Nghiên cứu tạo hệ đệm giúp tăng cường độ bền của Allicin từ tỏi và bước đầu đánh giá tác dụng trên mô hình chuột bị máu nhiễm mỡ

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Giang Huy Diệm NGHIÊN CỨU TẠO HỆ ĐỆM GIÚP TĂNG CƯỜNG ĐỘ BỀN CỦA ALLICIN TỪ TỎI VÀ BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG TRÊN MÔ HÌNH CHUỘT BỊ MÁU NHIỄM MỠ LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2015 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Giang Huy Diệm NGHIÊN CỨU TẠO HỆ ĐỆM GIÚP TĂNG CƯỜNG ĐỘ BỀN CỦA ALLICIN TỪ TỎI VÀ BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG TRÊN MÔ HÌNH CHUỘT BỊ MÁU NHIỄM MỠ Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã vol: 60 42 01 14 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS Trịnh Tất Cường Hà Nội – 2015 LỜI CẢM ƠN Luận văn thạc sĩ thực phòng Eznym học phân tích hoạt tính sinh học trực thuộc Phòng Thí nghiệm Trọng điểm Công nghệ Enzym protein, Trường Đại Học Khoa học Tự nhiên Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới TS Trịnh Tất Cường, người thầy trực tiếp hướng dẫn cho tôi, bảo tận tình để hoàn thành luận văn Thầy ân cần quan tâm, trao đổi cho góp ý bổ ích mặt khoa học để hoàn thành luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô khoa sinh, đặc biệt thầy cô thuộc môn Hóa sinh Sinh lý thực vật người thầy trực tiếp giảng dạy, cung cấp cho kiến thức phong phú quý giá giúp ứng dụng tốt nghiên cứu Tôi xin gửi lời biết ơn tới thầy cô trực thuộc Phòng Thí nghiệm trọng điểm Công nghệ Enzym Protein, thầy cô giáo môn, anh chị nghiên cứu sinh, cao học, thuộc Bộ môn Hóa sinh Sinh lý thực vật tạo điều kiện đầy đủ trang thiết bị phòng thí nghiệm, nhiệt tình giúp đỡ thời gian học tập nghiên cứu khoa học Cuối cùng, xin cảm ơn gia đình, bạn bè cổ vũ động viên mặt tinh thần giúp hoàn thành luận văn Học viên Giang Huy Diệm MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1- TỔNG QUAN 1.1 Máu nhiễm mỡ 1.1.1 Khái niệm 1.1.2 Các số để đánh giá bệnh máu nhiễm mỡ 1.1.2.1 Cholesterol triglyceride 1.1.3 Nguyên nhân 1.1.3.1 Yếu tố di truyền 1.1.3.2 Nguyên nhân thứ phát 1.1.4 Điều trị bệnh máu nhiễm mỡ 1.1.4.1 Thuốc hạ lipid máu 1.1.4.2 Thực vật điều trị máu nhiễm mỡ 11 1.2 Cây tỏi 11 1.2.1 Cây tỏi .11 1.2.1.1 Phân loại thực vật, đặc điểm sinh thái 12 1.2.2 Thành phần tỏi .14 1.3 Allicin 14 1.3.1 Quá trình sinh tổng hợp allicin tự nhiên .16 1.3.2 Tổng hợp allicin theo phương pháp hóa học 17 1.3.3 Hoạt tính Allicin 17 1.3.3.1 Hoạt tính kháng khuẩn allicin 18 1.3.3.2 Hiệu điều trị máu nhiễm mỡ allicin .19 1.3.4 Độ bền allicin 19 1.3.4.1 Allicin bị phân hủy nhiệt độ cao 19 1.3.4.2 Allicin bị phân hủy pH .20 1.3.4.3 Khả hấp thụ allicin vào máu 20 Chương - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊNCỨU .22 2.1 Đối tượng nghiên cứu 22 2.1.1 Động vật thí nghiệm .22 2.1.2 Hóa chất 22 2.1.3 Thiết bị nghiên cứu 22 2.2 Phương pháp nghiên cứu 22 2.2.1 Phương pháp nghiên cứu 22 2.2.1.1 Nghiên cứu tạo hệ đệm thích hợp để tăng khả bảo vệ hoạt tính allicin .22 2.2.2.2 Tạo môi trường pH giống dày so sánh bảo vệ allicin mẫu đối chứng mẫu bảo vệ đệm 24 2.2.2.3 Đánh giá hấp thụ allicin vào máu thông qua plasma 24 2.2.2.4 Tạo chuột bị máu nhiễm mỡ 25 2.2.2.5 Xác định số tiêu bệnh máu mỡ chuột .26 CHƯƠNG - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28 3.1 Thành phần hệ đệm bảo vệ hoạt tính allicin tỏi 28 3.2 Hệ đệm bảo vệ allicin môi trường pH giống với môi trường pH dày 35 3.3 Đánh giá hấp thụ allicin vào máu thông qua plasma Error! Bookmark not defined 3.4 Tạo chuột bị máu nhiễm mỡ .45 3.5 Xác định số hóa sinh để đánh giá hiệu điều trị allicin mô hình chuột bị máu nhiễm mỡ .47 3.5.1 Cholesteol máu .47 3.5.2 Triglyceride máu 48 3.5.3 LDL máu .49 3.5.4 HDL máu 50 3.5.5 Nồng độ đường huyết máu 50 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 DANH MỤC HÌNH Hình 1: Những triệu trứng lâm sàng bệnh máu nhiễm mỡ Hình 2: Cây tỏi 14 Hình 3: Cấu trúc allicin .15 Hình 4: Hoạt tính allicin chống chủng vi khuẩn Staphylococcus [21] 19 Hình 5: Hoạt lực allicin giảm 70 80 độ C [46] 20 Hình 6: Sắc kí đồ allicin chuẩn 28 Hình 7: Bước sóng hấp thụ cực đại allicin 29 Hình 8: Đường chuẩn allicin .29 Hình 9: bước sóng hấp thụ mẫu Allicin chuẩn với thể tích khác 30 Hình 10: Lượng allicin tạo thành với đệm có pH = .31 Hình 11: Lượng allicin tạo thành với đệm có pH = .31 Hình 12: Lượng allicin tạo thành với đệm có pH = .32 Hình 13: Lượng allicin tạo thành với đệm có pH = .32 Hình 14: Lượng allicin tạo thành H2O có pH = 33 Hình 15: Lượng allicin tạo thành với đệm có pH = 7,2 33 Hình 16: Lượng allicin tạo thành với đệm có pH = .34 Hình 17: Hàm lượng allicin đệm có pH khác 35 Hình 18: Lượng allicin tạo thành với đệm có pH = sau 30 phút 36 Hình 19: Lượng allicin tạo thành với đệm có pH = sau 30 phút 37 Hình 20: Lượng allicin tạo thành với đệm có pH = sau 30 phút 37 Hình 21: Lượng allicin tạo thành H2O sau 30 phút 38 Hình 22: Lượng allicin tạo thành với đệm có pH = 7,2 sau 30 phút 38 Hình 23: Sự thay đổi hàm lượng allicin theo thời gian .40 Hình 24: Lượng s-allycysteine với đệm có pH = 42 Hình 25: Lượng s-allycysteine với đệm có pH = 42 Hình 26: Lượng s-allycysteine với đệm có pH = 43 Hình 27: Lượng s-allycysteine với H2O 43 Hình 28: Lượng s-allycysteine với đệm có pH = 7,2 44 Hình 29: Chuột cho ăn với chế độ ăn giàu cholesterol chất béo (bên trái) chuột cho ăn với chế độ ăn uống bình thường (bên phải) 46 Hình 30: Sự thay đổi trọng lượng chuột sau tuần nuôi 46 Hình 30: Nồng độ cholesterol nhóm chuột sau tuần nuôi 47 Hình 32: Nồng độ triglyceride nhóm chuột sau tuần nuôi 48 Hình 33: Nồng độ cholesterol LDL nhóm chuột sau tuần nuôi 49 Hình 34: Nồng độ cholesterol HDL nhóm chuột sau tuần nuôi 50 DANH MỤC BẢNG Bảng 1: Mức độ lipid máu phù hợp người trưởng thành Bảng 2: Hoạt tính allicin .18 Bảng 3: Chế độ ăn gây bệnh máu nhiễm mỡ chuột 25 Bảng 4: Diện tích mẫu allicin đưa lên đường chuẩn 30 Bảng 5: Diện tích allicin pha đệm có pH khác 34 Bảng 6: Diện tích allicin pha đệm khác sau phút 30 phút 39 Bảng 7: Diện tích s-allycysteine pH khác .45 Bảng 8: Nồng độ glucose nhóm chuột sau tuần nuôi 50 BẢNG KÍ HIỆU CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT HDL Lipoprotein mật độ cao HPLC Sắc kí lỏng hiệu cao LDL Lipoprotein mật độ thấp VLDL Lipoprotein mật độ thấp MỞ ĐẦU Tỏi (tên danh pháp: Allium sativum) loài thực vật thuộc họ Hành sử dụng phổ biến làm gia vị vị thuốc Tỏi chứng minh có tác dụng tốt sức khỏe người Trong thành phần tỏi chứa nhiều hợp chất quý hợp chất có dược tính quan trọng allicin Các nghiên cứu gần công bố allicin tỏi có khả kháng khuẩn, chống viêm mạnh, ngăn chặn hình thành cholesterol có hại cho thể, làm giảm vol mỡ máu, tăng cường hoạt tính tế bào trình thực bào, tăng cường hoạt tính tế bào giết tự nhiên, ức chế phát triển vi sinh vật gây bệnh, ức chế phát triển tế bào ung thư Rất nhiều công bố công ty giới sản xuất allicin việc tạo trình xúc tác alliin với enzym allinase có sẵn tỏi Bằng việc sử dụng allicin chiết xuất từ alliin có sẵn tỏi, công ty giới sản xuất nhiều loại thực phẩm chức cao cấp với nhiều tác dụng sinh học quý Tuy allicin hợp chất có hoạt tính sinh học tốt khó bảo quản Allicin dễ bị phân hủy nhiệt độ cao không bền nhiệt độ thường Mặt khác, allicin bền pH tối ưu 6,5-7,2 pH dịch dày 1,92,0 Do vậy, dễ phân hủy allicin thể chưa kịp thời hấp thụ Các nghiên cứu giới tập trung nghiên cứu tạo pH ổn định cho việc bảo vệ allicin nhằm tránh phân hủy dày đạt kết hiệu Tuy nhiên, Việt Nam chưa có nghiên cứu hướng tới việc tạo hệ đệm để tạo điều kiện thích hợp tăng độ bền allicin tránh khỏi phân hủy pH dày Bên cạnh đó, máu nhiễm mỡ bệnh phố biến không quốc gia phát triển mà nước phát triển có Việt Nam Tuy bệnh không ảnh hưởng đến tính mạng bệnh máu nhiễm mỡ lâu dài dẫn đến nhiều biến chứng xơ vữa động mạch, nhồi máu tim hay tai biến mạch máu não Chính thế, việc tìm chất, đặc biệt chất có nguồn gốc tự nhiên quan trọng việc điều trị bệnh máu nhiễm mỡ TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Đỗ Trung Đàm (2003), Sử dụng Microsoft- Excel thống kê sinh học, Nhà xuất Y học, Hà Nội Đỗ Tất Lợi (2006), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội Chu Văn Mẫn (2009), Tin học công nghệ sinh học, Nhà xuất giáo dục, Hà Nội Bùi Thị Tho Nguyễn Thanh Hải (2013), "Nghiên cứu tác dụng diệt khuẩn in vitro dịch chiết tỏi (Allium Sativum L.) E.Coli gây bệnh E.Coli kháng Ampicillin, Kanamycin", Tạp chí Khoa học Phát triển 2013, vol 11, tr 804-808 Tiếng Anh Abramovitz Dana, Sagui Gavri, Dror Harats, Hanna Levkovitz, David Mirelman, Talia Miron, Sigal Eilat-Adar, Aharon Rabinkov, Meir Wilchek, and Michael Eldar (1999), "Allicin-induced decrease in formation of fatty streaks (atherosclerosis) in mice fed a cholesterol-rich diet", Coronary artery disease, vol 10(7), pp 515-520 Aimei Zhou (1998), Study on the stability of allicin, SCIENCE AND TECHNOLOGY OF FOOD INDUSTRY, pp 06 Allan G Michael and Bruce Arroll (2014), "Prevention and treatment of the common cold: making sense of the evidence", CMAJ: Canadian Medical Association Journal, vol 186(3), pp 190 Anderson James W, Lisa D Allgood, Ann Lawrence, Linda A Altringer, George R Jerdack, David A Hengehold, and Jorge G Morel (2000), "Cholesterollowering effects of psyllium intake adjunctive to diet therapy in men and women 52 with hypercholesterolemia: meta-analysis of controlled trials", The American journal of clinical nutrition, vol 71(2), pp 472-479 Ankri Serge and David Mirelman (1999), "Antimicrobial properties of allicin from garlic", Microbes and infection, vol 1(2), pp 125-129 10 Athyros Vassilios G, Olga I Giouleme, Nikolaos L Nikolaidis, Themistoklis V Vasiliadis, Vassilios I Bouloukos, Athanasios G Kontopoulos, and Nikolaos P Eugenidis (2002), "Long-term follow-up of patients with acute hypertriglyceridemia-induced pancreatitis", Journal of clinical gastroenterology, vol 34(4), pp 472-475 11 Bell Larry P, Kathy Hectorne, Helenbeth Reynolds, Timothy K Balm, and Donald B Hunninghake (1989), "Cholesterol-lowering effects of psyllium hydrophilic mucilloid: adjunct therapy to a prudent diet for patients with mild to moderate hypercholesterolemia", Jama, vol 261(23), pp 3419-3423 12 Bhandari Uma, Raman Kanojia, and KK Pillai (2002), "Effect of ethanolic extract of Embelia ribes on dyslipidemia in diabetic rats", Journal of Diabetes Research, vol 3(3), pp 159-162 13 Block Eric (2010), "Garlic and other Alliums: the lore and the science", Royal society of Chemistry 14 Boden William E, Jeffrey L Probstfield, Todd Anderson, Bernard R Chaitman, Patrice Desvignes-Nickens, Kent Koprowicz, Ruth McBride, Koon Teo, and William Weintraub (2011), "Niacin in patients with low HDL cholesterol levels receiving intensive statin therapy", The New England journal of medicine, vol 365(24),pp 2255-2267 15 Bose Sankhadip, Bibek Laha, and Subhasis Banerjee (2014), "Quantification of allicin by high performance liquid chromatography-ultraviolet analysis with effect of post-ultrasonic sound and microwave radiation on fresh garlic cloves", Pharmacognosy magazine, vol 10(Suppl 2), pp S288 16 Breckenridge W Carl, J Alick Little, George Steiner, Anne Chow, and Mary Poapst (1978), "Hypertriglyceridemia 53 associated with deficiency of apolipoprotein C-II", New England Journal of Medicine, vol 298(23), pp 12651273 17 Brunzell John D (2007), "Hypertriglyceridemia", New England Journal of Medicine, vol 357(10), pp 1009-1017 18 Cavallito Chester J and John Hays Bailey (1944), "Allicin, the antibacterial principle of Allium sativum I Isolation, physical properties and antibacterial action", Journal of the American Chemical Society, vol 66(11), pp 1950-1951 19 Chan Yan, Jackie Yan, Ailsa Chui‐Ying Yuen, Robbie Yat‐Kan Chan, and Shun‐Wan Chan (2013), "A review of the cardiovascular benefits and antioxidant properties of allicin", Phytotherapy Research, vol 27(5), pp 637646 20 Cox Diane Wilson, W Carl Breckenridge, and J Alick Little (1978), "Inheritance of apolipoprotein C-II deficiency with hypertriglyceridemia and pancreatitis", New England Journal of Medicine, vol 299(26), pp 1421-1424 21 Cutler RR and P Wilson (2004), "Antibacterial activity of a new, stable, aqueous extract of allicin against methicillin-resistant Staphylococcus aureus", British journal of biomedical science, vol 61(2), pp 71-74 22 Davidson Michael H, Maureen A Dillon, Bruce Gordon, Peter Jones, Julie Samuels, Stuart Weiss, Jonathon Isaacsohn, Phillip Toth, and Steven K Burke (1999), "Colesevelam hydrochloride (cholestagel): a new, potent bile axit sequestrant associated with a low incidence of gastrointestinal side effects", Archives of Internal Medicine, vol 159(16), pp 1893-1900 23 Deeg Roif and J Ziegenhorn (1983), "Kinetic enzymic method for automated determination of total cholesterol in serum", Clinical chemistry, vol 29(10), pp 1798-1802 24 Eilat Sigal, Yael Oestraicher, Aharon Rabinkov, Dan Ohad, David Mirelman, Alexander Battler, M Eldar, and Zvi Vered (1995), "Alteration of lipid profile in hyperlipidemic rabbits by allicin, an active constituent of garlic", Coronary artery disease, vol 6(12), pp 985-990 54 25 El-Hilaly Jaouad, Adil Tahraoui, Zafar H Israili, and Badiâa Lyoussi (2006), "Hypolipidemic effects of acute and sub-chronic administration of an aqueous extract of Ajuga iva L whole plant in normal and diabetic rats", Journal of ethnopharmacology, vol 105(3), pp 441-448 26 Elkayam Amitai, David Mirelman, Edna Peleg, Meir Wilchek, Talia Miron, Aharon Rabinkov, Mor Oron-Herman, and Talma Rosenthal (2003), "The effects of allicin on weight in fructose-induced hyperinsulinemic, hyperlipidemic, hypertensive rats", American journal of hypertension, vol 16(12), pp 1053-1056 27 Ensminger Marion Eugene Audrey H Ensminger (1993), Foods & Nutrition Encyclopedia, Two Volume Set, CRC press 28 Ewald Nils, Philip D Hardt, and Hans-Ulrich Kloer (2009), "Severe hypertriglyceridemia and pancreatitis: presentation and management", Current opinion in lipidology, vol 20(6), pp 497-504 29 Falkenberg Ricky L, Harold L Archibald, Danford Wilkinson, Lisa Trexler, and Julie M Hayes (2011), Alkalizing compositions and methods for using the same, Google Patents 30 Fojo SS and HB Brewer (1992), "Hypertriglyceridaemia due to genetic defects in lipoprotein lipase and apolipoprotein C‐II", Journal of internal medicine, vol 231(6), pp 669-677 31 from Ferrara Aglio di Voghiera and Italy PDO Emilia-Romagna Species: A sativum 32 Fung Michelle A and Jiri J Frohlich (2002), "Common problems in the management of hypertriglyceridemia", Canadian Medical Association Journal, vol 167(11), pp 1261-1266 33 Gardner Christopher D, Larry D Lawson, Eric Block, Lorraine M Chatterjee, Alexandre Kiazand, Raymond R Balise, and Helena C Kraemer (2007), "Effect of raw garlic vs commercial garlic supplements on plasma lipid concentrations 55 in adults with moderate hypercholesterolemia: a randomized clinical trial", Archives of Internal Medicine, vol 167(4), pp 346-353 34 Garg Abhimanyu and Scott M Grundy (1990), "Management of dyslipidemia in NIDDM", Diabetes care, vol 13(2), pp 153-169 35 Garg Abhimanyu and Vinaya Simha (2007), "Update on dyslipidemia", The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism, vol 92(5), pp 1581-1589 36 Ginsberg Henry N (2006), Review: "efficacy and mechanisms of action of statins in the treatment of diabetic dyslipidemia", The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism, vol 91(2), pp 383-392 37 Goldberg Anne C, Paul N Hopkins, Peter P Toth, Christie M Ballantyne, Daniel J Rader, Jennifer G Robinson, Stephen R Daniels, Samuel S Gidding, Sarah D de Ferranti, and Matthew K Ito (2011), "Familial hypercholesterolemia: screening, diagnosis and management of pediatric and adult patients: clinical guidance from the National Lipid Association Expert Panel on Familial Hypercholesterolemia", Journal of clinical lipidology, vol 5(3), pp 133-140 38 Gotto Antonio M Jr (2005), "Evolving Concepts of Dyslipidemia, Atherosclerosis, and Cardiovascular Disease: The Louis F Bishop Lecture", Journal of the American College of Cardiology, vol 46(7), pp 1219-1224 39 Grundy PhD Scott M Md (1998), "Hypertriglyceridemia, Atherogenic Dyslipidemia, and the Metabolic Syndrome", The American Journal of Cardiology, vol 81(4, Supplement 1), pp 18B-25B 40 Grundy Scott M (1997), "Small LDL, atherogenic dyslipidemia, and the metabolic syndrome", Circulation, vol 95(1), pp 1-4 41 Grundy Scott M, Gloria Lena Vega, Mark E McGovern, Brian R Tulloch, David M Kendall, David Fitz-Patrick, Om P Ganda, Robert S Rosenson, John B Buse, and David D Robertson (2002), "Efficacy, safety, and tolerability of once-daily niacin for the treatment of dyslipidemia associated with type diabetes: results of the assessment of diabetes control and evaluation of the efficacy of niaspan trial", Archives of Internal Medicine, vol 162(14), pp 1568-1576 56 42 Harris JC, S Cottrell, S Plummer, and David Lloyd (2001), "Antimicrobial properties of Allium sativum (garlic)", Applied Microbiology and Biotechnology, vol 57(3), pp 282-286 43 He Ning, Qingbiao Li, Daohua Sun, and Xueping Ling (2008), "Isolation, purification and characterization of superoxide dismutase from garlic", Biochemical Engineering Journal, vol 38(1), pp 33-38 44 Hunt Steven C, Lily L Wu, Paul N Hopkins, Barry M Stults, Hiroshi Kuida, Maria E Ramirez, Jean-Marc Lalouel, and Roger R Williams (1989), "Apolipoprotein, low density lipoprotein subfraction, and insulin associations with familial combined hyperlipidemia Study of Utah patients with familial dyslipidemic hypertension", Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology, vol 9(3), pp 335-344 45 Ilić Dušica, Vesna Nikolić, Ana Ćirić, Marina Soković, Tatjana Stanojković, Tatjana Kundaković, Mihajlo Stanković, and Ljubiša Nikolić (2012), "Cytotoxicity and antimicrobial activity of allicin and its transformation products", Journal of Medicinal Plants Research, vol 6(1), pp 59-65 46 Ilić Dušica P, Vesna D Nikolić, Ljubiša B Nikolić, Mihajlo Z Stanković, and Ljiljana P Stanojević (2010), "Thermal degradation, antioxidant and antimicrobial activity of the synthesized allicin and allicin incorporated in gel", Hemijska industrija, vol 64(2), pp 85-91 47 Ilić Dušica P, Vesna D Nikolić, Ljubiša B Nikolić, Mihajlo Z Stanković, Ljiljana P Stanojević, and Milorad D Cakić (2011), "Allicin and related compounds: Biosynthesis, synthesis and pharmacological activity", Facta universitatis-series: Physics, Chemistry and Technology, vol 9(1), pp 9-20 48 Insull Jr William (2006), "Clinical utility of bile axit sequestrants in the treatment of dyslipidemia: a scientific review", Southern medical journal, vol 99(3), pp 257-273 49 Jenkins David, Thomas Wolever, A Venketeshwer Rao, Robert A Hegele, Steven J Mitchell, Thomas Ransom, Dana L Boctor, Peter J Spadafora, 57 Alexandra L Jenkins, Christine Mehling (1993), "Effect on blood lipids of very high intakes of fiber in diets low in saturated fat and cholesterol", New England Journal of Medicine, vol 329(1), pp 21-26 50 Jialal Ishwarlal (1996), "A practical approach to the laboratory diagnosis of dyslipidemia", American journal of clinical pathology, vol 106(1), pp 128-138 51 Katona Terrence and Bruce R Smoller (2010), "Dyslipidemia (Hyperlipidemia), in Clinical and Pathological Aspects of Skin Diseases in Endocrine, Metabolic, Nutritional and Deposition Disease" Springer pp 55-61 52 Keulen Eric TP, Christine Voors-Pette, and Tjerk Wa De Bruin (2001), "Familial dyslipidemic hypertension syndrome: familial combined hyperlipidemia, and the role of abdominal fat mass", American journal of hypertension, vol 14(4), pp 357-363 53 Kourounakis PN and EA Rekka (1991), "Effect on active oxygen species of alliin and Allium sativum (garlic) powder", Research communications in chemical pathology and pharmacology, vol 74(2), pp 249-252 54 Kwiterovich Jr Peter O (2008), "Recognition and management of dyslipidemia in children and adolescents", The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism, vol 93(11), pp 4200-4209 55 Lawson Larry D and Christopher D Gardner (2005), "Composition, stability, and bioavailability of garlic products used in a clinical trial", Journal of agricultural and food chemistry, vol 53(16), pp 6254-6261 56 Lissiman Elizabeth, Alice L Bhasale, Marc Cohen (2012), "Garlic for the common cold", Cochrane Database Syst Rev, vol 57 Maccubbin Darbie, Michael J Koren, Michael Davidson, Dov Gavish, Richard C Pasternak, Geraldine Macdonell, Madhuja Mallick, Christine McCrary Sisk, John F Paolini, and Yale Mitchel (2009), "Flushing profile of extended-release niacin/laropiprant versus gradually titrated niacin extended-release in patients with dyslipidemia with and without ischemic cardiovascular disease", The American journal of cardiology, vol 104(1), pp 74-81 58 58 McGowan Michael W, Joseph D Artiss, Donald R Strandbergh, and Bennie Zak (1983), "A peroxidase-coupled method for the colorimetric determination of serum triglyceride", Clinical Chemistry, vol 29(3), pp 538-542 59 McNally Raymond T and Radu Florescu (1994), In search of Dracula: The history of Dracula and vampires, Houghton Mifflin Harcourt 60 Mensink Ronald P, Peter L Zock, Arnold DM Kester, and Martijn B Katan (2003), "Effects of dietary fatty axits and carbohydrates on the ratio of serum total to HDL cholesterol and on serum lipids and apolipoproteins: a metaanalysis of 60 controlled trials", The American journal of clinical nutrition, vol 77(5), pp 1146-1155 61 Meredith Ted Jordan and Ted Meredith’s The Complete Book of Garlic: A Guide For Gardeners, Growers, and Serious Cooks 62 Mohler III Emile R (2003), "Peripheral arterial disease: identification and implications", Archives of Internal Medicine, vol 163(19), pp 2306-2314 63 Nikolic V, M Stankovic, LJ Nikolic, and D Cvetkovic (2004), "Mechanism and kinetics of synthesis of allicin", Die Pharmazie-An International Journal of Pharmaceutical Sciences, vol 59(1), pp 10-14 64 Olson Beth H, Sallee M Anderson, Mark P Becker, James W Anderson, Donald B Hunninghake, David JA Jenkins, John C LaRosa, James M Rippe, David CK Roberts, and Diane B Stoy (1997), "Psyllium-enriched cereals lower blood total cholesterol and LDL cholesterol, but not HDL cholesterol, in hypercholesterolemic adults: results of a meta-analysis", The Journal of nutrition, vol 127(10), pp 1973-1980 65 Onyeagba RA, OC Ugbogu, CU Okeke, and O Iroakasi (2005), "Studies on the antimicrobial effects of garlic (Allium sativum Linn), ginger (Zingiber officinale Roscoe) and lime (Citrus aurantifolia Linn)", African Journal of Biotechnology, vol 3(10), pp 552-554 66 Pejic Rade N Daniel T Lee (2006), "Hypertriglyceridemia", The Journal of the American Board of Family Medicine, vol 19(3), pp 310-316 59 67 Perfetti Gracia A and Gregory W Diachenko (2003), "Determination of sulfite in dried garlic by reversed-phase ion-pairing liquid chromatography with postcolumn detection", Journal of AOAC International, vol 86(3), pp 544-550 68 Rabinkov Aharon, Talia Miron, Leonid Konstantinovski, Meir Wilchek, David Mirelman, Lev Weiner (1998), "The mode of action of allicin: trapping of radicals and interaction with thiol containing proteins", Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-General Subjects, vol 1379(2), pp 233-244 69 Rahman Khalid (2007), "Effects of garlic on platelet biochemistry and physiology", Molecular nutrition & food research, vol 51(11), pp 1335-1344 70 Ried Karin, Catherine Toben, pp Peter Fakler (2013), "Effect of garlic on serum lipids: an updated meta-analysis", Nutrition reviews, vol 71(5), pp 282-299 71 Rosen Robert T, Richard D Hiserodt, Elaine K Fukuda, Reginald J Ruiz, Zhengyi Zhou, Joseph Lech, Sharon L Rosen, and Thomas G Hartman (2001), "Determination of allicin, S-allycysteine and volatile metabolites of garlic in breath, plasma or simulated gastric fluids", The Journal of nutrition, vol 131(3), pp 968S-971S 72 Salama Akram Ahmed, Mahmoud AbouLaila, Mohamad Alaa Terkawi, Ahmed Mousa, Ahmed El-Sify, Mahmoud Allaam, Ahmed Zaghawa, Naoaki Yokoyama, and Ikuo Igarashi (2014), "Inhibitory effect of allicin on the growth of Babesia and Theileria equi parasites", Parasitology research, vol 113(1), pp 275283 73 Salunkhe Dattajirao K and SS Kadam (1998), Handbook of Vegetable Science and Technology: Production, Compostion, Storage, and Processing, CRC press 74 J Shepherd (1995), "Fibrates and statins in the treatment of hyperlipidaemia: an appraisal of their efficacy and safety", European heart journal, vol 16(1), pp 513 75 Simonetti Gualtiero, Italo Pergher, and Stanley Schuler (1990), Simon & Schuster's Guide to Herbs and Spices, Simon & Schuster 60 76 Simopoulos Artemis P (1991), "Omega-3 fatty axits in health and disease and in growth and development", The American journal of clinical nutrition, vol 54(3), pp 438-463 77 Stabler Sarah N, Aaron M Tejani, Fong Huynh, and Claire Fowkes (2012), "Garlic for the prevention of cardiovascular morbidity and mortality in hypertensive patients", Cochrane Database Syst Rev, vol 78 Staels Bart, Jean Dallongeville, Johan Auwerx, Kristina Schoonjans, Eran Leitersdorf, and Jean-Charles Fruchart (1998), "Mechanism of action of fibrates on lipid and lipoprotein metabolism", Circulation, vol 98(19), pp 2088-2093 79 Stone Neil J (1994), "Secondary causes of hyperlipidemia", The medical clinics of North America, vol 78(1), pp 117-141 80 Suvarna Yashasvi Rathai Rajagopalan (2015), "GARLIC: NATURE’S PANACEA", Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research, vol 8(3) 81 H Takagi (1990), "Garlic Allium sativum L, Onions and Allied Crops", Biochemistry, Food Science, and Minor Crops, vol 3, pp 109-146 82 Varady Krista A and Peter JH Jones (2005), "Combination diet and exercise interventions for the treatment of dyslipidemia: an effective preliminary strategy to lower cholesterol levels?", The Journal of nutrition, vol 135(8), pp 18291835 83 Williams RR1, SC Hunt, PN Hopkins, LL Wu, SJ Hasstedt, TD Berry, GK Barlow, BM Stults, MC Schumacher, and EH Ludwig (1993), "Genetic basis of familial dyslipidemia and hypertension: 15-year results from Utah", American journal of hypertension, vol 6(11 Pt 2), pp 319S-327S 84 Woo Hae Dong, Sohee Park, Kyungwon Oh, Hyun Ja Kim, Hae Rim Shin, Hyun Kyung Moon, and Jeongseon Kim (2013), "Diet and Cancer Risk in the Korean Population: A Meta-analysis", Asian Pacific journal of cancer prevention: APJCP, vol 15(19), pp 8509-8519 61 85 Yamamura Taku, Hiroshi Sudo, Katsunori Ishikawa, and Akira Yamamoto (1979), "Familial type I hyperlipoproteinemia caused by apolipoprotein C-II deficiency", Atherosclerosis, vol 34(1), pp 53-65 86 Yuan George, Khalid Z Al-Shali, Robert A Hegele (2007), "Hypertriglyceridemia: its etiology, effects and treatment", Canadian Medical Association Journal, vol 176(8), pp 1113-1120 87 Zhang Yifei, Xiaoying Li, Dajin Zou, Wei Liu, Jialin Yang, Na Zhu, Li Huo, Miao Wang, Jie Hong, and Peihong Wu (2008), "Treatment of type diabetes and dyslipidemia with the natural plant alkaloid berberine", The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism, vol 93(7), pp 2559-2565 88 Zhang Yuan-Li, Antonio Hernandez-Ono, Patty Siri, Stuart Weisberg, Donna Conlon, Mark J Graham, Rosanne M Crooke, Li-Shin Huang, and Henry N Ginsberg (2006), "Aberrant hepatic expression of PPARγ2 stimulates hepatic lipogenesis in a mouse model of obesity, insulin resistance, dyslipidemia, and hepatic steatosis", Journal of Biological Chemistry, vol 281(49), pp 3760337615 89 Zhou Xiao-Feng, Zhen-Shan Ding, and Nai-Bo Liu (2013), "Allium vegetables and risk of prostate cancer: evidence from 132,192 subjects", Asian Pacific Journal of Cancer Prevention, vol 14(7), pp 4131-4134 62