Đang tải... (xem toàn văn)
Đề tài Đánh giá tác dụng của cao chiết giàu Saponin từ tam thất (Panax Notoginseng (Burk.) F.H.Chen) đến nồng độ một số Hocmon Steroid trên mô hình gây trầm cảm thực nghiệm nghiên cứu nhằm đánh giá được ảnh hưởng của cao chiết giàu saponin từ tam thất đến biểu hiện trầm cảm của chuột trên mô hình gây trầm cảm bằng chuỗi stress nhẹ kéo dài, không báo trước; đánh giá được ảnh hưởng của cao chiết giàu sapoin từ tam thất đến nồng độ hocmon cortisol và testosteron trong huyết thanh chuột trên mô hình gây trầm cảm bằng chuỗi stress nhẹ kéo dài, không báo trước.
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC VŨ THỊ NGỌC ANH ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CỦA CAO CHIẾT GIÀU SAPONIN TỪ TAM THẤT (PANAX NOTOGINSENG (BURK.) F H CHEN) ĐẾN NỒNG ĐỘ MỘT SỐ HOCMON STEROID TRÊN MƠ HÌNH GÂY TRẦM CẢM THỰC NGHIỆM KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa: QH.2017.Y Hà Nội - 2022 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC Người thực hiện: VŨ THỊ NGỌC ANH ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CỦA CAO CHIẾT GIÀU SAPONIN TỪ TAM THẤT (PANAX NOTOGINSENG (BURK.) F H CHEN) ĐẾN NỒNG ĐỘ MỘT SỐ HOCMON STEROID TRÊN MƠ HÌNH GÂY TRẦM CẢM THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (NGÀNH DƯỢC HỌC) Khóa: QH.2017.Y Người hướng dẫn: ThS Nguyễn Văn Khanh NCS.ThS Đặng Kim Thu Hà Nội - 2022 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới hai giảng viên hướng dẫn ThS Nguyễn Văn Khanh NCS.ThS Đặng Kim Thu – giảng viên Bộ môn Bào chế Bộ môn Dược lý, Trường Đại học Y – Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội đưa lời khun hữu ích, ln lắng nghe, động viên dẫn dắt bước chân đường thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới thầy cô Trường Đại học Y – Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội nhiệt tình bảo, quan tâm truyền dạy cho kiến thức quí báu suốt năm học tập trường Mặc dù tình hình dịch bệnh Covid – 19 diễn phức tạp hai năm vừa qua, việc học tập nghiên cứu tơi gặp khó khăn, nhà trường xếp tạo điều kiện tốt cho thực trọn vẹn đề tài Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, người thân bạn bè động viên sát cánh bên vượt qua khó khăn qng thời gian cịn ngồi ghế nhà trường Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 21 tháng năm 2022 Sinh Viên Vũ Thị Ngọc Anh DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ACTH Hocmon kích thích vỏ thượng thận AVP Arginine - vasopressin COX – Enzym cyclooxygenase – CIS Mơ hình gây căng thẳng bất động mãn tính chuột CUMS Mơ hình gây trầm cảm chuỗi stress nhẹ, kéo dài, không báo trước động vật CRH Hocmon giải phóng corticotropin DA Hocmon dopamin ER Thụ thể estrogen HPA Trục đồi – tuyến yên – tuyến thượng thận (Hypothalamo – pituitary – adrenocortical) HPG Trục hạ đồi – tuyến yên – tuyến thượng thận ICI 182780 Chất đối kháng thụ thể estrogen iNOS Enzym nitric oxide synthase LPS Lipopolysaccharid MAO – A Enzym monoamin oxidase A MAOIs Chất ức chế monoamin oxidas NE Hocmon norepinephrin NO Oxit nitric NDRI Các chất ức chế tái hấp thu norepinephrin dopamin Neu Bạch cầu trung tính OVA Ovalbumin PA Plasminogen PGE2 Prostaglandin E2 PAI – Các chất ức chế plasminogen PNS Thành phần saponin Panax notoginseng SSRI Các chất ức chế hấp thu serotonin có chọn lọc SNRI Các chất ức chế tái hấp thu serotonin norepinephrin TCAs Thuốc chống trầm cảm ba vòng TG Triglycerid VEGF Yếu tố tăng trưởng nội mô mạch máu WHO Tổ chức Y tế Thế giới (World Health Organization) – HT Hocmon serotonin DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các loại saponin Panax notoginseng Bảng 1.2 Các phối tử tự nhiên saponin cho hocmon steroid 18 Bảng 2.1 Các tác nhân gây stress chuột thực nghiệm (Phụ lục 1) 28 Bảng 2.2 Lịch trình gây stress chuột theo tác nhân tuần đầu .28 Bảng 3.1 Bảng điểm cho trạng thái lơng nhóm chuột 36 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐỒ THỊ Hình 1.1 Các biến thể phát hoa Panax notoginseng Hình 1.2 Các biến thể Panax notoginseng Hình 1.3 Số lượng biến thể màu sắc thân số lượng thân khỏi rễ Panax notoginseng Hình 1.4 Các biến thể góc cuống thân, số lượng kép hình dạng Panax notoginseng Hình 1.5 Các biến thể màu sắc hình dạng rễ Panax notoginseng Hình 1.6 Cơng thức hóa học Cortisol (hydrocortison) – glucocorticoid nội sinh 14 Hình 1.7 Cơng thức hóa học testosteron – androgen người .16 Hình 2.1 Mẫu dược liệu tam thất 21 Hình 2.2 Chuột cống trắng, giống đực, chủng Sprague – Dawley .23 Hình 2.3 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu ảnh hưởng saponin từ tam thất mơ hình gây trầm cảm chuỗi stress nhẹ, kéo dài, không báo trước 25 Hình 2.4 Sơ đồ mơ tả mơ hình gây trầm cảm động vật thực nghiệm chuỗi stress nhẹ, kéo dài, không báo trước 27 Hình 2.5 Dụng cụ cho thử nghiệm chữ thập nâng cao 30 Hình 3.1 Ảnh hưởng cao chiết giàu saponin từ tam thất tới cân nặng chuột chịu stress .34 Hình 3.2 Trạng thái lơng nhóm chuột 35 Hình 3.3 Ảnh hưởng cao chiết giàu saponin từ tam thất tới hành vi chuột chịu stress thử nghiệm chữ thập nâng cao 37 Hình 3.4 Ảnh hưởng cao chiết giàu saponin từ tam thất tới hành vi chuột chịu stress mơ hình bơi cưỡng 38 Hình 3.5 Ảnh hưởng cao chiết giàu saponin từ tam thất tới nồng độ hocmon cortisol huyết chuột chịu stress định lượng phương pháp LC-MS/MS 40 Hình 3.6 Sắc ký đồ mẫu phân tích nồng độ hocmon cortisol .41 Hình 3.7 Ảnh hưởng cao chiết giàu saponin từ tam thất tới nồng độ hocmon testosteron huyết chuột chịu stress định lượng phương pháp LC-MS/MS 42 Hình 3.8 Sắc ký đồ mẫu phân tích nồng độ hocmon testosteron……… .43 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ MỤC LỤC MỞ ĐẦU………………………………………………………………………… CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN…………………………………………………… 1.1 Tổng quan tam thất 1.1.1 Tên khoa học tam thất .3 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Phân bố 1.1.4 Bộ phận dùng 1.1.5 Thành phần hóa học tam thất .6 1.1.6 Thành phần saponin tam thất 1.1.7 Tác dụng dược lý tam thất 1.2 Hocmon steroid .13 1.2.1 Một số hocmon steroid .13 1.2.2 Các nghiên cứu ảnh hưởng saponin đến nồng độ số hocmon steroid 16 1.3 Tổng quan mô hình gây stress thực nghiệm chuột .18 1.3.1 Mơ hình chuột bị trầm cảm tiêm corticosteron lặp lại .18 1.3.2 Mơ hình gây căng thẳng bất động mãn tính chuột (CIS) 19 1.3.3 Mơ hình gây trầm cảm nhẹ chuột không báo trước (CUMS) .19 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU………… 21 2.1 Đối tượng nghiên cứu 21 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu 21 2.2.2 Mẫu nghiên cứu 21 2.2 Phương tiện nghiên cứu 23 2.2.1 Động vật thí nghiệm .23 2.2.2 Hóa chất dung mơi 24 2.2.3 Thiết bị dụng cụ .24 2.3 Nội dung nghiên cứu 25 2.4 Điều kiện tiến hành nghiên cứu .26 2.5 Phương pháp nghiên cứu 26 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ………………………………………………………… 34 3.1 Kết ảnh hưởng cao chiết giàu saponin từ tam thất đến biểu trầm cảm chuột mơ hình gây trầm cảm chuỗi stress nhẹ, kéo dài không báo trước .34 3.1.1 Ảnh hưởng cao chiết giàu saponin từ tam thất tới cân nặng trạng thái lông chuột……… .34 3.1.2 Ảnh hưởng cao chiết giàu saponin từ tam thất tới hành vi chuột chịu stress thử nghiệm chữ thập nâng cao (EPM) .36 3.1.3 Kết đánh giá khả gây stress mơ hình gây trầm cảm chuỗi stress nhẹ, kéo dài, khơng báo trước mơ hình bơi cưỡng 38 3.2 Kết đánh giá ảnh hưởng cao chiết giàu saponin đến nồng độ hocmon cortisol testosteron 39 3.2.1 Đánh giá ảnh hưởng cao chiết saponin đến nồng độ hocmon cortisol ………………………………………………………………… …39 3.2.2 Đánh giá ảnh hưởng cao chiết saponin đến nồng độ hocmon testosteron…………………………………………………………… ……42 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN……………………………………………………… 45 4.1 Về kết triển khai mơ hình gây trầm cảm chuỗi stress nhẹ, kéo dài, không báo trước 45 4.1.1 Về kết đánh giá trạng thái lông 46 4.1.2 Về kết đánh giá thay đổi hành vi thử nghiệm chữ thập nâng cao…………… 46 4.1.3 Về kết đánh giá thay đổi hành vi mơ hình bơi cưỡng 47 4.2 Về kết đánh giá ảnh hưởng cao chiết giàu saponin đến nồng độ hocmon cortisol testosteron 48 4.2.1 Về kết đánh giá ảnh hưởng cao chiết giàu saponin đến nồng độ hocmon cortisol……… 49 4.2.2 Về kết đánh giá ảnh hưởng cao chiết già saponin đến nồng độ hocmon testosteron .50 CHƯƠNG 5- KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC MỞ ĐẦU Trầm cảm loại bệnh lý liên quan đến tâm thần, gặp lứa tuổi tỷ lệ mắc bệnh không ngừng gia tăng toàn giới Trong năm diễn đại dịch COVID – 19, theo thống kê Tổ chức Y tế giới (WHO), tỷ lệ lo âu trầm của toàn cầu tăng lên 25%, 40 giây giới lại có người tự tử trầm cảm Đây thực vấn đề lớn sức khỏe cộng đồng [5] Các rối loạn nội tiết từ lâu công nhận triệu chứng tâm thần đặc điểm bật biểu lâm sàng bệnh trầm cảm Nhiều nghiên cứu chứng minh rằng, triệu chứng bệnh lý trầm cảm có gia tăng nồng độ cortisol giảm nồng độ testosteron máu [8, 36] Do vậy, năm gần xuất thử nghiệm liệu pháp bổ sung hocmon testosteron dành cho bệnh nhân trầm cảm, kết ghi nhận cải thiện đáng kể [13] Panax notoginseng loại thuốc y học cổ truyền Trung Quốc người dân trồng trọt sử dụng từ xa xưa, ngày du nhập vào Việt Nam trồng chủ yếu Đông Bắc Ở kỷ 21, y học công nghệ ngày phát triển, có nhiều nghiên cứu sâu tác dụng có lợi cho sức khỏe người Panax notoginseng như: chống khối u, chống oxy hóa, chống viêm, bổ trợ kích thích miễn dịch, bảo vệ thần kinh… Saponin – chất có tác dụng sinh học Panax notoginseng Đã có 100 saponin phân lập từ tam thất, năm saponin chủ yếu chiếm tới 90% tổng số saponin có Panax notoginseng: notogingsenosid R1, ginsenosid Rb1, gingsenosid Rg1, gingsenosid Rd gingsenosid Re Trong số đó, ba saponin gingsenosid Rb1, gingsenosid Rg1và notogingsenosid R1 thành phần có tác dụng quan trọng chọn làm hợp chất tiêu chuẩn để đánh giá tam thất [60] Dựa thành phần tam thất, nhiều nghiên cứu thực nhằm làm sáng tỏ thêm hoạt tính sinh lý tìm tịi cơng dụng Panax notoginseng Như nghiên cứu thực gần chứng minh số saponin tam thất chất chủ vận thụ thể estrogen androgen, có ích bệnh nhân thiếu hụt hocmon streroid estrogen androgen, cịn làm giảm nồng độ hocmon cortisol máu [37, 40] Ngày có nhiều phương pháp định lượng hocmon steroid xét nghiệm miễn dịch (IAs), sắc ký ghép nối đầu dò khối phổ (GC-MS), sắc ký ghép nồi ... NGỌC ANH ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CỦA CAO CHIẾT GIÀU SAPONIN TỪ TAM THẤT (PANAX NOTOGINSENG (BURK.) F H CHEN) ĐẾN NỒNG ĐỘ MỘT SỐ HOCMON STEROID TRÊN MƠ HÌNH GÂY TRẦM CẢM THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP... chuột tác dụng cao chiết giàu saponin từ tam thất (Panax notoginseng (Burk.) F H Chen) mơ hình gây trầm cảm thực nghiệm Mục tiêu 1: Đánh giá ảnh hưởng cao chiết giàu saponin từ tam thất đến biểu trầm. .. hưởng cao chiết giàu saponin từ tam thất đến biểu trầm cảm chuột mơ hình gây trầm cảm chuỗi stress nhẹ, kéo dài không báo trước .34 3.1.1 Ảnh hưởng cao chiết giàu saponin từ tam thất