4.3.2 Về độc tính bán trường diễn thuốc nghiên cứu………… ………… 52 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT…………………………… ……………… ………………54 TÀI LIỆU THAM KHẢO……………………………………………… ……………….56 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi iv DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT ALT: Alanin aminotransferase AST: Aspartat aminotransferase COD: Calci oxalat monohydrat COM: Calci oxalat dihydrat DC1: Dịch chiết thuốc nghiên cứu với liều 2,52 g/kg DC2: Dịch chiết thuốc nghiên cứu với liều 5,04 g/kg DC3: Dịch chiết thuốc nghiên cứu với liều 10,08 g/kg LD50: Lethal dose 50 (liều gây chết 50% số động vật quan sát) PAM: Phosphat amoni magnesium v DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1: Danh sách số thuốc từ dược liệu dùng để điều trị sỏi thận, sỏi mật, sỏi tiết niệu……………………………………………………………… ….11 Bảng 2.1: Thang điểm đánh giá…………………… ……………… …………22 Bảng 3.1: Ảnh hưởng thuốc nghiên cứu đến thể tích nước tiểu…….….27 Bảng 3.2: Ảnh hưởng thuốc nghiên cứu đến ion Bảng 3.3: Điểm đánh giá tinh thể niệu lô chuột……………………30 Bảng 3.4: Ảnh hưởng thuốc nghiên cứu đến khối lượng thận……… 32 Bảng 3.5: Ảnh hưởng thuốc nghiên cứu với liều 8,64 g/kg liều , , ……29 25,92 g/kg chuột dùng liên tục 28 ngày đến số huyết học chuột nhắt trắng……………………………………………………………… 41 Bảng 3.6: Ảnh hưởng thuốc nghiên cứu với liều 8,64 g/kg liều 25,92 g/kg chuột dùng liên tục 28 ngày đến số hóa sinh chuột nhắt trắng…………………………… …………………….…… 43 Bảng 3.7: Ảnh hưởng thuốc nghiên cứu với liều 8,64g/kg liều 25,92g/kg chuột dùng liên tục 28 ngày đến khối lượng quan chuột nhắt trắng .44 Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi vi DANH MỤC CÁC HÌNH, ĐỒ THỊ Trang Hình 1.1: Hình ảnh tinh thể dạng COD (c) COM (a,b) kính hiển vi điện tử………………………………………………………… …….3 Hình 1.2: Cây Ý Dĩ (Coix lachrymal-jobi L Poaceae)……………………… 13 Hình 1.3: Lá bồ đề (Ficus religinosa L.Moraceae)………… ……… …15 Hình 1.4: Cây xấu hổ (Mimosa pudica L.Mimosaceae)……… ………… …16 Hình 2.1: Quy trình thí nghiệm gây sỏi tiết niệu…………… ……… …… 21 Hình 3.1: Ảnh hưởng thuốc nghiên cứu đến độ tăng khối lượng thể chuột……………………………… ………………… ………26 Hình 3.2: Ảnh hưởng thuốc nghiên cứu đến pH nước tiểu chuột………28 Hình 3.3: Hình ảnh tinh thể niệu chuột cống trắng………………… ……31 Hình 3.4: Hình ảnh vi thể thận chuột lơ chứng trắng………………….…….…34 Hình 3.5: Hình ảnh vi thể thận chuột lơ chứng bệnh………………… ………35 Hình 3.6: Hình ảnh vi thể thận chuột lơ uống DC1……………… ……… …36 Hình 3.7: Hình ảnh vi thể thận chuột lơ uống DC2……………… .……….37 Hình 3.8: Hình ảnh vi thể thận chuột lơ uống DC3………… …… ….…… 38 Hình 3.9: Ảnh hưởng thuốc nghiên cứu liều 8,64 g/kg liều 25,92 g/kg chuột dùng liên tục 28 ngày đến khối lượng thể chuột nhắt trắng…………………………………… ……………….40 Hình 3.10: Ảnh hưởng thuốc nghiên cứu với liều 8,64g/kg liều 25,92g/kg chuột đến cấu trúc vi thể gan thận chuột nhắt đực thí nghiệm sau 28 ngày uống thuốc .…46 Hình 3.11: Ảnh hưởng thuốc nghiên cứu với liều 8,64g/kg liều 25,92g/kg chuột đến cấu trúc vi thể gan thận chuột nhắt sau 28 ngày uống thuốc………………………………………………….47 ĐẶT VẤN ĐỀ Sỏi đường tiết niệu bệnh phổ biến giới Việt Nam Bệnh hay tái phát kết thạch số thành phần nước tiểu điều kiện lý hóa định Sỏi gây tắc đường tiết niệu, nhiễm khuẩn đau, làm nguy hại tới sức khỏe tính mạng người bệnh [19] Để giải sỏi tiết niệu, y học đại có nhiều phương pháp.Mổ lấy sỏi phương pháp thường dùng, đặc hiệu trường hợp sỏi to sỏi gây tắc đường tiết niệu.Tuy nhiên, với phương pháp sỏi thường bị tái phát sau thời gian.Tân dược điều trị sỏi có số loại tác dụng tương đối hạn chế [21], [28] Gần có phương pháp tán sỏi ngồi thể, tán sỏi qua danhưng nhiều tai biến Y học cổ truyền có nhiều thuốc, thuốc cho có tác dụng chữa sỏi tiết niệu chưa nghiên cứu đầy đủ để tạo điều kiện cho thầy thuốc nhân dân tin dùng.Vài năm trở lại đây, số đề tài nghiên cứu thực nghiệm tác dụng điều trị sỏi tiết niệu thuốc thuốc thực Trong đó, đề tài nghiên cứu tác dụng thuốc gồm ba vị dược liệu: Ý dĩ, Bồ đề, Xấu hổ sỏi tiết niệu in vitro cho kết khả quan [14] Để chứng minh tác dụng thuốc thực nghiệm, làm sở khoa học cho việc sử dụng thuốc lâm sàng, tiếp tục thực đề tài “Đánh giá tác dụng mơ hình gây sỏi tiết niệu in vivo độc tính thuốc gồm ba vị dược liệu: Ý dĩ, Bồ đề, Xấu hổ” với hai mục tiêu: 1- Đánh giá tác dụng thuốc mơ hình gây sỏi tiết niệu ethylen glycol amoni clorid 2- Xác định độc tính cấp bán trường diễn thuốc Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 SƠ LƯỢC VỀ BỆNH LÝSỎI TIẾT NIỆU 1.1.1 Bệnh sỏi tiết niệu theo Y học đại 1.1.1.1 Định nghĩa bệnh lí sỏi tiết niệu Sỏi tiết niệu bệnh thường gặp hay tái phát đường tiết niệu kết thạch số thành phần nước tiểu điều kiện lý hóa định Sỏi gây nghẽn tắc đường tiết niệu, hậu dẫn đến ứ nước thận, hủy hoại tổ chức thận, gây nhiễm khuẩn, gây đau, ảnh hưởng đến sức khỏe tính mạng người bệnh [4] 1.1.1.2 Dịch tễ học bệnh lí sỏi tiết niệu Sỏi tiết niệu bệnh phổ biến giới.Tuy nhiên, phân bố khơng đồng đều.Bệnh gặp châu Phi, châu Mĩ tỉ lệ gặp trung bình 20/10.000 người năm [2].Bệnh có tỉ lệ cao phía Nam Trung Quốc, Việt Nam, Indonexia, Mailaixia, Thái Lan, Ấn Độ, Pakixtan, Hi Lạp, Anh bán đảo Xcandinavo [2] Tuổi mắc bệnh thường từ 35-55tuy nhiên thời điểm mắc bệnh khác tùy theo loại sỏi [2], [44] Thành phần hóa học sỏi tỉ lệ gặp sau: sỏi calci oxalat kết hợp với calci phosphat 80%, sỏi struvit 17%, sỏi acid uric cystin 3% [2], [24], [38] Nam giới mắc bệnh sỏi nhiều gấp lần nữ giới [2], [24], [38], [39].Tuy nhiên, tỷ lệ bệnh thay đổi tùy theo thành phần hóa học sỏi Trong nam giới bị sỏi calci nhiều (88,4 % so với 58% nữ giới) nữ giới bị sỏi struvit nhiều (38% so với 8,8% nam giới) [2], [24] Tỷ lệ người có nguy cao bị sỏi tiết niệu vào khoảng - 3% dân số khoảng 50% bệnh nhân có tiền sử sỏi tiết niệu bị sỏi tái phát vòng 10 năm sau can thiệp lấy sỏi [24], [27] 1.1.1.3 Cấu trúc, thành phần hóa học sỏi tiết niệu Thành phần kết thạch sỏi tiết niệu gồm loại sau [4]: − Sỏi calci: calci oxalat, calci phosphat − Sỏi phosphat amoni magnesium – PAM (struvit) − Sỏi chuyển hóa: acid uric, cystin 49 (nhuộm HE, độ phóng đại x250) Vi thể gan lô chứng Vi thể thận lô chứng Vi thể gan lô uống liều 8,64g/kg Vi thể thận lô uống liều 8,64g/kg Vi thể gan lô uống liều 25,92g/kg Vi thể thận lô uống liều 25,92g/kg Hình 3.11: Ảnh hưởng thuốc nghiên cứu với liều 8,64g/kg liều 25,92g/kg chuột đến cấu trúc vi thể gan thận chuột nhắt sau 28 ngày uống thuốc Ket-noi.com Ket-noi.com kho kho tai tai lieu lieu mien mien phi phi 50 (nhuộm HE, độ phóng đại x250) Nhận xét: Ở lô chứng trắng, cấu trúc vi thể gan thận bình thường, tế bào gan khơng thấy thối hóa, hoại tử, khoảng cửa khơng viêm, xoang mạch không xung huyết Ở lô uống liều 8,64g/kg chuột, tế bào gan khơng thấy thối hóa, hoại tử, xoang mạch không xung huyết, khoảng cửa không viêm, thận giới hạn bình thường Ở lơ uống liều 25,92g/kg chuột, trúc vi thể gan thận giới hạn bình thường Kết cho thấy, sau 28 ngày dùng thuốc liên tục, cấu trúc vi thể gan thận lơ thực nghiệm nhìn chung giới hạn bình thường, không thấy xuất tổn thương 51 CHƯƠNG IV BÀN LUẬN 4.1 Về tác dụng thuốc mơ hình gây sỏi tiết niệu in vivo Để đánh giá tác dụng thuốc sỏi tiết niệu in vivo cần tiến hành nghiên cứu mơ hình động vật thí nghiệm bị gây sỏi tiết niệu Và đề tài nghiên cứu tác dụng thuốc dược liệu sỏi tiết niệu in vivo, chúng tơi triển khai mơ hình gây sỏi tiết niệu in vivo ethylen glycol amoni clorid Trên thực nghiệm có số mơ hình gây sỏi tiết niệu gây sỏi cách điều chỉnh chế độ ăn vitamin B6 [48], tăng tiết calci di truyền làm tăng tiết oxalat niệu [37] Trong đó, mơ hình gây sỏi tiết niệu in vivo ethylen glycol amoni clorid gây tăng tiết oxalat niệu dùng phổ biến nghiên cứu thực nghiệm Trong nghiên cứu thực nghiệm này, tiến hành gây sỏi tiết niệu ethylen glycol 1% amoni clorid 0,5% Khi cho chuột uống ethylen glycol liên tục thời gian dài gây tăng tiết oxalat niệu, oxalat sản phẩm chuyển hóa qua gan ethylen glycol Mặt khác, chuột uống amoni clorid làm acid hóa nước tiểu, làm giảm tiết citrat Citrat chất ức chế trình hình thảnh sỏi, citrat giảm dẫn đến tự nước tiểu tăng Chuột thí nghiệm uống kết hợp ethylen glycol amoni clorid thời gian dài gây tăng tinh thể calci oxalat niệu, đạt trạng thái bão hòa tinh thể kết tụ lắng đọng thận [37] Đề tài có sử dụng ethanol 70% để chiết thuốc nghiên cứu ethanol có khả hòa tan chất mang tính chọn lọc nước Liều dùng dịch chiết thuốc sử dụng chuột thí nghiệm xuất phát từ liều dùng hàng ngày thuốc nghiên cứu người, có dùng phương pháp ngoại suy Từ mức liều nâng dần gấp đơi để mức liều thử nghiệm, từ chọn mức liều hợp thực nghiệm Kết cho thấy, thể tích nước tiểu lơ uống chế phẩm thửcao thể tích nước tiểu lô chứng bệnh, tỉ lệ tăng so với lô chứng bệnh 60% (với p