Nghiên cứu tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu của các phân đoạn dịch chiết sâm vũ diệp (panax bipinnatifidus seem ) và tam thất hoang (panax stipuleanatus h tsai et k m feng) trên in vitro

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƢỢC LÊ THỊ TÂM NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CHỐNG NGƢNG TẬP TIỂU CẦU CỦA CÁC PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT SÂM VŨ DIỆP (Panax bipinnatifidus Seem.) VÀ TAM THẤT HOANG (Panax stipuleanatus H.Tsai et K.M.Feng) TRÊN IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƢỢC HỌC Hà Nội – 2017 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƢỢC Ngƣời thực hiện: LÊ THỊ TÂM NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CHỐNG NGƢNG TẬP TIỂU CẦU CỦA CÁC PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT SÂM VŨ DIỆP (Panax bipinnatifidus Seem.) VÀ TAM THẤT HOANG (Panax stipuleanatus H.Tsai et K.M.Feng) TRÊN IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƢỢC HỌC Khóa: QH.2012.Y Ngƣời hƣớng dẫn: PGS.TS Dƣơng Thị Ly Hƣơng TS.Vũ Thị Thơm Hà Nội – 2017 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên em xin gửi lời cám ơn đến toàn thể Ban chủ nhiệm Khoa Y Dược, ĐHQGHN, Bộ môn Dược lý – Dược lâm sàng, Bộ môn Y Dược học sở tạo điều kiện cho em làm khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn thầy giáo khoa dìu dắt, giúp đỡ em hồn thành chương trình học tập suốt năm qua Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PSG.TS Dương Thị Ly Hương, TS Vũ Thị Thơm người ln tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện giúp đỡ em hồn thành khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô Bộ mơn Dược lí – Dược lâm sàng Bộ mơn Y Dược học sở giúp đỡ em q trình thực khóa luận Em xin cảm ơn đề tài thuộc chương trình Tây Bắc: “Ứng dụng giải pháp khoa học công nghệ để phát triển nguồn nguyên liệu tạo sản phẩm từ hai loài thuốc Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H.Tsai et K.M.Feng) vùng Tây Bắc”, mã số KHCN-TB.07C/13-18 tài trợ kinh phí để em thực nội dung nghiên cứu Em xin cảm ơn Khoa Xét nghiệm Huyết Học, Bệnh viện Bạch Mai giúp đỡ em thực thí nghiệm Cuối em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè người thân ln quan tâm, động viên giúp em hồn thành khóa luận Dù cố gắng, lần đầu làm nghiên cứu khó tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận ý kiến đóng góp thầy để khố luận thêm hồn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng 06 năm 2017 Sinh viên Lê Thị Tâm Kí hiệu AA ADP AMP ATP CADP CEPI COX-1 CT EtOAc GP IC 50 LC 50 MDA MPA NTTC PBBt PBEA PBEt PBT PPP PRP PSBt PS DCM PSnH PST SVD TTH TXA2 vWF DANH MỤC CÁC BẢNG STT Bảng 1.1 Bảng 1.2 DANH MỤC CÁC HÌNH STT Hình 1.1 Các glyc Hình 1.2 Cấu trúc Hình 1.3 Cơ chế g Hình 1.4 Cơ chế g Hình 1.5 Q trình Hình 1.6 Vai trò củ Hình 1.7 Ngun l Hình 1.8 Ngun l Hình 1.9 Các đích Hình 1.10 Cơ chế ứ Hình 1.11 Sâm vũ d Hình 1.12 Tam thất Hình 1.13 Hợp chất Hình 1.14 Thành ph Hình 2.1 Sơ đồ ch Hình 2.2 Sơ đồ ch Hình 2.3 Quy trình Hình 3.1 Ảnh hưở Hình 3.2 Ảnh hưở Hình 3.3 Hình 3.4 Hình 3.5 Ảnh hưở NTTC Ảnh hưở So sánh h đoạn dịch Hình 3.6 Hình 3.7 Hình 3.8 Hình 3.9 Hình 3.10 Ảnh hư Ảnh hưở NTTC Ảnh hưở NTTC Ảnh hưở NTTC So sánh h đoạn dịch MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG I TỔNG QUAN 1.1 Sinh lý học tiểu cầu 1.1.1 Đời sống tiểu cầu 1.1.2 Cấu trúc tiểu cầu 1.1.3 Chức tiểu cầu 1.2 Các xét nghiệm đánh giá chức tiểu cầu 10 1.3 Các thuốc kháng tiểu cầu 13 1.4 Vài nét sơ lƣợc hai loài Sâm vũ diệp Tam thất hoang .16 1.4.1 Đặc điểm thực vật 16 1.4.2 Thực trạng phân bố 17 1.4.3 Thành phần hóa học 17 1.4.4 Công dụng 21 1.4.5 Các nghiên cứu nước hoá học dược lý 21 CHƢƠNG II ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .23 2.1 Nguyên liệu, đối tƣợng nghiên cứu 23 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 25 CHƢƠNG III KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 27 3.1 Kết 27 3.1.1 Tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu Sâm vũ diệp 27 3.1.2 Tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu Tam thất hoang .29 3.2 Bàn luận 33 Kết luận: 37 Đề xuất: 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, bệnh lý huyết khối nhóm bệnh có số bệnh nhân tử vong cao giới Huyết khối nguyên nhân hàng đầu tắc nghẽn mạch máu gây tử vong để lại di chứng nặng nề cho người bệnh [30] Nhiều nghiên cứu cho thấy tiểu cầu đóng vai trò quan trọng q trình hình thành huyết khối Ngay kích hoạt, tiểu cầu thực q trình bám dính, phóng thích, ngưng tập tiểu cầu tạo cục máu đơng dẫn đến hình thành huyết khối [18] Vì vậy, thuốc kháng tiểu cầu liệu pháp lý tưởng phòng điều trị bệnh lý liên quan đến huyết khối [30] Bên cạnh thuốc khẳng định giá trị phòng điều trị huyết khối aspirin, clopidogrel, … việc tiếp tục tìm kiếm thuốc có tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu vấn đề đáng quan tâm nhà khoa học Đặc biệt, với xu quay trở với giá trị thiên nhiên, việc tìm kiếm thuốc có nguồn gốc tự nhiên đối tượng quan tâm nghiên cứu Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H.Tsai et K.M.Feng) hai loài thuộc chi Panax, họ Nhân sâm (Araliacea), loài sâm đặc hữu vùng Tây Bắc, phân bố chủ yếu vùng núi Hoàng Liên Sơn [15] Theo kinh nghiệm dân gian, Sâm vũ diệp Tam thất hoang dùng làm thuốc bổ giống lồi sâm khác, có tác dụng giảm đau, bổ huyết, cầm máu,…[12].Tuy nhiên, nghiên cứu dược lý độc tính tiến hành tương đối đầy đủ số loài thuộc chi Panax (như Nhân sâm, Tam thất gần Sâm Việt Nam [24]) nghiên cứu hai loài Sâm vũ diệp Tam thất hoang nhìn chung hạn chế Các nghiên cứu ban đầu thành phần hóa học Sâm vũ diệp Tam thất hoang cho thấy rễ hai lồi có chứa saponin khung dammaran oleanan với hàm lượng cao [10,34,37,46] Saponin thành phần hóa học tìm thấy lồi khác thuộc chi Panax [51] Đặc biệt, saponin số loài thuộc chi Panax chứng minh có tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu [35] Liệu với thành phần giàu saponin rễ Sâm vũ diệp Tam thất hoang, hai loài có tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu khơng? Để làm sáng tỏ điều đó, tơi thực đề tài: “Nghiên cứu tác dụng chống ngƣng tập tiểu cầu phân đoạn dịch chiết Sâm vũ diệp Tam thất hoang in vitro”, với mục tiêu: Đánh giá tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu phân đoạn dịch chiết Sâm vũ diệp Đánh giá tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu phân đoạn dịch chiết Tam thất hoang CHƢƠNG I TỔNG QUAN 1.1 Sinh lý học tiểu cầu Tiểu cầu tế bào máu nhỏ nhất, khơng có nhân, đường kính 3-4µm, sản xuất từ ngun mẫu tiểu cầu tuỷ xương Số lượng tiểu cầu lưu hành máu ngoại vi khoảng 150 - 450 × 10 /L Nguyên mẫu tiểu cầu bắt nguồn từ tế bào nguồn dòng tủy, tế bào gốc sinh máu tạo nên Mỗi mẫu tiểu cầu tạo 3000 tiểu cầu [23] 1.1.1 Đời sống tiểu cầu Tiểu cầu có đời sống ngắn, khoảng từ 8-14 ngày Với điều kiện lắc liên tục thể nhiệt độ phòng lưu giữ tiểu cầu khoảng ngày [23] 1.1.2 Cấu trúc tiểu cầu Tiểu cầu có kích thước 2-4mm, thể tích 7-8mm Bình thường có 150-450× 10 tiểu cầu lít máu ngoại vi [23] Quan sát kính hiển vi điện tử cho thấy tiểu cầu có siêu cấu trúc phức tạp gồm lớp màng, hạt, hệ thống vi ống, hệ thống kênh mở [23]  Màng tiểu cầu Gồm lớp lipid kép bao quanh tiểu cầu, glycoprotein quan trọng, đóng vai trò receptor bề mặt, nơi diễn số hoạt động đông máu tiểu cầu [23] Các receptor tiểu cầu trình bày tóm tắt bảng 1.1 Bảng 1.1 Các receptor bề mặt tiểu cầu [42] C Gl b Đánh giá tác dụng phân đoạn dịch chiết Tam thất hoang độ ngưng tập tiểu cầu mức liều 0,5 - - - mg/mL, kết thu sau: 29 MPA (%) a Tác dụng chống ngƣng tập tiểu cầu phân đoạn tổng Hình 3.6 Ảnh hƣởng phân đoạn tổng Tam thất hoang đến độ NTTC (*: p