KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược học FULL (DL và DLS) đánh giá TD cải thiện trí nhớ trên MH gây sa sút TN bằng scopolamin của cao chiết giàu alcaloid từ thạch tùng răng cưa

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CẢI THIỆN TRÍ NHỚ TRÊN MƠ HÌNH GÂY SA SÚT TRÍ NHỚ BẰNG SCOPOLAMIN CỦA CAO CHIẾT GIÀU ALCALOID TỪ CÂY THẠCH TÙNG RĂNG CƯA (HUPERZIA SERRATA (THUNB.) TREVIS.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa: Hà Nội – 2020 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC Người thực hiện: ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CẢI THIỆN TRÍ NHỚ TRÊN MƠ HÌNH GÂY SA SÚT TRÍ NHỚ BẰNG SCOPOLAMIN CỦA CAO CHIẾT GIÀU ALCALOID TỪ CÂY THẠCH TÙNG RĂNG CƯA (HUPERZIA SERRATA (THUNB.) TREVIS.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC (NGÀNH DƯỢC HỌC) Khóa: Người hướng dẫn: Hà Nội – 2020 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới hai giảng viên hướng dẫn ThS Đặng Kim Thu Th.S Bùi Sơn Nhật - giảng viên Bộ môn Dược lý Dược lâm sàng, Khoa Y – Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội đưa lời khun hữu ích, ln lắng nghe, động viên dẫn dắt bước chân đường thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới PGS TS Bùi Thanh Tùng thầy cô thuộc môn Dược lý – Dược lâm sàng, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội chia sẻ học kinh nghiệm quý báu, nhiệt tình giúp đỡ động viên tơi Tơi xin trân trọng gửi lời cảm ơn tới DS Nguyễn Thị Thu Hồi – Học viên cao học khóa 22, đại học Dược Hà Nội bên nhiệt tình giúp đỡ suốt thời gian làm đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới thầy cô Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội nhiệt tình bảo, quan tâm truyền dạy cho kiến thức quí báu suốt năm học tập khoa tạo điều kiện tốt cho thực trọn vẹn đề tài Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, người thân bạn bè động viên sát cánh bên tơi vượt qua khó khăn quãng thời gian ngồi ghế nhà trường Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 21 tháng năm 2020 Sinh viên DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT A Độ hấp thụ (Absorbance) Aβ Amyloid beta ACh Acetylcholin AChE Enzym Acetylcholinesterase ACTI Acetylthiocholin iodid APP Protein tiền thân amyloid (Amyloid Precursor Protein) DL-30 Cao chiết giàu alcaloid từ Thạch tùng cưa liều 30 mg/kg cân nặng DL-60 Cao chiết giàu alcaloid từ Thạch tùng cưa liều 60 mg/kg cân nặng FDA Cục quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa Kỳ (Food and Drug Administration) HFD Chế độ ăn giàu chất béo (High fat diet) Hup A Huperzin A IC50 Nồng độ ức chế 50% (Inhibitory Concentration 50%) IU Đơn vị quốc tế (International Unit) MDA Malondialdehyd NMDA Thụ thể N-methyl-D-aspartat LD50 Liều dùng gây chết 50% số động vật thử nghiệm OBX Chuột vùng khứu giác (Olfactory bulbectomized) SAM Chuột tăng tốc lão hóa SAMP Chuột tăng tốc lão hóa nhạy cảm SE Sai số chuẩn (Standard errror) UV-Vis Quang phổ tử ngoại khả kiến DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.2.1 Các hợp chất alcaloid Thạch tùng cưa Bảng 2.4.1 Thành phần hỗn hợp phản ứng 28 Bảng 3.1.1 Kết đánh giá khả ức chế enzym AChE in vitro cao chiết giàu alcaloid từ Thạch tùng cưa chất chuẩn donepezil 29 Bảng 3.1.2 Giá trị IC50 cao chiết giàu alcaloid từ Thạch tùng cưa chất chuẩn quercetin 30 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.2.1 Cấu trúc hóa học Hup A Hình 2.1.1 Cây Thạch tùng cưa Huperzia serrata (Thunb.) Trevis 17 Hình 2.1.2 Phương pháp chiết alcaloid dung môi hữu môi trường kiềm 18 Hình 2.3.1 Sơ đồ nội dung nghiên cứu 20 Hình 2.4.1 Phản ứng chất hỗn hợp phản ứng Ellman 21 Hình 2.4.2 Sơ đồ triển khai mơ hình gây sa sút trí nhớ scopolamin in vivo 24 Hình 3.2.1 Ảnh hưởng cao chiết giàu alcaloid từ Thạch tùng cưa đến tỷ lệ chuyển tiếp cánh 31 Hình 3.2.2 Ảnh hưởng cao chiết giàu alcaloid từ Thạch tùng cưa đến thời gian tìm thấy bến đỗ tập có bến đỗ 32 Hình 3.2.3 Ảnh hưởng cao chiết giàu alcaloid từ Thạch tùng cưa tới thời gian lưu góc phần tư có bến đỗ tập khơng có bến đỗ .34 Hình 3.2.4 Ảnh hưởng cao chiết giàu alcaloid từ Thạch tùng cưa đến hoạt độ AChE thể đồng não chuột 35 Hình 3.2.5 Ảnh hưởng cao chiết giàu alcaloid từ Thạch tùng cưa đến hàm lượng malondialdehyd (MDA) mô não 36 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chương - TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan bệnh 1.1.1 Khái niệm bệnh sa sút trí nhớ 1.1.2 Các thể sa sút trí nhớ chế bệnh sinh 1.1.3 Các thuốc điều trị bệnh sa sút trí nhớ 1.2 Tổng quan Thạch tùng cưa 1.2.1 Đặc điểm thực vật 1.2.2 Phân bố 1.2.3 Thành phần hóa học 1.2.4 Tác dụng dược lý 1.2.5 Các nghiên cứu tác dụng cải thiện trí nhớ Thạch tùng cưa 1.3 Một số mơ hình nghiên cứu tác dụng tăng cường trí nhớ 1.3.1 Các mơ hình động gây sa sút trí nhớ động vật thử nghiệm 1.3.2 Một số thử nghiệm hành vi đánh giá tác dụng tăng cường trí nhớ in vivo 13 1.3.3 Một số phương pháp đánh giá tác dụng ức chế AChE 1.3.4 Một số phươn g pháp đánh giá khả chống oxy hóa 15 1.2.2 Hóa chất, dung mơi Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiê n c ứu 17 2.1.1 Dược liệu nghiên cứu 17 2.1.2 Mẫu nghiên cứu 17 2.2 Phươ ng tiện nghiê n cứu 18 2.2.1 Động vật thí nghiệ m 18 1.2.3 Thiết bị, dụng cụ 19 2.3 2.4 Nội dung nghiên cứu 19 Phương pháp nghiên cứu 20 2.4.1 Phương pháp đánh giá tác dụng ức chế AChE chống oxy hóa in vitro 20 2.4.2 Phương pháp đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ cao chiết giàu alcaloid từ Thạch tùng cưa mơ hình gây sa sút trí nhớ scopolamin 23 2.5 Phương pháp xử lý số liệu 28 Chương – KẾT QUẢ 29 3.1 Kết đánh giá tác dụng ức chế AChE khả dọn gốc tự in vitro cao chiết giàu alcaloid từ Thạch tùng cưa 29 3.1.1 Kết đánh giá tác dụng ức chế enzym AChE in vitro 29 3.1.2 Kết đánh giá khả dọn gốc tự DPPH in vitro 30 3.2 Kết đánh giá tác dụng tăng cường trí nhớ cao chiết giàu alcaloid từ Thạch tùng cưa mơ hình gây sa sút trí nhớ scopolamin 31 3.2.1 Kết đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ in vivo thơng qua thử nghiệm mê lộ Y 31 3.2.2 Kết đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ in vivo thông qua thử nghiệm mê lộ nước Morris 32 3.2.3 Ảnh hưởng cao chiết giàu alcaloid từ Thạch tùng cưa đến hoạt độ AChE não 34 3.2.4 Ảnh hưởng cao chiết giàu alcaloid từ Thạch tùng cưa đến hàm lượng malondialdehyd (MDA) mô não 36 Chương – BÀN LUẬN 38 4.1 Về kết đánh giá tác dụng ức chế enzym AchE chống oxy hóa in vitro cao chiết giàu alcaloid từ Thạch tùng cưa 38 4.1.1 Về kết đánh giá tác dụng ức chế enzym AChE in vitro 38 4.1.2 Về kết đánh giá khả dọn gốc tự in vitro 39 4.2 Về kết đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ mơ hình gây sa sút trí nhớ scopolamin cao chiết giàu alcaloid từ Thạch tùng cưa 40 4.2.1 Về kết thử nghiệm hành vi 40 4.2.2 Về kết định lượng marker sinh học 42 Chương – KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Nguyễn Thị Thu Hiền ghi nhận tác dụng cải thiện trí nhớ chuột dùng cao chiết toàn phần liều 600 mg/kg liều 300 mg/kg có xu hướng tăng trí nhớ khơng có ý nghĩa thống kê (thơng qua mê lộ chữ Y mê lộ nước Morris) [2] Từ nghiên cứu vừa kể trên, chúng tơi nhận thấy liều có tác dụng cải thiện trí nhớ cao chiết tồn phần 533 – 600 mg/kg cao hẳn so với liều có tác dụng cao chiết giàu alcaloid Điều giải thích alcaloid thành phần có tác dụng chống sa sút trí nhớ dược liệu Thạch tùng cưa 4.2.2 Về kết định lượng marker sinh học 4.2.2.1 Về kết định lượng hoạt độ AChE thể đồng não chuột Một ngày sau thử nghiệm chuột kết thúc, tiến hành định lượng hoạt độ AChE mơ não chuột thuộc nhóm Mục đích thử nghiệm nhắm tới tìm hiểu chế liên quan đến hoạt động ức chế AChE cao chiết giàu alcaloid từ Thạch tùng cưa Kết cho thấy mức liều cao chiết giàu alcaloid từ Thạch tùng cưa có tác dụng ức chế AChE mô não động vật thử nghiệm, tỷ lệ giảm có ý nghĩa thống kê 45,89% (p