Nghiên cứu bào chế và đánh giá tác dụng kháng ung thư của viên nén nổi chứa curcumin

BỘGIÁODỤCVÀ ĐÀOTẠO BỘY TẾ ĐẠI HỌCYDƯỢC THÀNHPHỐ HỒCHÍMINH HUỲNHTHỊMỸDUYÊN NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNGKHÁNGUNGTHƯCỦAVIÊNNÉNNỔICHỨACURCUMIN LUẬNÁNTIẾNSĨDƯỢCHỌC Thànhphố Hồ ChíMinh-Năm2017 HUỲNHTHỊMỸDUN NGHIÊNCỨUBÀOCHẾVÀĐÁNHGIÁTÁCDỤNGKHÁNG UNGTHƯCỦAVIÊNNÉNNỔICHỨACURCUMIN Chun ngành: Cơng nghệ dược phẩm bào chế thuốcMãsố:62720402 LUẬNÁNTIẾNSĨDƯỢCHỌC Ngườihướng dẫnkhoahọc: PGS.TS.HUỲNH VĂNHĨA PGS.TS.VĨNH ĐỊNH Thànhphố HồChíMinh-Năm2017 LỜICAMĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kếtquả nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trìnhnghiêncứunàokhác Tp.HồChíMinh, ngày tháng Tác giả HuỳnhThịMỹ Dun năm2017 MỤCLỤC Trang Trangphụbìa Lờicamđoan i Mụclục ii Danhmụccáckýhiệu,cácchữviếttắt .iv Danh mụccácbảng vi Danhmụccáchình ix Danhmụccácbiểuđồ xi ĐẶTVẤNĐỀ CHƯƠNG1.TỔNG QUANTÀILIỆU 1.1 TỔNGQUANVỀCURCUMIN .3 1.2 TỔNG QUAN VỀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH PHÂN TÍCH-ĐỘ ỔN ĐỊNHVÀTUỔI THỌCỦATHUỐC 1.3 TỔNG QUAN VỀ PHƯƠNG PHÁP ĐIỀU CHẾ HỆ PHÂN TÁN RẮN(HPTR)ĐỂCẢI THIỆNĐỘHÒATANCỦACURCUMIN 1.4 TỔNGQUANVỀDẠNGTHUỐC NỔITRONGDẠDÀY 15 1.5 TỔNG QUAN VỀ UNG THƯ DẠ DÀY-CÁC PHƯƠNG PHÁP NGHIÊNCỨU ĐỘC TÍNH TẾ BÀO VÀ MƠ HÌNH GÂY UNG THƯ DẠ DÀY TRÊNCHUỘTNHẮTTRẮNG 20 CHƯƠNG2.VẬTLIỆUVÀPHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU 31 2.1 VẬT LIỆU 31 2.2 PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU 34 CHƯƠNG3.KẾTQUẢNGHIÊNCỨU 59 3.1 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUI TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG CURCUMINTRONG HPTR BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ UV-Vis VÀ TRONGVIÊNNÉNNỔIBẰNGPHƯƠNGPHÁPHPLC .59 3.2 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ HPTR CHỨA CURCUMIN CĨ ĐỘ HỊA TANCAOBẰNGCÁCPHƯƠNGPHÁPVÀ CHẤTMANGKHÁCNHAU 69 3.3 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VIÊN NÉN NỔI CHỨA HỆ PHÂN TÁN RẮNCURCUMIN100MG 78 3.4 ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG KHÁNG UNG THƯ DẠ DÀY CỦA THÀNHPHẦN CÔNG THỨC VIÊN NÉN NỔI CHỨA HPTR CURCUMIN 100 MGTRÊN DÒNG TẾ BÀO UNG THƯ Ở NGƯỜI (IN VITRO) VÀ TRÊN CHUỘTNHẮTTRẮNG(INVIVO) 92 CHƯƠNG4.BÀNLUẬN 100 4.1 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUI TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG CURCUMINTRONG HPTR BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ UV-Vis VÀ TRONGVIÊNNÉN NỔIBẰNGPHƯƠNGPHÁPHPLC 100 4.2 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ HỆ PHÂN TÁN RẮN CHỨA CURCUMIN CÓĐỘ HÒA TAN CAO BẰNG CÁC PHƯƠNG PHÁP VÀ CHẤT MANG KHÁCNHAU 105 4.3 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VIÊN NÉN NỔI CHỨA HỆ PHÂN TÁN RẮNCURCUMIN100MG .110 4.4 ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG KHÁNG UNG THƯ DẠ DÀY CỦA THÀNHPHẦN CÔNG THỨC VIÊN NÉN NỔI CHỨA HPTR CURCUMIN 100 MGTRÊN DÒNG TẾ BÀO UNG THƯ Ở NGƯỜI (IN VITRO) VÀ TRÊN CHUỘTNHẮTTRẮNG(INVIVO) 117 KẾTLUẬN 125 KIẾNNGHỊ 127 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁNTÀILIỆUTHAMKHẢO PHỤLỤC DANHMỤCCÁCKÝHIỆU,CÁCCHỮVIẾTTẮT Stt Chữvi ếttắt NghĩatiếngAnh NghĩatiếngViệt 5-FU 5-fluorouracil ACN Acetonitril ASEAN AssociationofSoutheastAsian Nations B(a)P Benzo(a)pyren CD Cyclodextrin Cur Curcumin DAD Diodearraydetector DM DMBA 7,12dimethylbenzanthracene 10 DMSO Dimethylsulfoxide 11 DSC DifferentialThermalAnalysis Phântíchnhiệtvisai 12 HPLC Highperformanceliquid chromatography Sắckýlỏnghiệunăngcao 13 HPMC Hydropropylmethylcellulose 14 HPTR 15 IC50 The half maximal inhibitoryconcentration Nồng độ tối thiểu ức chế50%sinhvậtthửnghiệm 16 ICH InternationalConferenceon Harmonization Hộinghịquốctếvềhài hòa 17 IR Infrared Hồngngoại 18 MeOH Methanol 19 mtb 20 MTT 21 N Hiệphộicác quốcgia ĐơngNamÁ Đầudịdãydiodquang Phươngphápdungmơi Hệphântán rắn Khốilượngtrungbình 3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5diphenyltetrazoliumbromid) Phươngphápnghiền Stt Chữvi ếttắt NghĩatiếngAnh NghĩatiếngViệt 22 PEG Polyethylenglycol 23 PVP Polyvinylpyrrolidon 24 RH Relativehumidity Độẩmtương đối 25 RSD RelativeStandardDeviation Độlệchchuẩntương đối 26 SD StandardDeviation Độlệchchuẩn 27 SEM ScanningElectronMicroscopy Kínhhiển viđiệntửquét 28 UTDD 29 UV-Vis 30 VL Phươngphápvậtlý 31 VNN Viênnénnổi Ungthưdạdày Ultraviolet-Visible Tửngoạikhảkiến DANHMỤCCÁCBẢNG Trang Bảng1.1.Mộtsốchếphẩmthuôc nổitrênthịtrường 20 Bảng1.2.PhânloạimôbệnhhọcungthưdạdàytheoTổchứcYtếThếgiớinăm2010 21 Bảng1 M ộ t s ố n g h i ê n c ứ u t c d ụ n g c ủ a c u r c u m i n t r ê n m ô h ì n h g â y u n g t h kháctrênchuột .30 Bảng2.1.Cácnguyênliệusửdụngtrongbàochế 31 Bảng2.2.Cácnguyênliệusử dụngtrongphântích 32 Bảng2.3.Cácnguyênliệuvàđộngvậtsửdụngtrongthửinvitrovàinvivo .32 Bảng2.4.Cáctrangthiếtbịđượcsửdụngtrongđềtài .33 Bảng2.5.Cácđiềukiệnthămdò 37 Bảng2.6.CáccôngthứcbàochếHPTRvàhỗnhợptrộnvậtlý 41 Bảng2.7.Thànhphần côngthứccơ bảncủaviênplacebo 45 Bảng2.8.Thànhphần cơngthứcthămdịcáctádượctạokhung 46 Bảng2.9.Điềukiệnvàtầnsốthử nghiệmtrongnghiêncứuđộổnđịnh 50 Bảng2 C c c h ỉ t i ê u đ n h g i , m ứ c c h ấ t l ợ n g v s ố l ợ n g v i ê n n é n n ổ i curcumin100 mg dùng trongnghiêncứuđộổnđịnh 51 Bảng2.11.Nồngđộthử nghiệm .54 Bảng3.1.Sailệchđộhấpthucủacáchệtádượcsovớimẫugiảđịnh 59 Bảng3.2.Sựtuyếntínhgiữađộhấpthutheonồngđịnh lượng 61 Bảng3 K ế t q u ả k h ả o s t đ ộ c h í n h x c c ủ a p h n g p h p đ ị n h l ợ n g H P T R curcuminvớihệchất mangPVPK30+Tween80 62 Bảng3.4.Kếtquảthửđộđúngphươngpháp địnhlượngHPTRcurcumin 62 Bảng3.5.Giátrị trung bìnhcácthơngsốsắcký củamẫ uchuẩncurcuminở phađộngkhảosát(n=6) 63 Bảng3.6.Tínhtương thíchhệthốngtrênmẫuchuẩncurcumin .64 Bảng3 T í n h t n g t h í c h h ệ t h ố n g t r ê n m ẫ u t h v i ê n n é n n ổ i c h ứ a H P T R curcumin 64 Bảng3.8.Kếtquảkhảosáttínhtuyếntính 66 Bảng3.9.Kếtquảkhảosátđộđúng .67 Bảng3.10.Khảosátđộlặplạicủa phươngpháp 68 Bảng3.11.Kếtquảkhảosátđộchínhxáctrunggian .68 Bảng3.12.Độhoàtancủacurcuminnguyênliệu 69 Bảng3.13.ĐộhoàtancủaHPTRcurcuminvớihệβ-CD vàTween80 70 Bảng3.14.ĐộhoàtancủaHPTRcurcuminvớihệβ-CD vàPVPK30 70 Bảng3.15.Độhoàtan củaHPTRcurcuminvớihệPEG6000/PVP K30(10:90).71 Bảng3.16.ĐộhoàtancủaHPTR curcuminvớihệPEG 6000/PVPK30(25:75) 71 Bảng3.17.ĐộhoàtancủaHPTRcurcuminvớihệPEG6000/HPMC606(15:85) 72 Bảng3.18.ĐộhoàtancủaHPTRcurcuminvớihệPVPK30vàTween80 72 Bảng3.19.ĐộhoàtancủacurcumintừcácHPTRvới cáchệchất mang 73 Bảng3.20.Sosánhđộhoàtangiữacáccặp 74 Bảng3.21.Độlặp lạiq trìnhhồtancủaHPTR curcumin vớihệchấtmangPVPK30vàTween80bàochếbằngphươngphápnghiềnướt-cơngthức1 74 Bảng3.22.Kếtquảkhảosáthàmlượngtádượcdính .79 Bảng3.23.Kếtquảkhảosáttỉlệdungmơixáthạt 79 Bảng3.24.Kếtquảảnhhưởngcủaloạitádượctạokhíđếnkhảnăngnổicủaviên 80 Bảng3.25.KếtquảđánhgiákhảnăngnổicủaviênkhithayđổitỉlệNaHCO 3vàacidcit ric 80 Bảng3.26.Kếtquảđánhgiásửdụnggômxanthanđếnk h ả năngnổicủa viên 81 Bảng3.27.KếtquảđánhgiásửdụngHPMC K4Mđếnk h ả năngnổicủaviên 81 Bảng3.28.KếtquảđánhgiásửdụngHPMCK15Mđếnk h ả năngnổicủaviên 82 Bảng3.29.KếtquảđánhgiásửdụngHPMC615đếnk h ả năngnổi củaviên 82 Bảng3.30.Kếtquảđánhgiákhảnăngnổicủaviênkhiphốihợppolyme 83 Bảng3.31.Kếtquảảnhhưởngcủađộcứngđếnkhảnăngnổicủaviên .84 Bảng3.32.Mơ hìnhcơngthứcđượcxâydựngbởiphần mềmDesign-Expert 85 Bảng3.33.Kếtquảthựcnghiệm 85 Bảng3.34.Thànhphầncôngthứctối ưu 86 Bảng3.35.Kếtquảthựcnghiệm3lơ kiểmchứngvàkếtquảdự đốn 86 Bảng3 Đ ộ h ò a t a n t v i ê n n é n n ổ i c h ứ a H P T R c u r c u m i n : P V P : T w e e n ( : : 0,22)vàviênnénnổichứacurcuminnguyênliệu 87 Bảng3.37.Kếtquảkiểmnghiệm03lô 88 Bảng3.38.Kếtquảthửnghiệmđộổnđịnhcủa3lơởđiềukiệnlãohóacấptốctạithờiđiểm6 tháng 90 Bảng3.39.Kếtquảthửnghiệmđộổnđịnhcủa3lôởđiềukiệnthửnghiệmdàihạntạithờiđiểm 24tháng 91 Bảng 3.40.Tácdụngcủacácmẫuthửlên tỷlệsốngcủatếbào ungthưdạdàyN87 92 Bảng3.41.Tỷlệ%ứcchếpháttriểntếbàoungthưcủacácmẫuthử 93 Bảng3.42.PhươngtrìnhhồiquyvàgiátrịIC50củacác mẫuthử 93 Bảng3.43.Sốchuộtchếtởcáclôthửnghiệm 95 Bảng3.44.Tỷlệ chuộtmangungồidaởcáclơtừtuần5đếntuần24 96 Bảng3.45.Chỉ số mỡ củachuộtởcáclôtừtuần5đếntuần24 .97 Bảng3.46.Sosánhkếtquảđạithểgiữacáclôtừtuần5đếntuần24 97 Bảng3.47.Sosánhkếtquảvithể ởcáclôởtuần5đếntuần24 99