Khóa luận tốt nghiệp: Đánh giá tác dụng chống sa sút trí nhớ của cao chiết giàu alcaloid từ thạch tùng răng cƣa (Huperzia serrata (Thunb.) Trevis) trên mô hình thực nghiệm bằng

Đề tài Đánh giá tác dụng chống sa sút trí nhớ của cao chiết giàu alcaloid từ thạch tùng răng cưa (Huperzia serrata (Thunb.) Trevis) trên mô hình thực nghiệm bằng trimethyltin nghiên cứu về các tác dụng phân tử liên quan đến giả thuyết oxy hoá stress của cao chiết giàu alcaloid từ thạch tùng răng cưa trên mô hình gây sa sút trí nhớ bằng trimethyltin.

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC DƢƠNG VÂN THANH ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG SA SÚT TRÍ NHỚ CỦA CAO CHIẾT GIÀU AlCALOID TỪ THẠCH TÙNG RĂNG CƢA (HUPERZIA SERRATA (THUNB.) TREVIS) TRÊN MƠ HÌNH THỰC NGHIỆM BẰNG TRIMETHYLTIN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƢỢC HỌC KHÓA QH.2017.Y Hà Nội - 2022 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC Người thực hiện: DƢƠNG VÂN THANH ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG SA SÚT TRÍ NHỚ CỦA CAO CHIẾT GIÀU ALCALOID TỪ THẠCH TÙNG RĂNG CƢA (HUPERZIA SERRATA (THUNB.) TREVIS) TRÊN MƠ HÌNH THỰC NGHIỆM BẰNG TRIMETHYLTIN KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (NGÀNH DƢỢC HỌC) KHÓA QH.2017.Y Người hướng dẫn: NCS.ThS Đặng Kim Thu PGS.TS Vũ Mạnh Hùng Hà Nội - 2022 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, tơi xin phép bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc đến hai giảng viên hướng dẫn NCS.ThS Đặng Kim Thu PGS.TS Vũ Mạnh Hùng hết lịng bảo, ln động viên hướng dẫn giai đoạn thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới PGS.TS Bùi Thanh Tùng giảng viên môn Dược lý, Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội tạo điều kiện tối đa, nhiệt tình chia sẻ học kinh nghiệm trình thực đề tài Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới thầy cô giảng viên, lãnh đạo Trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội dành nhiều tâm huyết giảng dạy, bảo suốt năm học tập trường Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, người thân, bạn bè ln bên cạnh ủng hộ, động viên tơi vượt qua khó khăn trình học tập thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Sinh viên Dương Vân Thanh DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Tên viết đầy đủ Tên viết tắt Aβ Amyloid beta ACh Acetylcholin AChE Enzym Acetylcholinesterase ACTI Acetylthiocholin iodid APP Protein tiền thân amyloid (Amyloid Precursor Protein) CAT Catalase FDA Cục quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa Kỳ (Food and Drug Administration) H.serrata Huperzia serrata HsAE Cao chiết giàu alcaloid từ thạch tùng cưa Hup A Huperzin A NMDA Thụ thể N-methyl-D-aspartat NSAID Thuốc chống viêm không steriod MDA Malondialdehyd SAM Chuột tăng tốc lão hóa SAMP Chuột tăng tốc lão hóa nhạy cảm SOD Superoxide dismutase SD Độ lệch chuẩn (Standard deviation) SSTN Sa sút trí nhớ TMT Trimetyltin TBARS Thiobarbituric Acid WHO Tổ chức Y tế Thế giới (World Health Organization) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Bảng 2.2.3 Thành phần hóa học thạch tùng cưa Trang 12 DANH MỤC CÁC HÌNH VÉ, ĐỒ THỊ Hình ảnh/ Đồ thị Trang Hình 2.2.3 Phân tử Huperzin A 12 Hình 2.4 Sơ đồ triển khai mơ hình đánh giá tác dụng cao chiết 25 Hình 2.5.1 Mê lộ chũ Y 26 HÌnh 2.5.2 Mê lộ nước Morris 27 Hình 2.5.3 Hình ảnh mơ não, mơ não tách lấy phần Hippocampus 29 Hình 3.1.1 Đồ thị số lần di chuyển vào cánh tay chuột nhóm 32 Hình 3.1.2 Đồ thị ảnh hưởng cao chiết giàu alcaloid từ thạch 33 tùng cưa đến tỷ lệ chuyển tiếp cánh Hình 3.2.1 Đồ thị ảnh hưởng cao chiết giàu alcaloid từ thạch tùng cưa đến thời gian tìm thấy bến đỗ tập có bến đỗ 34 Hình 3.2.2 Đồ thị ảnh hưởng cao chiết giàu alcaloid từ thạch tùng cưa đến thời gian lưu góc phần tư có bến đỗ tập khơng có bến đỗ 36 Hình 3.3 Đồ thị ảnh hưởng cao chiết giàu alcaloid từ thạch tùng cưa đến hoạt độ AChE thể đồng vùng hồi hải mã 37 Hình 3.4.1 Đồ thị ảnh hưởng cao chiết giàu alcaloid từ thạch tùng cưa đến hàm lượng MDA thể đồng vùng hồi hải mã 39 Hình 3.4.2 Đồ thị ảnh hưởng cao chiết giàu alcaloid từ thạch tùng cưa đến hoạt độ SOD thể đồng vùng hồi hải mã 40 Hình 3.4.3 Đồ thị ảnh hưởng cao chiết giàu alcaloid từ thạch tùng cưa đến hoạt độ CAT thể đồng vùng hồi hải mã 41 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan sa sút trí nhớ 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Các giai đoạn sa sút trí nhớ 1.1.3 Các thể sa sút trí nhớ chế bệnh sinh 1.1.2 Các nhóm thuốc điều trị sa sút trí nhớ 1.2 Tổng quan Thạch tùng cƣa 11 1.2.1 Đặc điểm thực vật 11 1.2.2 Phân bố 11 1.2.3 Thành phần hóa học 11 1.2.4 Tác dụng dược lý 13 1.2.5 Một số nghiên cứu tác dụng dược lý thạch tùng cưa 13 1.3 Một số mơ hình nghiên cứu tác dụng tăng cƣờng trí nhớ 15 1.3.1 Mơ hình gây sa sút trí tuệ động vật thực nghiệm 15 1.3.2 Một số thử nghiệm hành vi đánh giá tác dụng tăng cường trí nhớ in vivo 16 1.4 Phƣơng pháp đánh giá thay đổi marker sinh học in vivo 17 1.4.1 Một số phương pháp đánh giá tác dụng ức chế AChE 17 1.4.2 Phương pháp đánh giá khả chống oxy hóa in vivo 18 CHƢƠNG PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 20 2.1.1 Dược liệu nghiên cứu 20 2.1.2 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu 20 2.2 Phƣơng tiện nghiên cứu 20 2.2.1 Động vật thí nghiệm 20 2.2.2 Hóa chất, dung mơi 21 2.2.3 Thiết bị, dụng cụ 21 2.3 Nội dung nghiên cứu 22 2.4 Điều kiện tiến hành nghiên cứu 23 2.5 Phƣơng pháp nghiên cứu 23 2.5.1 Thiết kế thí nghiệm 23 2.5.2 Đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ thơng qua thử nghiệm hành vi 25 2.5.3 Phương pháp nghiên cứu chế tác dụng thông qua đánh giá marker sinh học 28 2.6 Phương pháp xử lý số liệu 31 CHƢƠNG KẾT QUẢ 32 3.1 Kết đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ in vivo thông qua mê lộ chữ Y 32 3.2 Kết đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ in vivo thông qua mê lộ nước Morris 34 3.3 Kết đánh giá chế cải thiện sa sút trí nhớ cao chiết giàu alcaloid từ thạch tùng cưa 37 3.3.1 Ảnh hưởng cao chiết giàu alcaloid từ thạch tùng cưa đến hoạt độ AChE não vùng hồi hải mã 37 3.3.2 Ảnh hưởng cao chiết giàu alcaloid từ thạch tùng cưa đến khả chống oxy hóa in vivo 38 CHƢƠNG BÀN LUẬN 43 4.1 Về kết thử nghiệm hành vi 44 4.1.1 Về kết thử nghiệm mê lộ chữ Y 44 4.1.2 Về thử nghiệm mê lộ nước Morris 45 4.2 Về chế tác dụng cải thiện sa sút trí nhớ cao chiết giàu alcalloid từ thạch tùng cưa 46 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 50 5.1 Kết luận 50 5.2 Đề xuất 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Sa sút trí nhớ (SSTN) biết đến bệnh thoái hoá thần kinh tiến triển liên quan đến tuổi tác, làm suy giảm khả nhớ nhận thức [1] Sa sút trí nhớ thường nhiều nguyên nhân khác như: Alzheimer; bệnh mạch máu; tác nhân rượu, tác nhân kích thích/ức chế thần kinh, tác nhân tác động tâm thần; tổn thương rối loạn chức não bệnh thể Trong nguyên nhân đó, nhiều nguyên nhân cần quan tâm trị liệu sử dụng thuốc sản phẩm hỗ trợ để làm chậm biểu bệnh (Alzheimer; bệnh mach máu; tác nhân rượu, tác nhân kích thích/ức chế thần kinh, tác nhân tác động tâm thần) Sa sút trí nhớ Alzheimer thường gặp người cao tuổi theo báo cáo Thế giới năm 2021 (World Alzheimer Report 2021) giới có 65 triệu người mắc bệnh trí nhớ Alzheimer, ước tính tăng lên 152 triệu vào năm 2050 [2] Tại Việt Nam, theo nghiên cứu dịch tễ, tỷ lệ bệnh sa sút trí tuệ cộng đồng 60 tuổi chiếm khoảng 4,2-7,9%, tỷ lệ tăng lên rõ rệt theo nhóm tuổi, năm lại tăng gấp đơi SSTN có tác động tiêu cực tới kinh tế xã hội chi phí y tế để chăm sóc người bị bệnh chiếm tỷ lệ cao Tính riêng năm 2019, tổng chi phí xã hội cho SSTN tồn cầu 130 triệu la mỹ, chi phí dự kiến tăng tới khoảng 280 triệu đô la mỹ vào năm 2030 số người mắc bệnh chi phí chăm sóc bệnh nhân tăng Điều trở thành áp lực lớn cho hệ thống chăm sóc sức khoẻ xã hội nói chung gia đình bệnh nhân nói riêng, địi hỏi nhà khoa học cần có nghiên cứu chun sâu, tồn diện để tìm giải pháp kiểm sốt có hiệu Điều trị SSTN gặp phải nhiều khó khăn như: chi phí điều trị cho bệnh nhân lớn, thời gian điều trị kéo dài, đối tượng điều trị chủ yếu người già người thường có nhiều bệnh lý mắc kèm Trong đó, FDA phê duyệt 05 thuốc sử dụng để điều trị triệu chứng rối loạn nhận thức, có 04 thuốc sử dụng lâm sàng từ trước donepezil, rivastigmin, galantamin, memantin, 01 thuốc phê duyệt từ tháng năm 2021 aducanumab, đặt tranh cãi nhà khoa học giới Các thuốc chủ yếu làm giảm triệu chứng bệnh mà lại có nhiều tác dụng khơng mong muốn Do đó, việc nghiên cứu tìm sản phẩm có tiềm giảm nhẹ, điều trị sa sút trí nhớ, đặc biệt từ nguồn dược liệu tự nhiên góp phần giảm nhẹ gánh nặng y tế, kinh tế người mắc xã hội vấn đề cấp thiết Cây thạch tùng cưa (Huperzia serrata (Thunb.) Trevis) sử dụng theo y học cổ truyền Trung Quốc Ấn Độ để điều trị suy giảm trí nhớ, rối loạn thần kinh, nhiễm trùng, nôn máu,….[3, 4] Huperzin A, alcaloid thuộc nhóm sesquiterpen thành phần có hoạt tính sinh học thạch tùng cưa Hiện nay, Huperzin A nghiên cứu phát triển thành sản phẩm sử dụng phổ biến Trung Quốc để điều trị sa sút trí nhớ với liều 150-200 μg, lần/ngày [5] Nhiều nghiên cứu rằng, alcaloid thành phần có hoạt tính sinh học dược liệu thạch tùng cưa [6], nhiên tới chưa có nghiên cứu đánh giá đầy đủ tác dụng cải thiện trí nhớ cao chiết alcaloid toàn phần từ dược liệu Từ thực trạng nêu trên, đặt câu hỏi liệu alcaloid toàn phần chứa huperzin A chiết xuất từ thạch tùng cưa giải pháp thay tiềm cách chứng minh hiệu cải thiện trí nhớ tốt so với sử dụng huperzin A đơn hay không? Để giải câu hỏi nghiên cứu nêu trên, tiến hành đề tài “Đánh giá tác dụng chống sa sút trí nhớ cao chiết giàu alcaloid từ thạch tùng cƣa (Huperzia serrata (Thunb.) Trevis) mơ hình thực nghiệm trimethyltin” với mục tiêu: Đánh giá tác dụng cải thiện sa sút trí nhớ cao chiết giàu alcaloid từ thạch tùng cưa mơ hình thực nghiệm trimethyltin ... DƢỢC Người thực hiện: DƢƠNG VÂN THANH ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG SA SÚT TRÍ NHỚ CỦA CAO CHIẾT GIÀU ALCALOID TỪ THẠCH TÙNG RĂNG CƢA (HUPERZIA SERRATA (THUNB.) TREVIS) TRÊN MƠ HÌNH THỰC NGHIỆM BẰNG TRIMETHYLTIN... giá tác dụng chống sa sút trí nhớ cao chiết giàu alcaloid từ thạch tùng cƣa (Huperzia serrata (Thunb.) Trevis) mơ hình thực nghiệm trimethyltin” với mục tiêu: Đánh giá tác dụng cải thiện sa sút. .. 34 3.3 Kết đánh giá chế cải thiện sa sút trí nhớ cao chiết giàu alcaloid từ thạch tùng cưa 37 3.3.1 Ảnh hưởng cao chiết giàu alcaloid từ thạch tùng cưa đến hoạt độ AChE não vùng