ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI dP rm NGUYỄN THỊ GIANG ac y, VN U KHOA Y – DƢỢC an XÂY DỰNG MƠ HÌNH VÀ BƢỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ ine TÁC DỤNG CHỐNG HUYẾT KHỐI CỦA CAO GIÀU dic SAPONIN TAM THẤT HOANG Me (Panax stipuleanatus H.Tsai et K.M.Feng) ho ol of TRÊN CHUỘT THỰC NGHIỆM Co p yri gh t© Sc KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƢỢC HỌC Hà Nội - 2018 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI ac y, rm NGUYỄN THỊ GIANG VN U KHOA Y – DƢỢC dP XÂY DỰNG MƠ HÌNH VÀ BƢỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ an TÁC DỤNG CHỐNG HUYẾT KHỐI CỦA CAO GIÀU ine SAPONIN TAM THẤT HOANG dic (Panax stipuleanatus H.Tsai et K.M.Feng) ol of Me TRÊN CHUỘT THỰC NGHIỆM Khóa : QH.2013.Y Ngƣời hƣớng dẫn : PGS.TS.DƢƠNG THỊ LY HƢƠNG Co p yri gh t© Sc ho KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƢỢC HỌC Hà Nội – 2018 LỜI CẢM ƠN VN U Đầu tiên, em xin gửi lời cám ơn đến toàn thể Ban chủ nhiệm Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, Bộ môn Dược lý – Dược lâm sàng, Bộ môn Y Dược học sở tạo điều kiện cho em làm khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành ac y, cảm ơn thầy cô giáo khoa dìu dắt, giúp đỡ em hồn thành chương trình học tập suốt năm qua rm Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PSG.TS Dương Thị Ly Hương người ln tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện giúp đỡ em hoàn thành khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy Bộ mơn Dược lí – Dược lâm sàng an dP giúp đỡ em trình thực khóa luận Em xin cảm ơn đề tài thuộc chương trình Tây Bắc: “Ứng dụng giải pháp khoa học công nghệ để phát triển nguồn nguyên liệu tạo sản phẩm từ hai loài thuốc Sâm vũ diệp (Panax dic ine bipinnatifidus Seem.) Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H.Tsai et K.M.Feng) vùng Tây Bắc”, mã số KHCN-TB.07C/13-18 tài trợ kinh phí để em thực nội dung nghiên cứu Me Cuối em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè người thân ln quan tâm, động viên giúp em hồn thành khóa luận ol of Dù cố gắng, lần đầu làm nghiên cứu khó tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận ý kiến đóng góp thầy để khố luận thêm hồn thiện Co p yri gh t© Sc ho Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng năm 2018 Sinh viên Nguyễn Thị Giang DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Giải nghĩa Bơm điện tử Cyclooxygenase Dimethyl sulfoxide Heparin TLPT thấp HKTMS Heparin trọng lượng phân tử thấp IC50 κ - carrageenan Liều ức chế 50% đối tượng thử (Inhibitory Concentration 50%) Kappa – carrageenan LD50 TDD Liều gây chết 50% đối tượng thử ( Lethal Dose 50%) Tiêm da ac y, VN U Ký hiệu BĐT COX – DMSO Co p yri gh t© Sc ho ol of Me dic ine an dP rm Huyết khối tĩnh mạch sâu DANH MỤC HÌNH Tên hình Trang Q trình đơng máu Sơ đồ tóm tắt q trình điều trị huyết khối tĩnh mạch Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H T Tsai et K M Feng) 14 Hình 1.4 Hình 2.1 Hình 2.2 Saponin dẫn chất acid oleanolic Sơ đồ quy trình chiết xuất cao giàu hoạt chất từ tam thất hoang Sơ đồ tiến hành mô hình gây huyết khối chuột 16 19 22 Hình 3.1 Hình 3.2 Huyết khối chuột gây ĸ-carrageenan tiêm phúc mạc Phần trăm huyết khối đuôi chuột sau 24 gây huyết khối (A), 23 24 Hình 3.3 48 gây huyết khối (B), 72 gây huyết khối (C) Phần trăm huyết khối 24 giờ, 48 giờ, 72 sau tiêm κ- dP rm ac y, VN U STT Hình 1.1 Hình 1.2 Hình 1.3 carrageenan 20mg/kg Ảnh hưởng đường tiêm κ-carrageenan đến hình thành huyết khối Ảnh hưởng nhúng nước đá đến hình thành huyết khối Ảnh hưởng aspirin heparin đến hình thành huyết khối Ảnh hưởng tam thất hoang đến hình thành huyết khối ine an Hình 3.4 Hình 3.6 Hình 3.7 Me dic Hình 3.5 Co p yri gh t© Sc ho ol of đuôi chuột 25 26 27 28 30 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Trang Các thuốc sử dụng dự phòng huyết khối Mức độ gây huyết khối đuôi chuột sau 24 giờ, 48 giờ, 72 23 Ảnh hưởng thời gian nhúng đuôi nước đá đến phần trăm 26 Bảng 3.3 huyết khối Ảnh hưởng aspirin heparin đến hình thành huyết khối 28 Bảng 3.4 Ảnh hưởng tam thất hoang đến hình thành huyết khối 29 Co p yri gh t© Sc ho ol of Me dic ine an dP rm ac y, VN U STT Bảng 1.1 Bảng 3.1 Bảng 3.2 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN Huyết khối VN U 1.1 1.1.1 Định nghĩa ac y, 1.1.2 Phân loại .2 1.1.3 Cơ chế bệnh sinh huyết khối Phòng điều trị huyết khối rm 1.2 1.2.1 Phòng điều trị huyết khối tĩnh mạch 1.3 dP 1.2.2 Phòng điều trị huyết khối động mạch 12 Tam thất hoang 14 an 1.3.1 Đặc điểm thực vật .14 ine 1.3.2 Phân bố .15 dic 1.3.3 Thành phần hóa học 15 1.3.4 Tác dụng dược lý 16 Me CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 Đối tƣợng nghiên cứu 18 2.2 Động vật nghiên cứu 18 2.3 Hóa chất 18 2.4 Thiết bị dụng cụ 19 ol ho Sc 2.5 of 2.1 Phƣơng pháp nghiên cứu 20 t© 2.5.1 Xây dựng mơ hình huyết khối chuột κ-carrageenan 20 gh 2.5.2 Đánh giá tác dụng chống huyết khối tam thất hoang 21 Phƣơng pháp phân tích số liệu 22 yri 2.6 Co p CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 23 3.1 Kết 23 3.1.1 Xây dựng mơ hình huyết khối chuột ĸ-carrageenan 23 3.1.2 Xác định thuốc chứng dương 27 3.1.3 Tác dụng chống huyết khối tam thất hoang 29 3.2 Bàn luận 30 VN U 3.2.1 Mơ hình gây huyết khối κ-carrageenan .30 3.2.2 Thuốc chứng dương 33 3.2.3 Tác dụng chống huyết khối tam thất hoang 35 ac y, 3.2.4 Hạn chế nghiên cứu .37 rm KẾT LUẬN 38 Co p yri gh t© Sc ho ol of Me dic ine an dP TÀI LIỆU THAM KHẢO ĐẶT VẤN ĐỀ Huyết khối nguyên nhân quan trọng dẫn đến tắc nghẽn mạch máu gây VN U tử vong để lại di chứng nặng nề cho người bệnh [39] Huyết khối hình thành động mạch tĩnh mạch Huyết khối động mạch dẫn đến nhồi ac y, máu tim, tai biến mạch máu não đột quỵ Huyết khối tĩnh mạch thường gặp chi gây biến chứng thuyên tắc phổi dẫn đến tử vong đột ngột hội chứng hậu huyết khối với biểu loét, đau nhức giới hạn vận động chi Theo rm Global Burden of Disease Study năm 1997, có khoảng 6,3 triệu người tồn giới tử vong thiếu máu tim 4,4 triệu người tử vong đột quỵ [46] nguyên nhân hàng đầu gây gánh nặng bệnh tật Hoa Kỳ năm 2013 [42] Nhóm thuốc sử dụng chủ yếu thuốc chống đông thuốc ức chế dP kết tập tiểu cầu với thời gian liều dùng phải tuân thủ theo chế độ điều trị nghiêm dic ine an ngặt có hiệu Tuy nhiên, thuốc thường kèm theo tác dụng không mong muốn như: clopidogrel aspirin dùng đơn hay kết hợp có liên quan đến tăng nguy loét dày tá tràng [7, 49], sử dụng heparin có nguy gây chảy máu [7, 48] …Để hạn chế nhược điểm nói Y – Dược học nước giới có xu hướng quay trở với liệu pháp thiên nhiên Me Tam thất hoang có tên khoa học Panax stipuleanatus H.Tsai et K.M.Feng, t© Sc ho ol of họ Nhân sâm - Araliaceae, phân bố chủ yếu Hoàng Liên Sơn Các kết nghiên cứu phân tích tách chiết thành phần hóa học trước tam thất hoang phần thân rễ chứa nhiều saponin khung olean với hàm lượng tương đối cao, báo cáo tác dụng lồi hạn chế, hầu hết nghiên cứu in vitro Nghiên cứu Lê Thị Tâm Nguyễn Thị Tuyết Trinh chứng minh phân đoạn n-butanol chứa nhiều saponin tam thất hoang có tác dụng chống kết tập tiểu cầu liều mg/mL [12] tác dụng chống đông liều – mg/mL [15] in vitro Mà hình thành huyết khối lại phụ thuộc vào q trình đơng máu hoạt hóa tiểu cầu, vậy, với tác dụng chống đông chống kết tập yri gh tiểu cầu in vitro phân đoạn n-butanol, liệu chúng có tác dụng chống huyết khối in vivo hay khơng? Để trả lời câu hỏi đó, chúng tơi tiến hành đề tài: “Xây dựng mơ Co p hình bước đầu đánh giá tác dụng chống huyết khối cao giàu saponin tam thất hoang chuột thực nghiệm” với mục đích : Xây dựng mơ hình gây huyết khối đuôi chuột nhắt κ-carrageenan Bước đầu đánh giá tác dụng chống huyết khối cao giàu saponin tam thất hoang mơ hình xây dựng CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Huyết khối 1.1.1 Định nghĩa VN U Huyết khối tình trạng bệnh lý phát động lan rộng bất hợp lý phản ứng đông cầm máu thể, dẫn đến hình thành cục máu đơng lòng (tắc hồn tồn, bán tắc hay nghẽn mạch) Trong đó, tiểu cầu loạt protein ac y, đông máu (các yếu tố đơng máu) góp phần hình thành cục máu đông [44] rm 1.1.2 Phân loại Tuỳ theo loại huyết khối (tĩnh mạch, động mạch hay vi mạch) mà có khác dP thành phần huyết khối vai trò yếu tố khác hình thành huyết khối Huyết khối động mạch ine an Thành phần chủ yếu cục máu đông huyết khối động mạch tiểu cầu, sau fibrin thành phần khác [40] Sự tổn thương thành mạch Me dic tăng hoạt hoá tiểu cầu đóng vai trò chủ yếu tăng đơng, từ gây huyết khối động mạch Các yếu tố nguy thường gặp như: tăng huyết áp, đái tháo đường, rối loạn lipid, hút thuốc … Huyết khối tĩnh mạch t© Sc ho ol of Thành phần huyết khối tĩnh mạch fibrin [40] Tăng đông giảm chất ức chế đông máu (như giảm antithrombin III, protein C, protein S ) tăng hoạt hố yếu tố đơng máu (như động mạch sau phẫu thuật, tai biến, sản khoa thối hóa yếu tố tổ chức ) nguyên nhân gây huyết khối tĩnh mạch Tình trạng bất động, nhiễm trùng, có thai làm tăng khả bị huyết khối tĩnh mạch bệnh nhân Huyết khối vi quản Co p yri gh Thường gặp bệnh nhân có hội chứng đơng máu rải rác lòng mạch (DIC: Disseminated Intravasscular Coagulation), xuất huyết giảm tiểu cầu huyết khối (TTP: Thrombotic Thrombocytopenic Purpura) … Thường tình trạng tăng đơng gây nên đa yếu tố: thành mạch, tiểu cầu, hoạt hoá yếu tố đơng máu huyết tương Nhận xét: Hình 3.6 cho ta thấy lô aspirin heparin ức chế hình thành huyết khối κ-carrageenan gây so với nhóm chứng bệnh DMSO 0,1% với VN U p